轉運化合物穿過血腦屏障的分子的制作方法

專利名稱：:轉運化合物穿過血腦屏障的分子的制作方法轉運化合物穿itiL腦屏障的分子發明領域本發明涉及藥物遞送領域中的改進。更M地，本發明涉及多肽、綴合物以及含有本發明多肽或綴合物的藥物組合物。本發明還涉及這些多肽和綴合物在轉運化合物或藥物穿過哺乳動物血腦屏障中和在神經系統疾病的治療和診斷中的用途。發明背景在大腦病變新療法的M中，認為血腦屏障(BBB)是治療中樞神經系統(CNS)疾病的藥物可能用途的主要障礙。CNS藥物的全球市場在1998年為$330億，這大約是心血管藥物全球市場的一半，即^A在美國，患有CNS疾病的4接近心血管疾病患者的兩倍。這種不平衡性的原因;l^過98%的所有潛在CNS藥物不能穿itA腦屏障。此外，超過99。/。的全球CNS藥物研發只是致力于CNS藥物發現，不到1%是針對CNS藥物遞送。該比率可解釋為什么目前對于主要的神經系統疾病如腦瘤、阿爾茨海默氏病和中風沒有有效的療法可用。大腦因兩個屏障系統的存在得到保護來對抗潛在的毒性物質血腦屏障(BBB)和血-腦脊液屏障(BCSFB)。認為BBB是血清配體吸收的主要途徑，因為其表面積大約大于BCSFB表面積的5000倍。構成BBB的大腦內皮代表了對抗許多CNS障礙的潛在藥物用途的主要障礙。通常，只有小于約500道爾頓的親脂性分子可以穿過BBB，即，從血液進入大腦中。然而，許多在動物研究中顯示出具有治療CNS失調前景的藥物的大小明顯比較大。因此，由于大腦毛細血管內皮壁對這些藥物可忽略的滲透性，肽和蛋白質治療劑通常M液至大腦的轉運中排除。與其他器官的毛細血管相比較，大腦毛細血管內皮細胞(BCEC)通過緊密連接得到密閉，具有很少的孔和很少的內吞小泡。BCEC由胞外基質、星形細胞、周皮細胞和小神經月M細胞包圍。內皮細胞與星形細胞足突的和毛細血管的基底膜的緊密關聯對于允許血腦交換嚴密控制的BBB特性的M和維持是重要的。國際公開WO2004/060403公開了本發明人進行的發明，涉及轉運藥物穿過血腦屏障的分子。另夕卜，迄今為止，對于大腦不存在有效的藥物遞送方法可用。調查研究中的用于將肽和蛋白質藥物遞送至大腦的方法可以分成三種主要策略。第一，^/v性方法包括通過外科手術藥物的直接心室內給藥，和通過高滲溶液頸動脈內輸注BBB的暫時性破壞。第二，基于藥物的策略在于通過提高肽或蛋白質的脂溶性促進通過BBB。第三，基于生理的策略充分利用針對BBB的各種栽體機理，在近些年其已經得到了表征。在該方法中，使藥物附著于蛋白質載體上，該蛋白質載體如同靶向受體的遞送媒介物一樣對BBB執行功能。該方法是高度特異性的并呈現出高效能，對于具有無PM巴標的臨^it應癥具有極大的靈活性。本發明人已經并且仍然在研究后一種方美國專利US5，807，980描述了牛胰蛋白酶抑制劑衍生的抑制劑及其制備方法和治療用途。將這些肽用于治療特征在于組織因子和/或VIIIa因子異常出現或數量的病癥如異常的血栓形成。美國專利US5，780，265描述了能夠抑制血漿激肽^^放酶的絲氨酸蛋白酶抑制劑。美國專利US5，118，668描述了牛胰蛋白酶抑制劑變體。擁有可以作為用于轉運化合物或藥物穿過個體BBB的載體或纟某介物的改進分子是非常希望的。發明概述本發明的一個目的是提供藥物遞送領域中的改進。本發明的另一個目的是提供用于轉運化合物或藥物穿過個體血腦屏障的非4^v性且靈活的方法和載體。本申請公開了新的分子，其能夠，例如轉運所需的化合物穿過血腦屏障。在第一個方面中，本發明提供了能夠穿過(即，通過)體外測定中模仿(沖莫擬)哺乳動物血腦屏障的細胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)，-牛胰蛋白酶抑制劑類似物-可以包括(或基本上由)SEQIDN0.:1中限定的M酸序列(構成)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-SEQIDNO.:1的生物活性類似物，畫SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。第二個方面中，本發明提供了能夠穿過(即，通過)模仿(模擬)體外測定中哺乳動物血腦屏障的細胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-可以包括SEQIDN0.:1中限定的tt酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—SEQIDNO.:1的生物活性類似物，一SEQIDNO.:1的生物活性片段和；-SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據本發明，牛胰蛋白酶抑制劑片段可以由SEQIDNO.:1中限定的序列構成。此外根據本發明，牛胰蛋白酶抑制劑片段可以包括SEQIDNO.1并可以具有約19個氨基酸至約54個氨基酸的長度，例如，1G至50個M酸長，10至30個氨基酸長等。根據本發明，SEQIDNO.:1的生物活性類似物可以具有約19個氨基酸至約54個氨基酸的長度(例如，包括例如21至23、25至34、36至50和52至54個)，或約19個氨基酸至約50個M酸的長度，或約19個M酸至約34個氨基酸的長度(例如，19、20、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34個)，或約19個氛基酸至約23個氨基酸的長度或約19、20、21、22、23、24、35、51個氮基酸的長度。在此所述的(例如，19個氨基酸的)多肽的生物活性片段可以包括例如約7、8、9或10至18個氨基酸的多肽。因此，根據本發明，SEQIDNO.:1或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段可以具有約7至約18個氨基酸或約10至約18個氨基酸的長度。美國專利US5，807，980描述了在此標識為SEQIDN0.:102的多肽。美國專利US5，780，265描述了在此標識為SEQIDN0.:103的多肽。例如，可以在M(M年7月"日以國際公開號WO2004/060403公開的NO.:98)、血管肽(Angiopep)-1絲醋列(SEQIDNO.:67)，以及一些生物活性類似物的序列。此外，國際/^開WO04/060403描述了在此標識為SEQIDNO.:104的多肽。美國專利US5，118，668描迷了具有SEQIDNO.:105中所示序列的多肽。可以通過進行國際申請PCT/CA2004/000011中公開的合成牛胰蛋白酶抑制劑序列(或其部分)的蛋白質清除(Genebank:www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)找到牛胰蛋白酶抑制劑類似物的實例。例如，根據登錄號CAA37967(GI:58005)、1405218C(GI:3604747)等可以找到示例性牛胰蛋白酶抑制劑類似物。另一方面中，本發明提供了能夠穿過(即，通過)模仿(模擬)體外測定中哺乳動物血腦屏障的細胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-19至54(例如，19-50)個氨基酸長的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1,-由SEQIDNO.:1構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-約19至50個氨基酸長的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-(10至18個氨基酸的)SEQIDNO.:1的生物活性片段或(約10至18個氨基酸的)SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據本發明，提供了SEQIDNO.:1的生物活性類似物，其可以選自，例如畫包括與SEQIDNO.:1綠餅列至少35%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M辦列至少40%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M酸序列至少50%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1^J^酸序列至少60%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M絲列至少70%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1絲紗列至少80%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1tt麟列至少90%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1#^酸序列至少95%(即，96%、97%、98%、99%和100%)同一性的SEQIDNO.:1類似物。例如，SEQIDNO.:1的生物活性片段可以包括選自SEQIDNO.:2至SEQIDNO.:62、SEQIDNO.:68至SEQIDNO.:93和SEQIDNO.:97以及99、IOO和IOI的任一個中限定的M酸序列的^J^酸序列。當本發明的多肽包括，例如，SEQIDNO.:99、100或101時，該多肽具有約10至50個氨基酸，例如，10至30個M酸長的M酸序列。此外，根據本發明，SEQIDNO.:1的生物活性類似物可以包括SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(即，其是SEQIDNO.:67(血管肽-1)的@5化形式的67號多肽)。本發明的多肽可以是酰胺化的，即，可以具有酰胺化的M酸序列。例如，SEQIDNO.:67的多肽可以是酰胺化的(67號多肽)。本發明的一部分可以涉及除了SEQIDNO.:102、103、104和105中限定的多肽之外的在此限定的多肽，而本發明的另一部分可以包括這些肽。例如并且不受限制，本發明包括含有這些肽的綴合物及其用于治療神經系統疾病(例如，腦瘤)的用途、治療神經系統疾病(例如，腦瘤)的方法、治療神經系統疾病的藥物組合物等。再一方面中，本發明提供了生物活性多肽，其能夠穿過(即，通過)模仿(模擬)體外測定中哺乳動物血腦屏障的細胞層，該多肽可以選自，例如-19至54個(例如，19-50個)M酸長的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1，畫由SEQIDNO.:1構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-約19至50個氨基酸長的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要所述類似物不包括SEQIDNO.:102、103、104或105并且只要當所述類似物由SEQIDNO.:67構成時，所述類似物是,化的，-10至18個M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個氨基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。此外，根據本發明，SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段可以包括SEQIDNO.1或SEQIDNO.:1類似物的至少9個或至少10個(連續或鄰接的)氨基酸。本發明的多肽可以具有可以包括1至12個氨基酸置換的M酸序列(即，SEQIDNO.:91)。例如，氨基酸置換可以為1至10個氨基酸置換，或1至5個氨基酸置換。根據本發明，氨基酸置換可以是非保守氨基酸置換或保守M酸置換。例如，當本發明的多肽包括與SEQIDNO.:1的^J^酸完全相同的M酸和不同的(非相同的)其他氨基酸時，不同的那些可以是保守氨基酸置換。可以通過查看相應位置來進行相同和不同氨基酸的比較。可以具有至少35%同一性的SEQIDNO.:1類似物的實例包括，例如，包括(由)SEQIDNO.:91中限定的M酸序列(構成)的多肽(約36.8%同一性，即，SEQIDNO.:91的19個^J^酸中有7個^J^酸與SEQIDN0.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:98中限定的M酸序列(構成)的多肽(約68.4%同一性，即，19個M酸中有13個M酸與SEQIDNO.:l的相同)，包括(由)SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(構成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個tt酸中有14個M酸與SEQIDN0.:l的相同)，包括(由)SEQIDNO.:76中限定的M酸序列(構成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個氨基酸中有14個氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)和包括(由)SEQIDNO.:5中限定的M酸序列(構成)的多肽(約79%同一性，即，19個氬基酸中有15個氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)。可以具有至少60%同一性的SEQIDN0.:1類似物的實例包括，例如，包括(由)SEQIDNO,:98中限定的M酸序列(構成)的多肽(約68.4%同一性，即，19個氨基酸中的13個氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(構成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個M酸中的14個M酸與SEQIDNO.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:76中限定的M酸序列(構成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個氨基酸中的14個氨基酸與SEQIDN0.:1的相同)和包括(由)SEQIDN0.:5中限定的M酸序列(構成)的多肽(約79°/。同一性，即，19個M酸中的15個M酸與SEQIDNO.:1的相同)。可以具有至少70%同一性的SEQIDNO.:1類似物的實例包括，例如，包括(由)SEQIDNO.:67(約73.7%同一性，即，19個M酸中的14個氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)、SEQIDNO.:76(約73.7%同一性,即，19個氨基酸中的14個氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)和SEQIDNO.:5(約79%同一性，即，19個M酸中的15個Jl^酸與SEQIDNO.:1的相同)中限定的M酸序列(構成)的多肽。根據本發明，載體可以更具體地選自5、67、76、91和97號肽(即，SEQIDNO.:5、67、76、91和97(血管肽-2))。可以4吏用載體，例如，用于轉運連于其上的物質穿ii血腦屏障。根據本發明，所述栽體物質連接后能夠穿過血腦屏障并因此能夠將該物質轉運穿itj6L腦屏障。根據本發明，多肽可以是分離的形式或M本上純化的形式。更具體地，本發明提供了用于轉運連于其上的物質穿過血腦屏障的載體，其中所述載體與物質連接后能夠穿過血腦屏障并因此將該物質轉運穿過血腦屏障。該栽體可以包括至少一種本發明的多肽(只要當所述多肽或栽體由SEQIDNO.:67構成時，所述多肽^L^團所修飾，例如，被,化)。例如，該載體可以選自一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子。通過載體實現的轉運活性不影響血腦屏障完整性。物質的轉運可以導致，例如，該物質遞送至個體的中樞神經系統(CNS)。在此應該理解可以化學合成(例如，固相合成)或可以通過DNA重組技術產生本發明的多肽。編碼特定氨基酸的密碼子是本領域^^的并在，例如，Biochemistry(第三版；1988，LubertStryer,StanfordUniversity,W.H.FreemanandCompany,New-York)中論述。因此在此包括編碼本發明載體的核苷酸序列。更具體地，本發明包括編碼選自SEQIDNO.:1至97編碼牛胰蛋白酶抑制劑類似物的示例核苷酸序列示于SEQIDN0.:106中并可以在GeneBank中根據登錄號X04666找到。該序列編碼在位置16上具有替代見于SEQIDNO.:98中的纈氨酸的賴氨酸的牛胰蛋白酶抑制劑類似物(參照SEQIDNO.:106編碼的M酸序列)。可以通過本領域已知的方法引入SEQIDNO.:106的核苷酸序列中的突變以改變在位置16上具有纈氨酸的SEQIDNO.:98的肽。可以佳Jl本領域已知的技術將另外的突變引入該核苷酸序列中以編碼本發明的類似物。可以通過酶消化或聚合^t^應等從該核香^列獲得片段。另夕卜，可以通過本領域已知的方法來化學合成所需的核苷酸序列。另一方面中，本發明涉及綴合物，其可以包括選自本發明多肽中的任一種的載體，和選自例如藥物(例如，小分子藥物，例如，抗生素)、藥品、可檢測標記、蛋白質(例如，酶)、基于蛋白質的化合物(例如，包括一條多肽鏈的蛋白質復合物)和多肽(肽)的物質。更具體地，該物質可以是在中樞神經系統水平上具有活性的分子。該物質可以是用于治療或檢測神經系統疾病的任何物質。根據本發明，是綴合物一部分的栽體可以選自，例如-10至54個(例如，19-50個)M酸長的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包4舌SEQIDNO.:1，-由SEQIDN0.:1構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-(例如，約19至50個氨基酸長的)SEQIDNO.:1的生物活性片段，只要當所述類似物由SEQIDNO.:67構成時，所述類似物是酰胺化的，-10至18個M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個氣基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據本發明，該物質可以具有約160，000道爾頓的最大分子量。此外，根據本發明，可以通過受體介導的轉Jte作用或吸附介導的轉胞吞作用實現轉運活性。該物質可以是能夠通過這樣的機制轉運的物質。此外，根據本發明，綴合物可以是融合蛋白的形式，其可以具有基本上由本發明的載體構成的笫一個部分和基本上由蛋白質或基于蛋白質的物質構成的第二個部分。可以通過載體和/或綴合物治療或檢測的示例神經系統疾病是選自例如腦瘤、腦轉移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風和血腦屏障相關機能失常(例如，肥胖)的疾病。根據本發明，血腦屏障相關的機能失常A^巴胖。此外，根據本發明，可以與本發明載體綴合的物質可以是瘦蛋白。包括瘦蛋白和栽體的綴合物可以用于，例如，月巴胖的治療中。根據本發明，可檢測標記可以是放射性成像劑。可以與本發明的載體綴合的并在此包括的標記的實例包括，例如并且不受限制，同位素、熒光標記(例如，若丹明)、受體分子(例如，生物素)等。可檢測標記的其他實例包括，例如，綠色熒光蛋白、生物素、組胺酸標記蛋白和P-半乳糖苷酶。物的實例包括，且不受限制，抗體、抗體片段(例如，抗體結合片段如Fv片段、F(ab)2、F(ab)2，和Fab等)、基于肽或蛋白質的藥物(例如，正向藥理學調節劑(激動劑)或藥理學抑制劑(拮抗劑))等。在此包括的物質的其他實例包括細胞毒素(例如，單曱基auristatinE(MMAE)、選自細菌內毒素和外毒素的毒素；白喉毒素、肉^4素、破傷風毒素、百日咳毒素、葡萄球菌腸毒素、中毒性休克綜合征毒素TSST-1、腺苷酸環化酶毒素、Shiga毒素、霍亂腸毒素等)和抗血管生成化合物(內皮抑制素、兒茶素、營養藥、趨化因子IP-IO、基質金屬蛋白酶的抑制劑(MMPI)、anastellin、玻連蛋白、抗凝血酶、酪氨酸激酶抑制劑、VEGF抑制劑、針對受體的抗體、赫賽汀、阿瓦斯丁(avastin)和panitumumab等)。此外，根據本發明，物質可以是小分子藥物，如抗癌藥物(例如，用于治療腦瘤)。本發明包括的抗癌藥物可以包括，例如，具有允許其與本發明栽體綴合的基團的藥物。抗癌藥物的實例包括，例如，且不受限制，可以選自紫杉醇(紅豆杉醇)、長春花堿、長春新堿、依托泊苷、阿霉素、環磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥和任意組合的藥物。更具體地，本發明的綴合物可以包括式R-L-M或其藥物學上可接受的鹽，其中R是一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子(例如，牛胰蛋白酶抑制劑、牛胰蛋白酶抑制劑片段、血管肽-1、血管肽-2、類似物、衍生物或片段)。例如，R可以是選自一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子的載體，與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子與L-M連接后能夠穿過血腦屏障，并因此轉運M穿過血腦屏障。L可以是連接物或鍵(化學鍵)。M可以是選自藥物(例如，小分子藥物，例如，抗生素)、藥品、(可檢測)標記、蛋白質或基于蛋白質的化合物(例如，抗體、抗體片段)、抗生素、抗癌藥、抗血管生成化合物和多肽或任何在中樞神經系統水平上具有活性的分子的物質。在此應當理解沒有打算將式R-L-M局限于特定的次序或特定的比率。如在此例示的，可以發現M超過R幾個比率。例如，式R-L-M的綴合物或其藥物學上可接受鹽，可以用于轉運M穿過血腦屏障，其中R可以是，例如，選自如在此所述的5、67、76、91和97號肽的載體。該載體在與L-M連接后能夠穿過血腦屏障并可以轉運M穿iijk腦屏障。根據本發明，M可以是用于治療或診斷神經系統疾病的物質。在此應當理解當超過一個的載體綴合位點可用或存在時，可以將超過一個的藥物或藥物分子綴合于本發明的載體上。因此，綴合物可以包括一個或多個藥物分子。綴合物自身可以是活性的，即，即使與載體相連時藥物仍可以是活性的。此外，根據本發明，化合物可以從載體中釋放出來或不釋放出來，即，通常在轉運穿過血腦屏障之后。因此，化合物可以是能從綴合物中(或從載體中)^放出來的并且此后可以變成活性的。更具體地，物質轉運穿itii腦屏障后可以從載體中釋放出來。根據本發明的另一個實施方案，提供了用于轉運物質穿itA腦屏障的綴合物，該綴合物可以包括(a)栽體；和(b)連于栽體上的物質，其中該綴合物能夠穿itin腦屏障并因此轉運該物質穿ii血腦屏障。另一方面中，本發明涉及本發明的載體或綴合物用于轉運物質穿過有此需要的哺乳動物的血腦屏障的用途。再一方面中，本發明涉及一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子用于轉運與其連接的化合物穿過患者的血腦屏障的用途。另一方面中，本發明涉4此所述的栽體或綴合物用于診斷神經系統疾病或中樞神經系統疾病的用途。例如，可以將載體或綴合物用于神經系統疾病的體內檢測。載體可以選自，例如，(生物活性)的組畫牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)，-可以包括SEQIDN0.:1中限定的M酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-由SEQIDNO.:l構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。更具體地，載體可以選自，例如，(生物活性)組-可以包括SEQIDNO.:1中限定的M,列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—由SEQIDNO.:1構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。才艮據本發明，當該類似物由SEQIDNO:67構成時，所述類似物是酰胺化的。更具體地，載體可以選自，例如-10至54個(例如，19-50個)M酸長的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1，-由SEQIDNO.:l構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-(例如，約19至50個氨基酸長的)SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要當所述類似物由SEQIDNO.:67構成時，所述類似物是酰胺化的，-10至18個M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個氨基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。另一方面中，本發明涉及一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子在制造藥物中的用途。根據本發明，提供了一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子在制造用于治療神經系統疾病或用于治療中樞神經系統障礙的藥物中的用途。再一方面中，本發明涉及在此所述的載體或綴合物在制造用于治療腦病(腦相關疾病)或神經系統疾病，用于診斷腦病或神經系統疾病或用于轉運物質穿itjk腦屏障的藥物中的用途。另一方面中，本發明涉》4^發明的載體或綴合物用于治療具有例如神經t…、"二，、一，、、…根據本發明，本發明所包括的神經系統疾病包括，例如并且不受限制，腦瘤、腦轉移瘤、神經分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風和血腦屏障相關的^L能失常。另一方面中，本發明涉及轉運物質穿過哺乳動物(人、動物)的血腦屏障的方法，其可以包括將化合物給藥于哺乳動物的步驟，該化合物包括與一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子連接的物質。再一方面中，本發明提供了治療患者的神經系統疾病的方法，包括將藥物給藥于患者，該藥物包括一類與牛力夷蛋白酶抑制劑相關的分子和適于治療該疾病的化合物，該化合物與一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子連接。另一方面中，提供了治療患者的中樞神經系統障礙的方法，包括將藥物給藥于患者，該藥物包括一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關的分子和適于治療該疾病的化合物，該化合物與牛胰蛋白酶抑制劑連接。再一方面中，提供了轉運物質穿過血腦屏障的方法，其包括將本發明的藥物組合物給藥于個體的步驟。另一方面中，本發明還涉及治療有此需要的哺乳動物(例如，患者)(例如，具有神經系統疾病的患者)的方法。該方法可以包括將本發明的載體、綴合物和/或藥物組合物給藥于哺乳動物。本發明另外涉及診斷有此需要的哺乳動物(例如，患者)的神經系統疾病的方法(即診斷方法)。該方法可以包括將本發明的栽體、綴合物和/或藥物組合物給藥于哺乳動物(人個體、患者、動物)。根據本發明，可以動脈內、鼻內、皿內、靜脈內、肌內、皮下、經皮或口服來進行給藥。根據本發明，可以將治療有效量的藥物組合物給藥于哺乳動物。需要的哺乳動物(需要的個體)可以是，例如，具有神經系統疾病、中樞神經系統疾病、腦癌、腦轉移瘤等或處于具有神經系統疾病、中樞神經系統疾病、腦癌、腦轉移瘤等風險中的哺乳動物。另一方面中，本發明涉及藥物組合物，其可以包括，例如-本發明的載體(其可以選自在此所述的任一種多肽)或綴合物；和-藥物學上可接受的載體，例如，藥物學上可接受的賦形劑。根據本發明，藥物組合物可以用于例如治療神經系統疾病。根據本發明，藥物組合物可以用于例如診斷神經系統疾病。此外，根據本發明，藥物組合物可以用于例如轉運物質穿過血腦屏障。此外，根據本發明，藥物組合物可以用于例如將物質遞送至個體的CNS。此外，根據本發明，藥物組合物可以用于例如治療有此需要的哺乳動物的中樞神經系統障礙。根據本發明，藥物組合物可以用于將物質遞送至個體的CNS。在此應當理解本發明包括載體(多肽)或綴合物的藥物學上可接受的鹽。組合物(藥物組合物)因而可以包括如在此所限定的制造的藥物以及藥物學上可接受的賦形劑。對本發明來說，以下對下列術語進行定義。術語"載體"或"媒介物"意指能夠轉運化合物的化合物或分子如多肽。例如，轉運可以穿過血腦屏障而發生。可以將載體連接(共價或非共價)或綴合到另一種化合物或物質上并因此能夠轉運其他化合物或物質穿過血腦屏障。例如，載體可以與腦內皮細胞上存在的受體結合并因此通過轉月te作用被轉運穿過血腦屏障。栽體可以是為此可以獲得高水平的經內皮轉運的分子。載體可以是，但不限于，蛋白質、肽或肽才莫擬物并可以是天然存在的或通過化學合成或遺傳重組技術(遺傳工程)來生產。術語"綴合物"意指載體和另一種化合物或物質的組合。綴合物性質上可以是化學的，如通過連接物，或本質上是遺傳的，例如通過遺傳重組技術，(例如，綠色熒光蛋白、P-半乳糖苷酶、組胺酸標記等)的融合蛋白中。表述"小分子藥物"意指具有1000g/mol或更低分子量的藥物。術語"治療"意指獲得所需的藥理性和/或生理性效果，例如，癌細胞生長的抑制、癌細胞的死亡或神經系統疾病或病癥的緩解。就完全或部，防疾病或其癥狀而言，該效果可以是預防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或由疾病引起的副作用而言，該效果可以是治療性的。如在此所用的"治療"涵蓋哺乳動物(特別;l:人)疾病的任何治療，并包括(a)預防可以易患該疾病M沒有診斷為患有該疾病的個體中發生的疾病或病癥(例如，預防癌癥)的發生；(b)抑制疾病，(例如，阻止其M);或(c)緩解疾病(例如，減輕與疾病相關的癥狀)。如在此所用的"治療"涵蓋藥劑或化合物對個體的任何給藥來治療、治愈、緩解、改善、減輕或抑制該個體的病癥，包括，并且不受限制，將載體-物質綴合物給藥于個體。術語"癌癥"意指任何細胞惡性腫瘤，其獨特的性狀是失去正常控制，其導致無節制生長、缺乏分化和入侵局部組織和轉移的能力。癌癥可以在任何器官的任何組織中t艮。更具體地，癌癥包括但不限于，腦癌。術語"給藥"意指遞送方式，包括但不限于，動脈內、鼻內、>內、靜脈內、肌內、皮下、經皮或口服。可以將日劑量分成一個、兩個或多個適合于在整個時間段內給藥一次、兩次或多次形式的劑量。術語"治療有效"或"有效量"意指足以基本上改善一些與疾病或醫學病癥相關癥狀的化合物的量。例如，在癌癥或精神病癥或神經系統或CNS疾病的治療中，減輕、預防、延遲、抑制或阻止疾病或病癥的任何癥狀的物質或化合物將是在治療上有效的。治療有效量的物質或化合物不需要治愈疾病或病癥，但將提供疾病或病癥的治療，使得該疾病或病癥的發作得到延遲、阻礙或預防，或該疾病或病癥的癥狀得到緩解，或該疾病或病癥的期P艮得到改變，或例如，降低疾病的嚴重程度或加速個體的恢復。本發明的載體和綴合物可以與常規治療方法和/或療法聯合使用或可以與常規治療方法和/或療法分開使用。當本發明的綴合物與使用其它物質的療法聯合給藥時，可以將它們按次序或同時給藥于個體。另夕卜，根據本發明的藥物組合物可以由與藥物學上可接受賦形劑結合的本發明的栽體-物質綴合物，如在此所述的，和本領域已知的另一種治療劑或預防劑的組合構成。藥物學上可接受的酸加成鹽可以通過本領域已知和常用的方法來制備并包括于本發明中。本發明的生物活性多肽包括功能衍生物。術語"功能衍生物"意指本發明的載體或物質或綴合物及其鹽的"化學衍生物"、"片段"或"變體"生物活性序列或部分。載體功能衍生物能夠連接或綴合到另一種化合物或物質上并穿iij6L腦屏障且因此能夠轉運另一種化合物或物質穿過血腦屏障。術語"化學衍生物"意指本發明的載體、物質或綴合物，其含有不是該栽體、物質或載體-物質綴合物的一部分的附加化學部分。共價修飾包括在本發明的范圍內。可以使用本領域7>^口的方法，通過直掩化學合成來方便地制^f匕學衍生物。例如，可以將這樣的修飾引入蛋白質或肽載體、物質或栽體-物質綴合物中，其通過將靶向氨基酸殘基與能夠與選定的側鏈或末端殘基反應的有機衍生劑反應來進行。載體化學衍生物能夠穿itjk腦屏障并連接或綴合到另一種化合物或物質上且因此能夠轉運另一種化合物或物質穿過血腦屏障。在優選的實施方案中，獲得非常高水平的經內皮轉運穿過血腦屏障，而對血腦屏障的完整性沒有任何影響。術語"物質"無差別地意指抗體、藥物(如醫療藥物)或化合物如治療劑或化合物、標記、示蹤劑或成<象化合物。術語"治療劑"或"藥劑"意指用于治療疾病的癥狀、身體或精神病癥、損傷或感染的藥劑和/或藥品和/或藥物，并包括但不限于，抗生素、抗癌劑、抗血管生成劑和在中樞神經系統水平上具有活性的分子。例如，可以靜脈內給藥紫杉醇來治療腦癌。術語"病癥"意指任何引起個體疼痛、不適、惡心、疾病或傷殘(精神或身體)的情況，包括神經系統疾病、損傷、感染或慢性或急性疼痛。可以用本發明治療的神經系統疾病包括，但不限于，腦瘤、腦轉移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病和中風。如在此所用的，"藥物組合物，，意指治療有效量的物質以及藥物學上可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、輔助劑和/或載體。如在此所用的"治療有效量"指的是對于特定的病癥和給藥方案提供治療效果的量。這容物(例如，Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強度的稀釋劑、添加劑如白蛋白或明膠來防止被表面吸收、去污劑(例如，吐溫20、吐溫80、PluronicF68、膽汁酸鹽)、增溶劑(例如，甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、偏亞疏酸氫鈉)、防腐劑(例如，硫柳汞、苯曱醇、對羥基苯甲酸酯)、增量物質或張力調節劑(例如，乳糖、甘露醇)、聚合物如聚乙二醇與蛋白質的共價連接，與金屬離子配合或將該物質摻加到聚合物如聚乳酸、聚乙醇酸、7jc凝膠等的顆粒制劑之中或之上，或摻加到脂質體、微乳液、膠束、單層或多層脂質體、紅細胞影或原生質球上。這樣的組合物將影響物理狀態、溶解度、穩定性、體內釋放率和體內清除率。受控或持續釋放組合物包括親脂性儲庫(例如，脂肪酸、蠟、油)中的制劑。本發明還包括用聚合物(例如，泊洛沙姆或poloxamine)包被的顆粒組合物。本發明組合物的其它實施方案摻入顆粒形式的保護性涂層、蛋白酶抑制劑或滲透增強劑，用于各種給藥途徑，包括非腸道、肺、鼻、口、陰道、直腸途徑。一個實施方案中，藥物組合物非腸道、癌附近(paracancerally)、經粘膜、經皮、肌內、靜脈內、皮內、皮下、tt內、心室內、頭顱內和腫瘤內給藥。此外，如在此所用的"藥物可接受栽體"或"藥物載體"是本領域已知的并包括，但不限于，0.01-0.1M或0.05M磷酸鹽緩沖液或0.8%鹽水。此外，這樣的藥物學上可接受栽體可以是水性或非水性溶液、懸浮液和乳液。非水性溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射的有機酯類如油酸乙酯。水性載體包括水、醇"&溶液、乳液或懸浮液，包4舌鹽水和緩沖媒介物。非腸道媒介物包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化林格氏或固定油。靜脈內媒介物包括流體和營養補充劑、電解質補充劑，如基于林格氏葡萄糖的那些等。還可以存在防腐劑和其它添加劑，如，例如，抗微生物劑、抗氧化劑、整理劑(collatingagents)、惰性氣體等。"類似物"在此應^皮理解為源自原始序列或一部分原始序列的多肽并且其可以包括一個或多個》務飾；例如，一個或多個M酸序列中的修飾(例如，氨基酸添加、缺失、插入、置換等)，一個或多個氨基酸的主鏈或側鏈中的修飾，或將基團或另一個分子添加至一個或多個氨基酸(側鏈或主鏈)。因此，"類似物，，在此應被理解為具有與在此所述的多斜目似的生物活性和化學結構(或其結構的一部分)的分子。類似物包括在多肽的一個或兩個末端上和/或在多肽M酸序列的內部可以具有，例如，一個或多個M酸插入的多肽。"類似物"可以具有與原始序列或一部分原始序列的序列相似性和/或序列同一性并且還可以具有如在此所討論的其結構4務飾。兩個序列之間相似性的程g基于同一性(相同的氨基酸)和保守性置換的百分比。例如，可以在2、3、4、5、10、19、20個氨基酸或更多(和其之間的任何數量)的區域內比較相似性或同一性。同一性在此可以包括與原始糾目同的和與原始多^bN比較時可以占據相同或相似位置的M酸。例如，具有與原始多肽50%同一性的類似物可以包括例如，包含50%原始多肽的氨基酸序列和具有其它百分比的相似性的類似物。在此應當理解在與原始肽的M酸相同或相似的類似物的M酸之間可以發現缺口。該缺口可以沒有氨基酸、包括一個或多個與原始肽不相同或相似的氨基酸。在此包括本發明載體(多肽)的生物活性類似物。例如,可以使用WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0中的算法GAP、BESTFIT或FASTA確定同一性百分比，使用默認缺口重量。例如，類似物可以包含或具有與原始M酸序列的50%同一性并且一部分占據相似位置的剩余的氨基酸可以是例如非保守性或保守性氨基酸置換。因此，本發明的類似物包括與原始序列或一部分原始序列具有至少90%序列相似性的那些類似物。"類似物"可以具有，例如，至少35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%(96°/。、97%、98%、99%和100%)與原始序列或一部分原始序列的序列相似性。此外，"類似物"還可以具有，例如，至少35%、50%、60%、70%、亂90線95%(96%、97%、98%、99°/。和100%)與原始序列的序列相似性并且在氨基酸主鏈或側鏈中具有一個或多個置換的組合或添加基團或另一個分子等。用來與其它的M酸相似的示例性M酸(保守性氨基酸)是本領域已知的并包括，例如，表l中所示的那些。本發明的類似物還包括與原始序列或一部分原始序列可以具有至少35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%(96%、97%、98%、99%和100%)序列同一性的那些類似物。此外，"類似物"可以具有，例如，35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%氨基酸的主鏈或側鏈中具有一個或多個置換的組合或添加基團或另一個分子等與原始序列的(序列)同一性(即，與原始肽至少35°/。、50%、60%、70%、80%、90%或95%相同的類似物)并且在氨基酸的主鏈或側鏈中具有一個或多個置換的組合或添加基團或另一個分子等。"片段"在此應被理解為源自原始或親本序列的一部分或源自所述親本序列的類似物的多肽。片段包括具有一個或多個tt酸截斷的多肽，其中所述截斷可以源自氨基端(N-末端)、氛基端(C-末端)，或源自蛋白質的內部。片段可以包含與原始序列的相應部分相同的序列。本發明包括在此所述的載體(多肽)的生物活性片段。因此，本發明包括在此所述載體的原始多肽、片段(修飾或未<|^的)、類似物(#^或未修飾的)、衍生物(修飾或未修飾的)、同系物H請或未^f"飾的)形式的生物活性多肽。因此，在此包括與原始多斜目比較具有不顯著破壞所需生物活性的修飾的任何多肽。本領域7么^口，可以對本發明的多肽進行各種修飾而不會有害地影響它們的生物活性。另一方面，這些修飾可以保持或提高原始多肽的生物活性或可以最佳化本發明多肽的一個或多個在某些情況下可能是需要的或理想的特性(例如，穩定性、生物利用率等)。本發明的多肽包括，例如，M,列的那些多肽。#^可以發生在多肽的^(可位置，包括多肽主鏈、氨基酸側鏈和M-或g-末端。可以理解在指定多肽中的幾個位點上可以存在相同或不同程度的相同類型的〗奮飾。此外，指定的多肽可以含有許多類型的修飾。多肽作為泛素化的結果可以是分支的，并且它們可以是環狀的，具有或不具有分支。環狀、分支和分支環狀多肽可以由翻譯后自然過程產生或可以由合成方法制得。修飾包括，例如，并且不受限制，聚乙二醇化、乙酰化、酰化、乙酰亞M甲基(Acm)基團的添加、ADP-核糖基化、M化、化、生物素化、曱氨酖化、羧乙基化、酯化、共價連接黃素、共價連接血紅素部分、共價連接核苷酸或核苷酸衍生物、共價連接藥物、共價連接標記(例如，熒光性的、放射活性的，等)、共價連接脂質或脂質衍生物、共價連接磷脂酰肌醇、交聯、環化、二硫鍵形成、脫曱基、共價交聯的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、Y-^&化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、石^(匕、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯基化、外消旋化、硒酰化、石克酸鹽化、轉移-RNA介導的氨基酸添加至蛋白質如精氨酰化和泛素化等。在此應當理解本發明包括對在此所述的多肽多于一個的修飾達到生物活性與原始(親本)多W目似的程度。如上所述，肽修飾可以包括，例如，多肽序列中的M酸插入(即，添加)、缺失和置換(即，替換)，保守性或非保守性的(例如，D-M酸、脫氨基酸)，其中這樣的改變基本上沒有改變該多肽的整體生物活性。置換的實例可以是保守性置換(即，其中一個殘基由另一個相同大類或組的歹i&替換)或當需要時，是非保守性置換(即，其中一個g由另一種類型的M酸替換)。此外，非天然存在的M酸可以替代天然存在的M酸(即，非天然存在的保守性氨基酸置換或非天然存在的非保守性氨基酸置換)。如所理解的，天然存在的^酸可以被細分類為酸性、堿性、中性和極性，或中性和非極性。此外，編碼tt酸中有三個是芳香族的。不同于本發明的確定多肽的編碼多肽含有氨基酸的置換密碼子可能是有用的，其來自與所替代的M酸相同的類型或組。因此，在某些情況下，堿性氨基酸Lys、Arg和His是可互換的；酸性氨基酸Asp和Glu是可互換的；中性極性M酸Ser、Thr、Cys、Gln和Asn是可互換的；非極性脂族氨基酸Gly、Ala、Val、Ile和Leu是可互換的，但由于大小Gly和Ala的更密切相關而Val、Ile和Leu彼此更密切相關，且芳香族氨基酸Phe、Trp和Tyr是可互換的。應當進一步注意如果多肽是合成的，還可以用不是由DNA天然編碼的氨基酸(非天然存在的或非天然的氨基酸)進行置換。非天然存在的氬基酸在此應被理解為不是在哺乳動物中自然產生的或發現的氨基酸。非天然存在的氨基酸包括D-氛基酸、具有連接到半皿酸的硫原子上的乙酰氨基甲基的氨基酸、聚乙二醇化的氨基酸等。因此限定的多肽序列中包含非天然存在的M酸將產生原始多肽的衍生物。非天然存在的氨基酸(殘基)還包括式NH2(CH2)nCOOH的co氨基酸，其中n是2-6，中性非極性氨基酸，如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、正亮氨酸等。苯基甘氨酸可以替代Trp、Tyr或Phe;M酸和甲硫氨酸亞砜是中性非極性的，半自^A酸性的，鳥氨酸是堿性的。脯氨酸可以被羥基脯氨酸置換并保留構象賦予特性。本領域已知類似物可以通過置換誘變來產生并保持本發明多肽的生物活性。這些類似物使該蛋白質分子中的至少一個M酸^&被除去并在其位置上插入不同的殘基。被確認為"保守性置換"的置換實例顯示于表l中。如果這樣的置換導致不理想的改變，那么引入其他類型的置換，表l中稱為"示例性置換"，或關于氨基酸類別在此進一步所述的，并篩選產物。有時，可能所關心的是通過氨基酸置換、插入或缺失來改變多肽的生物活性。例如，多肽的修飾可以導致多肽生物活性的增加，可以調節其毒性，可以導致生物利用率或穩定性的改變，或可以調節其免疫活性或免疫特性。通過選擇置換來實現功能或免疫特性的實質性修飾，這些置換對維持(a)置換區域內多肽主鏈的結構，例如，作為片層或螺旋構象，(b)耙向位點上分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的大小的效果顯著不同。基于常見的側鏈特性將天然存在的殘基分成幾組(1)疏水性正亮氨酸、甲減氨酸(Met)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、組氨酸(His)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe),(2)中性親水性半胱氨酸(Cys)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)(3)酸性/帶負電荷的天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)(4)堿性天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、組氨酸(His)、賴氨酸(Lys)、精氦酸(Arg)(5)影響鏈取向的殘基甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro);(6)芳香族色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、組氨酸(His)(7)極性Ser、Thr、Asn、Gin(8)堿性帶正電荷的:Arg、Lys、His,和；(9)帶電荷的Asp、Glu、Arg、Lys、His非保守性置換需要將這些類別之一的一個成員換成另一個成員。保守性置換需要將這些組之一的一個成員換成這些組中的另一個成員。表1中列出了可替換的其他保守性氨基酸置換。表1氨基酸置換<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>生物活性類似物可以是，例如，原始序列中具有至少一個(即，非保守性或保守性)氨基酸置換的類似物。生物活性類似物還可以是例如，具有一個或多個M酸插入的類似物。其他示例性類似物包括，例如-具有式I:X「SEQIDNO.:l-X:的SEQIDNO.1類似物-具有式II:X:-血管肽-1-&的血管肽-l類似物和-具有式III:Xr~血管肽-2-&的血管肽-2類似物Xi和X;可以獨立地是0至約100個(例如，0至約30至50個)酸的M酸序列。l和t可以源自牛胰蛋白酶抑制劑或牛胰蛋白酶抑制劑類源M酸序列)。式I、II或III的化合物還可以包含血管肽-1、血管肽-2或SEQIDNO.1的M酸序列內的氨基酸置換、缺失或插入。然而，該類似物優選是生物活性的，如通過在此所述的測定之一或通過任何相似或等價測定所確定的。可以使用在此所述的測定或方法之一來鑒定生物活性多肽(例如，栽體)。例如，候選栽體可以通過常規肽合成生產，與在此所述的紅豆杉醇綴合并在在此所述的體內模型中測試。例如，可以基于與沒有用綴合物治療的對照相比較提高已經注射了腫瘤細胞并用綴合物治療的動物的存活率的功效來鑒定生物活性載體。此外，可以基于原位腦灌注測定中其在實質中的位置來鑒定生物活性載體。在此應當理解，如果對于本發明的特定特征(例如，溫度、濃度、時間等)提及"范圍"或"一組物質"，則本發明涉及并在此明確地引入每個具體的成員和其中任何亞范圍或亞組的組合。因此，應將任何指定的范圍或組理解為單獨提及某個范圍或組的每個成員以及其中所包括的每個可能的亞范圍或亞組的簡化方式；并且對于其中的任何亞范圍或亞組同樣如此。因此，例如，-對于10至18個M酸的長度，應當理解為在此具體引入每個個別的長度，例如，18、17、15、10的長度，和其之間的任何數目等；因此，除非特別指出，應將在此提及的每個范圍理解為包括兩個端點。例如，5至10個氨基酸長的表述應被理解為包括5和10;-關于其他*如序列、長度、濃度、元件等…同樣如此在此特別應當理解在此限定的序列、區域、部分各自包括所述的每個個別的序列、區域、部分以;^每個可能的亞序列、亞區域、亞部分，不管將這樣的亞序列、亞區域、亞部分定義為肯定包括特定的可能性、排除特定的可能性還是其組合；例如對于區域的排除性定義應當如下"只要所述多肽不短于4、5、6、7、8或9個氨基酸。另外否定性限制的另一實例如下包含SEQIDNO.:X的序列，排除SEQIDNO.Y的多肽；等。否定性限制的再一實例如下只要所述多肽不是(不包含或不由其構成)SEQIDNO.:Z。附圖簡述附圖中說明了本發明的典型實施方案，其中圖l說明了使用Tricine皿分析的實例；圖2說明了本發明的載體或媒介物與紫杉醇連接的方法；圖3說明了使用與牛胰蛋白酶抑制劑綴合的紫杉醇對Lewis大鼠的成膠質細胞瘤才莫型的治療效果；圖4說明了使用與血管肽-1綴合的紫杉醇對棵鼠的成膠質細胞瘤模型的治療效果；圖5說明了使用交聯劑BS3使牛胰蛋白酶抑制劑與IgG綴合的方案；圖6說明了使用交聯劑疏代-EMCS使牛胰蛋白酶抑制劑與IgG綴合的方案；圖7說明了IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的腦滲透；圖8說明了紅豆杉醇-血管肽-2綴合物對^成膠質細胞瘤小鼠(無胸腺、棵鼠)存活的治療效果；圖9說明了本發明的典型多肽的結構。發明詳述本發明涉及可以作為將物質、藥物或其他分子轉運至腦和/或中樞神經系統(CNS)中的載體的新分子。自身不能或無法穿過血腦屏障的物質、藥物或其他分子當與載體連接或偶聯(綴合)時將被轉運穿itj6L腦屏障。另夕卜，還可以觀察到自身能夠穿itjfe腦屏障的物質當與本發明的載體綴合時轉運得到了提高。這樣的綴合物可以為組合物，如藥物組合物的形式，用于治療病癥或疾病。對作為栽體的候選分子的i殳計在國際公開WO2004/060403中，發明人公開了血管肽-l(SEQIDNO.:67)和牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)是有效的載體，用于轉運所需的分子穿過血腦屏障。在此發明人證明了其他分子也可以用作載體，用于轉運物質穿過血腦屏障。因此，將具有和牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-l相似結構域的肽和血管肽-1的修飾形式(酖胺化的，67號肽)設想為潛在的載體。這些衍生的肽類似牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-l，但是包含不同的M酸插入并帶有不同的電荷。迄今，測試了表2中列出的96種肽以;Sjf列表中列出的其他肽作為栽體的可能性。在此應當理解以下的實驗中，已經基于與其他的及bN比較較高的活性選擇了肽。沒有選擇用于進一步實驗的那些肽決不是要放棄而是旨在將其視為非功能性的。這些肽顯示出顯著的活性并具有作為(生物活性)載體的用途并且也包括于本發明中。表2.來自與牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-1相似結構域的具有不同電荷和氨基酸插入的96種肽的設計<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>使用體外模型的選擇將體外模型用于篩選測定并用于藥物轉運至腦的機制研究。由CELLIALTechnologies公司研發出該有效的血腦屏障體外模型。為了得到可重復的結果，使用體外模型來評價不同載體到達腦的能力。該模型由牛腦毛細血管內皮細胞和大鼠M^細胞的共培養物構成。它呈現出腦內皮所特有的超結構特征，包括緊密連接、缺乏穿孔、缺乏經內皮的通道、親水性分子的低滲透性和高電阻。此外，該模型顯示出多種測試分子的體外和體內分析之間良好的相關系數。迄今，獲得的所有數據顯示出該BBB模型通過重現一些體內存在的細胞環境的復雜性嚴格i4^莫擬了體內狀況，同時保留了與組織培養相關的實驗優勢。許多研究已經證實了該細胞共培養物是最可重復的BBB體外模型之一。使用BBCEC和星形細胞的共培養物建立了BBB的體外模型。在細胞培R前，用大鼠^C^f、蛋白覆蓋在平板插入物(Millicel卜PC3.0"M;30-mm直徑)的上表面。然后將它們置于含有涂布于2mL共培養基中的濾器上表面的星形細胞和BBCEC的六孔微量平板中。將該BBCEC培養基一周更換三次。在這些條件下，7天后分化的BBCEC形成匯合單層。在達到匯合后5至7天進行實驗。測量蔗糖的滲透系數來證實內皮滲透性。由新生大鼠的大腦皮層制備混合星形細胞的初級培養物(DehouckM.P.，MeresseS.，DelormeP.,FruchartJ.C.,Cecchelli，R.AnEasier，Reproductible,andMass-ProductionMethodtoStudytheBlood—BrainBarrierInVitro./腸,oc/柳，54,1798-1801,1990)。簡而言之，除去腦膜后，將腦組織輕柔地壓過82jiim尼龍篩。將星形細胞在2mL補充了10%熱滅活的胎牛血清的最佳培養基(DMEM)中以1.2x10、田胞/mL的濃度涂布于六孑L微量平板上。將培養基每周更換兩次。從CellialTechnologies獲得牛大腦毛細血管內皮細胞(BBCEC)。在補充了10%(v/v)馬血清和10。/。熱滅活的小牛血清、2mM谷氨酰胺、50jlig/mL慶大霉素和lng/raL基礎成纖維細胞生長因子(每隔一天加入)的DMEM培養基存在下培養細胞。最初，進行一^擇，使用BBB的體外模型測試表2中所述的96種肽作為載體。將每種溫口到用內皮細月嫂蓋或沒有覆蓋的插入物的上表面，在37。C保持90分鐘。孵育后，通過電泳解析位于室下表面的肽。用考馬斯藍將電泳凝皎染色來顯現所述肽，如圖1中所示的一些肽(不限于此)。在此通常將血管肽-1(SEQIDNO.:67或67號肽(i^化形式))用作參照或用于比較目的。圖1中，##種涂布于濾器上表面的初始^口載于電泳皿(ini)上作為對照。轉月g作用90分鐘后，將覆蓋了(+)或沒有覆蓋(-)內皮細胞的濾器基底外側面的50m1體積也加栽于Tricine皿上。為了顯現，用考馬斯藍將肽染色。在一級篩選后，選擇通過考馬斯藍染色在室下表面檢測到的肽(5、8、45、67、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、81、82、90和91)用于進一步研究，使用碘化肽。簡而言之，使用來自Sigma的碘-珠用標準程序將選定的肽石制匕。每種蛋白質使用兩個碘-珠。在3mlWhatmar^濾器上用磷酸鹽緩沖液(pb)將這些珠粒洗滌兩次并重懸浮于60m1的pb中。在室溫下將來自Amersham-Pharmaciabiotech的1251(1mCi)加入到珠^立懸浮液中保持5分鐘。通it^口入100|ag(80-100|i1)珠粒懸浮液來開始每種肽的》典化。在室溫下孵育10分鐘后，將上清液施加到預先填充了5ml來自Pierce的交聯葡聚糖1"的脫鹽柱上并用10mlPBS1251-蛋白質。收集0.5ml的級分并測量5m1的各級分中的放射性。匯集對應于1251-蛋白質的級分并對pH7.4的Ringer/Hepes緩沖液滲析。放射性標記的效率為0.6-1.0x1()8cpm/100Mg蛋白質。還使用BBB的體外模型研究了碘化肽。在37。C將每種肽加到覆蓋了或沒有覆蓋內皮細胞的插入物的上表面，保持90分鐘。孵育后，對位于室下表面的M行TCA沉淀。將結a示為cpm比率。對于每種[1251]-肽，將底部室中的cpm數目除以加入覆蓋了內皮細胞(+細胞/初始)或;^蓋(-細胞/初始)的濾器的cpm總數。還計算了存在于用內皮細胞覆蓋或沒有a^的濾器的底部室中的rn-肽數目之間的比率(+細胞/-細胞)。非常低的-細胞/初始比率表示濾器可能干擾肽(肽5和8)。高的+細胞/初始和+細胞/-細胞比率表示肽較好地穿過了腦內皮細胞。之前選定的18種肽的結果顯示于表3中。表3在二級篩選后肽的篩選結果<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>從這些結果中，選#+細胞/-細胞比率一般高于0.35的12種肽，即，5、8、67、75、76、77、78、79、81、82、90和91。由于它們的+細月包/-細月包比率(>0.2)，還選擇了#91和#77肽用于進一步研究。然后通過使用體外BBB模型估算它們的滲透性系數來研究12種選定的肽。在星形細胞存在下生長于濾器上的BBCEC單層上的BBB才莫型中通過測量["C]蔗糖滲透性來確定250nM每種選定的肽對BBB完整性的影響。為了完成該測試，將生長于插入物上的腦內皮細胞單層轉移至每孔(基底外側區室)含有2mLRinger-Hepes的6-孔平板中，在37。C下保持兩小時。Ringer-Hepes溶液由150mMNaCl、5.2mMKC1、2.2mMCaCl2、0.2mMMgCl2、6mMNaHC03、5mMHepes、2.8mMHepes構成、pH7.4。在每個頂端室中，將培養基更換為lmL含有標記的["C]-蔗糖的Ringer-Hepes。在不同時間，將插入物置于另一個孔中。在沒有細胞的濾器或覆蓋了BBCEC細胞的濾器上，在37。C測量["C]蔗糖通過。在時間為零時的實驗開始時加入肽。將結果以蔗糖清除(ju1)作為時間(分鐘)的函數來作曲線。清除()j1)=[C]AxVA[C]A-腔外(Abluminal)痕量濃度[C]LVA-腔外室的體積[C]L-腔內(Luminal)痕量濃度線性變化的斜率(M1/分鐘)是在肽存在下沒有細胞的濾器(Psf)和覆蓋了BBCEC細胞的濾器(PSt)的蔗糖滲透系數。按照以下計算滲透系數(Pe):1/Pe=(1/PSt-1/PSf)/濾器面積(4.2cm2)選擇具有最高Pe的肽67、76、90、91、5、79、8和78。將原位腦灌注(小鼠中)用作第四級選擇來選擇最佳的肽。該程序還將腦血管區室中剩余的化合物與已經穿過腔外內皮膜進入腦實質的化合物區分開來。實際上，灌注后毛細血管減液的才支術可用于測量分子是否真正穿過內皮進入了腦實質。使用該技術，在此證明了特異性肽趨于在腦實質部分中累積(參見表4)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>四種肽，即5、67、76和91，顯示出在實質中最高水平的分布，體積高于20ml/100g并且其代表見于整個大腦(勻漿)體積的至少25%,因此顯示出作為用作轉運載體的最高潛能。排除了肽79，因為其在腦實質中的體積分布較低(18ml/100g)。肽67代表發明人遞交的在先申請中所述的血管肽-l的,化形式。肽的§化影響了肽的總電荷。如在表2和3中明顯可見的，具有不同電荷的兩種肽不一定具有相同的活性。因此本發明的載體可以用于轉運物質穿過血腦屏障的方法中，該方法包括將含有連接到載體如牛胰蛋白酶抑制劑或其功能衍生物(即，牛胰蛋白酶抑制劑類似物、牛胰蛋白酶抑制劑片段、牛胰蛋白酶抑制劑衍生物、牛胰蛋白酶抑制劑片段的類似物)上的活性成分或藥劑給藥于個體。可以動脈內、鼻內、內、靜脈內、肌內、皮下、經皮或口服將栽體和綴合物給藥于患者。藥劑可以是，例如，^jk管生成化合物。該藥劑可以具有160，000道爾頓的最大分子量。如在此所討論的，該藥劑可以是標記或藥物，如小分子藥物、蛋白質、肽或酶。藥物可以適于治療，例如，患者的神經系統疾病或中樞神經系統障礙。藥物可以是細胞毒性藥物并且標記可以是可檢測標記如放射活性標記、綠色熒光蛋白、組胺酸標記蛋白或P-半乳糖普酶。可以將藥劑遞送到，例如，患者的中樞神經系統中。根據另一個實施方案，其中所提及的用途、方法、化合物、物質、藥物或藥品可以不改變患者血腦屏障的完整性。根據本發明另外的實施方案，肽可以選自牛胰蛋白酶抑制劑、牛胰蛋白酶抑制劑片段(SEQIDN0:1)和SEQIDNO:l至97、99、100或101中限定的任一種肽。例如，肽5、76、91、97和97以及肽67可以用于本發明中，通過使它們與物質或化合物連接，用于轉運所述物質或化合物穿過患者的血腦屏障。所述物質或化合物可以適于治療神經系統疾病或治療中樞神經系統障礙。本發明的載體，如例如，肽5、76、91和97以及肽67可以與可檢測標記連接或用可檢測標記來標記，可檢測標記如放射性成像劑，如發射射線的那些，例如使用放射性成像劑-抗體-載體綴合物用于檢測疾病或病癥，其中抗體與疾病或病癥特異性抗原結合。除抗體以外的并且本領域已知并常用的其他結合分子也包括于本發明中。另夕卜，本發明的載體或其功能衍生物或其混合物可以與治療劑連接，來治療疾病或病癥，或可以與其混合物連接或用其混合物標記。可以通過在允許物質轉運穿過血腦屏障的條件下將本發明的載體-物質綴合物給藥于個體來實現治療。在此使用的治療劑可以是藥物、藥品、發射射線的物質、細胞毒素(例如，化療劑)和/或其生物活性片段，和/或其混合物以允許細胞殺傷，或可以是用于治療、治愈、緩解、改善、減輕或抑制所治療個體的疾病或病癥的物質。治療劑可以是合成產物或真菌、細菌或其它微生物如支原體、病毒等、動物如爬行動物或植物來源的產物。治療劑和/或其生物活性片段可以是酶促活性劑和/或其片段，或可以通過抑制或阻斷重要和/或必要細胞途徑或通過與重要和/或必要天然存在的細胞成分竟爭來起作用。#■99或低劑量硤-131來舉例說明。用于本發明中可檢測標記或標志可以是放射性標記、熒光標記、核磁共振活性標記、發光標記、發色團標記、PET掃描儀的正電子發射同位素、化學發光標記或酶標記。熒光標記包括但不限于，綠色熒光蛋白(GFP)、熒光素和若丹明。化學發光標記包括但不限于，螢光素酶和P-半乳糖苷酶。酶標記包括但不限于過氧化物酶和磷酸酶。組胺酸標記也可以是可檢測標記。預期物質可以在轉運穿過血腦屏障后從載體中釋放出來，例如通過酶切割或載體和物質之間化學鍵的斷裂。然后l^;改劑可以在載體不存在下以其預計能力來起作用。通過參照以下實施例將更容易理解本發明，給出這些實施例來說明本發明而不是限制其范圍。用牛胰蛋白酶抑制劑給出了以下實施例。然而，關于它們作為轉運物質穿itii腦屏障的載體的潛能，在此已經證明了本發明的分子具有與牛胰蛋白酶抑制劑共同的特性。因此這些實施例適用于本發明的分子。實施例I藥物綴合的策略(紫杉醇)對于綴合，紫杉醇(TAX0IA紅豆杉醇)具有2個策略位置(位置C2，和C7)。圖2說明了本發明的栽體與紫杉醇連接的方法。簡而言之，將紫杉醇與琥珀酸酐嘧。定在室溫反應3小時以在位置2，上連接琥珀醃基團。這樣的2，-琥珀酰紫杉醇在位置2，上具有可斷裂的酯鍵，在斷裂時其可以簡單地釋放琥珀酸。如果需要，該可斷裂的酯鍵可以進一步用于使用連接物的各種修飾。然后將所得到的2，-0-琥珀酰-紫杉醇與DMSO中的EDC/NHS在室溫反應9小時，接著加入Ringer/DMSO中的栽體，在室溫持續另外的4小時反應時間。通過HPLC監控圖2中所示的綴合反應。捧爭個中間產物，如紫杉醇、2，-0-琥珀酰-紫杉醇和2，-0-NHS-琥珀酰-紫杉醇純化，并^f吏用不同方法如HPLC、薄層色i普、NMR("C或111交換)、熔點、質譜來證實。通過質鐠和SDS-聚丙烯,:^電泳來分析最終的綴合物。這允許確定每個載體上綴合的紫杉醇分子的數量。確定牛胰蛋白酶抑制劑_紫杉醇綴合物的轉吞胞能力并呈現于以下的表5中。表5牛胰蛋白酶抑制劑-紅豆杉醇綴合物穿過BBB的轉吞胞能力的確定<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>綴合物沒有影響牛胰蛋白酶抑制劑穿過該屏障的能力還維持了該屏障的完整性如表5中所看到的，紫杉醇與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合仍然能過穿itj6L腦屏障的體外模型而沒有影響蔗糖完整性，因此證明了本發明的分子(在此也稱為載體)與大的化學個體如紫杉醇綴合時仍然保持了它們的活性。然后進行了大鼠腦腫瘤模型的存活研究來證實綴合的紫杉醇在體內是否仍然是有活性的。對于大鼠腦腫瘤模型，大鼠接受腦內植入50000個CNS-1成膠質瘤細胞。三(3)天后，動物通過靜脈內注射接受媒介物(牛胰蛋白酶抑制劑)、紫杉醇(5mg/kg)或紫杉醇-牛胰蛋白酶抑制劑(5mg/kg)的治療。然后每周給予治療直至將動物處死(參見圖3)。每天監控大鼠的臨床癥狀和體重減輕。根據優質動物失見范(goodanimalpractice)的實驗方案，當觀察到體重減輕持續了連續3天時或在體重減輕超過動物最初體重的20%之前將動物處死。使用相同的實驗方案，以最大耐受劑量(54mg/kg)單獨注射紫杉醇時，不能提高鼠的存活率(Laccabue等，2001Cancer,92(12):3085-92)。還在植7vA腦腫瘤異種移植物的小鼠中進行了存活研究。對于小鼠腦肺瘤模型，小鼠接受腦內才1X500000個人U87成M^瘤細胞。^LX3A^，動物通過靜脈內注射接受紫杉醇-血管肽1(5mg/kg)或媒介物的治療。然后每周給予治療直至將動物處死。每天監控小鼠的臨床癥狀和體重減輕。根據優質動物規范的實驗方案，當觀察到體重減輕持續了連續3天時或在體重減輕超過動物最初體重的20%之前將動物處死。此刻觀察到對照組的中值存活是19土2天。對于統計學分析，認為20%的存活增加是顯著性的。如圖4中所看到的，綴合物紫杉醇-血管肽-l保持了其活性，具有統計學上顯著的效果。與對照組相比較時，紫杉醇-血管肽l治療的動物的存活時間顯著延長(p<0.05，n=8)。在這兩項存活研究中獲得的結果表明紫杉醇與本發明載體的綴合提高了動物存活率。實施例II抗體綴合的策略由于蛋白質通常具有幾個氨基可用于綴合，所以將使用硫代-NHS/EDC激活的胺偶聯用于交聯治療性抗體與本發明的載體。選擇該方法是因為它是一種快速、簡單和可重復的偶聯技術，因為所得到的綴合物是穩定的，同時仍然保留抗體的生物活性并且其在偶聯過程中具有容易受控的高綴合能力和4氐的非特異性相互作用。已經將抗體或抗體片段(Fab和Fab，2)與本發明的栽體綴合以提高它們向大腦的遞送。各種綴合方法已經用于首先使IgG和牛胰蛋白酶抑制劑綴合，已經證明本發明的載體確切贈目當于牛胰蛋白酶抑制劑。對于IgG的綴合，已經測試了不同的交聯劑，如BS3[雙(磺基琥珀酰亞胺基)辛二酸酯]、NHS/EDC(N-羥基琥珀酰亞胺和N-乙基-N，(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺或硫代-EMCS([N-e-馬來酰亞胺己酸]酰肼)。BS'是革巴向可及伯胺的同雙功能N-羥fe^珀酰亞胺酯。NHS/EDC引起伯胺基團與的綴合。硫代-EMCSA^應朝向M和M的異雙功能^Ji性基團(馬來酰亞胺和NHS-酯)。首先評價了使用交聯劑BS3(圖5)或硫代-EMCS(圖6)的IgG與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合。然后測試了IgG或IgG-綴合物穿過BBB的轉運。使用本發明人實驗室改進的原位腦灌注方法測量了[1251]-IgG至鼠腦毛細血管腔內側的吸收以用于研究鼠腦中的藥物吸收(Dagenais等，2000，J.Cereb.BloodFlowMetab.20(2):381-386)。通過Smith以前所述的確定BBB轉運常數(1996，Pharm.Biotechnol.8:285-307)。將IgG吸4t^示為來自以下等式的分布體積(Vd):Vd=Q*br/C'pf其中Q'br是計算的每克右腦半球[1251]-IgG或ri]-IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的量且(Tpf是在灌注液中測量的標記的痕量濃度。該實驗的結果表明[1251]-IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的腦吸收高于未綴合n]-IgG的腦吸收(參見圖7)。IgG與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合提高了它們在體內腦實質中的累積。實施例III紅豆杉醇-血管肽-2綴合物對小鼠存活的影響使用紅豆杉醇-血管肽-2(在此稱為97號肽(血管肽2是未B化的))進行了該研究以確定紅豆杉醇與血管肽-2的綴合是否能夠提高小鼠存活率。SEQIDN0.:97中顯示了血管肽-2的結構。對于該實驗，小鼠接受腦內移植500000個人U87成膠質瘤細胞。植入后3天，用4某介物(DMS0/Ringer-Hepes80:20v/v(即，對照))或紅豆杉醇-血管肽-2綴合物(3:1，即，每種肽3個紅豆杉醇分子的比率；TxlAn2(5mg/kg))通過尾靜脈注射來治療動物(圖8)。每天監控小鼠的臨床癥狀和體重減輕。給予治療直至將動物處死。如表6中所示的，我們觀察到對照組的中值存活為18天而接受紅豆杉醇-血管肽-2綴合物的小鼠的中值存活為21天(圖8)。對于用紅豆杉醇-血管肽-2綴合物治療的小鼠所獲得的存活曲線(紅色)表示中值存活顯著提高了17%(圖8)。也在表6中呈現的統計學分析表明紅豆杉醇-血管肽-2綴合物的給藥將存活顯著提高了17%(p值-O.048)。表6.存活研究的結果小結a.中值存活天數提高了(％)小鼠(n)對照18.0一7TxlAn2綴合物21.0+177b.統計學分析(P值)統計學差異對照與Txlan2綴合物p=0，048是本申請中提及的每篇出版物、專利和專利申請的內容在此引入作為參考。盡管在此已經詳細描述并在附圖中說明了本發明，但應當理解本發明不限于在此所述的實施方案并且可以進行各種改變和改進而不脫離本發明的范圍或精神。盡管已經結合具體的實施方案描述了本發明，但應當理解能夠進一步改進且該申請意欲涵蓋通常按照本發明原理的本發明任何變化、用途或改i^JL包括在本發明所屬領域已知或常規實踐內的與本發明公開內容的偏離，并且可以將這樣的偏離應用于此前所述的必要特征并且落入所附權利要求的范圍中。序列表SEGIDNO.s1TFVYGGCRAKRNNFKSAED2TFQYGGCMGNGNFVTEKEPFFYGGcGGNRNNFDTEEY4SFYYGGcIjGNKNNYIjREEE5tFFYGGcRAKRNNFkRAKY5號肽包括SEQIDNO.:5中限定的氨基,列并在其N-末端是化的(參見例如圖9)6TFFY<5GCRGKRNNFKRAKY7TFFYGGCRAKKNNYKRAKY8tffyggcrgkkNTistfkraky9TFQYGGCRAKRNNFKRAKY10TFQYGGCRGKKNNFKRAK11TFFYGGcIjGKRnNFKRAKY12tFFYGGsIjGKRNNFKRAKY13PFFYGGcGGKKNNFKRAKY14TFFYGGcRGKGNNYKRAKY15pffyggcrgkrnnfIjraky16TFFYGGcRGKRNNFKREKY17PFFYGGcRAKKNNFKRAKE18TFFYGGcRGKRNNFKRAKD19TFFYGGcRAKRNNFDRAKY20TFFYGGcRGKKNNFKRAEY21pffyggcganrfkrak22TFFYGGcGGKKNFKTAKY23TFFYGGcRGRNNFIjRAK24TFFYGGcRGNRNFKTAKY25TFFYGGsRGNRNNFKTAKY26TFFYGGcIjGNGNNFKRAKY27TFFyGGcIjGNRNNFIjRAKY28TPFYGGCIjGNRNNFKTAKY29TFFYGGCRGNGNNFKSAKY30TFFYGGCRGKKNNFDREKY31TFFYGGCRGKRNNFIjREKE32TFFYGGCRGKGFDRAKY33TFFYGGSRGKGNNFDRAKY34TFFGGCRGNGNNFVTAKY35PFFYGGCGGKGNNYVTAKY36TFFYGGCIiGKGNNFIjTAKY37SFFYGGCIiGNKNNFIjTAKY38TFFGGCGGNKNNFVREKY39TFFYGGCMGNKNFVREKY40TFFYGGsMGNKNNFVREKY41PFFYGGcI;GNRNNYVRKY42TFFYGGcIjGNRNNFVREKY43TFFYGGcGNKNNYVREKY44TFFYGGcGGNGNFIjTAKY45TFFYGGcRGNRNNFIiTAEY46TFFYGGcRGNGNFKSAEY47PFFYGGcIjGKNNFKTAEY48TFFYGGcRGRNNFKTEEY49TFFYGGcRGKRNNFKTEED50PFFYGGcGGNGNNFVREKY51SFFGGcMGGNNFVREKY52PFFYGGcGGNGNNFIjREKY53TFFYGGcIjGNGNNFVREKY54SFFYGGc!>GNGNNYIjRKY55TFFYGGsIiGGNNFVREKY56TFFGGcRGNGNNFVTAEY57tffyggc:lgkgnnfvsaey5Btffyggc:lGnrnnfdraey59tFFYGGcIjGNRNNFIjREEY60TFFYGGcIjGNKNNYLiREEY61pffyggcggnrnnyreey62PFFYGGSGGNRNNYL<REEY63MRpDFCIiEPPYTGPCVAR工64ARIIRYFYNAKAGIjCQTFVYG65GGCRAKRNNYKSAEDCMRTCG66PDFcIiEPPYTGPCVARIIRYFY67TFFGGCRGKRNNFKTEEY67號肽包括SEQIDNO.:67中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是M化的(參見例如圖9)68KFFYGGCRGKRNnFKTEEY69TFYYGGCRGKRNNYKtEEy70TFFYGGSRGKRfKTEEY71ctffygccrgkrnnfkteey72TFFYGGCRGKRNNFKTEEYC73CTFFYGSCRGKRNNFKTEEY74TFfYGGSRGKRNNFKTEEYC75pfFYGGcrGkrNnFktEEy76tffyggcrgkrnnfktkey76號肽包括SEQIDNO.:76中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是酰胺化的(參見例如圖9)77TFFYGGKRGKRNNFKTEEY78TFFYGGCRGKRNNFKTKRY79TFFYGGKRGKRNNFKTAEY80TFFYGGKRGKRNNFKTAGY81TFFYGGKRGKRNNFKReKY81TFFYGGCGGNGNNFIjTAKY82TFFYGGCRGNRNNFLiTAEY83T.FFYGGCRGNGNNFKSAEY84pffyggcIjgnknnfktaey85TFFYGGCRGNRNNFKTEEY86TFFYGGCRGKRNNFKTEED87PFFYGGCGGNGNNFVREK88rfkyggc;lgnmnnfetlee89RFKYGGCIiGNKNNFLRIiKY91RFKYGGCLGNKNNYIiRIiKY91號肽包括SEQIDNO.:91中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是酰胺化的(參見例如圖9)92KTKRKRKKQRVKIAYEEIF93KTKRKRKKQRVKIAY94RGGRIiSYSRRFSTSTGR95rrIjsysrrrfRQIK工WFQNRRMKWKK97TFFYGGSRGKRNFKTEEYS8mrPdfcIjepPytGpcvariIRYFYNAKAGIjCQTFVYGGCRAKRNNFKSAEDCMRTCG99TFFYGGCRGKRNFKTKEY100RFKYGGCIjGNKNnY:lRIikY101TFFYGGCRAKRNNFKRAKY102NAKAG:lCQTFVYGGCIiAKrESAEDCMRTCGGA103YGGCRAKRNNFKSAEDCMRGA104GCQTFVYGGCRAKRNNFK105IjCQTFVYGGCEAKRNNFKSSEQIDNO.:106atgagaccagatttctgcctcgagccgccgtacactgggccctgcaaagctcgtatcatc5cgttacttctacaatgcaaaggcaggcctgtgtcagaccttcgtatacggcggctgcagagctaagcgtaacaacttcaaatccgcggaagactgcatgcgtacttgcggtggtgcttag權利要求1.能夠穿過體外測定中模仿哺乳動物血腦屏障的細胞層的生物活性多肽，所述多肽選自a)包括SEQIDNO.1中限定的氨基酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，b)由SEQIDNO.1構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，c)SEQIDNO.1的生物活性類似物，d)SEQIDNO.1的生物活性片段，和；e)SEQIDNO.1類似物的生物活性片段。2.能夠穿過體外測定中才莫仿哺乳動物血腦屏障的細胞層的生物活性多肽，所述多肽選自-19至50個M酸長的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1,-由SEQIDNO.:l構成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-9至50個氨基酸長的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要所述類似物不包4舌SEQIDN0.:102、103、104或105并且只要當所述類似物由SEQIDNO.:67構成時，所述類似物是酰胺化的，-10至18個氨基酸的SEQIDNO.:1的生物活性片^殳，和；-約10至18個氨基酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段。3.權利要求1或2的多肽，其中所述SEQIDNO.:l的生物活性類似物選自a)包括與SEQIDNO,:1的絲,列至少35°/。同一性的SEQIDNO.:1類似物，b)包括與SEQIDNO.:1的^J^,列至少40%同一性的SEQIDNO.:1類似物，c)包括與SEQIDNO.:1的絲^f列至少50%同一性的SEQIDNO.:1類似物，d)包括與SEQIDNO.:1的絲,列至少60%同一性的SEQIDNO.:1類似物，e)包括至少70%SEQIDNO.:1的M餅列同一性的SEQIDNO.:1類似物，f)包括至少80%SEQIDNO.:1的狄絲列同一性的SEQIDNO.:1類似物，g)包括至少90%SEQIDNO.:1的M酸序列同一性的SEQIDNO.:1類似物，h)包括至少95%SEQIDNO.:1的絲餅列同一性的SEQIDNO.:1類似物。4.權利要求1的多肽，其中所述的SEQIDNO.:1的生物活性類似物包4舌選自SEQIDNO.:2至SEQIDNO.:62、SEQIDNO.:68至SEQIDNO.:93和SEQIDNO.:97中限定的^i^酸序列的^J^酸序列。5.權利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性類似物包括SEQIDNO.:67中限定的M酸序列。6.權利要求5的多肽，其中所述多肽是酰胺化的。7.權利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性類似物包括SEQIDNO.:99、100或101中限定的^J^酸序列。8.權利要求1至4或7任一項的多肽，其中所述M,列是酰胺化的。9.權利要求1的多肽，其中所述牛胰蛋白酶抑制劑片段是10至50個氨基酸長。10.斥又利要求10的多肽，其中所述牛胰蛋白酶抑制劑片段是10至50個氨基酸長。11.權利要求4至7任一項的多肽，其中所述#^*列包括1至12個氨基酸置換。12.權利要求4至7任一項的多肽，其中所述M^列包括1至10個氨基酸置換。13.權利要求4至7任一項的多肽，其中所述^*列包括1至5個氨基酸置換。14.權利要求ll的多肽，其中所述M酸置換是非保守性的。15.權利要求ll的多肽，其中所述絲酸置^:保守性的絲酸置換。16.權利要求3的多肽，其中所述類似物與SEQIDNO.:1相應位置氨基酸不同的至少一個M^^呆守性氨基酸置換。17.權利要求1的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性片段是10至18個氨基酸長。18.權利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段是1G至18個氨基酸長。19.權利要求17的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性片段包括SEQIDNO.:1的至少10個氨基酸。20.權利要求17的多肽，其中所述SEQIDNO.:l類似物的生物活性片段包括所述SEQIDNO.:1類似物的至少10個氨基酸。21.—種綴合物，包括a)選自權利要求l至20任一項多肽的載體；和b)選自藥物、可檢測標記、蛋白質、基于蛋白質的化合物和多肽的物質。22.—種綴合物，包括a)選自權利要求1至20任一項多肽的載體，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是酰胺化的，和；b)選自藥物、可檢測標記、蛋白質、基于蛋白質的化合物和多肽的物質。23.權利要求21或22的綴合物，其中所述可檢測標記是放射性成像劑。24.權利要求21或22的綴合物，其中所述基于蛋白質的化合物是抗體或其抗體片段。25.權利要求21或22的綴合物，其中所述物質是小分子藥物。26.權利要求25的綴合物，其中所述小分子藥物是抗癌藥物。27.權利要求26的綴合物，其中所述抗癌藥物選自紫杉醇、長^^堿、長春新堿、依托泊苷、阿霉素、環磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥及其組合。28.選自權利要求1至20任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項綴合物的用途，用于轉運物質穿過需要該物質的哺乳動物的血腦屏障。29.選自權利要求1至20任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項綴合物的用途，用于轉運物質穿過需要該物質的哺乳動物的血腦屏障，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是酰胺化的。30.權利要求28或29的用途，其中所述物質是可檢測標記。31.權利要求28或29的用途，其中所述可檢測標記是放射性成像劑。32.權利要求28或29的用途，其中所述物質M于蛋白質的化合物。33.權利要求32的用途，其中所述基于蛋白質的化合物是抗體或其抗體片段。34.權利要求28或29的用途，其中所述物質是小分子藥物。35.權利要求34的用途，其中所述小分子藥物是抗癌藥物。36.權利要求35的用途，其中所述抗癌藥物選自紫杉醇、長春花堿、長春新堿、依托泊苷、阿霉素、環磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥及其組合。37.選自權利要求1至20任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項的綴合物在制造用于治療腦或神經系統疾病或用于診斷腦或神經系統疾病藥物中的用途。38.選自權利要求1至20任一項多肽的栽體或權利要求21至27任一項的綴合物在制造用于治療腦或神經系統疾病或用于診斷腦或神經系統疾病藥物中的用途，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是酰胺化的。39.權利要求37或38的用途，其中所述神經系統疾病選自腦瘤、腦轉移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風和血腦屏障相關的機能失常。40.權利要求39的用途，其中所#腦屏障相關的機能失常疾病^巴胖。41.治療患有神經系統疾病患者的方法，包括施用選自權利要求1至20任一項多肽的栽體或權利要求21至27任一項的綴合物。42.治療患有神經系統疾病患者的方法，包括施用選自權利要求1至任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項的綴合物，只要當所述載體由SEQIDN0:67構成時，所述載體是,化的。43.診斷有此需要的患者中神經系統疾病的方法，包括施用選自權利要求1至20任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項的綴合物。44.診斷有此需要的患者中神經系統疾病的方法，包括施用選自權利要求1至20任一項多肽的的載體或權利要求21至27任一項的綴合物，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是,化的。45.選自權利要求1至20任一項多肽的載體或權利要求21至27任一項的綴合物用于治療患有神經系統疾病的哺乳動物或用于診斷有此需要的哺乳動物中神經系統疾病的用途。46.選自權利要求1至20任一項多肽的栽體或權利要求21至27任一項的綴合物用于治療患有神經系統疾病的哺乳動物或用于診斷有此需要的哺乳動物中神經系統疾病的用途，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是酰胺化的。47.權利要求45或46的用途，其中所述神經系統疾病選自腦瘤、腦轉移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風和血腦屏正相關的機能失常。48.權利要求47的用途，其中所iiA腦屏障相關的機能失常疾病;O巴胖。49.一種藥物組合物，包括^a)選自權利要求1至20任一項多肽的栽體或權利要求21至27任一項的綴合物，和；b)藥物學上可接受的載體。50.—種藥物組合物，包括a)選自權利要求1至20任一項多肽的栽體或權利要求21至27任一項的綴合物，只要當所述載體由SEQIDNO:67構成時，所述載體是酰胺化的，和；b)藥物學上可接受的載體。51.權利要求49或50的藥物組合物，其中所述藥物組合物用于治療神經系統疾病。52.權利要求49或50的藥物組合物，其中所述藥物組合物用于診斷神經系統疾病。53.編碼權利要求1至4或7任一項多肽的核苷酸序列。54.權利要求43的核苷*列，其中所W列由選自核糖核苷酸、脫氧核糖核苦酸及其核苷酸類似物的核苷酸構成。專利摘要本發明涉及藥物遞送領域中的改進。更具體地，本發明涉及源自牛胰蛋白酶抑制劑和牛胰蛋白酶抑制劑類似物的多肽以及綴合物和含有這些多肽或綴合物的藥物組合物。本發明還涉及這些多肽在轉運化合物或藥物穿過哺乳動物血腦屏障中和在神經系統疾病的治療和診斷中的用途。文檔編號C12N15/15GKCN101160403SQ200580049237公開日2008年4月9日申請日期2005年7月21日發明者A·雷吉納,C·謝,M·德穆勒,R·貝利沃申請人:安吉奧開米公司導出引文BiBTeX,EndNote,RefMan