一種預防或/和治療肺纖維化和急性肺損傷的縮醛磷脂及其制備方法

本發明涉及一種預防或/和治療肺纖維化和急性肺損傷的縮醛磷脂及其制備方法，屬于生物醫藥制備領域。

背景技術：

1、特發性肺纖維化(idiopathic?pulmonary?fibrosis，ipf)是一種進行性且通常致命的肺部疾病，缺乏有效干預措施。目前ipf發病機制尚未完全明確，其特征是成纖維細胞、肌成纖維細胞增生，細胞外基質(extracellular?matrix，ecm)沉積，肺結構破壞的過程。近年來，越來越多的藥物如皮質類固醇、阿片類、抗酸劑等被用于治療ipf，但并不能有效控制其病死率。目前已有兩種抗肺纖維化藥(吡非尼酮和尼達尼布)被批準可用于ipf患者的治療，但這兩種藥物僅能部分延緩患者肺功能下降速度，疾病死亡率仍居高不下，且這兩種藥物有一定的副作用。吡非尼酮會引起胃腸道不良反應、肝功能損害、疲乏、皮疹等不良反應，尼達尼布則能使患者出現腹瀉、腹痛、惡心嘔吐、體重下降等不良反應。肺移植是目前最有效的治療方案，但鑒于價格昂貴、供體器官缺乏，存在局限性。因此開發新的能夠有效預防和治療特發性肺纖維化的藥物具有重要的意義。

2、急性肺損傷(acute?lung?injury，ali)是一種常見且可能危及生命的疾病，常導致急性呼吸衰竭，其典型特征是嚴重的肺水腫和肺部炎癥失控，易發展為急性呼吸窘迫綜合征，有很高的發病率和死亡率，目前暫無有效的預防和治療方法。炎癥反應和氧化應激是導致ali致病和發展的主要誘因，可以通過抑制炎癥反應和氧化應激以阻礙ali的發生和發展。目前地塞米松(dexamethasone，dex)、潑尼松龍、潑尼松和烏司他丁等藥物被廣泛用于ali的臨床治療。然而，這些藥物可能誘發多種不良副反應，如凝血功能障礙、胃潰瘍和骨質疏松癥等，這使得它們使用受限。近年來，許多研究者發現天然產物能通過多靶點、多途徑來防治ali，提出了多種具有抗炎活性和肺保護作用的天然產物，如類黃酮、生物堿和萜類化合物，它們具有療效高和不良反應少的天然優勢。綜上所述，現階段尋找和開發新型且安全有效的天然活性成分來干預急性肺損傷的發病進程是非常迫切和必要的。

技術實現思路

1、技術問題

2、現有抗肺纖維化和急性肺損傷藥物的高昂治療費用及不良反應，極大限制了其在臨床中的使用，因此，需要開發一種新型且安全有效的天然活性成分來干預急性肺損傷的發病進程。

3、技術內容

4、為實現上述目的，本發明提供以下技術方案：

5、本發明提供的縮醛磷脂在制備預防或/和治療肺纖維化和急性肺損傷的藥物中的應用。

6、進一步的，所述縮醛磷脂的制備方法，包括以下步驟：

7、(a)取海鞘肉，之后將海鞘肉和水混合打成勻漿，離心，得到沉淀；

8、(b)將步驟(a)制得的沉淀和氯仿、水、和甲醇混合，振蕩混勻，離心，保留上清液；

9、(c)將步驟(b)制得的上清液和水、氯仿，振蕩混勻，靜置，離心，取下層溶液，真空干燥，得到粗提物；

10、(d)將步驟(c)制得的粗提物洗滌，得到總脂；

11、(e)將步驟(d)制得的總脂用氯仿溶解，并采用柱層析法脫除中性酯，氯仿和甲醇作為洗脫液洗脫總脂，收集洗脫液；洗脫液進行硅膠板層析，顯色確認后旋蒸，得到海鞘磷脂粗提物；

12、(f)將步驟(e)制得的海鞘磷脂粗提物用正己烷溶解，加入磷脂酶a1和檸檬酸鈉緩沖液孵育后，用正己烷和異丙醇萃取經磷脂酶a1處理的海鞘磷脂粗提物，收集己烷層，并洗滌，旋蒸得到縮醛磷脂。

13、進一步的，步驟(a)中海鞘肉和水的質量比為1:0.5～3。

14、進一步的，步驟(a)中所述離心為在8000～10000rpm下離心0.5～1小時。

15、進一步的，步驟(b)中沉淀和水的質量體積比為1:3～5。

16、進一步的，步驟(b)中沉淀和氯仿的質量體積比為1:3～6。

17、進一步的，步驟(b)中沉淀和甲醇的質量體積比為1:8～12。

18、進一步的，步驟(b)中所述離心為在3000～5000rpm下離心0.2～0.6小時。

19、進一步的，步驟(c)中上清液和水體積比為2～8:1。

20、進一步的，步驟(c)中上清液和氯仿體積比為2～6:1。

21、進一步的，步驟(c)中所述離心為8000～10000rpm下離心0.2～0.6小時。

22、進一步的，步驟(e)中氯仿和甲醇的體積比為8～10:1。

23、進一步的，步驟(f)中海鞘磷脂粗提物的質量和正己烷的體積之比為50mg:8～15ml。

24、進一步的，步驟(f)中檸檬酸鈉緩沖液的ph為4～5。

25、進一步的，步驟(f)中海鞘磷脂粗提物的質量和檸檬酸鈉緩沖液的體積之比為50mg:8～15ml。

26、進一步的，步驟(f)中加入磷脂酶a1使得體系的酶活力為30～50lu/ml。

27、進一步的，步驟(f)中孵育時間為2～5小時。

28、進一步的，步驟(f)中正己烷和異丙醇的體積比為3～5:1。

29、進一步的，所述藥物劑型為液體試劑、粉劑、粒劑中的一種或多種。

30、進一步的，所述藥物中還含有藥用輔料。

31、進一步的，所述藥用輔料包括：增溶劑、乳化劑、著色劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、潤濕劑、滲透壓調節劑、穩定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、ph值調節劑、緩沖劑、增塑劑、消泡劑、增稠劑、保濕劑、助濾劑以及釋放阻滯劑中任意一種或多種。

32、有益效果

33、1、本發明提供了一種提取縮醛磷脂的方法，具體是通過化學萃取法從海鞘肉中提取出總脂，并通過硅膠柱層析和酶解法對總脂進行純化，最終制得了一種縮醛磷脂占總磷脂更高比例的縮醛磷脂，比現有技術中的常規提取效果要更好，并且所取得的縮醛磷脂也能夠起到更好的防治效果。

34、2、本發明通過博來霉素在小鼠體內誘導肺纖維化模型上使用縮醛磷脂，發現了縮醛磷脂對于預防和治療肺纖維化中的用途。通過小鼠組織病理學研究以及肺泡灌洗液中羥脯氨酸、炎癥因子指標檢測，發現是縮醛磷脂可以有效改善博來霉素誘導的肺纖維化，為預防和治療肺纖維化的臨床用藥提供了實驗數據支持，同時也擴大了縮醛磷脂的使用范圍。

35、3、本發明通過lps誘導的ali細胞模型，發現縮醛磷脂在細胞水平上能夠有效抑制氧化應激和炎癥反應，并提高受損傷肺細胞的存活率。通過lps誘導的ali動物模型，發現縮醛磷脂能改善lps所致的肺組織病變，有效抑制氧化應激和炎癥反應。表明縮醛磷脂可應用于急性肺損傷的預防，拓寬了其在肺部疾病上的應用范圍，為制備預防的急性肺損傷的藥物提供了新的方向。

技術特征：

1.縮醛磷脂在制備預防或/和治療肺纖維化和急性肺損傷的藥物中的應用，其特征在于，所述縮醛磷脂的制備方法，包括以下步驟：

2.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(a)中，海鞘肉和水的質量比為1:0.5～3。

3.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(b)中，沉淀和水的質量體積比為1:3～5；沉淀和氯仿的質量體積比為1:3～6；沉淀和甲醇的質量體積比為1:8～12。

4.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(c)中，上清液和水體積比為2～8:1；上清液和氯仿體積比為2～6:1。

5.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(f)中，海鞘磷脂粗提物的質量和正己烷的體積之比為50mg:8～15ml。

6.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(f)中，檸檬酸鈉緩沖液的ph為4～5；海鞘磷脂粗提物的質量和檸檬酸鈉緩沖液的體積之比為50mg:8～15ml。

7.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，步驟(f)中，加入磷脂酶a1使得體系的酶活力為30～50lu/ml；孵育時間為2～5小時。

8.根據權利要求1中所述的應用，其特征在于，所述藥物劑型為液體試劑、粉劑、粒劑中的一種或多種。

9.根據權利要求1～8任一項所述的應用，其特征在于，所述藥物中還含有藥用輔料。

10.根據權利要求9中所述的應用，其特征在于，所述藥用輔料包括：增溶劑、乳化劑、著色劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、潤濕劑、滲透壓調節劑、穩定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、ph值調節劑、緩沖劑、增塑劑、消泡劑、增稠劑、保濕劑、助濾劑以及釋放阻滯劑中任意一種或多種。

技術總結
本發明公開一種預防或/和治療肺纖維化和急性肺損傷的縮醛磷脂及其制備方法，屬于生物醫藥制備領域。所述縮醛磷脂的制備方法是通過化學萃取法將海鞘肉中的總脂提取出來，并通過硅膠柱層析和酶解法對總脂進行純化，得到縮醛磷脂。本發明中通過LPS誘導的ALI動物模型，發現縮醛磷脂能改善LPS所致的肺組織病變，有效抑制氧化應激和炎癥反應。表明縮醛磷脂可應用于急性肺損傷的預防，拓寬了其在肺部疾病上的應用范圍，為制備預防的急性肺損傷的藥物提供了新的方向。

技術研發人員：陸乃彥,王洵,向文,唐雪,楊國鋒
受保護的技術使用者：江南大學
技術研發日：
技術公布日：2024/9/9