本發明屬于肝素鈉加工提純領域,具體地說,涉及一種肝素鈉提純的高效方法。
背景技術:
肝素鈉是肝素的鈉鹽形式產物,可廣泛用于防治各種心腦血管疾病,在臨床應用中廣受青睞。
肝素鈉廣泛存在于哺乳動物的腸粘膜、肺、肝中,特別是豬小腸粘膜中含量最高。目前我國生產的肝素鈉主要以豬小腸粘膜為原料進行提取,由于肝素鈉在動物體內多以肝素鈉-蛋白質復合物的形式存在,故使得粗品中會殘留一定量的蛋白質,影響了產品的品質。由于一些提純采用單一的吸附或酶解法進行精制很難得到效價高的肝素鈉,而酶解反應由于反應速度較慢,酶用量大,生產周期長,且純化時采用多次溶解再沉淀的方法,酒精用量大,并且產品收率低,大大影響了生產效率。
技術實現要素:
本發明所要解決的技術問題是提供一種肝素鈉提純的高效方法,該方法能解決單純的吸附與酶解難以徹底除雜的問題,大大縮短了酶解時間,提高了生產效率。本發明的解決上述技術問題所采用的技術方案是一種肝素鈉提純的高效方法,包括下述步驟:預處理,將粗品肝素鈉進行粉碎、過篩;溶解,按照粗品肝素鈉,水的重量比為2~17進行溶解;酶解,所制成的肝素鈉溶液中加入胰酶和酶激活劑,在ph8、70℃下酶解5小時;升溫至80℃,過濾取濾液;將所得的濾液經氧化、吸附、過濾、超濾濃縮、沉淀、脫水后制得肝素鈉;所述肝素鈉粗品經粉碎過篩后所得為直徑小于50目的粉末;所述加入胰酶的量為溶液質量的7%;所述酶激活劑為氯化鈣、醋酸鈣的一種或兩種,所用量為溶液質量的0.2%;所述氧化為在所得濾液中加入雙氧水,對濾液進行氧化處理,加入量為濾液質量的0.5%,對濾液進行氧化處理;所述吸附為向氧化后的濾液中加入占濾液質量分數1.5%的ca3(po4)2以除去濾液中的雜質;所述過濾為采用板框過濾,采用0.2微米的醋酸纖維素濾膜;所述超濾濃縮為選用截留分子量為2000的醋酸纖維素濾膜;所述沉淀為將超濾濃縮后的溶液中用鹽酸調節ph至5.5,邊攪動邊加入乙醇,使乙醇度數在55度,靜置15小時沉淀;所述脫水用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
本發明的一種肝素鈉提純的高效方法,得到的產品效價高,收率高,且酶解速率大大提高,縮短生產周期,降低生產成本,利于工業化生產。
具體實施方式
本發明的具體步驟為實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:預處理,將粗品肝素鈉進行粉碎、過篩;溶解,按照粗品肝素鈉,水的重量比為2~17進行溶解;酶解,所制成的肝素鈉溶液中加入胰酶和酶激活劑,在ph8、70℃下酶解5小時;升溫至80℃,過濾取濾液;將所得的濾液經氧化、吸附、過濾、超濾濃縮、沉淀、脫水后制得肝素鈉;所述肝素鈉粗品經粉碎過篩后所得為直徑小于50目的粉末;所述加入胰酶的量為溶液質量的7%;所述酶激活劑為氯化鈣、醋酸鈣的一種或兩種,所用量為溶液質量的0.2%;所述氧化為在所得濾液中加入雙氧水,對濾液進行氧化處理,加入量為濾液質量的0.5%,對濾液進行氧化處理;所述吸附為向氧化后的濾液中加入占濾液質量分數1.5%的ca3(po4)2以除去濾液中的雜質;所述過濾為采用板框過濾,采用0.2微米的醋酸纖維素濾膜;所述超濾濃縮為選用截留分子量為2000的醋酸纖維素濾膜;所述沉淀為將超濾濃縮后的溶液中用鹽酸調節ph至5.5,邊攪動邊加入乙醇,使乙醇度數在55度,靜置15小時沉淀;所述脫水用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。實例證明本發明的一種肝素鈉提純的高效方法,得到的產品效價高,提純程度較好。
以上所述,僅是本發明的較佳實施例而已,并非是對本發明作其它形式的限制,任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容,依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型,仍屬于本發明技術方案的保護范圍。