一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物制藥技術領域，特別是涉及一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法。
【背景技術】
[0002]鹽酸四環素(Tetracycline hydrochloride)是一種四環類抗生素，對革蘭氏陽性菌、陰性菌、立克次體、濾過性病毒、螺旋體及原蟲類都有很好的抑制作用。鹽酸四環素是由金色鏈球菌在32°C發酵170小時，發酵液在pHl.7-1.9酸化處理，過濾，濾液調節pH結晶得四環素，四環素與尿素反應生成四環素尿素復鹽，四環素尿素復鹽在丁醇中加入鹽酸后，反應生成鹽酸四環素。鹽酸四環素的制備過程中會產生雜質，主要包括4-差向四環素(4-epitetracycline)、4_ 差向脫水四環素(4_epianhydrotetracycline)、脫水四環素(Anhydrotetracycline)、土霉素(Oxytetracycline)和 2_ 乙酰基-2-去氨甲基四環素(2-acetyl-2_decarbamoyltetracycline)，這些雜質毒性大，抗菌活性差。其中2_乙酰基-2-去氨甲基四環素在中國藥典和美國藥典中均未檢測，歐洲藥典中對該雜質采用4-差向四環素做對照進行了檢測，限度為彡1.5%。
[0003]近年來，各國藥典對原料藥中雜質控制越來越嚴格，在此背景下，制備2-乙酰基-2-去氨甲基四環素對照品，對鹽酸四環素中該雜質的定性及定量，顯得越來越重要。
【發明內容】
[0004]本發明的目的就在于提供一種工藝簡便，產品純度高，可作為鹽酸四環素定性及定量檢測對照品的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法。
[0005]為實現上述發明目的所采取的技術方案為:
一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法，其特征在于其工藝步驟為:
將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液減壓濃縮至原體積的1/4，后注入高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素出峰時段的溶液；
將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液pH調至中性，逐漸加入氯化鈉，直至使乙腈與水分離，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈層，在-15°C?_30°C靜置14-18小時，后立即過濾，所得濾液減壓濃縮至近干，58°C?62°C干燥得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品。
[0006]所述高效液相色譜的色譜條件為:
流動相:體積比為80?85:20?15的0.05%磷酸溶液-乙腈溶液；
色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ；
流動相流速:20-30ml/min ；
檢測波長:254nm。
[0007]所述減壓濃縮條件為:壓力0.06?0.09MPa，58°C?62°C水浴中加熱。
[0008]上述萃取過程，加入氯化鈉后，使乙腈與水分層，2-乙酰基-2-去氨甲基四環素被萃取至乙腈層中，連續萃取兩次，使水層接近無色。在-15°C?-30°C靜置的目的是使溶解在乙腈中微量鹽類結晶析出。
[0009]在上述體系中，乙腈層在減壓濃縮干燥后，所得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的純度高達85%。
[0010]本發明的優點在于:1、通過本方法可制備出2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品，以它作為2-乙酰基-2-去氨甲基四環素定性的對照品，從而解決了分析人員在分析過程中該雜質定位問題。2、本發明工藝簡便，具有高效、快速等特點。
【具體實施方式】
[0011]為了更好的理解本發明，下面通過實施例對本發明作進行一步說明，但所舉實施例并不限制本發明的保護范圍。
[0012]下述實施例中鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液是四環素與尿素反應生成尿素復鹽后的廢液，其中4-差向四環素、2-乙酰基-2-去氨甲基四環素等雜質較多。
[0013]實施例1
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:15);流速:24 ml/min ;檢測波長:254nm。
[0014]儀器型號:大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0015]制備方法:
將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液經0.08MPa，60°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素出峰時段的溶液。
[0016]將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液用乙酸調至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時，取出后立即過濾，取濾液在0.07MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品，經測定，含量為85.6%,87.4%。
[0017]實施例2
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:20);流速:20 ml/min ;檢測波長:254nm。
[0018]儀器型號:大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0019]制備方法:
將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液經0.06MPa，58°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素出峰時段的溶液。
[0020]將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液用乙酸調至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時，取出后立即過濾，取濾液在0.09MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品，經測定，含量為86.2%、85.3%。
[0021]實施例3
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:20);流速:20 ml/min ;檢測波長:254nm。
[0022]儀器型號:大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0023]制備方法:
將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液經0.09MPa，62°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素出峰時段的溶液。
[0024]將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液用乙酸調至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時，取出后立即過濾，取濾液在0.06MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品，經測定，含量為85.5%,87.0%。
【主權項】
1.一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法，其特征在于其工藝步驟為: 將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液減壓濃縮至原體積的1/4，后注入高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素出峰時段的溶液； 將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液pH調至中性，逐漸加入氯化鈉，直至使乙腈與水分離，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈層，在-15°C?_30°C靜置14-18小時，后立即過濾，所得濾液減壓濃縮至近干，58°C?62°C干燥得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品。
2.按照權利要求1所述的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法，其特征在于所述高效液相色譜的色譜條件為: 流動相:體積比為80?85:20?15的0.05%磷酸溶液-乙腈溶液； 色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ； 流動相流速:20-30ml/min ； 檢測波長:254nm。
3.按照權利要求1所述的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法，其特征在于所述減壓濃縮條件為:壓力0.06?0.09MPa，58°C?62°C水浴中加熱。
【專利摘要】本發明涉及一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環素的制備方法，該方法是以將鹽酸四環素生產過程中的尿素復鹽母液經減壓濃縮后，注入高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液；將分離出來的2-乙酰基-2-去氨甲基四環素溶液pH調至中性，逐漸加入氯化鈉，使乙腈與水分層，2-乙酰基-2-去氨甲基四環素被萃取至乙腈層中，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置冰箱冷凍室中靜置過夜，取出后立即過濾，取濾液減壓濃縮并干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環素純品。本發明工藝簡便，具有高效、快速、回收率高等特點。
【IPC分類】C07C231-24, C07C237-26
【公開號】CN104529813
【申請號】CN201410744314
【發明人】周紅, 鄒學鋒, 李鑫
【申請人】寧夏啟元藥業有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月9日