本發明涉及生醫藥物,更具體地,涉及一株可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體及其應用。
背景技術:
1、結核病(tuberculosis,tb),是一種由結核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis,mtb)感染引起的傳染性疾病,可累及機體多個器官臟器,引起全身性疾病。
2、目前治療結核病的一線抗菌藥物主要有4類:異煙肼(isoniazid,inh)、利福平(rifampicin,rfp)、吡嗪酰胺(pyrazinamide,pza)和乙胺丁醇(ethambutol,emb)。他們的廣泛和規范使用一度較好控制了tb全球流行。然而,隨著結核分枝桿菌不斷突變,耐藥菌株尤其是多重耐藥株(mdr-tb)和廣泛耐藥株(xdr-tb)相繼出現,嚴重威脅了全球結核病防治工作,結核病防控形勢異常嚴峻。mdr-tb是指至少對兩種一線抗結核藥物——inh和rfp具有耐藥性的結核分枝桿菌菌株;xdr-tb是指也對6種二線藥物中至少3種具有耐藥性的耐多藥結核分枝桿菌菌株。如何克服結核桿菌耐藥性,增加其對于臨床藥物敏感性成為迫在眉睫的工作。
3、降低耐藥性一方面可通過優化藥物組合,提高治療成功率并防止抗生素耐藥性的進一步傳播;公開號為cn103357016a的中國發明專利公開了一種治療耐藥性結核病的藥物組合物,其通過一種治療耐藥性結核用的納米殼聚糖青蒿素與抗結核藥物的組合物,包括以下有效成分:抗結核藥物,納米殼聚糖青蒿素及三種納米殼聚糖青蒿素衍生物或青蒿素及其衍生物,能抑制和殺滅耐藥性結核病菌,對于治療耐藥性結核病具有極其突出的療效,但針對性較弱;另一方面可通過尋找介導結核桿菌耐藥的關鍵突變基因,并以此為靶點設計出新型分子藥物,以提高細菌對已有抗結核藥物的敏感性,研發藥物的針對性較好,但結核桿菌耐藥的關鍵突變基因及其突變眾多,設計何種藥物并增加結核藥物的敏感性亟待解決。
技術實現思路
1、本發明的目的是解決上述技術問題,提供一株可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體,該抗體可以增加結核藥物的敏感性,本發明的另一目的是提供該抗rv0340單克隆抗體的應用。
2、為實現上述目的,本發明采用了如下技術方案:
3、一株可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5,所述抗rv0340單克隆抗體4d5的重鏈可變區的cdr-h1為seq?id?no.1所示的氨基酸序列,所述重鏈可變區的cdr-h2為seq?id?no.2所示的氨基酸序列,所述重鏈可變區的cdr-h3為seq?id?no.3所示的氨基酸序列;所述抗rv0340單克隆抗體4d5的輕鏈可變區的cdr-l1為seq?idno.4所示的氨基酸序列,所述輕鏈可變區的cdr-l2為seq?id?no.5所示的氨基酸序列,所述輕鏈可變區的cdr-l3為seq?id?no.6所示的氨基酸序列。
4、進一步地,所述重鏈可變區為seq?id?no.7所示的氨基酸序列。
5、進一步地,所述輕鏈可變區為seq?id?no.8所示的氨基酸序列。
6、進一步地,所述抗rv0340單克隆抗體4d5為igg1亞型,所述輕鏈均為κ鏈。
7、本發明還提供了上述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5的制備方法:用rv0340蛋白免疫動物,從動物體內分離單個b淋巴細胞進行骨髓瘤細胞融合、篩選得到抗rv0340單克隆抗體4d5;所述rv0340蛋白為結核分枝桿菌分泌蛋白,所述rv0340蛋白氨基酸序列為seq?id?no.9所示的序列。
8、本發明針對rv0340蛋白篩選制備多個單克隆抗體,在研究其對結核分枝桿菌抗藥性的研究中意外發現一株抗rv0340單克隆抗體4d5,該抗rv0340單克隆抗體4d5可以顯著增加mtb對于異煙肼inh的敏感性;且當抗rv0340單克隆抗體4d5與inh聯合用藥時,可顯著提高mtb對特定藥物inh的敏感性,而對于其他藥物無此效果,具有改善結核分枝桿菌耐藥性的單抗藥物應用前景。
9、由于該抗rv0340單克隆抗體4d5可以顯著增加mtb對于異煙肼inh的敏感性,本發明請求保護編碼上述的可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5的核酸,所述核酸的序列如seq?id?no.10所示。
10、在此基礎上,本發明提供了一種表達載體,包含上述核酸,并能在原核或真核宿主細胞中表達所述核酸。
11、本發明提供了一種宿主細胞,該宿主細胞包含并可表達上述載體,并產生上述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5。
12、本發明提供了一種可改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物,包括上述抗rv0340單克隆抗體4d5,以及醫學上可接受的載體或輔料。
13、本發明提供了一種可改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物,包括上述抗rv0340單克隆抗體4d5與異煙肼的組合物,以及醫學上可接受的載體或輔料。
14、優選地,所述載體可以為聚合物載體、糖基化配體;所述輔料可以為白蛋白、蛋白質a(金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白)。
15、本發明提供了上述的抗rv0340單克隆抗體4d5、核酸、載體或宿主細胞在制備預防和治療結核病或改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物中的應用。
16、優選地,所述制備預防和治療結核病或改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物,包括抗rv0340單克隆抗體4d5及其他免疫調節藥物或傳統抗結核藥物。
17、本抗rv0340單克隆抗體4d5可通過被動免疫和主動免疫預防結核病、通過直接參與目標治療與免疫調節治療結核病、與傳統抗結核藥物進行聯合治療或者通過不同機制作用于結核分枝桿菌,從而繞過其耐藥性機制,提高藥物的有效性,因此,可以用于制備此類藥物。
18、本發明的有益效果如下:
19、(1)本發明針對rv0340蛋白篩選制備多個單克隆抗體,在研究其對結核分枝桿菌抗藥性的研究中意外發現一株抗rv0340單克隆抗體4d5,該抗rv0340單克隆抗體4d5可以顯著增加mtb對于異煙肼inh的敏感性;且當抗rv0340單克隆抗體4d5與inh聯合用藥時,可顯著提高mtb對特定藥物inh的敏感性。
20、(2)本發明為特異性提高mtb對inh敏感性提供了新的單抗藥物,具有改善結核分枝桿菌耐藥性的單抗藥物應用前景。
1.一株可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5,其特征在于,所述抗rv0340單克隆抗體4d5的重鏈可變區的cdr-h1為seq?id?no.1所示的氨基酸序列,所述重鏈可變區的cdr-h2為seq?id?no.2所示的氨基酸序列,所述重鏈可變區的cdr-h3為seq?idno.3所示的氨基酸序列;所述抗rv0340單克隆抗體4d5的輕鏈可變區的cdr-l1為seq?idno.4所示的氨基酸序列,所述輕鏈可變區的cdr-l2為seq?id?no.5所示的氨基酸序列,所述輕鏈可變區的cdr-l3為seq?id?no.6所示的氨基酸序列。
2.根據權利要求1所述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5,其特征在于,所述重鏈可變區為seq?id?no.7所示的氨基酸序列。
3.根據權利要求1所述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5,其特征在于,所述輕鏈可變區為seq?id?no.8所示的氨基酸序列。
4.根據權利要求1所述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5,其特征在于,所述抗rv0340單克隆抗體4d5為igg1亞型,所述輕鏈均為κ鏈。
5.權利要求1-5任意一項所述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5的制備方法,其特征在于,用rv0340蛋白免疫動物,從動物體內分離單個b淋巴細胞進行骨髓瘤細胞融合、篩選得到抗rv0340單克隆抗體4d5;所述rv0340蛋白為結核分枝桿菌分泌蛋白,所述rv0340蛋白氨基酸序列為seq?id?no.9所示的序列。
6.一種編碼權利要求1所述的可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5的核酸。
7.一種表達載體,其特征在于,包含權利要求6所述核酸,并能在原核或真核宿主細胞中表達所述核酸。
8.一種宿主細胞,其特征在于,包含并可表達權利要求7所述載體,并產生權利要求1-5任意所述可改善結核分枝桿菌耐藥性的抗rv0340單克隆抗體4d5。
9.一種可改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物,其特征在于,包括權利要求1-5任意一項所述抗rv0340單克隆抗體4d5;或權利要求1-5任意一項所述抗rv0340單克隆抗體4d5與異煙肼的組合物;以及醫學上可接受的載體或輔料。
10.權利要求1-5任意一項所述的抗rv0340單克隆抗體4d5、權利要求6所述核酸、權利要求7所述載體或權利要求8所述宿主細胞在制備預防和/或治療結核病或改善結核分枝桿菌耐藥性的藥物中的應用。