硫酸軟骨素的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種硫酸軟骨素的制備方法，軟骨加水浸沒，堿調pH8-9,55-60℃保溫4-6小時:加入2709堿性蛋白酶，攪拌6-8小時，升溫至沸騰，過濾得硫酸軟骨素溶液:向硫酸軟骨素溶液中加入氯化鈉，再加入溶液體積2-3倍的酒精，靜止6小時，過濾得硫酸軟骨素沉淀:將硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化鈉，調pH10-12，加入溶液重量1-3%雙氧水氧化6小時，過濾得濾液:調節硫酸軟骨素濾液pH5-6，加入濾液體積4-6倍的酒精二次沉淀，得硫酸軟骨素沉淀:將二次硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫。水罐中，將硫酸軟骨素沉淀體積3-5倍的酒精泵入脫水罐，抽濾，收集沉淀，干燥，得硫酸軟骨素成品。本發明獲得的硫酸軟骨素質地疏松、顆粒細小、容易脫水和烘干，能耗低，有機溶劑殘留極低，生產周期短。
【專利說明】硫酸軟骨素的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，具體涉及一種硫酸軟骨素的制備方法。
【背景技術】
[0002]硫酸軟骨素，英文名chondroitin sulfate，是以動物(豬、牛、馬、羊、雞、藍魚等)的軟骨為原料的一種高分子酸性粘多糖，其分子結構為自β -D —葡萄糖醛酸和N —乙酰氨基半乳糖通過自β? — 3糖苷鍵形成的重復二糖單位所組成的多糖鏈。它是一種白色或微黃色粉末，吸水性強，易溶于水而成粘稠液體，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有機溶劑，其鹽類，對熱較穩定。
[0003]目前，硫酸軟骨素通常采用堿-酶解提取法，主要包括以下步驟:
1)堿提酶解:原料軟骨加水浸沒，用氫氧化納調PHS.5，升溫至5 -60° C，保溫4-6小時，然后加入2%的堿性蛋白酶，保持ρΗ8.5，保溫55-60° C攪拌6_8小時，升溫至沸騰I5分鐘左右，過濾，得濾液；
2)酒精沉淀:濾液中加入3%重量的氯化鈉，降溫至室溫，按體積的2.5倍加入95%酒精，靜止8小時，取沉淀；
3)氧化:按沉淀:水的重量比為1:10的比例混合水，同時加入3%重量的氯化納，調ρΗΙΟ-12，加入2%重量雙氧水氧化8小時，過濾，取濾液；
4)酒精沉淀干燥:濾液調pH6，加入體積的2.5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用95%酒精脫水兩次，干燥粉碎得到硫酸軟骨素成品。
[0004]由于硫酸軟骨素溶液比較粘稠，在醇沉時傳統的做法是將酒精加入到硫酸軟骨素溶液中使硫酸軟骨素結晶析出沉淀下來，這樣產生的硫酸軟骨素沉淀結晶體容易結塊而且粘稠，結晶體中包含的有機溶劑在脫水干燥過程中由于顆粒形狀較大且堅硬致密，不容易揮發，致使產品的溶劑殘留偏高，多2%，影響產品質量，滿足不了客戶要求。其次由于沉淀結塊粘稠，使得脫水、烘干、粉碎等操作變得困難，浪費能耗。本 申請人:以前提交的一個發明專利申請，公開了一種反向沉淀生產硫酸軟骨素的方法，經沉淀得到的硫酸軟骨素質地酥松，
容易脫水、烘干，不需要粉碎，且產品的色澤好，質量穩定，硫酸軟骨素的含量在98%以上，有機溶劑殘留低于0.2%，但該方法沉淀時間長，影響了產品的生產效率。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是:提供一種硫酸軟骨素的制備方法，采用該制備方法不僅獲得的硫酸軟骨素沉淀質地疏松、顆粒細小、容易脫水和烘干，產品不需要粉碎，能耗低，產品中有機溶劑殘留極低，產品質量好，而且生產周期短、生產效率高。
[0006]本發明的技術解決方案是該制備方法包括下列步驟:
(I)堿提酶解:首先，軟骨原料加水浸沒，用堿調PH至8-9，升溫至55 -60° C，保溫4-6小時；然后，按軟骨原料重量1-3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH8-9，保溫55 -60° C攪拌6 -8小時，升溫至沸騰12 - 18分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液； (2)酒精沉淀:將步驟(I)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態下，向溶液中加入氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%，再加入溶液體積2-3倍的重量濃度為90%以上的酒精，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化:將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%、含硫酸軟骨素重量濃度為3-5 %，調pH至10 - 12，加入溶液重量的1-3%雙氧水或過錳酸鉀氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥:調節步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5-6，加入濾液體積4-6倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水:將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3 -5倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，加料完畢后繼續乳化0.5 - 1.5小時，靜止沉淀2 -3小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
[0007]其中，步驟(5)的乳濁液含酒精的重量濃度始終保持在85%、或85%以上。
[0008]本發明取得的效果是:1、本發明將經過氧化、酒精第二次沉淀得到的硫酸軟骨素沉淀物直接加入乳化機中，再緩慢向乳化機中加入酒精進行乳化，乳化結束后僅需靜止沉淀2-3小時，即可進行脫水烘干，乳化作用使粘稠的硫酸軟骨素沉淀在脫水過程中不容易結塊，質地疏松；2、生產周期短，效率高，得到的硫酸軟骨素質地酥松、顆粒細小，容易脫水、烘干，不需要粉碎，節約能源、生產成本低；3、產品的色澤好，質量穩定，硫酸軟骨素的含量在98%以上；4、產品的有機溶劑殘留極少，低于0.2%。
【具體實施方式】
[0009]下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術解決方案的限制。
[0010]實施例1:依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)堿提酶解:首先，軟骨原料10Kg加水浸沒，用堿調pH至8，升溫至55°C，保溫6小時；然后，加入lKg2709堿性蛋白酶，保持pH8，保溫55° C攪拌8小時，升溫至沸騰12分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液500L ;
(2)酒精沉淀:將步驟(I)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態下，向溶液中加入5Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1%，再加入溶液體積2倍的重量濃度為90%以上的酒精1000L，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化:將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入200L水中溶解，同時向水中加入2Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1%、含硫酸軟骨素重量濃度為3 %，調pH至10，加入溶液重量的1%雙氧水Kg氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥:調節步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5，加入濾液體積4倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水:將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，使乳濁液的酒精重量濃度達到85%，加料完畢后繼續乳化0.5小時，靜止沉淀2小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
[0011]實施例2:依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)堿提酶解:首先，軟骨原料100Kg加水浸沒，用堿調pH至8.5，升溫至58° C，保溫5小時；然后，加入2Kg2709堿性蛋白酶，保持pH8.5，保溫58° C攪拌7小時，升溫至沸騰15分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液500L ;
(2)酒精沉淀:將步驟(I)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態下，向溶液中加入13Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為2.5%，再加入溶液體積2.5倍的重量濃度為90%以上的酒精1250L，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化:將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入200L水中溶解，同時向水中加入5Kg氯化納，使溶液含氯化鈉重量濃度為2.5%、含硫酸軟骨素重量濃度為4%，調pH至11，加入溶液重量的2%過錳酸鉀4Kg氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥:調節步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5.5，加入濾液體積5倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水:將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的4倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，使乳濁液的酒精重量濃度達到85%，加料完畢后繼續乳化I小時，靜止沉淀2.5小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
【權利要求】
1.硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于包括下列步驟: (1)堿提酶解:首先，軟骨原料加水浸沒，用堿調PH至7.5 -9，升溫至55-60° C，保溫4 -6小時；然后，按軟骨原料重量I %- 3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH7.5-9，保溫55-60° C攪拌6 -8小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液； (2)酒精沉淀:將步驟(I)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態下，向溶液中加入氧化納，使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%，再加入溶液體積2-3倍的重量濃度為89%以上的酒精，靜止5小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀； (3)氧化:將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化納， 使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%、含硫酸軟骨素重量濃度為3-5 %，調pH至9.6-12，加入溶液重量的1-3%雙氧水或過錳酸鉀氧化6小時以上，過濾得濾液； (4)沉淀干燥:調節步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5-6，加入濾液體積4-6倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀； (5)乳化脫水:將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3 -5倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，加料完畢后繼續乳化0.5 -1.5小時，靜止沉淀2-3小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
2.如權利要求1所述的硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:其中步驟(5)的乳濁液含酒精的重量濃度始終保持在84%、或84%以上。
【文檔編號】C08B37/08GK104448040SQ201410813474
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月24日 優先權日:2014年12月24日
【發明者】劉冠男, 尚明彩, 夏襯來 申請人:青島九龍生物醫藥有限公司