一種云芝多糖的提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種云芝多糖的提取工藝，其從云芝中提取出水溶性多糖，經脫色后，加入纖維素酶和中性蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調節pH6.5，溫度45-55℃，時間60-90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液；而后用無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。本發明經過雙酶酶解發酵提取云芝提取物，其工藝簡單，成本較低，提取率高。特別是通過纖維素酶進行破壁處理，蛋白酶進行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來的溶解度低等缺點，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
【專利說明】
一種云芝多糖的提取工藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種云芝有效成分的提取方法，具體地說是一種云芝多糖的提取工藝。
【背景技術】
[0002]云芝多糖是從擔子菌雜色云芝菌種提取的多糖，也可以從人工培養的菌絲體中分離得到。具有多種生物活性。研究表明云芝多糖具有免疫調節功能，是良好的免疫增強劑，具有增強免疫細胞功能和識別能力，提高IgM的量等作用；云芝多糖同時具有保肝護肝作用，可顯著降低血清轉氨酶，對肝組織病變和肝壞死有明顯的修復作用。相關的多糖制劑已經被廣泛應用于臨床。傳統的云芝多糖的提取方法有熱水提取法，其將云芝浸泡在熱水中，從云芝中提取出水溶性多糖。但此方法耗時長，多糖的提取率較低，成本高。特別是云芝提取物中大分子蛋白質含量高，因云芝多糖是含蛋白質的葡聚糖，而大分子的蛋白質會影響其溶解性和吸收率，影響其生物活性。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種工藝簡單，提取率高，成本低的云芝多糖的提取工藝。
[0004]本發明解決上述技術問題采用的技術方案是:一種云芝多糖的提取工藝，其特征在于:其具體步驟如下:
1)稱取一定質量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次；
2)將步驟I)所得溶液離心過濾，取其上清液，然后經過樹脂吸附脫去顏色，靜置24h；
3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調節pH6.5，溫度45-55°C，時間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液；
4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
[0005]進一步，本發明所述步驟3)中上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調節pH6.5，溫度50°C，時間90min。
[0006]本發明經過雙酶酶解發酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%_45%。對照現有技術，本發明工藝簡單，成本較低，提取率高。特別是通過纖維素酶進行破壁處理，蛋白酶進行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來的溶解度低等缺點，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
【具體實施方式】
[0007]下面結合實施例對本發明做進一步說明。
[0008]本發明一種云芝多糖的提取工藝，其步驟是:云芝樣品烘干一〉粉碎(過80目篩)一> 水解一> 保濕浸提一> 尚心一> 上清液一> 大孔樹脂吸附一> 酶解一> 減壓濃縮一>醇沉一〉烘干。具體步驟為:
I)稱取一定質量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0009]2)將步驟I)所得溶液離心過濾，取其上清液，然后經過樹脂吸附脫去顏色，靜置24h。
[0010]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進行酶解，其中兩種酶濃度均為1.5%，酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%。調節pH6.5，溫度45-55°C，時間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。利用酶反應具有高度專一性等特性，根據植物藥材細胞壁的構成，纖維素酶能將細胞壁的組成成分水解或降解，破壞細胞壁結構，使有效成分充分暴露出來，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，從而達到提取細胞內有效成分的目的。中性蛋白酶能進行去蛋白處理，使蛋白質沉淀，減少水溶性多糖中大分子蛋白的殘留。
[0011]4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
[0012]本發明從云芝中提取出水溶性多糖，經脫色后，加入纖維素酶和中性蛋白酶。利用酶反應具有高度專一性等特性，根據植物藥材細胞壁的構成，纖維素酶能將細胞壁的組成成分水解或降解，破壞細胞壁結構，使有效成分充分暴露出來，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，從而達到提取細胞內有效成分的目的。中性蛋白酶能進行去蛋白處理，使蛋白質沉淀，減少水溶性多糖中大分子蛋白的殘留。
[0013]本發明經過雙酶酶解發酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%_45%。其工藝簡單，成本較低，提取率高。特別是通過纖維素酶進行破壁處理，蛋白酶進行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來的溶解度低等缺點，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
[0014]實施例1:一種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱取處理的云芝粉末200g，加入4000ml的水，浸泡90min，于50°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0015]2)將步驟I)所得溶液離心過濾取其上清液，然后經過大孔樹脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0016]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調節pH6.5，溫度50°C，時間90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0017]4)將步驟3)清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物24g。經測定，其中云芝多糖含量為45%。
[0018]云芝多糖含量測定方法是:稱取干燥恒重的葡萄糖50g，置250ml容量瓶中加水溶解后稀釋成母液。分別吸取母液5.0、10.0、15.0,20.0,25.0ml加水稀釋成50ml。取各濃度的標準液Iml于試管中加入5%苯酹溶液0.3ml,再加濃硫酸3ml,搖勻,放置20min,以蒸懼水為空白，在490nm處測吸光度。并繪制標準曲線。然后稱取上述制備的云芝多糖提取物250mg加蒸餾水適量使溶解，置1ml量瓶中加蒸餾水定容至刻度線。然后再取Iml用蒸餾水定容至50ml，搖勻，測其吸光值。測定其中云芝多糖含量為45%。
[0019]實施例2:—種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱取處理的云芝粉末100g，加入2000ml的水，浸泡60min，于55°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0020]2)將步驟I)所得溶液離心過濾取其上清液，然后經過大孔樹脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0021]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的4%，調節pH6.5，溫度45°C，時間60min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0022]4)將步驟3)清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物10.5g，經測定，其中云芝多糖含量為32%。
[0023]實施例3:—種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱取處理的云芝粉末200g，加入5000ml的水，浸泡80min，于60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0024]2)將步驟I)所得溶液離心過濾取其上清液，然后經過大孔樹脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0025]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2%，調節pH6.5，溫度55°C，時間80min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0026]4)將步驟3)清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物25g，經測定，其中云芝多糖含量為38%。
[0027]通過對實施例1-3進行云芝多糖含量測定，結合含量和云芝提取物得率，確定實施例I為優化工藝。
【權利要求】
1.一種云芝多糖的提取工藝，其特征在于:其具體步驟如下: 1)稱取一定質量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次； 2)將步驟1)所得溶液離心過濾，取其上清液，然后經過樹脂吸附脫去顏色，靜置24h； 3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調節pH6.5，溫度45-55°C，時間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液； 4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
2.根據權利要求1所述的云芝多糖的提取工藝，其特征在于:所述步驟3)中上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的.5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調節pH6.5，溫度50°C，時間90min。
【文檔編號】C08B37/00GK104387496SQ201410785842
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年12月18日 優先權日:2014年12月18日
【發明者】王麗娜, 蔡傳文, 張偉 申請人:威海百合生物技術股份有限公司