一株不動桿菌及其制備方法、應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一株不動桿菌及其制備方法、應用,尤其是在降解廢水中的對苯二甲酸的應用,屬于微生物應用技術領域。
【背景技術】
[0002]堿減量廢水產生于滌綸織物的堿減量加工工藝,堿減量廢水的主要成分為對二甲酸(PTA)、乙二醇(EG)、聚酯低聚物及少量的助劑(如季銨鹽陽離子面活性劑、耐堿滲透劑和N,N-聚氧乙烯基烷基胺)等,其中,PTA占COD總荷的63%?71%,是堿減量廢水的特征性污染物[I]。在堿減量廢水中,PTA以“三廢”形式進入環境,某些廢水(如PTA生產廢水與聚酯生產廢水)中,PTA的濃度高達數千毫克每升[2]。PTA對魚類有刺激毒害性[3],對水中微生物的再生有抑制的作用,對某些動物有致畸和致突變作用[4-5]。有效地處理堿減量廢水中的PTA,一直是人們關注的問題。
[0003]目前處理PTA廢水的主要方法為:活性炭吸附、臭氧或二氧化氯氧化的物化處理法及用好氧、厭氧或厭氧-好氧的生化處理法等.近年來PTA的生物降解處理技術受到更廣泛的關注,國內外學者對如何利用微生物處理PTA生產廢水進行了大量的研宄[6-10]。眾多研宄表明PTA可以被多種微生物分解而且可以作為微生物惟一的碳源而被降解.降解PTA的微生物廣泛存在于土壤、河流、污水處理廠的活性污泥與堆肥中.單一菌株、混合菌和活性污泥都可以在有氧與厭氧條件下降解PTA,好氧降解速度比厭氧降解速度要快得多。目前已有的文獻報道中,有人篩選到能降解PTA的菌包括革蘭氏陰性和陽性桿菌、八疊球菌、絲菌和酵母菌。陳鵬等人發現一種假絲酵母,能夠在72小時內對1400mg/L的PTA降解80%以上,降解效率較好,但是降解速率較慢。
[0004]因此,為解決上述技術問題,確有必要提供一種新的一株不動桿菌及其降解對苯二甲酸的應用,以克服現有技術中的所述缺陷。
【發明內容】
[0005]為解決上述技術問題,本發明的第一目的在于提供一種易于獲得、降解對苯二甲酸效果好且對印染廢水適應性好的一株不動桿菌。
[0006]本發明的第二目的在于提供一株不動桿菌的應用。
[0007]本發明的第三目的在于提供一株不動桿菌的制備方法。
[0008]為實現上述第一目的,本發明采取的技術方案為:一株不動桿菌,其此株菌分類名為不動桿菌Tl (Acinetobacter sp.Tl),已于2014年11月9日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC),保藏號為 CCTCC N0.M 2014558。
[0009]為實現上述第二目的,本發明采取的技術方案為:一株不動桿菌的應用,其用于高效率降解印染廢水中的對苯二甲酸。
[0010]本發明的一株不動桿菌的應用進一步為:其接種量為1%,溫度為20-40°C,pH為6-8,印染廢水(對苯二甲酸濃度為100-1000mg/L),搖床轉速為150_200r/min,24h后檢測其降解效率。
[0011]為實現上述第三目的,本發明采取的技術方案為:一株不動桿菌的制備方法,其包括如下工藝步驟:
1),富集:取曝氣池水,并加入富集培養基中,在180r/min的速度下攪拌,30°C培養I天,I天后取富集液,并加入富集培養基中,如此重復2次;
2),篩選:取富集液進行稀釋涂平板,并在篩選培養基上以30°C培養1-2天,直至平板上長出菌落;
3),分離純化和分子鑒定:將平板上長出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上進行劃線純化,30°C培養24 - 48h,挑長出的單菌落重復劃線3次;單菌落培養成菌液制成甘油管保存;
4),復篩:配制降解培養基,接種純化的菌株,接種量為1%,培養24小時候檢測降解培養基中對苯二甲酸的濃度,挑選出對苯二甲酸濃度下降較多菌株,制成甘油管保存。
[0012]本發明的一株不動桿菌的制備方法進一步為:步驟I)中,富集培養基中包含如下成分(單位為g/L):酵母浸出粉5.0,蛋白胨10.0,NaCll0.0,用lmol/L NaOH調pH至7.0。
[0013]本發明的一株不動桿菌的制備方法進一步為:步驟I)中,水和富集培養基的量為1:100 ;富集液和富集培養基的量為1:100。
[0014]本發明的一株不動桿菌的制備方法進一步為:步驟2)中,篩選培養基中包含如下成分(單位為 g/L): NH4Cll.0,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0,NaCl0.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,瓊脂 15,用 lmol/L NaOH 調 pH 至 7.5。
[0015]本發明的一株不動桿菌的制備方法還可為:步驟4)中,降解培養基中包含如下成分(單位為 g/L):NH4Cl1.0,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0,NaCl0.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,瓊脂 15,用 lmol/L NaOH 調 pH 至 7.5。
[0016]與現有技術相比,本發明具有如下有益效果:
1.本發明的一株不動桿菌降解對苯二甲酸效果好,所需時間短;能降解較高濃度的對苯二甲酸,應用范圍更廣。
[0017]2.本發明的一株不動桿菌篩選自處理印染污水的曝氣池活性污泥中,對印染污水有更好的適應性,更有應用價值。
【具體實施方式】
[0018]本發明為一株不動桿菌,此株菌分類名為不動桿菌Tl (Acinetobacter sp.Tl),已于2014年11月9日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC),保藏號為CCTCC N0.M2014558,保藏地址:中國,武漢,武漢大學。
[0019]上述不動桿菌具有如下特征:菌落為白色,圓形,邊緣整齊,表面光滑,濕潤。顯微鏡下觀察為桿狀,無芽孢,無鞭毛,革蘭氏陰性。
[0020]上述一株不動桿菌可用于降解印染廢水中特定污染物對苯二甲酸,其中一種降解方法為:其接種量為1%,溫度為20-40°C,pH為6-8,印染廢水(對苯二甲酸濃度為100-1000mg/L),搖床轉速為150_200r/min,24h后檢測其降解效率。
[0021]上述一株不動桿菌可采用如下方法制得:
1),富集:曝氣池中取曝氣池水,并加入富集培養基中,在180r/min的速度下攪拌,30°C培養I天,I天后取富集液,并加入富集培養基中,如此重復2次;其中,富集培養基中包含如下成分(單位為g/L):酵母浸出粉5.0,蛋白胨10.0,NaC110.0,用lmol/L NaOH調pH至7.0 ;水和富集培養基的量為1:100 ;富集液和富集培養基的量為1:100 ;
2),篩選:取富集液進行稀釋涂平板,并在篩選培養基上以30°C培養1-2天,直至平板上長出菌落;其中,篩選培養基中包含如下成分(單位為g/L): NH4ClLO,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0,NaC10.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,瓊脂 15,用 Imol/L NaOH 調 pH 至 7.5 ;
3),分離純化和分子鑒定:將平板上長出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上進行劃線純化,30°C培養24 - 48h,挑長出的單菌落重復劃線3次;單菌落培養成菌液制成甘油管保存;
4),復篩:配制降解培養基,接種純化的菌株,接種量為1%,培養24小時候檢測降解培養基中對苯二甲酸的濃度,挑選出對苯二甲酸濃度下降較多菌株,制成甘油管保存;其中,降解培養基中包含如下成分(單位為g/L):NH4Cl1.0,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0,NaCl0.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,瓊脂 15,用 lmol/L NaOH 調 pH 至 7.5。
[0022]以上的【具體實施方式】僅為本創作的較佳實施例,并不用以限制本創作,凡在本創作的精神及原則之內所做的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本創作的保護范圍之內。
【主權項】
1.一株不動桿菌,其特征在于:此株菌分類名為不動桿菌Tl (Acinetobacter sp.Tl),已于2014年11月9日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC),保藏號為CCTCC N0.M2014558。
2.如權利要求1所述的一株不動桿菌的應用,其特征在于:用于高效率降解印染廢水中的對苯二甲酸。
3.如權利要求2所述的一株不動桿菌的應用,其特征在于:其接種量為1%,溫度為20-40°C, pH為6-8,印染廢水(對苯二甲酸濃度為100-1000mg/L),搖床轉速為150_200r/min, 24h后檢測其降解效率。
4.一株不動桿菌的制備方法,其特征在于:包括如下工藝步驟: 1),富集:取曝氣池水,并加入富集培養基中,在180r/min的速度下攪拌,30°C培養I天,I天后取富集液,并加入富集培養基中,如此重復2次; 2),篩選:取富集液進行稀釋涂平板,并在篩選培養基上以30°C培養1-2天,直至平板上長出菌落; 3),分離純化和分子鑒定:將平板上長出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上進行劃線純化,30°C培養24 - 48h,挑長出的單菌落重復劃線3次;單菌落培養成菌液制成甘油管保存; 4),復篩:配制降解培養基,接種純化的菌株,接種量為1%,培養24小時候檢測降解培養基中對苯二甲酸的濃度,挑選出對苯二甲酸濃度下降幅度較大的菌株,制成甘油管保存。
5.如權利要求4所述的一株不動桿菌的制備方法,其特征在于:步驟I)中,富集培養基中包含如下成分(單位為g/L):酵母浸出粉5.0,蛋白胨10.0,NaCll0.0,用lmol/L NaOH調pH至7.0o
6.如權利要求4所述的一株不動桿菌的制備方法,其特征在于:步驟I)中,水和富集培養基的量為1:100 ;富集液和富集培養基的量為1:100。
7.如權利要求4所述的一株不動桿菌的制備方法,其特征在于:步驟2)中,篩選培養基中包含如下成分(單位為 g/L): NH4ClLO, KH2P043.0, Na2HP047.0, NaCl0.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,瓊脂 15,用 lmol/L NaOH 調 pH 至 7.5。
8.如權利要求4所述的一株不動桿菌的制備方法,其特征在于:步驟4)中,降解培養基中包含如下成分(單位為 g/L)-NH4Cll.0,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0,NaC10.5,MgSO4.7Η200.25,PTA (對苯二甲酸)1.0,用 lmol/L NaOH 調 pH 至 7.5。
【專利摘要】本發明涉及一株不動桿菌,此株菌分類名為不動桿菌T1(Acinetobacter sp.T1),已于2014年11月9日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC),保藏號為CCTCC NO.M2014558。該一株不動桿菌在印染廢水中降解對苯二甲酸的應用。本發明的一株不動桿菌對印染廢水中的對苯二甲酸具有更好降解性能,更有應用價值;降解效率高,所需時間短;在好氧條件下具有更好的降解效果,應用范圍更廣。CCTCC NO.M201455820141109
【IPC分類】C02F101-34, C02F3-34, C12R1-01, C12N1-20
【公開號】CN104630112
【申請號】CN201510067447
【發明人】張翼, 任燁, 王海云
【申請人】紹興柯橋江濱水處理有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月10日