一種熒光素類半胱氨酸熒光探針的制作方法

本發明涉及一種熒光素類半胱氨酸熒光探針以及其在檢測半胱氨酸中的應用。

背景技術：

半胱氨酸(cysteine)屬于20種天然氨基酸之一，是一種含硫的非必需氨基酸。動物體內可經由蛋氨酸和絲氨酸合成。具有緩解修復放射線對人體的損傷作用。半胱氨酸是不穩定的化合物，容易氧化還原，與胱氨酸相互轉換。可與有毒的芳香族化合物縮合成硫醚氨酸(mercapturicacid)而起解毒作用。半胱氨酸在食品加工中具有許多用途，它主要用于焙烤制品，作為面團改良劑的必需成分，它作為一種還原劑，它可以促進面筋的形成，減少混合所需的時間和所需藥用的能量，半胱氨酸通過改變蛋白質分子之間和蛋白質分子內部的二硫鍵，減弱了蛋白質的結構，這樣蛋白質就伸展開來。

目前，半胱氨酸含量測定的方法有氣相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜法、全自動的熒光偏振免疫測定、高效毛細管電泳法、有機小分子熒光探針檢測法等。在各種方法中有機小分子熒光探針檢測法由于其具有簡單、便捷、成本低、快速、靈敏及其潛在的細胞內成像等特性，已被證明是一種非常有效的檢測方法，目前許多的有機小分子熒光探針被開發出來。

熒光素具有較強的熒光強度、優良的溶解性、易于制備等特征，因此成為熒光探針使用非常廣泛的熒光基團之一。

技術實現要素：

本發明目的是提供一種熒光素類半胱氨酸熒光探針，它適于在食品、藥品、化妝品等產品中檢測半胱氨酸。

更具體的是，本發明涉及一種熒光素類半胱氨酸熒光探針，它通過下式表示：

附圖說明

圖1是在磷酸緩沖鹽溶液中，本發明的熒光探針(10μm)在半胱氨酸(30μm)加入前后的顏色變化。

圖2是在磷酸緩沖鹽溶液中，隨著不同濃度半胱氨酸的加入，本發明的熒光探針(10μm)的熒光強度變化。嵌入圖：半胱氨酸的濃度。

圖3是在磷酸緩沖鹽溶液中，本發明的熒光探針(10μm)熒光強度隨著半胱氨酸濃度變化的標準曲線。

具體實施方式

實施例1.熒光素類半胱氨酸熒光探針的制備

合成路線如下式所示：

將1g(3mmol)a熒光素與0.8g(3mmol)b2，4-二硝基苯磺酰氯加入到50ml三口燒瓶中，再將一滴三乙胺加入到其中，加入10ml三氯甲烷，加熱回流5h。后將溫度將至室溫，旋蒸濃縮，柱層析分離純化(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)，得白色晶體105mg。

產物經過核磁氫譜及核磁碳譜表征。

¹hnmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：10.25(s，1h)，8.91(d，j＝2.7hz，1h)，8.48(dd，j＝9.3，2.7hz，1h)，8.00(d，j＝7.2hz，1h)，7.72-7.85(m，2h)，7.42(d，j＝9.3hz，1h)，7.26-7.36(m，2h)，7.00(dd，j＝8.7，2.4hz，1h)，6.91(d，j＝8.7hz，1h)，6.70(d，j＝0.9hz，1h)，6.61(s，2h).

¹³cnmr(300mhz，dmso)：δ(ppm)：169.1，160.2，156.1，154.2，152.8，152.4，151.9，142.8，140.5，136.4，136.4，130.9，130.3，129.7，126.3，125.4，124.6，122.5，121.5，117.0，116.2，113.7，109.6，108.5，102.8，82.4.

如圖1所示，隨著半胱氨酸的加入，本發明的熒光探針溶液的顏色由淺黃色變為黃綠色，該顏色變化可以在自然光下用人眼直接觀察到，表明本發明的熒光探針可用于半胱氨酸的定性檢測。本發明的熒光探針的熒光強度隨著半胱氨酸濃度的變化如圖2所示，依據該變化可作出該熒光探針(10μm)熒光強度隨著半胱氨酸濃度變化的標準曲線，標準曲線如圖3所示，通過該標準曲線的建立，本發明的熒光探針可用于半胱氨酸的定量檢測。