本發明涉及生物,具體而言,涉及一種類人膠原蛋白的制備工藝及產品、應用。
背景技術:
1、膠原蛋白是人體內含量最多的蛋白質,主要存在于人體的皮膚、骨骼、軟骨、牙齒、肌腱、韌帶和血管中,是結締組織中極其重要的結構蛋白質,起著支撐器官,保護肌體的功能。根據功能及其構成組織的結構特點可分為:成纖維膠原、成網狀結構膠原、位于纖維表面的纖維相關膠原、成串珠絲膠原、成基底膜固定纖維膠原、具有跨膜結構膠原等。
2、類人膠原蛋白(human-l?i?ke?co?l?l?agen)是通過生物工程技術將人體膠原蛋白的mrna逆轉錄成cdna,經酶切后的一段基因重組于e.co?l?i(大腸桿菌)內,經過高密度發酵、分離、復性、純化工藝生產的一種高分子生物蛋白。
3、現有技術cn?115252881a公開了一種類人膠原蛋白組合物及其制備方法,其中,該類人膠原蛋白組合物,包括以下原料:5-15重量份的類人膠原蛋白;10-20重量份的可交聯粉末;1-2重量份的交聯劑;20-25重量份的魚膠提取物以及50-80重量份的殼聚糖。最終得到的類人膠原蛋白組合物具有良好的結構穩定性、吸水性、舒適性、人體相容性和止血效果。
4、現有技術cn114085394b公開了公開了一種重組膠原蛋白雙相凝膠及其制備方法和應用,涉及生物醫用材料技術領域;通過同步乳化交聯方式,在乳化過程中,同時將交聯劑滴入正在乳化的體系中,部分乳滴將交聯劑直接包裹入膠原蛋白乳液顆粒的內部,乳液顆粒內部交聯度高,部分未包裹交聯劑或包裹少量交聯劑的乳滴內部交聯度小,從而形成多交聯度分布的乳液顆粒,通過一次乳化交聯反應,同時制備不同交聯度的膠原蛋白微球,使得重組膠原蛋白雙相凝膠中膠原蛋白微球的交聯度分布不同,可以實現梯度降解。
5、現有技術cn117327170b公開了一種類人膠原蛋白制備方法及其在化妝品中的應用,其能有效促進成纖維細胞增殖活性,具備潤滑角質層,修護磚墻結構,促進上皮細胞及成纖維細胞增長。能夠很好的促進成纖維細胞生成e?l?ast?i?n,增加皮膚緊密度,令皮膚緊致,賦予彈性嫩滑。本發明的類人膠原蛋白具有保護肌膚涵水屏障,改善肌膚微環境,滋潤清透不粘膩。呵護肌膚屏障,抗微生物及酶,調節細胞生長微環境,抵御外界刺激。
6、現有技術cn116286914b公開了一種跨膜蛋白復合體基因及其在生物發酵制備重組類人膠原蛋白中的應用,所述跨膜蛋白復合體基因包含三段基因,第一段基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示,第二段基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示,第三段基因選自能夠表達分子量在6-12kda類人膠原蛋白的人膠原蛋白基因片段。采用大腸桿菌跨膜蛋白復合體將第3段目的基因類人膠原蛋白分泌表達到發酵液或大腸桿菌周質空間,離心和提取周質蛋白,再經純化,所得發酵液或大腸桿。
7、上述現有技術要么重點放在交聯的組分和比例的選擇,要么重點放在基因克隆上,但是均不能很好的實現其大規模生產。
8、基于現有技術的缺陷,本發明將開發一種類人膠原蛋白的制備工藝及產品。
技術實現思路
1、本發明首先提供了一種類人膠原蛋白,其氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
2、在某些實施例中,所述氨基酸序列是將seq?id?no.1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的類人膠原蛋白。
3、本發明還提供了與上述蛋白相關的生物材料,為下述b1)至b8)中的任一種:
4、b1)編碼上述類人膠原蛋白的核酸分子;
5、b2)含有b1)所述核酸分子的表達盒;
6、b3)含有b1)所述核酸分子的重組載體,
7、b4)含有b2)所述表達盒的重組載體;
8、b5)含有b1)所述核酸分子的重組微生物;
9、b6)含有b2)所述表達盒的重組微生物;
10、b7)含有b3)所述重組載體的重組微生物;
11、b8)含有b4)所述重組載體的重組微生物;
12、任選地,所述載體包括酵母表達載體;
13、任選地,所述重組微生物為酵母細胞。
14、在某些實施中,所述核酸分子序列如seq?id?no.2所示。
15、本發明還提供了上述的類人膠原蛋白在制備皮膚修復、傷口愈合和減少疤痕的藥物中的應用。
16、本發明還提供了上述的生物材料在制備類人膠原蛋白中的應用。
17、本發明還提供了一種類人膠原蛋白制備工藝,其包含以下步驟:利用上述的生物材料,得到類人膠原蛋白。
18、在某些實施中,所述類人膠原蛋白的序列如seq?id?no.1所示。
19、在某些實施中,所述生物材料含有如seq?id?no.2所述的核酸分子。
20、本發明最后提供了一種含類人膠原蛋白的產品,所述產品包括上述的蛋白或上述的生物材料,以及交聯劑;任選地,所述交聯劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚、戊二醛、nhs、京尼平中的至少一種。
21、本發明與現有技術相比,至少具有如下有益效果:
22、(1)本發明獲得了新的類人膠原蛋白的序列,其與已知的序列不同,拓展了新的參考序列來源;
23、(2)本發明獲得了新的類人膠原蛋白能夠顯著的促進人皮膚成纖維細胞增殖,具有優秀的皮膚修復能力,為大規模生產和應用打下了堅實的基礎。
1.一種類人膠原蛋白,其特征在于,其氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
2.一種類人膠原蛋白,其特征在于,其氨基酸序列是將seq?id?no.1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的類人膠原蛋白。
3.一種與權利要求1或2所述類人膠原蛋白相關的生物材料,為下述b1)至b8)中的任一種:
4.根據權利要求3所述的生物材料,其特征在于:所述核酸分子序列如seq?id?no.2所示。
5.權利要求1所述的類人膠原蛋白在制備皮膚修復、傷口愈合和減少疤痕的藥物中的應用。
6.權利要求3所述的生物材料在制備類人膠原蛋白中的應用。
7.一種類人膠原蛋白制備工藝,其特征在于,其包含以下步驟:利用權利要求3所述的生物材料,得到類人膠原蛋白。
8.根據權利要求7所述的制備工藝,其特征在于:所述類人膠原蛋白的序列如seq?idno.1所示。
9.根據權利要求7所述的制備工藝,其特征在于:所述生物材料含有如seq?id?no.2所述的核酸分子。
10.一種含類人膠原蛋白的產品,其特征在于,所述產品包括權利要求1-2任意一項所述的蛋白或權利要求3所述的生物材料,以及交聯劑;所述交聯劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚、戊二醛、nhs、京尼平中的至少一種。