一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，包括：S1：蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，超微粉碎至粒徑為7～11μm的超細粉末，加入至水中，浸泡，再加熱至沸騰，保持微沸，離心，取上清液即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液；S2：濃縮得濃縮液；S3：沉淀：加入乙醇，邊加邊攪拌，靜置，離心，收集沉淀；S4：干燥：冷凍干燥，即得蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖。該方法是一種簡便、高效、成本低、多糖得率及含量高，且適合規模化生產的方法。
【專利說明】一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種生物領域中的一種菌絲體多糖，具體涉及一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲 體多糖的制備方法。
【背景技術】
[0002] 蝙fe蛾擬青霉發酵菌絲又稱為蟲草發酵菌絲Cs_4 (Cs為Cordyceps sinensis的 縮寫，即冬蟲夏草，后邊的4為菌種編號），其菌絲體含有較高含量的多糖，此多糖在保健食 品、醫藥等領域具有重要的作用，但目前對該蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中的多糖提取方法存在 不足使得多糖的提取率較低。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，該方法是一種簡 便、高效、成本低、多糖得率及含量高，且適合規模化生產的方法，克服了現有技術中的一些 不足。
[0004] 本發明的目的是通過以下技術方案來實現：
[0005] -種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：
[0006] S1 :蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，超微粉碎 至粒徑為7?11 μ m的超細粉末，加入至水中，浸泡，再加熱至沸騰，保持微沸60-120分鐘， 離心；分離沉淀和上清液，取沉淀并按上述步驟重復再提取1?2次，取每次離心分離后的 上清液并合并，即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液；
[0007] S2 :濃縮：將步驟S1中蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液進行減壓蒸餾，濃縮至 液體和原料的比例（質量/體積）為2 : 1?4 : 1，得到濃縮液；
[0008] S3 :沉淀：向步驟S2中所述的濃縮液中緩慢加入乙醇，邊加邊攪拌，然后室溫靜置 12-18小時，離心，棄上清液，收集沉淀；
[0009] S4:干燥：向步驟S3中所述的沉淀中加水溶解，加熱除去乙醇，然后進行冷凍干 燥，即得蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖，得率大于20%。
[0010] 進一步地，步驟S1中，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取的具體方法為：以蝙蝠蛾 擬青霉菌絲體為原料，超微粉碎為粉末，加入到15-20倍原料重量的水中，常溫浸泡30-60 分鐘，再加熱至沸騰，保持微沸60-120分鐘后離心；分離沉淀和上清液，取沉淀并按上述步 驟重復再提取1?2次，取每次離心分離后的上清液并合并，即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖 的粗提液。
[0011] 進一步優選地，將所述蝙蝠蛾擬青霉菌絲體超微粉碎至粒徑為?ο μ m的超細粉 末。
[0012] 進一步優選地，常溫浸泡后再加熱至沸騰，保持微沸90-105分鐘。
[0013] 進一步優選地，所述離心的時間為20min。
[0014] 進一步地，步驟S2中，將蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液濃縮至液體和原料的 比例（質量/體積）為3 : 1時為止。
[0015] 進一步地，步驟S3中，所述乙醇加至乙醇含量達到70% -80%時停止。
[0016] 進一步優選地，所述乙醇為無水乙醇。
[0017] 本發明提供了一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其主要具有的有益效果 為：該制備方法通過超微粉碎來破壞細胞壁再經過一些列的提取過程，得到的粗多糖得率 高，且純多糖的得率超過20% ;該多糖對RAW264. 7巨噬細胞株釋放N0有明顯的促進作用； 此外，該方法是一種簡便、高效、成本低且適合規模化生產的方法。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018] 下面根據附圖對本發明作進一步詳細說明。
[0019] 圖1是本發明實施例所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0020] 本發明實施例所述的一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，下面以具體實驗 案例為例來說明【具體實施方式】，應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明， 并不用于限定本發明。
[0021] 實施例1
[0022] 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，通過超微粉 碎將顆粒細度粉碎為粒徑10 μ m的超細粉末，通過超微粉碎后，稱取50g超微粉碎后的粉 末，再加入1000mL蒸餾水，常溫浸泡60分鐘，加熱至沸騰，保持微沸120分鐘，8000g離心 20min ;分離沉淀和上清液，取沉淀并按上述步驟重復再提取1次，即在該沉淀中加蒸餾水、 常溫浸泡、加熱至沸騰，保持微沸后離心，取上清液，合并兩次離心所得的上清液，即為蝙蝠 蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液。
[0023] 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖粗提液的濃縮：將上述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗 提液于旋轉蒸發儀中減壓濃縮至l〇〇mL，得濃縮液。
[0024] 乙醇沉淀：向上述濃縮液中緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達到 70%時，室溫靜置12小時，離心除去乙醇上清液，收集沉淀。
[0025] 干燥：沉淀加70mL水溶解，水浴鍋上揮去乙醇，置于_20°C冰箱中凍存12h后放入 冷凍干燥機中冷凍干燥，即得蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖，該多糖為含有微量雜質的粗多糖； 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的得率為21. 13%。
[0026] 實施例2
[0027] 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，通過超微粉碎 將顆粒細度粉碎為粒徑9 μ m的超細粉末，稱取50g超微粉碎后的粉末，再加入800mL蒸餾 水，常溫浸泡40分鐘，加熱至沸騰，保持微沸100分鐘，8000g離心20min ;分離沉淀和上清 液，取沉淀并按上述步驟重復再提取1次，即在該沉淀中加蒸餾水、常溫浸泡、加熱至沸騰， 保持微沸后離心，取上清液，合并兩次離心所得的上清液，即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的 粗提液。蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖粗提液的濃縮：將上述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗 提液于旋轉蒸發儀中減壓濃縮至l〇〇mL，得濃縮液。乙醇沉淀：向上述濃縮液中緩慢加入無 水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達到75%時，室溫靜置15小時，離心除去乙醇上清液，收 集沉淀。干燥：沉淀加70mL水溶解，水浴鍋上揮去乙醇，置于-20°C冰箱中凍存ia后放入 冷凍干燥機中冷凍干燥，即得蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖，該多糖為含有微量雜質的粗多糖； 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的得率為21. 50%。
[0028] 實施例3
[0029]
【權利要求】
1. 一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步 驟： 51 :蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，超微粉碎至粒 徑為7?11 μ m的超細粉末，加入至水中，浸泡，再加熱至沸騰，保持微沸60-120分鐘，離 心；分離沉淀和上清液，取沉淀并按上述步驟重復再提取1?2次，取每次離心分離后的上 清液并合并，即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液； 52 :濃縮：將步驟S1中蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液進行減壓蒸餾，濃縮至液體 和原料的比例為2 : 1?4 : 1時為止，得到濃縮液； S3:沉淀：向步驟S2中所述的濃縮液中緩慢加入乙醇，邊加邊攪拌，然后室溫靜置 12-18小時，離心，棄上清液，收集沉淀； S4 :干燥：向步驟S3中所述的沉淀中加水溶解，加熱除去殘留乙醇，然后進行冷凍干 燥，即得蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖，得率大于20 %。
2. 根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：步驟S1 中，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的提取的具體方法為：以蝙蝠蛾擬青霉菌絲體為原料，超微粉 碎為粒徑在7?11 μ m的超細粉末，加入到15-20倍原料重量的水中，常溫浸泡30-60分 鐘，再加熱至沸騰，保持微沸60-120分鐘后離心；分離沉淀和上清液，取沉淀并按上述步驟 重復再提取1?2次，取每次離心分離后的上清液并合并，即為蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的 粗提液。
3. 根據權利要求2所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：將所述 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體超微粉碎至粒徑為10 μ m的超細粉末。
4. 根據權利要求2所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：常溫浸 泡后再加熱至沸騰，保持微沸90-105分鐘。
5. 根據權利要求2所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：所述離 心的時間為20min。
6. 根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：步驟S2 中，將蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的粗提液濃縮至液體和原料的固體的比例為3 : 1時為止。
7. 根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：步驟S3 中，所述乙醇加至乙醇含量達到70% -80 %時停止。
8. 根據權利要求7所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體多糖的制備方法，其特征在于：所述乙 醇為無水乙醇。
【文檔編號】C08B37/00GK104151439SQ201410341964
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月18日 優先權日:2014年7月18日
【發明者】龐小博, 史先敏 申請人:上海天嵩生物科技有限公司