裂褶菌菌絲球的制造方法及利用其的β-葡聚糖生產方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及裂褶菌菌絲球的制造方法及利用該方法的β-葡聚糖生產方法，更詳細地講，涉及如下的制造裂褶菌菌絲球的方法及能夠通過這種方法高產地生產源于裂褶菌菌絲體的β-葡聚糖的方法:在培養裂褶菌菌絲體時，添加粘土礦物而增加了緊實度。
【背景技術】
[0002]裂裙菌(Schizophyllum commume)在分類學上屬于擔子菌類的傘菌目糙皮側耳科裂褶菌屬，在闊葉林的古木或樹樁上以集群產生，隨著發現裂褶菌的抗氧化、抗炎等的功效，對其關注度日益增加。
[0003]在培養蘑菇的菌絲體時，如果形成適當的顆粒大小，則氧氣傳遞率提高，從而能夠增加菌絲體的成長及二次代謝產物的生成量。另外，在堅硬顆粒的情況下，能夠作為反復的培養接種源來再使用。這種緊實度高、適當大小的顆粒，順利進行物質傳遞、氧氣傳遞等，能夠減少在通氣和攪拌中使用的能量的消耗。相對于此，在菌絲體以塊的形態(loosemycelia clump)聚集生長或者顆粒大小非常大的情況下,營養成分不能很好地傳遞到顆粒內部的菌絲體，因此相比于菌絲體量，酶的分泌、二次代謝產物形成量減少，在菌絲體中生成的細胞外分泌酶的生成量和分泌量出錯，從而對特定物質的生物降解能力產生很大的影響。另外，在顆粒非常小的情況下，對菌絲體培養液的后處理工序、即菌絲體的過濾等產生很大的壞影響。
[0004]另一方面，裂褶菌存在如下問題:在菌絲體液體培養時，不能形成緊實度優異的顆粒(pellet)。因此，要求開發出緊實度優異的裂褶菌菌絲球的形成方法。
[0005]另一方面，葡聚糖(β-glucan)是在體內不會被消化、吸收的膳食纖維的一種，從酵母、蘑菇、谷類等以各種形態進行生產。這種β_葡聚糖具有抗癌效果、防止血栓形成效果、免疫力增加、糖尿病及成人疾病預防效果等，從而作為藥品和食品添加劑來進行了利用。另外，具有皮膚保護、皮膚水分增加、彈力性提高等美容效果，從而還使用為化妝品原料。
[0006]最近，在與裂褶菌有關的各種研究中，發現裂褶菌生產的被稱為葡聚糖的多糖體具有各種功效，作了很多努力，以從裂褶菌生產β -葡聚糖。
[0007]但是，目前實情是，還不能以滿意的提取率生產葡聚糖，因此能夠從裂褶菌高產地回收β_葡聚糖的方法的開發仍是迫切的。
[0008]在韓國授權專利第10-0909857號中，記載有“以高濃度生產β _1，6_支鏈-β -1, 3-葡聚糖的裂褶菌新菌株QG143-1和使用該菌株的β -1, 6-支鏈-β -1, 3-葡聚糖的制造方法”。
[0009]另外，在韓國授權專利第10-0892355號中記載有“基于裂褶菌菌絲體的半連續式液體培養的β -1, 3-葡聚糖批量生產方法”。
【發明內容】
[0010]本發明想要開發并提供能夠制造緊實度優異的裂褶菌菌絲球的方法。
[0011]另外，本發明想要開發并提供能夠高產地獲得源于裂褶菌菌絲體的β-葡聚糖的方法。
[0012]本發明的第一方式，提供一種裂褶菌菌絲球(pellet)的制造方法，其特征在于，在培養裂褶菌的菌絲體時，添加粘土礦物。
[0013]屬于擔子菌類的白腐菌、裂褶菌，在液體培養菌絲體時不能形成緊實度優異的顆粒(pellet)。但是,通過本發明確認到,在將粘土礦物(clay mineral)添加到裂裙菌菌絲體的液體培養過程中時，能夠制造出菌絲體緊實度優異的裂褶菌菌絲球。
[0014]另一方面，在本發明裂褶菌菌絲球的制造方法中，上述粘土礦物作為一例可以是蛭石(vermiculite)或伊利石(illite)。
[0015]另一方面，在本發明裂褶菌菌絲球的制造方法中，關于上述粘土礦物，優選以培養基的0.1%?5% (w/v)進行添加。這是因為，在以這種比率添加時，相比于其他添加比率，能夠順利地執行菌絲體培養，也能夠順利地形成顆粒。
[0016]另一方面，本發明的第二方式提供一種從裂褶菌菌絲體生產β_葡聚糖的方法，其特征在于，包括如下步驟:在培養裂褶菌的菌絲體時，添加粘土礦物而進行培養；以及在上述培養之后，從培養液回收β_葡聚糖。
[0017]根據本發明能夠確認到，在培養裂褶菌的菌絲體時，添加粘土礦物而進行培養的情況，與沒有添加粘土礦物的情況相比，β-葡聚糖(β-glucan)的生產量增加了 30%左右。
[0018]另一方面，在本發明的從裂褶菌菌絲體生產葡聚糖的方法中，關于上述葡聚糖的回收，作為一例能夠通過乙醇沉淀而執行。在利用公知為容易回收有用物質的方法的乙醇沉淀法來執行乙醇沉淀時，能夠從培養液容易地獲得β_葡聚糖。但是，根據需要，在乙醇沉淀之前，還能夠追加培養液的過濾過程。
[0019]根據本發明，在培養裂褶菌菌絲體時添加粘土礦物而進行培養，從而能夠制造出緊實度增加的裂褶菌顆粒菌絲體。
[0020]另外，在培養裂褶菌菌絲體時添加粘土礦物而進行培養，從而能夠高產地生產源于裂褶菌的葡聚糖。
【附圖說明】
[0021]圖1是用肉眼觀察了通過培養制造的裂褶菌菌絲球的結果。
[0022]圖2是利用解剖顯微鏡觀察了通過培養制造的裂褶菌菌絲球的截面的結果。
[0023]圖3是測量添加粘土礦物(蛭石或伊利石)而進行培養的裂褶菌菌絲體培養液的過濾效率的結果。
[0024]圖4是測量添加粘土礦物(蛭石或伊利石)而進行培養的裂褶菌菌絲體培養液的β葡聚糖生產量的結果。
【具體實施方式】
[0025]以下，通過下述實施例進一步詳細說明本發明的內容。但是，本發明的權利范圍不僅僅限定于下述實施例，包含與此等價的技術思想的變形。
[0026]實施例1:裂褶菌菌絲球的制造
[0027]對于一般YMG液體培養基(0.4% (w/v)酵母提取物、1% (w/v)麥精、0.4% (w/v)葡萄糖)和在上述一般YMG液體培養基中添加了 0.5% (w/v)蛭石(vermic ulite)或伊利石(illite)而制造的培養基各自接種裂褶菌種菌并執行了菌絲體液體培養。
[0028]關于液體培養，在將上述制造的10ml的液體培養基分別投入到250ml錐形瓶之后，進行滅菌而使用，在24°C下以150rpm振蕩培養了五天。之后，用肉眼觀察了所生成的顆粒，并且利用解剖顯微鏡對截面進行了觀察。
[0029]實驗結果，能夠確認到相比于在一般培養基中培養的裂褶菌顆粒菌絲體，在添加了粘土礦物(蛭石或伊利石)的培養基中培養的裂褶菌顆粒菌絲體的緊實度更優異(圖1、圖
2)。圖1是用肉眼觀察了通過培養而制造的裂褶菌菌絲球的結果。圖2是利用解剖顯微鏡觀察了通過培養而制造的裂褶菌菌絲球的截面的結果。
[0030]實驗例1:裂褶菌菌絲球的過濾效率測量
[0031]在本實驗例中，想要確認在添加了本發明的粘土礦物(蛭石或伊利石)的培養基中培養而制造的裂褶菌菌絲球的過濾效率。
[0032]菌絲體培養是按照在上述實施例1中記載的方法而執行的，過濾效率是以100L的培養液為基準來測量了過濾速度、過濾器更換次數。過濾速度是以裂褶菌一般菌絲體培養液為基準測量每升獲得的量的時間而換算為百分率的。關于過濾器更換次數，對在過濾100L時0.45 μ m過濾器(filter)的更換次數進行了測量。
[0033]實驗結果，能夠確認到:在添加了蛭石(Vermiculite)的培養基中培養而制造的裂裙菌菌絲體培養液相比于在一般培養基中培養而制造的菌絲體培養液，過濾速度增加，過濾過濾器更換次數也減少，大大增加了作業效率(圖3)。圖3是對添加粘土礦物(蛭石或伊利石)而培養的裂褶菌菌絲體培養液的過濾效率進行測量的結果。觀察圖3可確認到，在培養液過濾時到約5L的過濾速度三種都表現出相似的模樣，但是隨著過濾液的量增加，一般裂褶菌菌絲體培養液的過濾速度顯著降低，甚至減少到初始過濾速度的約50%。另外，能夠確認到:添加粘土礦物而培養的裂褶菌菌絲體培養液，到100L的整個過濾期間都表現出初始速度的80%以上。
[0034]如上所述的實驗的結果，表示:在添加了本發明的粘土礦物的培養基中培養而制造的裂褶菌菌絲球比在一般培養基中培養而制造的裂褶菌菌絲球更堅硬、即緊實度增大。
[0035]實施例2:從裂褶菌菌絲體回收β -葡聚糖
[0036]在本實施例中，想要確認從在添加了粘土礦物(蛭石或伊利石)的培養基中培養的裂裙菌菌絲體生成的β -葡聚糖(β -glucan)的量。
[0037]菌絲體培養是按照在上述實施例1中記載的方法而執行的，而關于β -葡聚糖，在通過滅菌而殺滅微生物之后，利用0.45 μ m過濾器(filter)將菌絲體與培養液進行了分離。之后，添加與所過濾的培養液同量的95%乙醇，一邊以約400rpm進行攪拌一邊使β-葡聚糖沉淀而獲得，將所獲得β_葡聚糖在65°C下干燥48小時后測量了重量。
[0038]實驗結果，如圖4所示，能夠確認到:以100L培養液為基準，與在一般培養基中培養的培養液相比，伊利石(illite)約增加了 18%、蛭石(vermiculite)約增加了 30%。圖4是測量添加粘土礦物(蛭石或伊利石)而進行培養的裂褶菌菌絲體培養液的β葡聚糖生產量的結果。
【主權項】
1.一種裂褶菌菌絲球的制造方法，其特征在于， 在培養裂褶菌的菌絲體時，添加粘土礦物。
2.根據權利要求1所述的裂褶菌菌絲球的制造方法，其特征在于， 上述粘土礦物為蛭石或伊利石。
3.根據權利要求1所述的裂褶菌菌絲球的制造方法，其特征在于， 關于上述粘土礦物，以培養基的0.1%?5% (w/v)進行添加。
4.一種從裂褶菌菌絲體生產葡聚糖的方法，其特征在于包括如下步驟: 在培養裂褶菌的菌絲體時，添加粘土礦物而進行培養；以及 在上述培養之后，從培養液回收葡聚糖。
5.根據權利要求4所述的從裂褶菌菌絲體生產β-葡聚糖的方法，其特征在于，上述β-葡聚糖的回收是通過乙醇沉淀而執行的。
【專利摘要】本發明涉及裂褶菌菌絲球的制造方法及利用其的β-葡聚糖生產方法。在培養裂褶菌菌絲體時，添加粘土礦物而增加了緊實度。
【IPC分類】C12P19-08, C12N1-14, C12R1-645
【公開號】CN104673674
【申請號】CN201310616930
【發明人】崔信旭, 黃淳錫, 石地琄
【申請人】瑞帝安有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年11月27日