專利名稱：：微生物多糖,其制備方法和含有它的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種作為白細胞介素-1(IL-1)受體拮抗劑的微生物多糖、其制備方法、含有它的藥物組合物和它在制備用于治療或預防可通過抑制IL-1活性而得以緩解的疾病的藥物中的用途，還涉及能夠產生所述微生物多糖的放線菌139。迄今為止，已發現植物、動物和微生物中存在數百種碳水聚合物，它們在機體生命過程中起著各種各樣的作用，如能量儲存，結構成份，作為調控和信息系統等。由于微生物多糖具有顯著親水性，因此其商業應用前景廣闊。近20年，國內外各類多糖藥物不斷進入臨床，用于抗感染、抗腫瘤、抗風濕、抗消化道潰瘍和增進免疫功能等，近年在抗血脂、抗衰老方面也有發展。目前如香菇多糖、靈芝多糖、銀耳多糖、豬苓多糖、蟲草多糖等均已用于臨床，但對其糖鏈基本結構及與體內相應作用機理研究較少。YoshidazuMorishita等，BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications，1991；176(3)949-957報道，從微生物Aureobasidium產物中發現了多糖HS-142-1，它是心鈉素的受體拮抗劑，并對其化學性質進行了較深入研究，該多糖是第一個選擇性作用于心鈉素受體的非肽類拮抗劑。目前還沒有發現高分子量多糖可以作為IL-1受體拮抗劑。IL-1是一種重要的細胞因子，具有廣泛的生物學活性，幾乎對各種類型的細胞都有影響，同時與其它細胞因子和小分子介質相互聯系。它不僅參與多種生理過程，如免疫活性細胞的調節、造血、神經內分泌及抗腫瘤等，同時與許多疾病的病理變化有關。例如，本領域已知IL-1參與下列多種病理變化過程炎性疾病、敗血性休克、風濕性關節炎、炎性腸疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰島素依賴性糖尿病、動脈粥樣硬化、發熱、病理性移植排斥反應、移植物抗宿主疾病、牙周組織病、自身免疫性甲狀腺炎癥、酒精中毒性肝炎、急性疾病血清蛋白改變、紫外線照射致皮膚損傷、嗜睡、厭食、通風、牛皮癬、哮喘及骨質疏松等。在這些疾病過程中降低IL-1的作用已成為一種治療這些疾病的潛在方法。因而迫切需要各種來源的IL-1受體拮抗劑。本發明的發明人出人意外地發現，從放線菌菌株139的培養物中分離的多種高分子量多糖具有顯著的IL-1受體拮抗活性，體內研究表明多糖139A具有抗炎作用。因此，本發明涉及一種分離的微生物多糖或其鹽或具有IL-1受體拮抗活性的水解產物，其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105；其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。本發明還涉及一種分離的微生物多糖或其鹽或具有IL-1受體拮抗活性的水解產物的制備方法，其特征在于將放線菌139在適合其生長的條件下培養一段時間，然后從培養物中分離所述微生物多糖或其鹽，或進一步水解所分離的多糖，或進一步將所分離的游離酸轉化為鹽或將其鹽轉化為游離酸形式。本發明另一方面涉及含有上述微生物多糖或其可藥用鹽或可按上述方法獲得的微生物多糖或其可藥用鹽和可藥用載體的藥物組合物。本發明也涉及上述微生物多糖或其可藥用鹽或可根據上述方法獲得的微生物多糖或其可藥用鹽在制備用于治療或預防可通過抑制IL-1活性得以緩解的疾病的藥物的用途。本發明再一方面涉及能夠產生上述多糖或可用于上述方法的微生物菌株放線菌139。如上所述，本發明涉及一類新型微生物多糖，它們具有IL-1受體拮抗活性。這些微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105，優選為4×105-10×105，更優選為6×105-9×105，最優選為約6．33478×105。上述多糖分子量是用已知分子量的葡聚糖(Fluka)作為標準參照通過凝膠色譜法測定的。色譜條件如下柱為GF-7MHQShodexAsahipak凝膠柱(7．6×300mm)；流動相為0．1MNaNO3；流速為0．5ml／min；柱溫為35℃；檢測器為RID-6A示差折光檢測器。在上述條件下，本發明微生物多糖的保留時間在8-25分鐘，優選在10-20分鐘之間，特別優選為約11．5、11．6、15．0或19．4分鐘。如上所述，本發明的微生物多糖含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。在本發明的一個優選實施方案中，所述微生物多糖含有葡萄糖，更優選以下列摩爾比含有下列單糖鼠李糖4．0、木糖6．0、甘露糖3．0、阿拉伯糖12、巖藻糖3．0、半乳糖12、半乳糖醛酸5．0。在本發明的另一實施方案中，所述微生物多糖部含有葡萄糖，優選以下列摩爾比含有下列單糖鼠李糖3．0、木糖4．0、葡萄糖2．0、甘露糖5．0、阿拉伯糖16、巖藻糖5．0、半乳糖19、半乳糖醛酸3．0。本發明的多糖是天然來源的，更優選是微生物來源的，最優選是從放線菌科、尤其是鏈霉菌的微生物獲得。本說明書中所用的術語“分離的”是指本發明的多糖與其天然環境相分離，即與其天然環境中的通常混合或以其它方式結合的物質部分分離或基本分離，從而基本不含有蛋白質、核酸等。本發明的微生物多糖可以是單一成分的多糖，也可以是多種多糖成分的混合物。在凝膠色譜中，本發明的多糖可以呈現單峰，也可以呈現多個峰。本發明的多糖可以是游離酸形式的，也可以是在其分離過程中或在用適當的堿中和游離酸后形成的鹽的形式。所述多糖的鹽形式包括可藥用的鹽或僅作為多糖分離純化中間體或貯存形式的鹽。所述可藥用的鹽例如包括與氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂或氨形成的鹽。本發明多糖的游離酸也可以從其鹽形式再生，例如通過離子交換樹脂。本發明的主題還包括上述天然來源的多糖的部分水解產物，但該水解產物應保留有意義的IL-1受體拮抗活性。關于IL-1受體拮抗活性的測定可參見本說明書下文的詳細描述的方法或使用本領域中熟知的其它方法。本發明多糖的水解可以利用本領域技術人員熟知的任何方法進行，例如酸水解。本發明的多糖尤其可以通過培養一種特殊的菌株即放線菌139并從其培養物中分離得到。因此，本發明還涉及一種分離的微生物多糖或其鹽或具有IL-1受體拮抗活性的水解產物的制備方法，其特征在于將放線菌139在適合其生長的條件下培養一段時間，然后從培養物中分離所述微生物多糖或其鹽，或進一步水解所分離的多糖，或進一步將所分離的游離酸轉化為鹽或將其鹽轉化為游離酸形式。放線菌139是利用一種IL-1受體拮抗劑篩選模型發現的一種微生物菌株，經初步的形態鑒定，它屬于放線菌科，可能屬于鏈霉菌屬。申請人已在1999年7月5日將該菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址中國北京中關村)，保藏號為CGMCCNo．0405。該菌株也構成了本發明的一個主題。放線菌139的培養條件和培養基是常規用于放線菌科特別是鏈霉菌屬微生物培養的那些，相信本領域技術人員能夠從經典教科書或文獻中找到。在下述實施例中詳細描述了這樣的培養基和培養條件。從培養物，特別是從發酵液分離本發明多糖可以用常規方法完成，特別是本領域中常規用于從微生物發酵液中分離水溶性成分的方法。作為例子，可以提到大孔吸附樹脂柱層析、離子交換柱層析、葡聚糖凝膠柱層析、透析、蒸發和冷凍干燥等。這些方法種類、材料和操作條件的選擇在本領域技術人員的知識范圍之內。在下文的實施例中給出了示例性的詳細分離和純化操作和條件。采用以基因重組白細胞介素1可溶性受體為靶位的ELISA高通量檢測方法，確定了本發明多糖特別是139A為白細胞介素1受體的拮抗劑。在小鼠角叉菜膠性足腫脹模型中的體內試驗證明139A多糖具有抗炎作用，在大鼠佐劑型關節炎模型中證明139A多糖還對多發性關節炎具有預防和治療作用。對小鼠的急性毒性試驗表明本發明的多糖毒性很低。因此，本發明的多糖適用于治療或預防那些可通過抑制IL-1活性得以環解的疾病，例如炎性疾病、敗血性休克、風濕性關節炎、炎性腸疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰島素依賴性糖尿病、動脈粥樣硬化、發熱、病理性移植排斥反應、移植物抗宿主疾病、牙周組織病、自身免疫性甲狀腺炎癥、酒精中毒性肝炎、急性疾病血清蛋白改變、紫外線照射致皮膚損傷、嗜睡、厭食、通風、牛皮癬、哮喘及骨質疏松等。因此，本發明的微生物多糖或其可藥用鹽特別適合用作藥物活性成分。本發明從而涉及含有本發明微生物多糖或其鹽或可按本發明方法獲得的微生物多糖或其鹽和可藥用載體的藥物組合物。每劑量單位中，活性成分以適于預想的每日劑量的量存在。將藥物組合物進行配制以對包括人的哺乳動物給藥，以治療上述疾病。如此獲得的藥物組合物可有益地呈現各種形式，如可注射或可飲用的溶液、片劑、包衣片或明膠膠囊。可注射溶液是優選的藥物形式。劑量可隨患者的年齡、體重和健康狀況，所醫治疾患的性質和嚴重程度以及給藥途徑有很大變化。在本發明的口服、舌下、皮下、肌內、靜脈內、透皮、透粘膜、局部或直腸給藥的藥物組合物中，活性成分可與標準藥物賦形劑混合以單位給藥形式給藥于動物和人。適宜的給藥單位形式包括如片劑、明膠膠囊、粉劑、顆粒的口服形式和口服混懸液和溶液，舌下和頰給藥形式，皮下、肌內、靜脈內、鼻內或眼內給藥形式以及直腸給藥形式。當制備片劑形式的固體組合物時，將主要活性成分與藥物賦形劑，如明膠、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石或阿拉伯膠等混合。片劑可用蔗糖或其他適宜的材料包衣，或者可經處理使它們具有緩慢或延遲釋放活性成分的功能以及使它們連續地釋放預定量的活性成分。明膠膠囊制劑可通過將活性成分與稀釋劑混合，然后傾入軟或硬明膠膠囊中獲得。可在水中分散的粉末或顆粒可含有與分散劑、潤濕劑或助懸劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)以及甜味劑或增味劑混合的活性成分。直腸給藥利用的栓劑可用在直腸溫度下熔融的粘合劑，例如可可脂或聚乙二醇制備。對于非胃腸、鼻內或眼內給藥，利用的是無菌的可注射溶液、等滲的鹽溶液或水懸浮液，它們含有藥理學上相容的分散劑和／或潤濕劑，例如丙二醇或丁二醇。對于透粘膜給藥，活性成分可在促進劑如膽汁鹽的存在下或在親水性聚合物的存在下進行配制，所述親水性聚合物是例如羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、果膠、淀粉、明膠、酪蛋白，丙烯酸、丙烯酸酯和它們的共聚物，乙烯基聚合物或共聚物，乙烯醇，烷氧基聚合物，聚環氧乙烷聚合物和聚醚類，或者它們的混合物。活性成分也可任意地與一種或多種賦形劑或添加劑一起配制為微囊形式。活性成分還可與環糊精，例如α-、β-或γ-環糊精，2-羥丙基-β-環糊精或甲基-β-環糊精形成配合物形式。本發明還涉及所述微生物多糖或其鹽或可根據本發明的方法獲得的微生物多糖在制備用于治療可通過抑制IL-1活性得以緩解的疾病的藥物的用途。其中所述可通過抑制IL-1活性得以緩解的疾病例如為上文列舉的那些，但不限于這些。本發明另外還涉及一種白細胞介素1受體拮抗劑的篩選方法，該方法包括將待測樣品溶液和克隆有可溶性IL-1受體1的昆蟲細胞培養上清液或細胞裂解液混合后加至已固定有一種人重組IL-1受體拮抗劑的酶標板中，然后加入抗可溶性IL-1受體的單克隆抗體，4℃保溫后洗滌，再加入酶標記的抗IgG，4℃保溫后洗滌，加入酶底物顯色并進行光度測定，光密度比對含重組sIL-1R1的昆蟲細胞裂解液測得的光密度顯著低的樣品為含白細胞介素1受體拮抗劑的樣品。該模型方法的圖示見圖5。本篩選方法中，標記酶可以是辣根過氧化物酶，其底物可以是3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺。關于本方法的詳細描述可參見實施例4。下面參照附圖通過實施例詳細描述本發明，但本發明的范圍不受此限制。圖1為139A的凝膠色譜圖。圖2A和圖2B分別為標準單糖和139A水解液的毛細管電泳圖譜。圖3為139B的凝膠色譜圖。圖4為139B水解液的毛細管電泳圖譜。圖5為白細胞介素-1受體拮抗劑ELISA檢測方法示意圖。圖6為采用白細胞介素-1受體拮抗劑ELISA檢測方法測定的放線菌139發酵不同時間生物活性變化的示意圖。微量鹽溶液FeSO40．1％；ZnSO40．1％；MnSO40．1％；CuSO40．1％；CoCl20．1％。3．放線菌139的培養將27-30℃培養7-10天的放線菌139斜面培養物，接種于500ml搖瓶中的50-100ml種子培養基中，27-30℃振蕩(240轉／分)培養24-30小時。然后將獲得的種子搖瓶培養物以5-10％接種量接種于5000ml大立瓶中的800-1000ml二級種子培養基中，27-30℃振蕩(260轉／分)培養40-50小時。將所獲得的二級種子培養物以5-10％的接種量接種到200升發酵罐中的約120升發酵培養基中。于27-30℃攪拌發酵90-120小時。將樣品溶于水中，測定139A多糖的紫外吸收光譜，在194nm處見到最大吸收。以水為溶劑在溫度28℃測得139A得比旋光度[α]1dmNa=18．02°。按上文描述的操作條件，以葡聚糖為參照利用凝膠色譜法測定了139A多糖的分子量。結果表明，139A在凝膠色譜中基本為單峰，保留時間為約11．6分鐘(見圖1)。根據分子量校準曲線和分子量積分曲線計算重均分子量MW=6．33478×105，分布寬度(MW／Mn)為20．36。將139A樣品經過全水解、衍生化及毛細管電泳分析以確定其單糖組成。將多糖樣品1mg加入1ml的4N三氟乙酸中，在100℃保溫4小時。向水解液中加入50微升含70mg／mlNaBH3CN和330mg／ml對氨基苯甲酸乙酯的衍生化試劑，在80℃反應1小時。然后加入0．5ml水、0．5ml氯仿，并收集水相用于電泳分析。毛細管電泳采用長50厘米、內徑50微米的石英毛細管。電解液為75nM硼砂，pH=10．35。電泳電壓為15KV，電泳電流為30μA。在214nm處紫外檢測。圖2A和圖2B分別為標準單糖和139A水解液的毛細管電泳圖譜。從圖中可以看出，多糖139A含有下列8中單糖鼠李糖(Rhm)木糖(Xyl)葡萄糖(Glc)甘露糖(Man)阿拉伯糖(Ara)巖藻糖(Fuc)半乳糖(Gal)半乳糖醛酸(GalA)對上述八種多糖的摩爾比值也進行了測定，結果見表1。表1139A多糖的單糖摩爾比<tablesid="table1"num="001"><table>單糖名稱鼠李糖Rhm木糖Xyl葡萄糖Glc甘露糖Man阿拉伯糖Ara巖藻糖FUC半乳糖Gal半乳糖醛酸GalA摩爾比3．04．02．05．0165．0193．0</table></tables>對139B進行了相似凝膠色譜分析，結果顯示三個主峰，保留時間分別為約11．5，15．0和19．4(見圖3)。估算的重均分子量為8×105。對139B進行了相似的毛細管電泳分析，結果顯示139B含有7種單糖，除不含有葡萄糖外，與139A的單糖種類相同(見圖4)。這7種單糖的摩爾比如下表2所示表2139B多糖的單糖摩爾比<tablesid="table2"num="002"><table>單糖名稱鼠李糖Rhm木糖Xyl葡萄糖Glc甘露糖Man阿拉伯糖Ara巖藻糖FUC半乳糖Gal半乳糖醛酸GalA摩爾比4．06．00．03．0123．0125．0</table></tables>實施例4多糖的體外生物活性采用白細胞介素1受體拮抗劑ELISA高通量檢測方法，該方法建立過程如下(1)．基因重組小鼠白細胞介素1可溶性受體基因的獲得采用RT-PCR擴增技術獲得該目的基因。首先用異硫氰酸胍提取和氯化銫超速離心制備NIH／3T3細胞總RNA，采用美國GibcoBRL公司出品的SuperScriptPreamplificationsystemforFirstStrandCDNASynthesis試劑盒通過反轉錄，合成了CDNA第一鏈，再進一步進行PCR(聚合酶鏈反應)擴增。根據IL-1R可溶性受體核苷酸序列，合成了一對引物上游區5’端引物為5’TGGAGATTGACGTATGTACAGA3’下游區3’端引物為5’CGGAATTCTAAAGGGACTGGGTATATTAACTG3’PCR擴增條件為Mg2+1．0-3．0mmol／L，先90-95℃變性5-8分鐘，然后90-95℃再變性1-2分鐘，55-60℃退火1-3分鐘，70-75℃延伸1-5分鐘，共30-35個循環，最后70-75℃延伸10-15分鐘。凝膠電泳結果表明，擴增獲得了單一條帶，分子量大小約為960bp，采用美國ABI公司自動核苷酸測序儀測定該DNA片斷核苷酸序列，結果與文獻報道(Sims，J．E．等，Science，1988，241585)鼠白細胞介素1受體I型序列結果相符。(2)．白細胞介素1可溶性受體I(sIL-1R1)基因的克隆以昆蟲細胞Sf9為宿主進行sIL-1R1的基因克隆。首先將PCR擴增獲得的sIL-1R1DNA片斷，克隆至昆蟲細胞桿狀病毒轉移載體pAcGP67B質粒。采用改良的磷酸鈣共沉淀法，將重組質粒和野生多角病毒(AcNPV)共轉染Sf9昆蟲細胞，28-30℃培養3-6天，采用終點稀釋一點雜交方法，以熒光標記的sIL-1R1基因為探針，進行斑點雜交獲得了克隆有sIL-1R1基因的重組病毒。經過3-5輪空斑分析純化，獲得了純的重組病毒。以重組病毒轉染Sf9昆蟲細胞，于28-30℃培養3-6天，取不同培養時間的細胞培養上清液或經TritonX-100裂解細胞的上清，于4℃保存備用。(3)．白細胞介素1受體拮抗劑篩選模型的建立。A．取1-5μg／ml重組人IL-1ra(天然白細胞介素1受體拮抗劑)固定于96孔酶標板，每孔100-200μl，于4℃固定過夜。B．加入含1-5％BSA(牛血清白蛋白)的PBS緩沖液(0．05mol／L磷酸鹽緩沖液含0．15mol／LNaCl)200-400μl／孔，4℃封閉6-15小時。C．用PBS洗滌數次后，取50-100μl待測樣品溶液(pH調至7．0-7．5)和50-100μl克隆有sIL-1R1的昆蟲細胞培養上清液(或細胞裂解液)，二者混合后，取100-200μl加至已固定IL-1ra的酶標板，同時作對照1(含重組sIL-1R1的昆蟲細胞裂解液)和對照2(野生型AcNPV轉染的昆蟲細胞裂解液)于4℃過夜，以PBS洗滌數次。D．加入含1％BSA的1-3μg／ml大鼠抗小鼠sIL-1R的單克隆抗體100-150μl／孔，4℃1-3小時后，用PBS洗滌數次。E．加入含1％BSA的1∶100-200稀釋的辣根過氧化物酶標記的羊抗大鼠IgG100-200μl／孔，4℃1-3小時后，PBS洗滌數次，加入100-200μl／孔TMB底物(3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺)。F．室溫顯色30分鐘-1小時，以100μl／孔2NHCl終止反應。G．以只加TMB和HCl的孔調零，在450nm用酶標比色計比色，測定結果。該模型方法的圖示見圖5。采用本方法對照1光密度值～1．5，對照2＜0．2，當待測樣品中存在有拮抗劑時，該拮抗劑可以與固定在酶標板上的重組人IL-1ra競爭性結合sIL-1R1，使光密度值下降，根據光密度值的變化可以確定待測品的拮抗活性。表2表明139A多糖在分離純化過程中，不同階段純化產物采用上述方法的活性檢測結果。表3．139A多糖純化過程中的活性檢測(A450)<tablesid="table3"num="003"><table>步驟樣品對照1對照2大孔樹脂HP-200．151．250．10陽離子交換0．561．580．29醇沉淀0．501．570．38</table></tables><tablesid="table4"num="004"><table>透析0．511．570．28陰離子交換0．461．420．23培養基對照1．511．500．20</table></tables>注各步驟中樣品均稀釋成相當于原發酵液的濃度結果顯示多糖139A具有顯著的IL-1受體拮抗活性。139B在該模型中也表現出IL-1受體拮抗活性。還利用該模型測定了放線菌139不同發酵時間的培養物樣品的體外生物活性。結果如圖6所示，其中顯示在96小時光密度值下降最為明顯，因此活性最高。小鼠，昆明種，雄性，體重18-22g，20只，隨機分為兩組，每組10只，一組為給藥組、一組為對照組。給藥組小鼠皮下注射139A80，100mg／Kg／10ml，對照組給生理鹽水10ml／kg。0．5小時后左足趾皮內注射0．1％角叉菜膠50ml致炎。3小時后將小鼠拉頸處死，從左右兩后腿關節處剪下雙足，分別稱重，以左右兩足重量差表示腫脹程度，并與對照組比較，計算腫脹抑制率。表4．139A多糖對小鼠角叉菜膠性足腫脹的抑制作用<tablesid="table5"num="005"><table>組別劑量(mg／kg)腫脹度(mg)抑制率139A10044．05±9．3344．2***對照18．88±9．55139A8049．65±5．9138．3***對照80．48±13．23</table></tables>***P＜0．001與對照組比較結果表明139A多糖在80，100mg／kg劑量下對小鼠角叉菜膠性關節腫脹有明顯的抑制作用。B．139A多糖對大鼠佐劑型關節炎模型中多發性關節炎的預防作用大鼠，Wistar種，雄性，體重180-2209，30只，隨機分為3組，每組10只，一組為預防組，一組為治療組，一組為對照組。預防組皮下注射給139A100mg／kg／10ml，對照組皮下注射生理鹽水10ml／kg。0．5小時后，左右足趾皮內注射弗氏完全佐劑(液體石蠟∶羊毛脂=2∶1，含10mg滅活卡介苗／m1)0．1mla注射佐劑后7天，皮下注射給藥100mg／kg，每天一次共7天。第14天測量大鼠左右后踝關節周長差，并給前肢、尾、耳腫脹度打分，評價139A對大鼠多發性關節炎的預防作用。表4．139A多糖對大鼠多發性關節炎的預防作用<tablesid="table6"num="006"><table>組別注射佐劑左足后足腫脹程度非注射佐劑右足前肢、尾、耳腫脹度(打分)139A0．99±0．15**0．17±0．13**0．69±1．07***對照1．99±0．730．77±0．435．69±1．13抑制率(％)507887．9</table></tables>**P＜0．01，***P＜0．001，與對照相比。注根據前肢、尾、耳部病變的發生率和嚴重程度按0-4分評定0分無紅腫；1分小趾關節腫脹；2分趾關節和足趾腫脹；3分踝關節以下的足趾腫脹；4包括踝關節在內的全部足爪腫脹。結果表明139A多糖100mg／kg，皮下注射對大鼠關節炎多發性關節炎有明顯的預防作用。C．139A多糖對小鼠的急性毒性小鼠，雄性，昆明種，體重18-229，灌胃用量為10g／kg，試驗139A對小鼠的急性毒性反應，在觀察的一周內動物攝食、飲水、行為、皮毛等均未見異常，無一死亡，表明139A多糖毒性低。在進行藥效學試驗過程中，大鼠以100mg／kg皮下注射，每天1次，7天亦未見139A對大鼠的毒性反應。權利要求1．一種分離的微生物多糖或其鹽或具有IL-1受體拮抗活性的水解產物，其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×105-12×105；其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸，含有或不含有葡萄糖。2．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw=4×105-10×105。3．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw=6×105-9×105。4．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于重均分子量Mw為約6．33478×105。5．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量測定的凝膠色譜中的保留時間為約8-25分鐘。6．根據權利要求5的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量測定的凝膠色譜中的保留時間為約10-20分鐘。7．根據權利要求6的微生物多糖，其特征在于其在用于分子量測定的凝膠色譜中的保留時間為約11．5、11．6、15．0或19．4分鐘。8．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于其含有下列摩爾比的單糖鼠李糖4．0、木糖6．0、甘露糖3．0、阿拉伯糖12、巖藻糖3．0、半乳糖12、半乳糖醛酸5．0。9．根據權利要求1的微生物多糖，其特征在于其含有下列摩爾比的單糖鼠李糖3．0、木糖4．0、葡萄糖2．0、甘露糖5．0、阿拉伯糖16、巖藻糖5．0、半乳糖19、半乳糖醛酸3．0。10．一種分離的微生物多糖或其鹽或具有IL-1受體拮抗活性的水解產物的制備方法，其特征在于將放線菌CGMCCNo．0405在適合其生長的條件下培養一段時間，然后從培養物中分離所述微生物多糖或其鹽，或進一步水解所分離的多糖，或進一步將所分離的游離酸轉化為鹽或將其鹽轉化為游離酸形式。11．含有權利要求1-9中任一項的微生物多糖或其可藥用鹽或可根據權利要求10的方法獲得的微生物多糖或其可藥用鹽和可藥用載體的藥物組合物。12．權利要求1-9中任一項的微生物多糖或其可藥用鹽或可根據權利要求10的方法獲得的微生物多糖或其可藥用鹽在制備用于治療可通過抑制IL-1活性得以緩解的疾病的藥物的用途。13．放線菌CGMCCNo．0405。14．一種白細胞介素1受體拮抗劑的篩選方法，該方法包括將待測樣品溶液和克隆有可溶性IL-1受體1的昆蟲細胞培養上清液或細胞裂解液混合后加至已固定有一種人重組IL-1受體拮抗劑的酶標板中，然后加入抗可溶性IL-1受體的單克隆抗體，4℃保溫后洗滌，再加入酶標記的抗IgG，4℃保溫后洗滌，加入酶底物顯色并進行光度測定，光密度比對含重組sIL-1R1的昆蟲細胞裂解液測得的光密度顯著低的樣品為含白細胞介素1受體拮抗劑的樣品。15．根據權利要求14的方法，其中標記酶是辣根過氧化物酶，其底物是3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺。全文摘要本發明涉及分離的微生物多糖或其鹽或具有IL－1受體拮抗活性的水解產物,其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×10文檔編號C08B37/00GK1281865SQ9911082公開日2001年1月31日申請日期1999年7月22日優先權日1999年7月22日發明者吳劍波,李元,張治平,吳倩,劉伯英,郭連宏,張洋,姜蓉,李寶義申請人:中國醫學科學院醫藥生物技術研究所