一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法。
【背景技術】
[0002] 肝素首先從肝臟發現而得名，天然存在于肥大細胞，現在主要從牛、豬肺或豬小腸 黏膜提取，是一種由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替組成 的黏多糖硫酸脂。無論在體內還是體外，肝素的抗凝作用都很強，故臨床把它作為抗凝劑廣 泛使用，抑制血小板，增加血管壁的通透性，并可調控血管新生，具有調血脂的作用，可作用 于補體系統的多個環節，以抑制系統過度激活。與此相關，肝素還具有抗炎、抗過敏的作用。
[0003] 目前，國內生產肝素的方法，主要是鹽解法和酶解法，比如公開號為 CN101735340A、CN101649008A、CN101519459A等等的中國發明申請，這兩種方法都是采用豬 小腸粘膜為原料，在堿性條件下通過鹽解、酶解，通過乙醇反復沉淀，去除部分蛋白質后，通 過三甲胺季銨性強堿性陽離子交換樹脂吸附劑洗脫，在洗脫液中加以乙醇沉淀既得肝素鈉 初級原料出售，其缺點是生產周期長達48h，反應溫度為95-100°C，能源消耗大，水解不完 全，收率低，生產1億國際單位（IU)肝素粗品需2800-3000根豬小腸粘膜，所得產品純度低， 粗品含肝素至多為80效價/毫克；并產生大量的肥腸渣和廢水，污染環境；且生產過程中 樹脂再生困難，這種制備方法由于生產周期長，水解不完全、不徹底，制得的肝素鈉純度低、 收率低、效價低，很難進行規模性生產，且不能滿足市場的大量需求。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種高效去除蛋白質，不影響 有效成分，可節約大量乙醇，免去了使用乙醇的費用及濃縮藥液與回收乙醇的能源消耗， 其除雜工藝的成本只有乙醇法的六分之一，可縮短生產周期，降低生產成本，可用于工業化 生產。
[0005] 本發明實現目的的技術方案如下：一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特 征在于：步驟如下：（1)澄清劑的配制：A組份配成10%的溶液，先用少量的水攪成糊狀，然 后加入需要量的水，溶脹24h，備用；B組份配成10%的醋酸溶液，先用少量水攪成糊狀，然后 加入需要量的水，最后加入10%的醋酸，溶脹24h，備用；（2)酶解液的預處理：將酶解液的 pH值調至10-12,升溫至60?70°C，滅酶30?60min，降溫至30?40°C ;(3)除蛋白：按 酶解液重量的〇. 01%?〇. 05%，計算出所需要的澄清劑的用量，取步驟（1)中配制的澄清劑， 加入酶解液中并升溫至90?95°C，保溫4?6h，降至常溫，板框過濾，得到澄清液。
[0006] 所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（2)中調 pH用的堿濃度為1%?3%。
[0007] 所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（2)中調 pH用的堿為氫氧化鈉、氨水、碳酸鈉中的一種。
[0008] 所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（3)中加 入澄清劑時需稀釋3?5倍緩慢加入酶解液中。
[0009] 本發明的優點和有益效果為：1、能夠有效去除蛋白質等大分子絡合而共沉的物 質，一步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得傳統的醇 沉工藝得到簡化，并能大大縮短生產周期，降低生產成本；3、方便快捷，不用添加特殊設 備，在現有工藝中直接添加，對原液的分子結構不會造成任何方式的破壞，工藝流程短。
[0010] 采用考馬斯亮藍法，檢測去除前后，酶解液中蛋白質含量的變化，結果見表1。
【主權項】
1. 一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：步驟如下：（1)澄清劑的配 制：A組份配成10%的溶液，先用少量的水攪成糊狀，然后加入需要量的水，溶脹24h，備用； B組份配成10%的醋酸溶液，先用少量水攪成糊狀，然后加入需要量的水，最后加入10%的醋 酸，溶脹24h，備用；（2)酶解液的預處理：將酶解液的pH值調至10-12,升溫至60?70°C， 滅酶30?60min，降溫至30?40°C ; (3)除蛋白：按酶解液重量的0. 01%?0. 05%，計算出 所需要的澄清劑的用量，取步驟（1)中配制的澄清劑，加入酶解液中并升溫至90?95°C，保 溫4?6h，降至常溫，板框過濾，得到澄清液。
2. 根據權利要求1所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述 步驟（2)中調pH用的堿濃度為1%?3%。
3. 根據權利要求1所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述 步驟（2)中調pH用的堿為氫氧化鈉、氨水、碳酸鈉中的一種。
4. 根據權利要求1所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述 步驟（3)中加入澄清劑時需稀釋3?5倍緩慢加入酶解液中。
【專利摘要】一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，步驟如下：澄清劑的配制、酶解液的預處理、除蛋白、板框過濾，得到澄清液。本發明的優點和有益效果為：1、能夠有效去除蛋白質等大分子絡合而共沉的物質，步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得傳統的醇沉工藝得到簡化，并能大大縮短生產周期，降低生產成本；3、方便快捷,不用添加特殊設備,在現有工藝中直接添加，對原液的分子結構不會造成任何方式的破壞，工藝流程短。
【IPC分類】C08B37-10
【公開號】CN104558249
【申請號】CN201510040270
【發明人】徐賓朋, 郭慶, 趙厚發
【申請人】安徽科寶生物工程有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月27日