一株對花生果腐病具有防效的金龜子綠僵菌及其發酵工藝的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及微生物防治領域，特別涉及金龜子綠僵菌菌株、液固雙向發酵工藝及發酵菌劑在防治花生果腐病中的應用。
【背景技術】
[0002]花生果腐病為一種花生生長中后期發生的土傳病害，是由侵脈新赤殼菌(.Neocosmosporasp.)侵染花生果而引起花生果腐爛的一種病害，該病害發病特征如下:
(I)發生病變的莢果主要是中后期的秕果和飽果；(2)初步發生時，花生莢果的中果皮和外果皮變為黑褐色斑點，內果皮及種子正常；(3)發病嚴重時，莢果的整個果皮和種子變黑、腐爛；(4)根部外表皮發黑，而地上部分不變或者更綠。2006?2011年，該病害在我國河北、山東、吉林、河南等花生種植區先后被發現，爛果率在30?100%，這嚴重損害了當地花生種植戶的利益。目前市場上還沒有有效的防治該病害藥物。因此，提供一種能夠有效防治花生果腐病的藥物具有重要現實意義。
[0003]綠僵菌作為當今世界應用最為廣泛的一種昆蟲病原真菌，因對昆蟲的致病力強、寄主范圍廣，對人、畜、作物無毒害而受到人們的重視。目前，已經發現金龜子綠僵菌能夠寄生的昆蟲約有200余種，許多國家對它們在生產、應用和安全性等方面都做了大量細致的研究，對有些害蟲已開發出綠僵菌殺蟲劑，并收到良好防治效果。近年來，科研人員發現綠僵菌對植物病原菌也有一定的抑制作用，田間試驗表明部分綠僵菌制劑對植物病害具有良好的防治效果。因此，急需一種能夠實現持續控制花生果腐病和地下害蟲，降低花生果農藥殘留，實現防病蟲、保果、增產作用的綠僵菌生物制劑。目前還未見綠僵菌對花生果腐病有防治作用。
【發明內容】
[0004]有鑒于此，本發明提供一株金龜子綠僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的應用。該金龜子綠僵菌的保藏編號為CGMCC N0.8385。該金龜子綠僵菌菌株能夠持續控制花生果腐病，降低花生果農藥殘留，實現防病、保果、增產。
[0005]為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案:
本發明提供了一株金龜子綠僵菌，其保藏編號為CGMCC N0.8385。
[0006]該菌株ITS在GenBank序列登記號為KF913494。
[0007]本發明的金龜子綠僵菌，菌落絨毛狀或棉絮狀，最初白色，產生孢子時呈綠色；菌絲具分隔和分枝，透明，直徑1.5?2.0 μ m ;分生孢子梗很難與菌絲區別，直徑約2.0 μ m，其末端產生瓶形小梗，(8.0?16.0 μ m)* (1.5?2.2) μ m,從瓶梗的末端以向基式連續形成長串鏈的分生孢子；在同一小梗上，第一層分生孢子后面形成第二層、第三層分生孢子，呈現一系列念珠狀排列的孢子；分生孢子為單細胞，長橢圓形，兩端鈍截形或鈍圓，大小變化很大，(5.0?7.0) μπι* (2.0?3.0) μ m，單個存在時色亮，成堆時呈橄欖綠色，脫落的孢子常聚成菱形孢子團塊或殼狀結構；平皿對峙實驗表明該菌對花生果腐病菌具有明顯的抑制作用。
[0008]本發明還提供了保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌在制備抑制花生果腐病菌藥物中的應用。
[0009]本發明還提供了一種菌劑，其包括保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌及菌劑中可接受的佐劑。
[0010]作為優選，所述金龜子綠僵菌的含量彡18孢子/克。
[0011]本發明還提供了上述菌劑的液固雙向發酵工藝，包括如下步驟:
步驟1:挑取保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌接種于PPDA固體培養基上，于24?30°C培養9?12d，刮取孢子置于研磨器中，用0.05%吐溫-80無菌水配制成濃度為I?5X 18個/mL的孢子懸液，得第一培養物；
步驟2:吸取2?4mL第一培養物，置于SDAY改良液體培養基中，于25?30°C、160?200 rpm培養70?75h，得第二培養物；
步驟3:將14?16mL第二培養物做為固態發酵的種子液轉接至80?100克/袋的固態發酵培養基中，混勻后于25?30°C培養6?9 d后即得。所述固態發酵培養基包括:麥殼I?3重量份,麥麩6?10重量份,水87?93重量份。
[0012]作為優選,上述菌劑的施用量為I?10萬億孢子/畝。
[0013]本發明提供一株金龜子綠僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的應用。該金龜子綠僵菌的保藏編號為CGMCC N0.8385。包含保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌的菌劑按I?10萬億孢子/畝穴施于花生，田間防病試驗表明對花生果腐病的防治效果60%以上，增產5?12%，實現了在控制病害的同時，達到保果，增產的目的。本發明涉及的金龜子綠僵菌能對花生果腐病有良好的防治效果；其次，該菌株還具有促生增產作用；同時，該菌劑無毒無致病性，對人畜安全，不污染環境，生產成本低。
【主權項】
1.一株金龜子綠僵菌，其特征在于，其保藏編號為CGMCC N0.8385。
2.根據權利要求1所述的金龜子綠僵菌在制備抑制花生果腐病菌中的應用。
3.一種菌劑，其特征在于，其包括保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌及菌劑中可接受的佐劑。
4.根據權利要求3所述菌劑，其特征在于，所述金龜子綠僵菌的含量>18孢子/克。
5.根據權利要求3或4所述菌劑的液固雙向發酵工藝，其特征在于:包括如下步驟: 步驟1:挑取保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌接種于PPDA固體培養基上，于24?30°C培養9?12d，刮取孢子置于研磨器中，用0.05%吐溫-80無菌水配制成濃度為I?5X 18個/mL的孢子懸液，得第一培養物； 步驟2:吸取2?4mL第一培養物，置于SDAY改良液體培養基中，于25?30°C、160?200 rpm培養70?75h，得第二培養物； 步驟3:將14?16mL第二培養物做為固態發酵的種子液轉接至80?100克/袋的固態發酵培養基中，混勻后于25?30°C培養6?9 d后即得。
6.所述固態發酵培養基包括:麥殼I?3重量份,麥麩6?10重量份,水87?93重量份。
7.根據權利要求3、4或5任一項所述菌劑，其特征在于，其施用量為I?10萬億孢子/畝。
【專利摘要】本發明涉及微生物防治領域，特別涉及金龜子綠僵菌菌株、液固雙相發酵工藝及發酵菌劑在防治花生果腐病中的應用。包含保藏編號為CGMCCNo.8385的金龜子綠僵菌菌劑1～10萬億孢子/畝穴施于花生，田間防病試驗表明對花生果腐病的防治效果為60%以上，增產5～12%，實現了在控制病害的同時，達到保果增產的目的。本發明涉及的金龜子綠僵菌對花生果腐病有良好的防治效果；其次，該菌株還具有促生增產作用；同時，該菌劑的孢子含量高、用量少，且無毒無致病性，對人畜安全，不污染環境，生產成本低。CGMCC No838520131025
【IPC分類】A01P3-00, C12N1-14, C12R1-645, A01N63-04
【公開號】CN104694395
【申請號】CN201310657681
【發明人】郭巍, 李瑞軍, 陸秀君, 于浩海, 孫偉明, 趙丹, 徐大慶, 康占海, 王偉
【申請人】河北農業大學
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2013年12月9日