一種提取芍藥內酯苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種從芍藥藥材或其提取物中提取高純度芍藥內酯苷的方法。
【背景技術】
[0002]芍藥內酯苷為毛茛科植物中藥白芍或赤芍中的一種主要有效成分。芍藥內酯苷具有鎮痛、鎮靜、抗驚厥、抗炎、抗病原微生物及護肝等作用，臨床上用于治療類風濕性關節炎、細菌性痢疾及腸炎、病毒性肝炎及老年性等疾病，可作為有效成分應用于人或動物相關的藥品領域。
[0003]目前有關芍藥內酯苷的主要提取方法如下，如顏繼忠等(中國專利申請號201210569941.8)公開了 “一種快速高效提取芍藥苷和芍藥內酯苷的方法”，步驟包括醇水提取、大孔樹脂富集、高速逆流色譜分離純化；李偉等(中國專利申請號201110184287.4)公開了 “芍藥內酯苷、芍藥苷的制備方法”，步驟包括白芍總苷提取物的氧化鋁、活性炭、硅膠的分別洗脫、收集流份和精制；孫振蚊等(中國專利申請號200910100680.3)公開了 “模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法”，該方法采用白芍總苷提取物作為原料，應用模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷，等等。以上操作步驟均較復雜，且需要較長的分離提取時間。
[0004]本發明以芍藥藥材為原料，通過水提醇沉及高效液相色譜制備技術，可快速從芍藥藥材中分離提取到高純度的芍藥內酯苷。對于芍藥提取物如白芍總苷可直接通過高效液相色譜制備技術分離提取芍藥內酯苷。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供了一種快速從芍藥藥材或其提取物中分離提取芍藥內酯苷的工藝。
[0006]本發明的目的是由以下技術方案實現的。
[0007]一種從芍藥藥材或其提取物中提取高純度芍藥內酯苷的工藝，其步驟如下。
[0008]A.將所用芍藥藥材分別進行淋洗處理、2-3次煎煮提取，合并2-3次煎煮提取的液體，得到初提物；所述的2-3次煎煮提取中，芍藥或藥材與水的重量比為1:10-20 ;所述的淋洗處理和煎煮處理均采用蒸懼水，煎煮時間為30-60min。
[0009]B.將所述的初提物進行濃縮處理，得到濃縮液；所述的濃縮藥液中，生藥濃度為lg/ml ；所述的濃縮處理中，采用減壓濃縮的方法。
[0010]C.向所述的濃縮液中加無水乙醇，得到乙醇溶液；所述乙醇溶液中，乙醇濃度為75% ;將所述的乙醇溶液進行低溫離心處理，得到乙醇上清液和沉淀；所述的低溫離心處理中，溫度為4°C，離心力為5000g，時間為30min。
[0011]D.將所述的乙醇上清液進行回收乙醇處理，得到提取物；所述的提取物中，生藥濃度為lg/ml。
[0012]E.將所述的提取物用流動相配制成相當于生藥50-300mg/ml的提取物溶液，或藥材提取物如白芍總苷用流動相配制成5-20mg/ml的溶液，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液，均過0.45Mm微孔濾膜，所述的流動相為乙腈和水的混合物(體積比為12:88)，磷酸調pH為3.0。
[0013]F.將芍藥內酯苷標準品進樣制備型高效液相色譜儀確定芍藥內酯苷出峰的保留時間；將提取物溶液進樣制備型高效液相色譜儀，收集與標準品芍藥內酯苷一致的保留時間組分，提取物溶液重復進樣收集同一組分，低溫干燥即得到高純度芍藥內酯苷。
[0014]G..所述的制備型高效液相色譜條件是:Varian Prostar 210制備型高效液相色譜儀，色譜柱 Dynamax HPLC column, 250 X 21.4 mm, Microsorb 100-8 C18。流速為10ml/min，柱溫25°C，檢測波長為230nm。流動相為乙腈和水(體積比為12:88)，磷酸調pH為3.0，提取物的進樣體積為l-2ml。
【具體實施方式】
[0015]實施例1。
[0016]毛茛科芍藥白芍飲片I kg以蒸餾水淋洗，白芍飲片與蒸餾水的重量比為1:15，以YZN50型液體真空濃縮煎藥機煎煮2次，每次時間lh，合并煎液減壓濃縮至生藥濃度為Ig/ml。加入無水乙醇，得到乙醇濃度為75%白芍提取液，4°C、5000g離心30min，棄沉淀，得到白芍乙醇上清液，以YZN50型液體真空濃縮煎藥機減壓回收乙醇，得到生藥濃度為lg/ml白芍提取物。
[0017]將白芍提取物用流動相配制成200mg/ml的白芍提取物溶液，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液，均過0.45Mm微孔濾膜；將芍藥內酯苷標準品進樣制備型高效液相色譜儀2ml，確定芍藥內酯苷出峰的保留時間為25.7min，將白芍提取物溶液進樣制備型高效液相色譜儀2ml，收集與標準品芍藥內酯苷一致的保留時間組分，白芍提取物溶液重復進樣制備型高效液相色譜儀收集同一組分，低溫干燥即得到芍藥內酯苷。
[0018]將芍藥內酯苷用流動相配制成0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液；同時，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成0.lmg/ml的茍藥內酯苷溶液。將茍藥內酯苷溶液及標準品，依次進樣分析型高效液相色譜儀，檢測芍藥內酯苷純度> 96% ;分析型高效液相色譜儀為Agilent1100，分析色譜柱為 Eclipse XDB- C18 5 Mm, 4.6X150 mm。流速為 0.8 ml/min，檢測波長為230 nm。流動相由乙腈和水組成(v/v=12/88)，磷酸調pH為3.0，芍藥內酯苷溶液進樣體積為10 μ?ο
[0019]實施例2。
[0020]白芍總苷提取物5 g以流動相溶解并配制成10mg/ml的白芍總苷提取物溶液，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液，均過0.45Mm微孔濾膜；將芍藥內酯苷標準品進樣制備型高效液相色譜儀2ml，確定芍藥內酯苷出峰的保留時間25.5min，將白芍總苷提取物溶液進樣制備型高效液相色譜儀2ml，收集與標準品芍藥內酯苷一致的保留時間組分，白芍總苷提取物溶液重復進樣制備型高效液相色譜儀收集同一組分，低溫干燥即得到芍藥內酯苷。
[0021]將芍藥內酯苷用流動相配制成0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液；同時，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成0.lmg/ml的茍藥內酯苷溶液。將茍藥內酯苷溶液及標準品，依次進樣分析型高效液相色譜儀，檢測芍藥內酯苷純度> 97.3% ;分析型高效液相色譜儀為Agilent 1100,分析色譜柱為 Eclipse XDB- C18 5 Mm, 4.6 X 150 mm。流速為 0.8 ml/min,檢測波長為230 nm。流動相由乙腈和水組成(v/v=12/88)，磷酸調pH為3.0，芍藥內酯苷溶液進樣體積為?ο μι。
【主權項】
1.一種提取芍藥內酯苷的方法，其特征在于:所述的方法主要涉及水提醇沉技術和高效液相色譜制備技術，與以往方法比較具有速度快、純度高等優點。
2.根據權利要求1所述的一種從芍藥藥材或其提取物中提取芍藥內酯苷的方法，其特征在于該方法包括以下步驟: A.將所用芍藥藥材分別進行淋洗處理、2-3次煎煮提取，合并2-3次煎煮提取的液體，得到初提物；所述的2-3次煎煮提取中，芍藥或藥材與水的重量比為1:10-20 ;所述的淋洗處理和煎煮處理均采用蒸餾水，煎煮時間為30-60min ； B.將所述的初提物進行濃縮處理，得到濃縮液；所述的濃縮藥液中，生藥濃度為Ig/ml ;所述的濃縮處理中，采用減壓濃縮的方法； C.向所述的濃縮液中加無水乙醇，得到乙醇溶液；所述乙醇溶液中，乙醇濃度為75%；將所述的乙醇溶液進行低溫離心處理，得到乙醇上清液和沉淀；所述的低溫離心處理中，溫度為4°C，離心力為5000g，時間為30min ； D.將所述的乙醇上清液進行回收乙醇處理，得到提取物；所述的提取物中，生藥濃度為 lg/ml ； E.將所述的提取物用流動相配制成相當于生藥50-300mg/ml的提取物溶液，或藥材提取物如白芍總苷用流動相配制成5-20mg/ml的溶液，將芍藥內酯苷標準品用流動相配制成.0.lmg/ml的芍藥內酯苷溶液，均過0.45Mm微孔濾膜，所述的流動相為乙腈和水的混合物(體積比為12:88),磷酸調pH為3.0 ; F.將芍藥內酯苷標準品進樣制備型高效液相色譜儀確定芍藥內酯苷出峰的保留時間；將提取物溶液進樣制備型高效液相色譜儀，收集與標準品芍藥內酯苷一致的保留時間組分，提取物溶液重復進樣收集同一組分，低溫干燥即得到高純度芍藥內酯苷； G.所述的制備型高效液相色譜條件是=VarianProstar 210制備型高效液相色譜儀，色譜柱 Dynamax HPLC column, 250 X 21.4 mm, Microsorb 100-8 C18 ;流速為 1ml/min，柱溫25°C，檢測波長為230nm ;流動相為乙腈和水(體積比為12:88)，磷酸調pH為.3.0，提取物的進樣體積為l-2ml。
【專利摘要】一種從芍藥藥材或其提取物中提取高純度芍藥內酯苷的方法，其特征在于將所用芍藥藥材進行水提醇沉處理，回收乙醇得到其提取物。先用芍藥內酯苷標準品進樣制備型高效液相色譜儀確定芍藥內酯苷出峰的保留時間，再將提取物溶液進樣制備型高效液相色譜儀，收集與標準品芍藥內酯苷一致的保留時間組分，提取物溶液重復進樣收集同一組分，低溫干燥即得到高純度芍藥內酯苷。本發明的優點是通過水提醇沉及高效液相色譜制備技術，可快速從芍藥藥材或其提取物中分離提取到高純度的芍藥內酯苷。
【IPC分類】C07H1-08, C07H17-04
【公開號】CN104725448
【申請號】CN201310699046
【發明人】姜代勛, 陳武, 李佳, 李偉, 程鵬
【申請人】北京農學院
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2013年12月19日