專利名稱:一種家蠶幼蟲的性別鑒定方法
技術領域：
本發明涉及一種生物體的性別鑒定方法，特別是一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法。
背景技術：
栽桑養蠶起源于我國，至今已有5000多年的歷史。繭絲業一直是我國的優勢傳統產業，蠶繭生絲年產量和出口量分別占世界總額的70％和80％以上，是世界繭絲業的中心。
但是，在20世紀的一百年中，我國所采取的養蠶技術體系，總體上是基于國外在20世紀三四十年代所建立的，蠶業科技在相當長的一個時期內沒有明顯突破。
建立在現代科學技術上的，利用生物基因技術開展的養蠶技術體系就成為世界各繭絲業國家的競爭焦點。我國科學家僅用5個月，就完成了“框架圖”的繪制工作，家蠶基因組“框架圖”的繪制完成，將有助于人們獲得家蠶基因結構組織的詳細信息和全部基因、，從分子水平上深刻闡明家蠶的生物學特性、吐絲機理，可利用基因研究手段培育出新型高產優質蠶品種等。
已知雄蠶較雌蠶除了具有較高的生命力外，還有食桑少，發育快，繭參率高和繭絲長，解殊絲長，凈度好等優點。因而絲繭養育人們都希望專養雄蠶。另一方面為了提高蠶種場的制種效益，人們希望多養雄蠶，因為雄蠶可以利用2次。
現已找到了一些控制桑蠶性別的途徑(何克榮，夏建國等，桑蠶的性別控制與專養雄蠶的研究，蠶桑通報，1998年第03期)。把家蠶控制身體特種斑紋顏色的基因和性別基因轉接到一起，就可以讓雌雄家蠶的身體呈現出不同顏色。一旦搞清家蠶的性別基因序列和分子調控機理，人們就能夠最終實現“單養雄蠶”的夙愿。如用輻射誘變，將第10染色體上的第2白卵基因易位到W染色體上，獲得限性卵色系；將第2染色體上含有斑紋基因的染色體片斷易位到W染色體上，獲得限性皮斑系；將第2染色體上的黃血基因Y易位到W染色體上，獲得了限性黃繭突變系。由此可以利用這些已知基因序列，設計特定的引物進行PCR擴增檢測。
“框架圖”的完成是家蠶基因組研究和開發計劃的第一步，而“精細圖”預計也即將完成。科研人員將利用生物信息學的最新方法，對家蠶所擁有的所有基因進行注釋，開展重要功能基因的基礎和應用研究。到時候，會對家蠶的特定性別基因等有個更為明晰的了解和定位。
因為家蠶的性別特征在幼蟲時期十分模糊，目前還沒有很好的鑒別方法。
發明內容本發明的目的在于提供一種采用DNA基因方法來對家蠶幼蟲的性別進行鑒定的方法，以解決現有家蠶幼蟲不能很好鑒別的問題。
本發明的目的可以通過以下方法來實現一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法，該方法包括如下步驟(1)家蠶DNA的提取；(2)利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸(3)利用與家蠶性別決定有關的基因序列設計引物，進行PCR擴增；(4)將PCR擴增的產物進行瓊脂糖凝膠電泳；(5)通過電泳的結果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定。
采用上述方法，可以很方便地鑒別出家蠶幼蟲的性別，提高蠶種場的制種效益。
圖1為本發明提取的家蠶總DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖。
圖2本發明用與家蠶性別有關的基因設計特定熒光引物PCR后的瓊脂糖凝膠電泳圖。
具體實施方式家蠶DNA的提取與DNA的測定首先從家蠶取少量的組織進行DNA的提取，將提取物以一定比例稀釋后，用紫外分光光度計在260nm波長下測提取物OD，估算大致濃度。然后取1-3μl的提取物進行瓊脂糖凝膠電泳圖1，條帶100是Marker，條帶101-117是提取的家蠶總DNA，其中101-112是沒有純化、沒有酶解RNA的家蠶總DNA，113-117是經純化、消化RNA的家蠶總DNA條帶。位于101-117加樣孔附近的條帶120是家蠶的總DNA。位于101-112加樣孔遠端的彌散狀條帶121是RNA。
特定基因的PCR擴增與檢測利用控制桑蠶性別的基因，如已知獲得限性卵色系的易位到W染色體的白卵基因序列，利用此基因設計引物，取1μ總DNA為模板，用設計好的引物(或熒光引物)進行PCR擴增反應，將取反應物3μl進行瓊脂糖凝膠電泳檢測鑒定家蠶的性別。如圖2，其中CK是陽性對照，CK，5，9，14，，19加入Marker的條帶，1-22是與家蠶性別決定有關的基因用熒光引物PCR擴增后的產物，25是與家蠶性別決定有關的基因位點1，26是與家蠶性別決定有關的基因位點2。據已知的基因序列信息可知1-11為雌性，12-22為雄性。
如上所述，還可利用已知獲得限性皮斑系易位到W染色體含有斑紋基因序列，設計引物進行性別檢測；同法可以利用獲得了限性黃繭突變系的易位到W染色體的黃血基因Y。
除了以上所述的三種已知的與家蠶性別基因有關的序列可以應用于本發明的檢測方法外，隨著對家蠶基因圖譜的進一步深入了解，后續發現的決定家蠶性別的基因均可以用本方法檢測。
權利要求
1.一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于包括如下步驟(1)家蠶DNA的提取；(2)利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸；(3)利用與家蠶性別決定有關的基因序列設計引物，進行PCR擴增；(4)將PCR擴增的產物進行瓊脂糖凝膠電泳；(5)通過電泳的結果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定。
2.權利要求
1所述的一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關的基因，是獲得限性卵色系的易位到W染色體的白卵基因序列。
3.權利要求
1所述的一種家蠶幼蟲性別鑒定的方法，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關的基因，是獲得限性皮斑系易位到W染色體含有斑紋基因序列。
4.權利要求
1所述的落地燈，其特征在于所述的與家蠶性別決定有關的基因，是利用獲得了限性黃繭突變系易位到W染色體上的黃血基因Y序列。
專利摘要
本發明提供了一種家蠶幼蟲的性別鑒定的方法，該方法包括家蠶DNA的提取；利用分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳測定核酸；利用與家蠶性別決定有關的基因序列設計引物，進行PCR擴增；將PCR擴增的產物進行瓊脂糖凝膠電泳；通過電泳的結果，進行家蠶幼蟲性別的鑒定等步驟。采用上述方法，可以很方便地鑒別出家蠶幼蟲的性別，提高蠶種場的制種效益。
文檔編號C12Q1/68GK1990881SQ200510112347
公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月29日
發明者湯霈霈 申請人:上海市向明初級中學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan