一種治療光化性角化病的原料藥物巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制備方法
【技術領域】：
[0001] 本發明屬于藥物制備方法技術領域，具體地，設及一種治療光化性角化病原料藥 物巨大戟醇的制備方法。
【背景技術】
[000引 2012年1月23日美國FDA批準了巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)， 作為用于治療光化性角化病（Actinic Keratosis, AK，對陽光敏感的一種皮膚病）藥物上 市。該藥物的商品名Picato,由LEO化arma AS研發成功。
[000引巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)，可W從大戟屬植物巧uphorbia) 中提取分離純化，如化地orbia peplus, Euphorbia hirta, Euphorbia 化ummondi，及中藥 Euphorbia lathyris(千金子），Euphorbia kansui (甘遂）等同屬植物都含有該原料藥 物。但該原料藥物含量很低，而其Ingenol Mebutate的母核骨架化合物Ingenol,同屬植 物中也分布很廣，可供提取分離純化。母核Ingenol為四環二祗天然產物，其中B環、C環 是由環張力非常大的bicyclic[4, 4, l]undecane構成，由于其橋頭上的inside-outside stereochemistry,即構成C環的C-11到C-14在橋頭異側，使其張力大增。合成化學家對 此特殊立體化學現象特別感興趣，也使得Ingenol的全合成研究成為熱點，Wood, Tanino/ Kuwajima, Winkler,化nk, Rigby等研究團隊都完成了 Ingenol的全合成研究。最便捷的 Ingenol 全合成僅需^;：步反應。使得原料藥物巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate) 可W從合成和半合成途徑得到。
[0004] 南歐大戟巧uphorbia P巧lus Linn)，原產地中海沿岸（南歐至北非），歸化于亞 洲、美洲和澳大利亞；我國的臺灣（臺北、臺中）、廣東、香港、福建（廈口、福州）、廣西（南 寧）和云南（昆明）相繼發現歸化植株或種群，作為大戟屬植物的一種，南歐大戟在云南省 已經廣泛分布，田邊地頭，園林綠化區域，隨處可見，因其乳汁具有毒性，不能作為牧草，資 源極大，是巨大戟醇甲基了締酸醋的原料資源基礎。
[0005] 迄今為止，現有技術中未見有從南歐大戟中提取巨大戟醇甲基了締酸醋工業藥物 原料的工藝方法的報道。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種從廣布云南地區的外來植物南歐大戟巧uphorbia P巧lus)中提取分離純化天然原料藥物巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)的方 法。該工藝方法具備分離純化快捷簡單，高效高純，成本較低等優點。
[0007] 為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：
[000引巨大戟醇甲基了締酸醋的制備方法，包括下述步驟：原料提取、石油離萃取、大孔 樹脂D101吸附干法拌樣劃段、硅膠分離、Sephadex凝膠純化、DI化硅膠純化；
[0009] 所述的原料提取為；采集各地的南歐大戟或同屬植物全草，在自然陽光下驚曬干 燥，切碎后w甲醇浸泡，加熱回流提取=次，過濾除去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏；
[0010] 所述的石油離萃取為：總浸膏水混懸分散后，W體積比1:1石油離萃取3次，分液 濃縮石油離部分，得石油離總浸膏；
[0011] 所述的大孔樹脂D101吸附干法拌樣劃段是用石油離總浸膏，用適量氯仿溶解，與 大孔樹脂D101干法拌樣，然后用大孔樹脂柱粗分離，W甲醇/水溶液作為流動相，按40 %、 60%、80%、100%洗脫，收集80%甲醇水溶液洗脫洗脫流份，減壓濃縮回收溶液，得到浸膏 為總二祗部位；
[0012] 所述硅膠分離為；W適量氯仿溶解后硅膠拌樣，裝硅膠柱粗分離，用石油離/己酸 己醋作為洗脫液進行梯度洗脫，得到8個主要部位化I-VIII，其中化VII WC18柱分離， 再得10個亞部位sub化1-10 ;
[0013] 所述Se地adex凝膠純化為；對亞部位subRr8-9,再上Se地adex凝膠柱用甲醇洗 脫，收集流份濃縮，得到目標化合物單體；
[0014] 所述DI化硅膠純化為：得到單體化合物，經DI化硅膠再次分離純化，得到純度 98% W上巨大戟醇甲基了締酸醋。
[0015] 如所述的巨大戟醇甲基了締酸醋的制備方法，其中所述的方法關鍵步驟為大孔樹 脂D101吸附拌樣劃段得到總二祗部位；Se地adex凝膠柱層析純化得到化合物單體；DIOL 硅膠柱層析純化得到高純目標原料單體。
[0016] 如所述的巨大戟醇甲基了締酸醋的制備方法，其中所述的方法為取南歐大戟全 草，干燥，切碎后W甲醇浸泡，加熱回流提取=次，過濾除去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏，浸 膏W 2化水混懸分散后，體積比1:1石油離萃取5次，濃縮石油離部分，得石油離總浸膏，W 適量氯仿溶解浸膏，用大孔樹脂D101干法拌樣，然后用大孔樹脂柱粗分離，W甲醇/水溶液 作為流動相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脫；對80 %甲醇洗脫液濃縮回收得總二祗部位， W適量氯仿溶解后硅膠200~300目拌樣，裝硅膠柱粗分離，W 20:1-0:1的石油離：己酸 己醋進行梯度洗脫，得到8個主要部位化I-VIII，其中化VII WC18柱分離，得10個亞部 位sub化1-10, sub化9再上se地adex凝膠柱用甲醇洗脫，得到純度90% W上的目標化合物， 再次經DI化分離純化，得到純度98%W上的巨大戟醇甲基了締酸醋Ingenol Mebutate。
【具體實施方式】
[0017] 下面用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但并不W此來限定本 發明。
[001引實施例1
[0019] Ingenol Mebutate 的制備；
[0020] 1.原料甲醇提取：采集各地的南歐大戟巧uphorbia P巧lus Linn)或同屬植物全 草，在自然陽光下驚曬干燥，切碎后W甲醇浸泡，加熱回流提取=次，過濾除去殘渣，濾液濃 縮后得總浸膏。
[0021] 2.石油離萃取；總浸膏水混懸分散后，W體積比1:1石油離萃取3次，分液濃縮石 油離部分，得石油離總浸膏。
[002引 3.大孔樹脂D101吸附干法拌樣劃段巧油離總浸膏用適量氯仿溶解，與大孔樹 脂D101干法拌樣，然后用大孔樹脂柱粗分離，W甲醇/水溶液作為流動相，按40%、60%、 80%、100%洗脫。收集80%甲醇水溶液洗脫洗脫流份，減壓濃縮回收溶液，得到浸膏為總二 祗部化。
[0023] 4.硅膠分離；W適量氯仿溶解后硅膠拌樣，裝硅膠柱粗分離，用石油離/己酸己 醋作為洗脫液進行梯度洗脫，得到8個主要部位（化I-VIII)，其中化VII WC18(化ji Silysia化emical公司）柱分離，再得10個亞部位sub化1-10。目標化合物主要在 subRr8-9。
[0024] 5. Se地adex凝膠純化；對亞部位subRr8-9,再上Se地adex凝膠柱用甲醇洗脫，收 集流份濃縮，得到目標化合物單體。
[0025] 6. DI化硅膠純化；得到單體化合物，經DI化硅膠再次分離純化，得到純度98% W 上巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)。
[0026] 上述方法的關鍵點在于：
[0027] 1.大孔樹脂D101吸附拌樣劃段得到總二祗部位；
[002引 2. Se地adex凝膠純化得到化合物單體；
[0029] 3. DI化硅膠純化得到高純目標原料單體。
[0030] 實施例2
[0031] 巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate)的制備；
[0032] 從南歐大戟全草植物分離原料藥物巨大戟醇甲基了締酸醋：
[0033] 南歐大戟巧uphorbia P巧lus Li皿）采集于昆明北郊，干燥全草20kg，切碎后W甲 醇浸泡，加熱回流提取S次（3X 10化)，過濾除去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏約化g，浸膏W 2化水混懸分散后，體積比1:1石油離萃取5次，濃縮石油離部分，得石油離總浸膏4kg，W 適量氯仿溶解浸膏，用大孔樹脂D101 (天津市海光化工有限公司）干法拌樣，然后用大孔樹 脂柱粗分離，W甲醇/水溶液作為流動相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脫。對80 %甲醇洗 脫液濃縮回收得總二祗部位300g，W適量氯仿溶解后硅膠（200~300目）拌樣，裝硅膠柱 粗分離，W石油離：己酸己醋（20:1-0:1)進行梯度洗脫，得到8個主要部位（化I-VIII)， 其中化 VIlWC18(F'uji Silysia Qiemical 公司）柱分離，得 10 個亞部位 subRrl-lO， sub化9再上se地adex凝膠柱用甲醇洗脫，得到目標化合物（106mg)，純度90% W上。再次 經DI化(puji Silysia化emical公司）分離純化，得到巨大戟醇甲基了締酸醋（Ingenol Mebutate) (95mg)，純度98 % W上，得率百萬分之4. 75%。
[0034]
【主權項】
1. 巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟：原料提取、 石油醚萃取、大孔樹脂DlOl吸附干法拌樣劃段、硅膠分離、S印hadex凝膠純化、DIOL硅膠純 化， 所述的原料提取為：取南歐大戟或同屬植物全草，干燥，切碎后以甲醇浸泡，加熱回流 提取三次，過濾除去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏； 所述的石油醚萃取為：總浸膏水混懸分散后，以體積比1:1石油醚萃取3次，分液濃縮 石油醚部分，得石油醚總浸膏； 所述的大孔樹脂DlOl吸附干法拌樣劃段是用石油醚總浸膏，用氯仿溶解，與大孔樹 脂DlOl干法拌樣，然后用大孔樹脂柱粗分離，以甲醇/水溶液作為流動相，按40%、60%、 80%、100%洗脫，收集80%甲醇水溶液洗脫洗脫流份，減壓濃縮回收溶液，得到浸膏總二萜 部位； 所述硅膠分離為：以氯仿溶解后硅膠拌樣，裝硅膠柱粗分離，用石油醚/乙酸乙酯作為 洗脫液進行梯度洗脫，得到8個主要部位Fr I - VIII，其中Fr VII以C18柱分離，再得10 個亞部位subFrl - 10 ; 所述Sephadex凝膠純化為：對亞部位subFr8 - 9,再上Sephadex凝膠柱用甲醇洗脫， 收集流份濃縮，得到目標化合物單體； 所述DIOL硅膠純化為：上一步驟得到的單體化合物，經DIOL硅膠再次分離純化，得到 純度98 %以上的巨大戟醇甲基丁烯酸酯。
2. 如權利要求1所述的巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制備方法，其特征在于所述方法中大 孔樹脂DlOl吸附拌樣劃段得到總二萜部位，S印hadex凝膠柱層析純化得到化合物單體， DIOL硅膠柱層析純化得到高純目標原料單體為關鍵步驟。
3. 如權利要求1所述的巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制備方法，其特征在于所述的方法為 取南歐大戟全草，干燥，切碎后以甲醇浸泡，加熱回流提取三次，過濾除去殘渣，濾液濃縮后 得總浸膏，浸膏以20L水混懸分散后，體積比1:1石油醚萃取5次，濃縮石油醚部分，得石油 醚總浸膏，以適量氯仿溶解浸膏，用大孔樹脂DlOl干法拌樣，然后用大孔樹脂柱粗分離，以 甲醇/水溶液作為流動相，按40 %、60 %、80 %、100 %洗脫；對80 %甲醇洗脫液濃縮回收得 總二萜部位，以適量氯仿溶解后硅膠200~300目拌樣，裝硅膠柱粗分離，以20:1-0:1的石 油醚：乙酸乙酯進行梯度洗脫，得到8個主要部位Fr I-VIII，其中Fr VII以C18柱分離， 得10個亞部位subFrl-10, subFr9再上sephadex凝膠柱用甲醇洗脫，得到純度90%以上的 目標化合物，再次經DIOL分離純化，得到純度98 %以上的巨大戟醇甲基丁烯酸酯Ingenol Mebutate0
【專利摘要】一種治療光化性角化病的原料藥物巨大戟醇甲基丁烯酸酯的制備方法，包括下述步驟：原料提取、石油醚萃取、大孔樹脂D101吸附干法拌樣劃段、硅膠分離、Sephadex凝膠純化、DIOL硅膠純化。該方法從南歐大戟全草植物分離原料藥物巨大戟醇甲基丁烯酸酯，具備分離純化快捷簡單，高效高純，成本較低等優點。
【IPC分類】C07C67-56, C07C69-533, C07C67-48
【公開號】CN104649901
【申請號】CN201510066743
【發明人】邱明華, 萬落生, 彭惺蓉, 李忠榮, 周琳, 于慕湲
【申請人】中國科學院昆明植物研究所
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月9日