超氧化歧化酶的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物酶制備技術領域，尤其涉及一種超氧化歧化酶的提取方法。
【背景技術】
[0002]超氧化歧化酶是自然界動植物和好氣微生物中普遍存在的一種重要及微量的生命物質。當代醫學研究發現，人的生命階段在在過了青少年以后，一些過氧化物等人體“垃圾”，會因來不及清除而積聚在體內。其中的過氧化游離子自由基能直接攻殺損害人體的蛋白質、核酸、細胞膜，和內臟器官，從而是人體的實質性組織器官衰老破壞。超氧化歧化酶是人體內的一種最重要的細胞保護酶，既能防輻射損傷，又能有效的抵抗過氧化游離子自由基，從而延緩衰老，調節機體代謝能力，提高人體自身的免疫功能。
[0003]超氧化歧化酶常見的生產工藝是經過采血、取血球、熱處理、離心、超濾、濃縮、冷凍干燥而制成。然而由于這些工藝中大多采用了有毒藥劑和有毒溶劑，對人體的健康造成了一定的威脅，而且其工藝復雜，成本過高，制得的產品超氧化歧化酶的雜質多。
【發明內容】
[0004]本發明提供了一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法采用的是物理法提取超氧化歧化酶，其制得的超氧化歧化酶純度可達到80%以上。
[0005]為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是:
一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法包括以下步驟:
A、將新鮮的動物血液用鈷輻照18分鐘?20分鐘；
B、向經過步驟A處理的動物血液中加入占所述動物血液質量1%?3%的水蛭素，混合，靜置2小時?3小時；
C、在B步驟反應之后，倒去其上層血清，然后再向下層紅細胞中加入占所述紅細胞體積I倍?2倍的維生素E，以1200轉/分鐘?1500轉/分鐘離心30分鐘?40分鐘；
D、將經過C步驟反應之后的混合物放入70°C?75°C的水中恒溫水浴40分鐘?60分鐘，然后取出并立即放入冰中冷凍2分鐘?3分鐘，取出，靜置2小時?3小時；
E、在D步驟反應之后，過濾，將得到的濾液加熱至50°C?60°C，然后在攪拌情況下加入占所述濾液質量1%?2%的硫酸銅飽和溶液，攪拌時間為I分鐘?5分鐘；
F、在E步驟反應之后，繼續在50°C?60°C和攪拌情況下加入占所述濾液質量1%?2%的硫酸鋁飽和溶液和占所述濾液質量0.02%?0.04%的亞硫酸鈉飽和溶液，攪拌時間為5分鐘?10分鐘；
G、將經過F步驟反應之后的混合物加熱至60°C?65°C，并調節其pH值至5.5?6.5，然后加入硫酸銅飽和溶液；當所述混合物的顏色變為無色時，停止就加入硫酸銅飽和溶液和停止加熱；
H、將經過G步驟反應之后的混合物自然冷卻并靜置I小時?1.5小時，過濾，濃縮。
[0006]由于采用上述技術方案，本發明具有如下有益效果: 1、本發明提供了一種成本低、無毒、無害，工藝簡單，條件溫和的超氧化歧化酶的提取方法。
[0007]2、本發明制得的超氧化歧化酶含有的雜質少，其純度達到80以上。
【具體實施方式】
[0008]實施例1
一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法包括以下步驟:
A、將Ikg新鮮的動物血液用鈷輻照18分鐘；
B、向經過步驟A處理的動物血液中加入0.0lkg水蛭素，混合，靜置3小時；
C、在B步驟反應之后，倒去其上層血清，然后再向下層紅細胞中加入占所述紅細胞體積I倍的維生素E，以1200轉/分鐘離心40分鐘；
D、將經過C步驟反應之后的混合物放入70°C的水中恒溫水浴60分鐘，然后取出并立即放入冰中冷凍2分鐘，取出，靜置2小時；
E、在D步驟反應之后，過濾，將得到的濾液加熱至50°C，然后在攪拌情況下加入占所述濾液質量2%的硫酸銅飽和溶液，攪拌時間為5分鐘；
F、在E步驟反應之后，繼續在50°C和攪拌情況下加入占所述濾液質量2%的硫酸鋁飽和溶液和占所述濾液質量0.04%的亞硫酸鈉飽和溶液，攪拌時間為10分鐘；
G、將經過F步驟反應之后的混合物加熱至60°C，并調節其pH值至5.5，然后加入硫酸銅飽和溶液；當所述混合物的顏色變為無色時，停止就加入硫酸銅飽和溶液和停止加熱；
H、將經過G步驟反應之后的混合物自然冷卻并靜置I小時，過濾，濃縮。
[0009]本實施例制得的超氧化歧化酶的純度為82%。
[0010]實施例2
一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法包括以下步驟:
A、將Ikg新鮮的動物血液用鈷輻照20分鐘；
B、向經過步驟A處理的動物血液中加入0.03kg水蛭素，混合，靜置2小時；
C、在B步驟反應之后，倒去其上層血清，然后再向下層紅細胞中加入占所述紅細胞體積2倍的維生素E，以1500轉/分鐘離心30分鐘；
D、將經過C步驟反應之后的混合物放入75°C的水中恒溫水浴40分鐘，然后取出并立即放入冰中冷凍3分鐘，取出，靜置3小時；
E、在D步驟反應之后，過濾，將得到的濾液加熱至60°C，然后在攪拌情況下加入占所述濾液質量1%的硫酸銅飽和溶液，攪拌時間為I分鐘；
F、在E步驟反應之后，繼續在60°C和攪拌情況下加入占所述濾液質量1%的硫酸鋁飽和溶液和占所述濾液質量0.02%的亞硫酸鈉飽和溶液，攪拌時間為5分鐘；
G、將經過F步驟反應之后的混合物加熱至65°C，并調節其pH值至6.5，然后加入硫酸銅飽和溶液；當所述混合物的顏色變為無色時，停止就加入硫酸銅飽和溶液和停止加熱；
H、將經過G步驟反應之后的混合物自然冷卻并靜置1.5小時，過濾，濃縮。
[0011]本實施例制得的超氧化歧化酶的純度為80.5%。
[0012]實施例3
一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法包括以下步驟: A、將新鮮的動物血液用鈷輻照19分鐘；
B、向經過步驟A處理的動物血液中加入占所述動物血液質量2%的水蛭素，混合，靜置
2.5小時；
C、在B步驟反應之后，倒去其上層血清，然后再向下層紅細胞中加入占所述紅細胞體積1.5倍的維生素E，以1400轉/分鐘離心35分鐘；
D、將經過C步驟反應之后的混合物放入73°C的水中恒溫水浴50分鐘，然后取出并立即放入冰中冷凍3分鐘，取出，靜置2.5小時；
E、在D步驟反應之后，過濾，將得到的濾液加熱至55°C，然后在攪拌情況下加入占所述濾液質量1.5%的硫酸銅飽和溶液，攪拌時間為3分鐘；
F、在E步驟反應之后，繼續在55°C和攪拌情況下加入占所述濾液質量1.5%的硫酸鋁飽和溶液和占所述濾液質量0.03%的亞硫酸鈉飽和溶液，攪拌時間為8分鐘；
G、將經過F步驟反應之后的混合物加熱至60V?65 °C，并調節其pH值至6.0，然后加入硫酸銅飽和溶液；當所述混合物的顏色變為無色時，停止就加入硫酸銅飽和溶液和停止加熱；
H、將經過G步驟反應之后的混合物自然冷卻并靜置I小時，過濾，濃縮。
[0013]本實施例制得的超氧化歧化酶的純度為83.1%。
【主權項】
1.一種超氧化歧化酶的提取方法，其特征在包括以下制作步驟: A、將新鮮的動物血液用鈷輻照18分鐘?20分鐘； B、向經過步驟A處理的動物血液中加入占所述動物血液質量1%?3%的水蛭素，混合，靜置2小時?3小時； C、在B步驟反應之后，倒去其上層血清，然后再向下層紅細胞中加入占所述紅細胞體積I倍?2倍的維生素E，以1200轉/分鐘?1500轉/分鐘離心30分鐘?40分鐘； D、將經過C步驟反應之后的混合物放入70V?75°C的水中恒溫水浴40分鐘?60分鐘，然后取出并立即放入冰中冷凍2分鐘?3分鐘，取出，靜置2小時?3小時； E、在D步驟反應之后，過濾，將得到的濾液加熱至50°C?60°C，然后在攪拌情況下加入占所述濾液質量1%?2%的硫酸銅飽和溶液，攪拌時間為I分鐘?5分鐘； F、在E步驟反應之后，繼續在50°C?60°C和攪拌情況下加入占所述濾液質量1%?2%的硫酸鋁飽和溶液和占所述濾液質量0.02%?0.04%的亞硫酸鈉飽和溶液，攪拌時間為5分鐘?10分鐘； G、將經過F步驟反應之后的混合物加熱至60°C?65°C，并調節其pH值至5.5?6.5，然后加入硫酸銅飽和溶液；當所述混合物的顏色變為無色時，停止就加入硫酸銅飽和溶液和停止加熱； H、將經過G步驟反應之后的混合物自然冷卻并靜置I小時?1.5小時，過濾，濃縮。
【專利摘要】本發明公開了一種超氧化歧化酶的提取方法，屬于生物酶制備技術領域。本發明先將原料用鈷輻照；加入水蛭素，靜置；倒去其上層血清，向下層紅細胞中加入維生素E，進行離心；接著恒溫水浴，水浴后立即冷凍，然后取出，靜置，過濾；將得到的濾液加熱，在攪拌情況下加入硫酸銅飽和溶液；再在攪拌情況下繼續加入硫酸鋁飽和溶液和亞硫酸鈉飽和溶液；繼續加熱，并調節其pH值，然后加入硫酸銅飽和溶液，直至所述混合物的顏色變為無色；將得到的混合物自然冷卻并靜置，過濾，濃縮。本發明提供了一種超氧化歧化酶的提取方法，該方法采用的是物理法提取超氧化歧化酶，其制得的超氧化歧化酶純度可達到80%以上。
【IPC分類】C12N9-02
【公開號】CN104651325
【申請號】CN201410292034
【發明人】鐘延華
【申請人】鐘延華
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2014年6月26日