一種多肽合成方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及多肽的合成，特別是涉及一種多肽液相合成方法，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002]隨著人們對多肽藥物的需求逐漸增加，對化學家，特別是藥物化學家而言，如何高效合成廉價的多肽藥物，是一個亟待解決的技術問題。
[0003]隨著科技水平的提高和人類對多肽的重視與研發，越來越多的多肽藥物被開發應用于臨床，為提高人類健康水平和治療、預防疾病，提供高效安全的新型藥物和疫苗。多肽的化學合成已經成為獲得多肽藥物的最重要途徑。
[0004]目前，液相合成多肽是合成短肽及片段肽的非常高效廉價的制備手段，而結合固相合成和液相合成優點的片段縮合工藝，與液相合成多肽的方法相比，則更是廉價且高效。但是，采用傳統的液相合成方法合成多肽時，除了必須使用保護氨基酸、縮合劑和反應溶劑(一般為有機溶劑)之外，還需要使用大量有機溶劑用于反應后的處理，常用的有機溶劑包括石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等，易污染環境。
[0005]由于必須使用大量有機溶劑，不僅提高了多肽的生產成本，而且造成非常嚴重的環境污染，因此，如何降低液相合成多肽的成本和減少對環境的污染，是本領域亟待解決的技術問題。
【發明內容】
[0006]為了克服上述【背景技術】的不足，本發明的目的在于提供一種多肽合成方法，其能夠大幅度降低多肽的生產成本，并減少因大量使用有機溶劑而對環境造成的污染。
[0007]為了實現上述發明目的，本發明采取的技術方案為:
一種多肽合成方法，其包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應溶液加入水中，析出固體后，經過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護基后加入水中，并調節溶液酸堿性，將脫除氨基保護基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中縮合，然后重復上述過程，直至得到全保護多肽，再脫除所述全保護多肽的保護基，得到目標多肽。
[0008]作為優選實施方案之一，所述中間體的氨基保護基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脫除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基。
[0009]優選的，將脫除叔丁氧羰基后的反應溶液加入水中，再通過弱堿來調節溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0010]優選的，將脫除9-芴甲氧羰基后的反應溶液加入水中，再通過弱酸來調節溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0011]與現有技術相比，本發明的優點如下:
本發明避免大量使用有機溶劑進行反應后的處理，改用水作為析出保護多肽中間體的溶劑。本發明適用于規模化生產小分子多肽，不需大規模改變原有工藝，只需在合成環節中采用易溶于水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)作為反應溶劑，在脫除氨基保護基的過程中，選用易溶于水的三氟乙酸(TFA)來脫除叔丁氧羰基(Boc)，選用哌啶和DMF的混合溶液來脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。因此，本發明不僅能夠大幅度降低多肽的生產成本，而且能夠減少因大量使用有機溶劑而對環境造成的污染。
【具體實施方式】
[0012]下面結合實施例對本發明作進一步的詳細描述。
[0013]本發明實施例提供的多肽液相合成方法，包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中縮合，將反應溶液加入水中，析出固體后，經過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護基后加入水中，并調節溶液酸堿性，將脫除氨基保護基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中縮合，然后重復上述過程，直至得到全保護多肽，再脫除所述全保護多肽的保護基，得到目標多肽。
[0014]其中，所述中間體的氨基保護基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脫除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。將脫除叔丁氧羰基(Boc)后的反應溶液加入水中，再通過弱堿來調節溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基(Boc)的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。將脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反應溶液加入水中，再通過弱酸來調節溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0015]反應過程的具體實施通式如下:
I號保護氨基酸+2號保護氨基酸一在二甲基甲酰胺(DMF)中縮合一全保護二肽溶液一加入純水中析出全保護二肽(固體)一過濾洗滌得到全保護二肽(純化的保護二肽)一干燥，脫除全保護二肽的氨基保護基一脫除氨基保護基的側鏈保護二肽溶液一加入純水中并用弱酸(或弱堿)調節溶液酸堿性使側鏈保護二肽析出完全一過濾洗滌得側鏈保護二肽一干燥，與3號保護氨基酸縮合一過程循環一得全保護多肽一脫除保護基一多肽。
[0016]以上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種多肽合成方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應溶液加入水中，析出固體后，經過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護基后加入水中，并調節溶液酸堿性，將脫除氨基保護基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中縮合，然后重復上述過程，直至得到全保護多肽，再脫除所述全保護多肽的保護基，得到目標多肽。
2.如權利要求1所述的多肽液相合成方法，其特征在于，所述中間體的氨基保護基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脫除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基。
3.如權利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，將脫除叔丁氧羰基后的反應溶液加入水中，再通過弱堿來調節溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
4.如權利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，將脫除9-芴甲氧羰基后的反應溶液加入水中，再通過弱酸來調節溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
【專利摘要】本發明公開了一種多肽合成方法，其包括以下步驟：將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應溶液加入水中，析出固體后，經過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護基后加入水中，并調節溶液酸堿性，將脫除氨基保護基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，然后重復上述過程，直至得到全保護多肽，再脫除所述全保護多肽的保護基，得到目標多肽。本發明避免大量使用有機溶劑進行反應后的處理，改用水作為析出保護多肽中間體的溶劑，能夠大幅度降低多肽的生產成本，而且能夠減少因大量使用有機溶劑而對環境造成的污染。
【IPC分類】C07K1-06, C07K1-02
【公開號】CN104725463
【申請號】CN201510072355
【發明人】袁建新
【申請人】南通奧斯特鞋業有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月12日