一種血液檢驗中細菌反接鑒定的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫學病害微生物鑒別技術領域，具體是提供一種簡單且準確的血液檢驗中細菌反接鑒定的方法。
【背景技術】
[0002]人體正常的血液是沒有細菌的。當人體受到細菌感染后，根據受細菌感染程度的不同，可以簡單地把血液受細菌感染引起的病癥分為菌血癥、敗血癥、膿毒血癥等。在抵抗力降低的情況下細菌感染人體一般先引起某一部分的炎癥，如癤、癰、肺炎、腦炎等。醫學上把因細菌由局部炎癥部位進入血循環的病癥稱為菌血癥。這時往往會有少量細菌侵入血液，如果人的全身情況很好，這少量的細菌會被身體里產生的各種抗體、吞噬細胞和血液里的白細胞消滅。而如果侵入血管的病菌很多，毒性很強，或者由于人體過勞、營養不良、嚴重創傷或有其他疾病等原因而抵抗力極其低下時，細菌會大量繁殖并產生有毒有害物質，隨血流播散到全身。這時患者表現為高熱、寒戰、頭痛等嚴重中毒癥狀，體溫常高達40°C以上。同時，細菌可侵入各個臟器引起臟器的發炎、化膿。如果播散到皮膚，可出現各種皮疹。醫學上把細菌進入血液后在血液中生長繁殖引起的病癥稱為敗血癥。如果是化膿性細菌進入血液后，不但在血液中繁殖，引起一些臟器形成膿腫甚至是器官功能障礙、組織灌注不良或低血壓，這種病癥則稱之為膿毒血癥。膿毒癥病死率較高，大約有9%的膿毒癥患者會發生膿毒性休克和多器管功能不全，重癥監護室中一半以上的死亡是由膿毒性休克和多器官功能不全引起的。研究表明，出現臟器器官衰竭、休克、多重感染、嚴重的潛在疾病的患者預后較差。以上菌血癥、敗血癥、膿毒血癥這三種病癥的一個共同點是患者血液中都有細菌。如果用患者血液做培養，即可以檢出致病菌。因此，血液細菌培養和鑒定的結果對疾病的診斷與治療具有重要意義。
[0003]一般來說，血液細菌培養的標本是由檢驗人員采集的，采集的標本經過孵育、移種，進行初步判斷，然后再根據各種病原菌的生物學特性鑒定發出報告。但在實際臨床檢驗中，采集的血樣直接孵育培養，常常會出現某些特定的致病菌未能檢出的情況。尤其是近年來，血液感染發生呈上升趨勢，許多設備條件較好的醫院基本均采用自動血液細菌培養的設備進行血液細菌培養，普遍地存在血培養的陽性率不夠高，培養周期長，易出現污染導致錯誤結果等問題，這對臨床治療中選擇用藥、及時有效地控制感染和最后病人治療效果都具有非常巨大的影響。
[0004]因此提供一種簡單且準確的血液檢驗中細菌反接鑒定的方法具有非常重要意義。
【發明內容】
[0005]針對現有生產存在的技術問題，本發明的目的是提供一種操作簡單、安全可靠、成本低廉的泡菜生花病害菌的分選挑取方法。
[0006]本發明方法根據科赫法則，采用傳統微生物鑒定方法與臨床血液檢驗方法進行結合。具體技術方案為一種血液檢驗中細菌反接鑒定的方法，其特征在于包括步驟:
[0007]I)取樣培養:以無菌操作從血樣中取樣進行病原菌孵育，置于搖床中培養10?24h ；
[0008]2)反接培養:取液面上層液作為樣品，涂抹反接于血清培養基上，倒置于36°C恒溫培養箱中恒溫培養2?3d,觀察菌落生長狀況；
[0009]3)初步藥敏:挑取病害菌，初步藥敏測試；
[0010]4)鑒定:根據檢驗結果進行鑒定，視情況進行二次藥敏測試。
[0011]本發明通過對疑似病害微生物進行接種培養后再反接培養，利用細菌培養后不同種類的微生物不同的生長特性和菌落特征使其得以區分并選取病害疑似菌進行藥敏測試，為臨床醫生針對某一特定感染提供依據。本發明方法具有實驗簡單、成本低廉、易操作實施、重復性好等優點，能在一定程度上克服傳統臨床檢驗的局限。
【具體實施方式】
[0012]以下將結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。
[0013]實施例
[0014]試驗原料和試劑
[0015]I)患者血樣；
[0016]2)血清基礎培養基:將血清均勻加熱至56°C并保持30min，貯存于4°C，之后與基本培養基混合，基本培養基占80%?90%，血清占10%?20%。按I %體積分數加入雙抗忙存液(青霉素+鏈霉素)；
[0017]3)藥敏測試:哌拉西林他唑巴坦鈉、慶大霉素、萬古霉素、克林霉素、頭孢呋辛鈉、頭孢噻廂鈉。
[0018]試驗步驟:
[0019]I)取樣培養:以無菌操作從血樣中取樣進行病原菌孵育，置于搖床中培養10?24h ；
[0020]2)反接培養:取液面上層液作為樣品，涂抹反接于血清培養基上，倒置于36°C恒溫培養箱中恒溫培養2d,觀察菌落生長狀況；
[0021]3)初步藥敏:挑取病害菌，初步藥敏測試；
[0022]4)鑒定:根據檢驗結果進行鑒定，視情況進行二次藥敏測試。
【主權項】
1.一種血液檢驗中細菌反接鑒定的方法，其特征在于包括步驟:1)取樣培養:以無菌操作從血樣中取樣進行病原菌孵育，置于搖床中培養10?24h； 2)反接培養:取液面上層液作為樣品，涂抹反接于血清培養基上，倒置于36°C恒溫培養箱中恒溫培養2?3d,觀察菌落生長狀況； 3)初步藥敏:挑取病害菌，初步藥敏測試； 4)鑒定:根據檢驗結果進行鑒定，視情況進行二次藥敏測試。
【專利摘要】本發明通過對疑似病害微生物進行接種培養后再反接培養，利用細菌培養后不同種類的微生物不同的生長特性和菌落特征使其得以區分并選取病害疑似菌進行藥敏測試，為臨床醫生針對某一特定感染提供依據。本發明方法具有實驗簡單、成本低廉、易操作實施、重復性好等優點，能在一定程度上克服傳統臨床檢驗的局限。
【IPC分類】C12N1-20, C12Q1-02
【公開號】CN104561225
【申請號】CN201310471556
【發明人】晏健強
【申請人】晏健強
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月11日