專利名稱：靈芝α－(1→3)－D－葡聚糖硫酸酯衍生物及其用途和制備方法
技術領域：
本發明涉及一種α-(1→3)-D-葡聚糖的衍生物及其用途和制備方法，這種衍生物具有明顯的抗腫瘤活性。它屬于高分子化學領域，也屬于分子生物學領域。
80年代以來的研究表明，靈芝水不溶性多糖是靈芝多糖的主要成分。Sone等人(Agric.Biol.Chem.49，2641，1985)的研究認為靈芝水不溶性多糖是靈芝子實體β-(1→3)-D-葡聚糖，但不具有抗腫瘤活性且不能被β-(1→3)-D-葡聚糖水解酶水解。通過化學修飾改變多糖生物活性的報道主要有Smith降解(藥學學報21，944，1986)，高碘酸氧化后硼氫化還原(Carbohydr.Res.115，273，1983)，羧甲基化(Eur.J.Cancer 15，2110，1978)和硫酸酯化(Antimicrob.Agents Chemother.85，6132，1985；Biochem.Pharmcol.37，2887，1988；J.Imunopharmcol.12，225，1990)等，由此提高多糖在抗腫瘤、抗愛滋病毒及抗凝血等方面生物活性。
本發明的目的是提供一種α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物及其用途和制備方法，該方法將充分利用靈芝子實體中含量最多(含量占3％)而又無生物活性的水不溶性α-(1→3)-D-葡聚糖，通過硫酸酯化后變為水溶性衍生物，使其具有明顯抗腫瘤活性和免疫功能的多糖，可用作保健品，并可望開發成天然藥物，是一種科技含量高的產物。
為實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下一種α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物，它是以靈芝子實體中水不溶性的線型α-(1→3)-D-葡聚糖為原料，將其溶解在0.25M LiCl/DMSO中，加入由氯磺酸和吡啶制成的磺化試劑，反應4-6小時，經丙酮沉淀、洗滌和真空干燥后得到硫酸酯化衍生物。
這種硫酸酯化衍生物對植入小鼠(昆明種小白鼠)體內的愛氏腹水腫瘤(EAC)具有明顯的抑制作用(動物實驗結果見附表1)，且無毒副作用，因此，本發明的α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物可用于制備抗腫瘤藥物和提高人體免疫機能的保健品。
一種制備α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物的方法以從靈芝子實體中分離出的不溶性α-(1→3)D-葡聚糖為原料，將溶解在0.25M LiCl/DMSO中，加入磺化試劑，反應4-6小時，得產物。經丙酮沉淀、洗滌和真空干燥后得到硫酸酯化衍生物。
磺化試劑的制備方法為在冰浴條件下，將4.9mL氯磺酸緩慢地滴加到24mL吡啶中，制成磺化試劑。
從靈芝子實體中分離出的水不溶性線型α-(1→3)-D-葡聚糖分子量為19.5×104，在1N NaOH中[α]D=170(degcm2g-1)。分離方法如下靈芝子實體經粉碎、脫脂、再用磷酸鹽緩沖液于100℃下提取出水溶性多糖后，用1M NaOH水溶液提取出水不溶性α-(1→3)-D-葡聚糖。將它的NaOH溶液在流水中透析7天，再對蒸餾水透析3天。此時NaOH被透析掉，多糖沉淀出來。然后將渾濁液進行離心，收集固體并進行真空干燥。由此得到白色粉末狀靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖。
本發明建立了以靈芝子實體水不溶性線型α-(1→3)-D-葡聚糖為原料制備出水溶性硫酸酯化衍生物的方法。動物體內試驗證明，α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物都具有顯著的抗腫瘤EAC活性，且無毒副作用，可用作保健品，作為抗腫瘤天然藥物也具有應用前景。本發明與已有技術相比有實質性不同，而且科技含量較高，有明顯的技術進步。
本發明首次用靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖為原料，通過衍生化使水不溶性且無生物活性的多糖變為水溶性，且抗腫瘤活性明顯的多糖衍生物。此法工藝簡單，操作方便，效果顯著。
以下結合具體的實施例對本發明的技術方案作進一步的說明實施例1靈芝子實體經粉碎、脫脂、再用磷酸鹽緩沖液于100℃下提取出水溶性多糖后，用1M NaOH水溶液提取出水不溶性α-(1→3)-D-葡聚糖。將它的NaOH溶液在流水中透析7天，再對蒸餾水透析3天。此時NaOH被透析掉，多糖沉淀出來。然后將渾濁液進行離心，收集固體并進行真空干燥。由此得到白色粉末狀靈芝α-(1→3)D-葡聚糖。
將靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖200mg，溶于40mL含0.25M LiCl的二甲基亞砜(0.25M LiCl-DMSO)混合溶劑中。在冰浴條件下，將4.9mL氯磺酸緩慢地滴加到24mL吡啶中，制成磺化試劑。在持續攪拌下，將磺化試劑慢慢滴加到上述多糖的LiCl-DMSO溶液中，反應4-6小時。然后，用NaOH水溶液中和至中性。最后，加入大量丙酮沉淀出反應產物。用丙酮水溶液洗滌反應產物6次，以除去其中的無機鹽和小分子，再用無水丙酮洗滌6次，真空干燥7天，得到白色的硫酸酯化衍生物。產率為70-80％。
附表1．靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖及其衍生物抗EAC腫瘤活性
權利要求
1．一種靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物，其特征在于它是將α-(1→3)-D-葡聚糖溶于含0.25M LiCl的二甲基亞砜混合溶劑中，在攪拌下滴加磺化試劑，反應4-6小時，最后用NaOH水溶液中和至中性，再用丙酮沉淀并用丙酮/水混合溶液洗滌后得到的硫酸酯化衍生物。
2．按權利要求1所述的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物用于制備抗腫瘤藥物或保健品。
3．一種制備權利要求1所述的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物的方法，其特征在于它是將α-(1→3)-D-葡聚糖溶于含0.25M LiCl的二甲基亞砜混合溶劑中，在攪拌下滴加磺化試劑，反應4-6小時，最后用NaOH水溶液中和至中性，再用丙酮沉淀并用丙酮/水混合溶液洗滌后，即得到靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖硫酸酯化衍生物。
全文摘要
本發明公開了具有抗腫瘤活性的靈芝α－(1→3)－D－葡聚糖硫酸酯化衍生物及其用途和制備方法。該方法用堿水溶液首次從靈芝子實體中提取出水不溶性線型α－(1-3)－D－葡聚糖,將其溶解在0.25M LiCl/DMSO中,加入磺化試劑,在室溫下反應4-6小時得到水溶性的多糖的硫酸酯衍生物。這種衍生物對植入小鼠體內的愛氏腹水瘤(EAC)的生長具有明顯的抑制作用,并且無毒副作用。
文檔編號C08B37/00GK1283632SQ99116588
公開日2001年2月14日 申請日期1999年8月5日 優先權日1999年8月5日
發明者張俐娜, 陳敬華, 張玫 申請人:武漢大學