乙醇沉淀法從肝素副產物制備舒洛地特原料的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從肝素副產物分離制備舒洛地特原料的方法，將肝素副產物溶解，以氫氧化鈉調節溶液至高pH值，以適量乙醇做低溫沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；以鹽酸調該硫酸多糖溶液至低pH值，以適量乙醇做低溫沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；再以氫氧化鈉調節該溶液至pH中性，以適量乙醇做室溫沉淀，取沉淀烘干得到制得的舒洛地特原料。本發明的工藝簡單、成本低、容易放大、適于工業化生產。
【專利說明】乙醇沉淀法從肝素副產物制備舒洛地特原料的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種制備舒洛地特原料的方法，尤其涉及一種從肝素副產物分離舒洛地特原料的方法。
【背景技術】
[0002]舒洛地特Sulodexide，商品名為偉素VESSEL DUE F，化學名稱為葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸鹽。由意大利Alfa Wassermann公司原創生產，1974年在意大利首先上市,2003年進入中國市場。適應癥為有血栓形成危險的血管疾病，是一種可口服吸收的抗凝血藥。近年顯示其對糖尿病腎病的治療有效果。
[0003]舒洛地特由豬腸粘膜提取，是高度純化的糖胺聚糖，由重復的二糖結構單元組成帶有負電荷的長鏈大分子，二糖單元包含兩個改構糖，即乙酰半乳糖胺或乙酰葡糖胺及糖醛酸，如葡糖醛酸或艾杜糖醛酸。瓊脂凝膠電泳法測得含有80%的快速移動肝素(fast moving heparin, FMH)(基于電泳遷移率)即低分子肝素(1wmolecularweightheparin, LMWH)和20%的硫酸皮膚素(dermatan sulfate, DS)及少量慢速移動肝素(slowmoving heparin, SMH)(不得大于2%)。其中的LMWH部分與未分級肝素一樣含有二糖聚合結構，但硫酸化程度較低，多糖鏈的長度較短。未降解DS是由許多不同二糖組成的多糖，平均相對分子質量25000Da。
[0004]肝素生產 過程會產生大量副產物，其中含有硫酸軟骨素(chondroitin sulfate,CS)、硫酸皮膚素、快移動肝素、慢移動肝素等，是分離制備舒洛地特原料的良好的材料。
[0005]專利“一種從肝素副產物分離舒洛地特原料的方法(申請號201210064002.8)”給出了一種從肝素副產物分離舒洛地特原料的方法，采用醋酸鉀沉淀、斑氏試劑沉淀、乙醇沉淀、陰離子交換樹脂處理等步驟，從肝素副產物中分離出舒洛地特原料。
[0006]本專利提供另一種從肝素副產物分離舒洛地特原料的方法，分別采用高pH、低pH、中pH條件下乙醇沉淀法將不同的無效成分分離除去，從而簡單快速地從肝素副產物中分離出舒洛地特原料。
【發明內容】
[0007]本發明所要解決的技術問題是提供一種從肝素副產物分離舒洛地特原料的方法。
[0008]在生產肝素的過程中產生大量副產物，其中主要組成是硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、快移動肝素、慢移動肝素等。本發明中建立了一種新的分離純化工藝，從肝素副產物分離出舒洛地特原料，本發明包括以下步驟:
(I)將肝素副產物溶解為5-15% (m/m)的溶液，以氫氧化鈉調節pH至10.0-11.5，加乙醇至質量濃度為29-33%，在2-8°C沉淀1-2小時。離心收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液。
[0009](2)向經過步驟(1)純化的硫酸多糖溶液中加水，使乙醇濃度為24%，以鹽酸調節pH至1.5-2.5，加乙醇至質量濃度為38-42%，在2-8°C沉淀1_2小時。離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液。
[0010](3)向步驟⑵得到的溶液中加水，使乙醇濃度為36%，以氫氧化鈉調節pH至
5.5-8.5，加固體NaCl至質量濃度為2%，再加乙醇至質量濃度為40_50%，8_10°C沉淀過夜。轉移走上清，得沉淀。
[0011](4)步驟(3)得到的沉淀以60_75°C烘干，即為舒洛地特藥物原料。
[0012]步驟(1)所述的肝素副產物溶液濃度優選為8%_12%，進一步優選為10%，溶液pH優選為11.0，沉淀時乙醇濃度優選為31% ;步驟(2)溶液pH優選為2.0，沉淀時乙醇濃度優選為40%、(3)溶液pH優選為7.0，沉淀時乙醇濃度優選為45%。步驟(1)、(2)、(3)使用乙醇做有機溶劑沉淀，但同理也可使用甲醇、丙酮做有機溶劑沉淀，只需將參數做微調即可。
[0013]本發明所述制備方法，具有成本低廉、工藝簡單、容易放大等特點。用本發明所制得的舒洛地特藥物原料用瓊脂糖電泳檢測發現其組成為DS 20-30%、快肝素70-80%，符合舒洛地特藥物組分要求。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1為原料、第一次沉淀后產物、第二次沉淀后產物、第三次沉淀后產物(終產物)瓊脂糖凝膠電泳圖譜。
【具體實施方式】
[0015]下面結合實 例對本發明所述內容作進一步闡述。
[0016]實施例一
將肝素副產物(含CS5%、DS50%、快肝素25%、慢肝素20%，效價41usp u/mg,比旋+15° )溶解為10% (m/m)的溶液，以6M氫氧化鈉調節pH至11.0，加乙醇至質量濃度為31%，在2_8°C沉淀2小時。4000rpm離心30min，收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液。
[0017]向得到的硫酸多糖溶液中加水，使乙醇濃度為24%，以6M鹽酸調節pH至2.0，加乙醇至質量濃度為40%，在2-8°C沉淀1-2小時。離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液。
[0018]向得到的溶液中加水，使乙醇濃度為36%，以6M氫氧化鈉調節pH至7.0，加固體NaCl至質量濃度為2%，再加乙醇至質量濃度為50%，8-10°C沉淀過夜。移走上清，得沉淀。
[0019]沉淀在烘箱中以70°C烘干，即為舒洛地特藥物原料(DS20%,快肝素80%，效價69usp u/mg,比旋+35° )。
[0020]實施例二
取實施例一的原料、第一次沉淀后產物、第二次沉淀后產物、第三次沉淀后產物(終產物)等做瓊脂糖凝膠電泳分析，方法參照專利“一種玻載電泳法分析粘多糖的方法200910040788.8”。結果如圖1所示，M表示肝素副產物原料，原料中含有CS、DS、快肝素、慢肝素，經過第一次沉淀去除了慢肝素，經過第二次沉淀，將DS含量降低，經過第三次沉淀去除CS，得到最終產物:DS 20-30%、快肝素70-80%。
【權利要求】
1.一種從肝素副產物分離制備舒洛地特原料的方法，其特征包括以下步驟: (1)將肝素副產物溶解為質量濃度為5-15%的溶液，以氫氧化鈉溶液調節pH至10.0-11.5，加乙醇至質量濃度為29-33%，在2-8°C沉淀1_2小時，離心收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液； (2)向經過步驟(1)純化的硫酸多糖溶液中加純化水，使乙醇濃度降為24%，以鹽酸調節pH至1.5-2.5，補加乙醇至質量濃度為38-42%，在2-8°C沉淀1_2小時，離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液； (3)向步驟⑵得到的溶液中加純化水，使乙醇濃度為36%，以氫氧化鈉溶液調節pH至5.5-8.5，加固體NaCl至質量濃度為2%，再加乙醇至質量濃度為40_50%，室溫沉淀過夜，轉移走上清，得沉淀； (4)步驟(3)得到的沉淀以60-75°C烘干，即為舒洛地特藥物原料。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)中所述肝素副產物溶解為8-12%質量分數的溶液，以氫氧化鈉調節PH至11.0，沉淀時體系中乙醇質量濃度為40%。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)所述以鹽酸調節pH至2.0，補加乙醇至質量濃度為40%。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)所述以氫氧化鈉調節pH至7.0，加乙醇至質量濃度為45%。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)、(2)、(3)分別在堿性、酸性、中性環境執行乙醇沉淀。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)、(2)、(3)使用甲醇或者丙酮做有機溶劑沉淀。
【文檔編號】C08B37/00GK104017102SQ201410274835
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月19日 優先權日:2014年6月19日
【發明者】馬小來, 李鋰, 張錦, 黃洪 申請人:深圳市海普瑞藥業股份有限公司