從藍莓中分離純化紫檀芪的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然有機化學領域，涉及一種以大興安嶺野生藍莓為原料制備紫檀芪的方法。
【背景技術】
[0002]紫檀芪是紫檀中所含的一種化學成分，但是科學家在其它植物中也相繼發現了紫檀芪的存在，但因其首次發現與紫檀種，固命名為紫檀芪。紫檀芪為白色或類白色粉末結晶，屬多羥基二苯乙烯類化合物，為白藜蘆醇的同系物，有著豐富的藥用價值，屬于血竭制品中的抗真菌活性成分，對于癌癥，尚血壓，尚血脂的治療都有一定的效果。
[0003]目前，紫檀芪的獲得有三種方式，一種為植物提取，一種為生物合成，一種為化學合成。
[0004]盧文杰等(藥學學報33:755-758，1998)報道了從劍葉龍血樹木材中提取紫檀芪。
[0005]中國專利申請CN 201010582548.3報道了一種紫檀芪的生物合成法，即采用葡萄白藜蘆醇-氧-甲基轉移酶催化白藜蘆醇制備紫檀芪，具體為:根據獲得的中國野生葡萄華東葡萄ROMT基因EST序列，利用5’和3’ RACE全長基因克隆技術克隆葡萄ROMT基因，該基因開放閱讀框全長為1074bp ;克隆的葡萄STS和ROMT能同時轉入模式植物煙草中，利用煙草植物分析葡萄ROMT催化白藜蘆醇生成紫檀芪的生物合成途徑，為定向獲得一個葡萄ROMT基因序列，此ROMT基因在轉基因煙草中能催化白藜蘆醇生成紫檀芪，為利用植物合成紫檀芪提供ROMT基因序列和方法；該方法以白藜蘆醇為原料，生產成本高。
[0006]中國專利申請CN 200310111885.4報道了一種紫檀芪的化學合成方法，即采用對硝基甲苯與3，5_ 二甲氧基苯甲醛為原料，經縮合，還原，重氮化，水解得到產品；具體包括如下步驟:3，5-二甲氧基苯甲醛、對硝基甲苯及甲醇鈉反應制得3，5-二甲氧基-4’ -硝基二苯乙烯；再與水合肼、活性炭及路易斯酸反應得到3，5_二甲氧基-4-氨基二苯乙烯，然后溶于適量有機溶劑中，加入硫酸，攪拌，在冰鹽浴條件下慢慢滴加質量濃度為10%?30%的亞硝酸鈉溶液，制得3，5- 二甲氧基-二苯乙烯的重氮鹽；3，5- 二甲氧基-二苯乙烯的重氮鹽水解得到目標化合物。該方法目標產物的收率較低，成本高，且所得產品質量較差，不適合工業化。
[0007]中國專利申請CN 200510118277.5公開了一種紫檀芪的合成方法，該方法以3，5-二甲氧基氯芐與對羥基苯甲醛或以3，5-二甲氧基苯甲醛與對羥基苯甲醇(先保護后氯代)，經采用保護4’ -羥基和制成膦酸酯試劑的辦法，進行維悌希-霍納爾(WITTIG-H0RNER)反應，再經水解或裂解制得紫檀芪。該方法目標產物的收率很低，不適合工業化。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供一種以植物藍莓為原料制備紫檀芪的方法，為紫檀芪的生產提供了一種新的制備路線。
[0009]本方法先采用酸水對藍莓中的花青素進行提取，防止花青素對紫檀芪純化的干擾，再利用超高壓提取設備對紫檀芪進行提取，然后進行紫檀芪的富集，最后用模擬移動床色譜分離技術的方法對紫檀芪進行分離純化，得到高純度的紫檀芪產品。
[0010]本發明的技術方案是這樣實現的，它包括以下步驟:
[0011](I)將藍莓果洗凈，然后在酸性水溶液的條件下進行提取，提取液用于分離花青素，藍莓渣用于進行下步操作；
[0012](2)將藍莓渣用超高壓提取設備以酒精為提取溶劑進行提取，啟動高壓泵，將容器內的空氣排出后迅速將壓力升高到一定值后，在此壓力下維持一定時間，然后快速打開控制高壓回路的閥門，卸除壓力，放出提取液。
[0013](3)將步驟(2)收集到的提取液濃縮，得到濃縮物；
[0014](4)將步驟(3)得到的濃縮物用正己烷溶解后過濾，收集濾餅；
[0015](5)將步驟(4)得到的濾餅用甲醇溶解后過濾，收集過濾液；
[0016](6)采用模擬移動床色譜分離技術從步驟(5)的過濾液中分離紫檀芪；
[0017]本發明較好的技術方案是:所述的步驟(I)中，酸性水溶液的pH值范圍在3?5之間，料液比為1: 5?8 (m/v)，提取溫度為40?70°C，提取2?4遍。
[0018]本發明較好的技術方案是:所述的步驟(2)中，采用超高壓提取技術對藍莓渣進行提取，提取采用的溶劑為60%?80%的酒精，料液比為1: 5?10(m/v);提取壓力為100?150Mpa ;提取時間為15?20min ;提取溫度為常溫。
[0019]本發明較好的技術方案是:所述的步驟(3)中，采用真空濃縮，真空度為-0.05?-0.08Mpa，濃縮溫度在50?60°C，得到的濃縮物中水分控制在5%以內。
[0020]本發明較好的技術方案是:所述的步驟(4)中，濃縮物:正己烷=I: 5?10(w/
V) O
[0021]本發明較好的技術方案是:所述的步驟(5)中，濾餅:甲醇溶液=I: 5?10(w/V)，溶解溫度范圍在55?60°C。
[0022]本發明較好的技術方案是:所述的步驟￠)中，采用模擬移動床色譜分離技術從甲醇層中分離純化紫檀芪，所用的模擬移動床為IV帶結構，由4?8根C18色譜柱組成，每個帶由I?2根色譜柱串聯組成，流動相為乙腈:水(1%冰醋酸)=75: 25，進樣液流速為0.2?0.4ml/min，洗脫液流速為I?5ml/min，沖洗液流速為I?5ml/min，切換時間為16?20min，色譜系統操作溫度為25?30°C。
【具體實施方式】
[0023]實施例1
[0024]將藍莓果洗凈，然后在酸性水溶液的條件下進行提取，酸性水溶液的pH值范圍在
3.0±0.1，料液比為1: 5 (m/v)，提取溫度為60°C，提取3遍，分別收集提取液和藍莓渣；將藍莓渣用超高壓提取設備以80%的酒精為提取溶劑進行提取，料液比為1: 5(m/v)，啟動高壓泵，將容器內的空氣排出后迅速將壓力升高到150Mpa，在此壓力下維持20min，溫度為常溫，然后快速打開控制高壓回路的閥門，卸除壓力，放出提取液；提取液采用真空濃縮，真空度為-0.08Mpa，濃縮溫度為50±2°C，得到的濃縮物中水分控制在5%以內，得到濃縮物；向濃縮物中加入6倍量(v/w)的正己烷，攪拌溶解后過濾，收集濾餅；向濾餅中加入5倍量(v/w)的甲醇，攪拌溶解后再次過濾，溶解溫度為55°C，收集過濾液；采用模擬移動床色譜分離技術從過濾液中分離純化紫檀芪，所用的模擬移動床為IV帶結構，由8根C18色譜柱組成，每個帶由2根色譜柱串聯組成，流動相為乙腈:水(1%冰醋酸)=75: 25，進樣液流速為0.2ml/min,洗脫液流速為5ml/min，沖洗液流速為5ml/min，切換時間為16min，色譜系統操作溫度為25°C;對得到的含有紫檀芪的洗脫液進行真空減壓濃縮，得到純度為99.31 %的紫檀芪類白色晶體狀粉末。
[0025]實施例2
[0026]將藍莓果洗凈，然后在酸性水溶液的條件下進行提取，酸性水溶液的pH值范圍在4±0.1，料液比為1: 6 (m/v)，提取溫度為50°C，提取3遍，分別收集提取液和藍莓渣；將藍莓渣用超高壓提取設備以70%的酒精為提取溶劑進行提取，料液比為1: 6(m/v)，啟動高壓泵，將容器內的空氣排出后迅速將壓力升高到140Mpa，在此壓力下維持17min，溫度為常溫，然后快速打開控制高壓回路的閥門，卸除壓力，放出提取液；提取液采用真空濃縮，真空度為-0.07Mpa，濃縮溫度為55 ± 2°C，得到的濃縮物中水分控制在5 %以內，得到濃縮物；向濃縮物中加入7倍量(v/w)的正己烷，攪拌溶解后過濾，收集濾餅；向濾餅中加入6倍量(v/w)的甲醇，攪拌溶解后再次過濾，溶解溫度為60°C，收集過濾液；采用模擬移動床色譜分離技術從過濾液中分離純化紫檀芪，所用的模擬移動床為IV帶結構，由8根C18色譜柱組成，每個帶由2根色譜柱串聯組成，流動相為乙腈:水(1%冰醋酸)=75: 25，進樣液流速為0.3ml/min，洗脫液流速為4ml/min，沖洗液流速為4ml/min，切換時間為18min，色譜系統操作溫度為25°C ;對得到的含有紫檀芪的洗脫液進行真空減壓濃縮，得到純度為99.17%的紫檀芪類白色晶體狀粉末。
【主權項】
1.一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于，包括以下幾個步驟: (1)將藍莓果洗凈，然后在酸性水溶液的條件下進行提取，提取液用于分離花青素，藍莓渣用于進行下步操作； (2)將藍莓渣用超高壓提取設備以酒精為提取溶劑進行提取，啟動高壓泵，將容器內的空氣排出后迅速將壓力升高到一定值后，在此壓力下維持一定時間，然后快速打開控制高壓同路的閥門，卸除壓力，放出提取液； (3)將步驟(2)收集到的提取液濃縮，得到濃縮物； (4)將步驟(3)得到的濃縮物用正己烷溶解后過濾，收集濾餅； (5)將步驟(4)得到的濾餅用甲醇溶解后過濾，收集過濾液； (6)采用模擬移動床色譜分離技術從步驟(5)的過濾液中分離紫檀芪。
2.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟⑴中，酸性水溶液的pH值范圍在3?5之間，料液比為1: 5?8 (m/v)，提取溫度為40?70°C，提取2?4遍。
3.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟(2)中，采用超高壓提取技術對藍莓渣進行提取，提取采用的溶劑為60%?80%的酒精，料液比為1: 5?10 (m/v);提取壓力為100?150Mpa ;提取時間為15?20min ;提取溫度為常溫。
4.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟(3)中，采用真空濃縮，真空度為-0.05?-0.08Mpa，濃縮溫度在50?60°C，得到的濃縮物中水分控制在5 %以內。
5.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟⑷中，濃縮物:正己燒=1: 5?10(w/v)。
6.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟(5)中，濾餅:甲醇溶液=1: 5?10(w/v)，溶解溫度范圍在55?60°C。
7.根據權利要求1所述的一種從藍莓中分離純化紫檀芪的方法，其特征在于:所述的步驟￠)中，采用模擬移動床色譜分離技術從甲醇層中分離純化紫檀芪，所用的模擬移動床為IV帶結構，由4?8根C18色譜柱組成，每個帶由I?2根色譜柱串聯組成，流動相為乙腈:水(1%冰醋酸)=75: 25，進樣液流速為0.2?0.4ml/min，洗脫液流速為I?5ml/min，沖洗液流速為I?5ml/min，切換時間為16?20min，色譜系統操作溫度為25?30。。。
【專利摘要】本發明屬于天然有機化學領域，涉及來源于藍莓的紫檀芪提取、分離方法。本方法采用酸水對藍莓中的花青素進行提取，防止花青素對紫檀芪純化的干擾，再利用超高壓提取設備對紫檀芪進行提取，然后進行紫檀芪的富集，最后用模擬移動床色譜分離技術的方法對紫檀芪進行分離純化，得到高純度的紫檀芪產品。本發明的優點：1、超高壓技術可使提取溶劑更好的進入植物細胞內部，實現紫檀芪的高效率提取；2、提取時間短，提取溫度低，能耗低；3、采用模擬移動床色譜分離技術進行紫檀芪的分離和純化，得到的紫檀芪產品純度高。本發明為紫檀芪的制備提供了一種新的生產路線，該方法原料價廉易得，收率高，且所使用到的溶劑均可以回收利用，非常適合工業化大生產。
【IPC分類】C07C41-34, C07C43-23
【公開號】CN104672066
【申請號】CN201510107787
【發明人】蘇學輝, 姚德坤
【申請人】大興安嶺林格貝寒帶生物科技股份有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月9日