一種提高硫酸軟骨素純度的方法
【專利摘要】本發明屬于生物制藥【技術領域】，具體涉及一種提高硫酸軟骨素純度的方法。該方法包括下述步驟：（1）將軟骨和沸水混合；（2）在堿性條件下用超聲波處理；（3）加入木瓜蛋白酶酶解反應；（4）加入胃蛋白酶水解；（5）過濾，取濾液，向濾液中加入乙醇溶液，沉降；（6）將沉降液離心，抽濾后將沉淀烘干，得到純度較高的硫酸軟骨素。該方法工藝簡單、無污染，所得的硫酸軟骨素純度高，達到88%以上，符合國家標準，是一種提高其純度的有效方法。
【專利說明】一種提高硫酸軟骨素純度的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物制藥領域，具體涉及一種提高硫酸軟骨素純度的方法。
【背景技術】
[0002]硫酸軟骨素(chondroitin sulfate，CS)又名牛磺軟骨素、康得寧，是哺乳動物結締組織的主要成分之一，多分布于軟骨、鼻骨、喉骨、韌帶、肌膜中。
[0003]CS在臨床上主要用于治療神經痛、關節炎、耳鳴以及促進潰瘍愈合和防治高血脂等，動物口服后未發現臨床毒性癥狀。CS也廣泛應用于食品、化妝品行業。近年來，硫酸軟骨素作為一種新型藥用活性成分，在醫藥制劑、醫學材料、日化產品、化妝品、生發劑、保健品等領域應用廣泛，越來越受到人們的重視，市場需求趨旺。
[0004]目前，硫酸軟骨素普遍提取的方法主要有鹽解、堿解、酶解法以及堿-酶法，其分離純化的方法有乙醇沉淀法、離子交換色譜法、季銨鹽配合法、吸附法和纖維素分離法等。但是上述方法在現有生產工藝中普遍存在一個問題:生產工藝繁瑣不易操作、堿酸乙醇使用量大、硫酸軟骨素純度不高、生產成本高昂，生產周期較長，產率低并且污染嚴重，不適合企業規模化生產需求。
[0005]實踐中，由于制備硫酸軟骨素的原料軟骨原料表面附著許多脂肪和肌肉組織，這些組織往往成為了硫酸軟骨素提取的主要雜質，又加上硫酸軟骨素本身比較粘稠，這就使得硫酸軟骨素的提取過濾非常困難，這也就直接導致規模化生產硫酸軟骨素過濾效率低，生產周期長。本發明人經多方研宄，通過超聲波輔助，探索得出一種由超聲波輔助提取的堿-酶法提取硫酸軟骨素。
【發明內容】
[0006]本發明提供一種提高硫酸軟骨素純度的方法，以期在縮短硫酸軟骨素生產周期，簡化生產工藝過程的同時提高硫酸軟骨素的純度，使得硫酸軟骨素的生產適合現代企業的規模化生產，為企業和社會創造更大的經濟效益。
[0007]為實現上述發明目的，本發明一種提高硫酸軟骨素純度的方法，該方法實施的具體步驟為:
(1)軟骨和純水以1:1-1:2的重量比例混合，將水煮沸10-15min，去除表面油殘留物自然風干后粉碎；
(2)將粉碎后的軟骨至于堿性條件下超聲處理2-2.5h ;
(3)按照一定的比例加入木瓜蛋白酶，于50-60°C，pH6.5-7.0條件下酶解反應Ih ;升溫到90°C滅酶；
(4)按照一定的比例加入胃蛋白酶，于30-50°C，pH6.5-7.0條件下酶解反應1.5_2h ；升溫到90°C滅酶；
(5)過濾，取濾液，向濾液中加入乙醇溶液，使得乙醇體積分數達到60-70%，沉降Ih；
(6)將步驟(5)中的沉降液離心，取沉淀，抽濾，用乙醇洗滌1-2次，置于恒溫干燥箱中干燥，得到硫酸軟骨素。
[0008]所述的步驟(I)中，堿性條件為6%的NaOH溶液。
[0009]所述的步驟(2)中，軟骨與純水的重量比例為:1:1.5。
[0010]所述的步驟(3)中，木瓜蛋白酶占軟骨的重量的0.5%，酶解反應的條件是:溫度55°C, pH6.8。
[0011]所述的步驟(4沖，胃蛋白酶占軟骨重的0.5%，于40°C，pH 6.8的條件下酶解反應1.5h0
[0012]所述的步驟(6)中，將沉降液離心的條件是:轉速為6000rpm，離心時間為10-15min ;干燥溫度為60°C。
[0013]本發明具有以下優點:
1.本方法制備的硫酸軟骨素純度高、質量好。
[0014]2.本方法工藝簡單，容易操作，適合企業規模化生產。
【具體實施方式】
[0015]實施例1
一種提高硫酸軟骨素純度的方法，本發明包括下述生產工藝:
(1)軟骨和純水以1:1的重量比例混合，將水煮沸12min，去除表面油殘留物自然風干后粉碎；
(2)將粉碎后的軟骨浸于6%的氫氧化鈉溶液中超聲處理2h;
(3)按照木瓜蛋白酶與軟骨的重量比為1:200的比例加入木瓜蛋白酶，于50°C，pH6.5條件下酶解反應Ih ;升溫到90°C滅酶15min ；
(4)按照胃蛋白酶與軟骨的重量比為1:200的比例加入胃蛋白酶于45°C，pH6.5條件下酶解反應1.5 ;升溫到90°C滅酶15min ；
(5)過濾，取濾液，向濾液中加入乙醇溶液，使得乙醇體積分數達到70%，沉降Ih;
(6)將步驟(5)中的沉降液在轉速6000rpm下離心lOmin，取沉淀，抽濾，用乙醇洗滌1-2次，置于恒溫干燥箱中于60°C干燥，得到硫酸軟骨素。
[0016]在該條件下，所得硫酸軟骨素產品的產率為19.8%,純度為88.7%,達到國家標準。
[0017]實施例2
一種提高硫酸軟骨素純度的方法，本發明包括下述生產工藝:
(1)軟骨和純水以1:1.5的重量比例混合，將水煮沸15min，去除表面油殘留物自然風干后粉碎；
(2)將粉碎后的軟骨浸于6%的氫氧化鈉溶液中超聲處理2h;
(3)按照木瓜蛋白酶與軟骨的重量比為1:200的比例加入木瓜蛋白酶，于55°C，pH6.8條件下酶解反應Ih ;升溫到90°C滅酶20min ；
(4)按照胃蛋白酶與軟骨的重量比為1:200的比例加入胃蛋白酶于40°C，pH6.8條件下酶解反應2h ;升溫到90°C滅酶20min ；
(5)過濾，取濾液，向濾液中加入乙醇溶液，使得乙醇體積分數達到70%，沉降Ih;
(6)將步驟(5)中的沉降液在轉速6000rpm下離心lOmin，取沉淀，抽濾，用乙醇洗滌1-2次，置于恒溫干燥箱中于60°C干燥，得到硫酸軟骨素。
[0018]在該條件下，所得硫酸軟骨素產品的產率為20.8%,純度為90.3%,達到國家標準。
【權利要求】
1.一種提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，該方法由下述六個步驟組成: (1)軟骨和純水以1:1-1:2的重量比例混合，將水煮沸10-15min，去除表面油殘留物自然風干后粉碎； (2)將粉碎后的軟骨置于堿性條件下超聲處理2-2.5h ; (3)按照一定的比例加入木瓜蛋白酶，于50-60°C，pH6.5-7.0條件下酶解反應Ih ;升溫到90°C滅酶； (4)按照一定的比例加入胃蛋白酶，于30-50°C，pH6.5-7.0條件下酶解反應1.5_2h ；升溫到90°C滅酶；(5)過濾，取濾液，向濾液中加入乙醇溶液，使得乙醇體積分數達到60-70%，沉降Ih； (6)將步驟(5)中的沉降液離心，取沉淀，抽濾，用乙醇洗滌1-2次，置于恒溫干燥箱中干燥，得到硫酸軟骨素。
2.如權利要求1所述的提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，所述的步驟(I)中，堿性條件為6%的NaOH溶液。
3.如權利要求1所述的提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，軟骨與純水的重量比例為1.5。
4.如權利要求1所述的提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中，木瓜蛋白酶占軟骨的重量的0.5%，酶解反應的條件是:溫度55°C，pH6.8。
5.如權利要求1所述的提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，所述的步驟(4)中，胃蛋白酶占軟骨重的0.5%，于40°C，pH 6.8的條件下酶解反應1.5h。
6.如權利要求1所述的提高硫酸軟骨素純度的方法，其特征在于，所述的步驟(6)中，將沉降液離心的條件是，在6000rpm的轉速下，離心1min ;干燥溫度為60°C。
【文檔編號】C08B37/08GK104448041SQ201410813502
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月24日 優先權日:2014年12月24日
【發明者】劉冠男, 郭利, 夏襯來 申請人:青島九龍生物醫藥有限公司