一種大花還亮草生物堿甲和大花還亮草生物堿乙的制備工藝及其對腫瘤細胞的細胞毒作用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及天然藥物化學領域。具體的，涉及一種大花還亮草生物堿甲和大花還 亮草生物堿乙的生產工藝及其對腫瘤細胞的細胞毒作用。
【背景技術】
[0002] 腫瘤是危害人類健康的主要疾病之一，目前，化療、放療、手術是當今治療腫瘤的 常規手段，但毒副反應較大。隨著對腫瘤研宄的深人，傳統中草藥在腫瘤治療方面已經得 到廣泛應用，特別是隨著細胞生物技術的不斷發展，一些常用抗癌中草藥作用機制的研宄 取得了突破性進展。據統計，我國當前已對藥用植物中28個科（屬）的3000多種以上中 草藥進行了抗癌篩選，其中含有抗癌活性成分的中草藥有200種左右。發明人在民間習 用草藥調查時，發現了草藥'大花還亮草'。大花還亮草為毛莨科翠雀屬植物Delphinium anthriscifoliumvar.majus的干燥全草，《中國植物志》記載分布于貴州，四川東部，陜西 南部，湖北及安徽等地。為我國特有植物，全草可入藥，有清熱解毒，祛痰止咳之功效 [1]。我 們在廣西隆林、賀州、金秀、凌云等地都發現了該植物的分布，當地壯族群眾主要將其用于 治療風濕痹痛，各種癰瘡癬癩等癥，效果顯著。發明人對該藥材開展了系統的化學分離工 作，并從中提取分離制備了新化合物大花還亮草生物堿甲（AnthriscifolconeA)和大花還 亮草生物堿乙（AnthriscifolconeB)，通過細胞學實驗，發現這兩種化合物對多個腫瘤細 胞具有一定的細胞毒作用，可以作為開發抗腫瘤藥物的潛在化合物，故提出此發明。
【發明內容】
[0003] 本發明化合物大花還亮草生物堿甲（AnthriscifolconeA)和大花還亮草生物堿 乙（AnthriscifolconeB)為新發現的18C降二貓生物堿，可以從大花還亮草Delphinium anthriscifolium中提取分離制備。具體步驟如下：藥材干燥全草粉碎成粗粉，采用0. 05? 0. 15mol無機酸水溶液（鹽酸、硫酸、磷酸）提取，在靜態或動態下，室溫或加熱（包括浸漬、 滲漉、回流、微波、煎煮等）提取，提取溶劑用量為藥材的5?15倍，提取次數為1?3次，酸 水提取液過濾合并后，采用無機堿（濃氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液）調節pH= 9? 10后，采用乙酸乙酯或氯仿萃取多次（3次以上）萃取的有機液濃縮后，回收去除有機溶劑， 得有機溶劑萃取物。有機溶劑萃取物用適量甲醇溶解后，用適量硅膠（200?300目）拌樣， 進行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇（含1%二乙胺）溶液進行洗脫，根據組分的分布和流出順 序，初步分成A、B、C、D四個鎦分。
[0004]A鎦分采用反向硅膠（ODS)中壓柱層析，以甲醇-水（5%-95%)為洗脫劑，開展 梯度洗脫，以TLC斑點指導合并分離，得大花還亮草生物堿甲（AnthriscifolconeA)。
[0005] B餾分首先采用凝膠柱層析（SephadexLH-20)甲醇洗脫，收集無黃酮類成分部 分，去除溶劑后，進行硅膠柱層析，采用環己烷-丙酮混合溶液洗脫（10 : 1)，以TLC斑點指 導合并分離得大花還亮草生物堿乙（AnthriscifolconeB)。
[0006] 分離獲得的大花還亮草生物堿甲（AnthriscifolconeA)和大花還亮草生物堿乙 (AnthriscifolconeB)結構式如下：
[0007]
【主權項】
1. 從大花還亮草Delphiniumanthriseifolium中提取制備大花還亮草生物堿甲 (AnthriscifolconeA)和大花還亮草生物堿乙（AnthriscifolconeB)的制備工藝；且大 花還亮草生物喊甲（AnthriscifolconeA)和大花還亮草生物喊乙（AnthriscifolconeB) 對人腫瘤細胞PC3,PC3-RTX，SUNE1，H0NE1，A549均有一定的細胞毒作用，具有開發成抗腫 瘤藥物的潛在價值。
2. 權利要求1所述的兩化合物的結構式如下：
結構式：大花還亮草生物堿甲（&)，大花還亮草生物堿乙（R2)。
3. 權利要求1所述的兩個化合物的提取工藝為： 3. 1 大花還亮草（Delphiniumanthriscifoliumvar.Majus)全草粗粉，米用 0? 05 ? 0. 15mol無機酸水溶液（鹽酸、硫酸、磷酸）提取； 3. 2酸水提取液采用無機堿調節pH= 9?10后，采用乙酸乙酯或氯仿等有機溶劑萃 取，萃取溶液減壓回收去除溶劑后，首先采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇（含1 %二乙胺）溶 液進行洗脫，洗脫液回收去除溶劑后，按流出先后分成A、B、C、D，4個餾分；A餾分采用反向 硅膠（0DS)中壓柱層析，以甲醇-水（5%?95%)為洗脫劑，梯度洗脫，分離得大花還亮草 生物堿甲（AnthriscifolconeA) ;B餾分首先采用凝膠柱層析（SephadexLH-20)甲醇洗 脫，去除黃酮類成分，收集無黃酮反應餾分上硅膠柱層析，采用環己烷-丙酮（10 : 1)溶液 洗脫，分離得到大花還亮草生物堿乙（AnthriscifolconeB); 3. 3有關上述提取工藝的說明： 1) 3. 1所述提取方法可為：浸漬、滲漉、超聲、回流、微波、煎煮提取等多種方法； 2) 3. 2所述調節pH的無機堿為：濃氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液。
4. 權利發求1所述的大花還亮草生物堿甲（AnthriscifolconeA)和大花還亮草生物 堿乙（AnthriscifolconeB)具有對腫瘤細胞的細胞毒作用，上述化合物有開發成抗腫瘤藥 物的潛力。
【專利摘要】一種大花還亮草生物堿甲和大花還亮草生物堿乙的制備工藝及其對腫瘤細胞的細胞毒作用。屬醫藥技術領域，發明公開了種從大花還亮草Delphinium anthriscifolium中提取制備新化合物大花還亮草生物堿甲(Anthriscifolcone A)和大花還亮草生物堿乙(Anthriscifolcone B)的制備工藝，大花還亮草生物堿甲(Anthriscifolcone A)和大花還亮草生物堿乙(Anthriscifolcone B)對人腫瘤細胞PC3，PC3-RTX，SUNE1，HONE1，A549均有定的細胞毒作用，具有開發成抗腫瘤藥物的潛在價值。
【IPC分類】A61P35-00, C07D491-113
【公開號】CN104557958
【申請號】CN201510034092
【發明人】藍鳴生, 王碩, 周小雷, 陳路
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月23日