復合酶法提取黃參多糖的方法
【專利摘要】本發明公開了一種復合酶法提取黃參多糖的工藝，是將黃參干燥、粉碎后加水，先微波提取，再用纖維素酶水解，然后用木瓜蛋白酶水解，滅酶，冷卻，離心，取上清液，雙層濾紙抽后減壓濃縮，最后用乙醇沉淀，冷凍干燥得黃參多糖，多糖得率為18.92～21.35%。用苯酚-硫酸法測定了提取物中多糖含量在88.33%±0.93%。用考馬斯亮藍法測定蛋白含量在2.17±1.03%。實驗表明，本發明黃參多糖對實驗性高血糖大鼠的血糖和血脂具有明顯的抑制作用，安全無副作用。將凍干的提取物粉碎后制成片劑、硬膠囊、顆粒劑等，是一種具有調節血糖血脂功能的天然保健產品。
【專利說明】復合酶法提取黃參多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種黃參多糖的提取方法，尤其涉及一種復合酶法提取黃參多糖的方法。
【背景技術】
[0002]隨著現今社會生活節奏加快，生活壓力增加，患高血壓、高血糖、高血脂癥(并稱三高癥)的人群日益增長。現今，防治三高癥主要依賴于西藥，如防治高血壓的卡托普利片、復方降壓片、清腦降壓片等，防治高血糖的主要是注射胰島素或口服降糖藥，防治高血脂癥的藥物如辛伐他丁、普拉固等。這些藥物盡管見效較快，但對肝、腎等臟器損害較大。而純天然植物提取物類藥物具有作用溫和、無毒副作用等優點，開發利用潛力很大。
[0003]黃參，又名黃葑，其形似人參，通體金黃。主要生長于沿祁連山、焉支山(又名大黃山)海拔2400~2900米的高寒濕潤草原和丘陵地帶，是多年生純天然植物。據《本草綱目》記載，黃參味甘、性溫，具有補氣養血、滋陰壯陽、通經活絡、健胃舒肝之功效。對中老年人胃氣虛寒、神疲乏力，婦女氣血失調，兒童發育遲緩、營養不良、挑食厭食效果俱佳，被譽為“小人參”。據北京食品研究所、甘肅農業大學等科研單位對山丹天然黃參檢測鑒定，它的肉質直根富含人體必需的16種氨基酸、礦物質和鈣、磷、鐵、鋅等微量元素，是一種經濟、藥用價值極高、純天然綠色保健食品。黃參多糖(Sphallerocarpus gracilispolysaccha-ride, SGP)是由甘肅特色植物黃參中提取。近年研究證實，黃參多糖對運動時能量補充、激發糖代謝和能量代謝酶系活性有積極作用，同時在提高機體免疫能力及抗疲勞方面也有作用，能夠有效地減小四氧嘧啶對胰島細胞的損傷作用，提高細胞的存活率，促進胰島素分泌，增強細胞內SOD的活性，降低細胞內MDA的含量。
[0004]專利CN101463094公開了一種黃參多糖制備方法，是將黃參粉碎成0.5cm大小的顆粒后，以水浸泡后煮沸提取，減壓真空濃縮提取液，用乙醇靜置沉淀，離心過濾去除上清液，收集沉淀物后噴霧干燥即得黃參多糖提取物。黃參多糖提取物的產率為15~30%，采用硫酸-苯酚法測定提取物中多糖含量為72%。《食品工業科技》2012年09期“波輔助提取黃參多糖的工藝研究”(楊小舟張繼楊曉龍王俊龍高峰)公開了用微波輔助提取黃參多糖的工藝，首先通過單因素實驗選取影響因素與水平，然后在單因素實驗的基礎上采用三因素三水平的Box-Benhnhen設,依據回歸分析確定最佳提取工藝條件為:微波作用時間11.2min，微波功率375W，料液比1: 43g/mL，實多糖得率為11.7%，明顯大于常規法得率
6.2%。與常規提取方法相比，該方法在多糖得率和提取效率上有了大幅度提高，但是提取得到的多糖含量為68.82%，蛋白質含量為13.1%，雖然提取效率高但得到的產物中多糖含量低。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對現有技術中存在的問題，提供一種復合酶法提取黃參多糖的方法。本發明復合酶法提取黃參多糖的方法，包括以下工藝步驟:(1)微波提取:將黃參干燥、粉碎成粉末，過60目篩，以1: 30~1: 40 g/mL料液比加水，調節pH =5~7后，于55~65°C、微波功率為200~300W下微波提取8~13min ；
(2)復合酶水解:微波提取后，在攪拌下(攪拌速度為800~1200r/min)先用干燥黃參質量1.5%~2.5%的纖維素酶(活力為5萬U/g)水解2~4h,再用干燥黃參質量0.3%~
0.5%的木瓜蛋白酶(活力為65萬U/g)水解2~4h，然后于90~95°C滅酶10~15min，冷卻至室溫，得提取液；
(3)濃縮、沉淀:提取液離心，取上清液，雙層濾紙抽濾I~2次后，減壓濃縮至體積為提取液體積的1/4~1/5，再加入體積為濃縮液3~4倍體積量的乙醇，充分攪拌后靜置過夜；離心，取下層沉淀，冷凍干燥得黃參提取物。該工藝中，離心速度為4000~4500 r/min，離心時間為10~15min ;減壓濃縮的工藝條件為:壓力0.07~0.09Mpa，溫度60~70°C ;冷凍干燥的工藝條件為:冷井溫度為-60~-70°C，真空度為I~10pa，冷凍時間為5~8h，連續抽真空12~16h。黃參多糖的得率為18.92~21.35%。
[0006]本發明地方法是用微波提取后應用纖維素酶能使細胞壁破裂，細胞內物質充分流出，木瓜蛋白酶能使得提取物中的蛋白質從多糖分子上解離下來，從而大大提高了提取物中的多糖含量。用苯酚-硫酸法測定了本發明黃參提取物的多糖含量，測定五次，多糖含量在88.33%±0.93%。用考馬斯亮藍法測定了本發明產品的蛋白含量，測定五次，蛋白含量在
2.17 ± 1.03%。
[0007]為進一步證明本發明中提取的黃參多糖產品的主要成分及其藥理作用，同時為了保證其安全性能，對本發明所提取的黃參多糖產品做了成分分析及其藥理實驗，具體的實驗材料、試驗方法和實驗結果闡述如下:
實驗材料=Wistar大鼠(160±20) g,雄性,甘肅省中醫學院提供；四氧喃唳(alloxan),Sigma公司提供。
[0008]糖尿病大鼠模型的建立:Wistar大鼠適應喂養6天后，禁食24h，按200mg/(kg.Bw)的劑量經左腹腔一次性注射四氧嘧啶(臨用前用0.86%生理鹽水新鮮配制)。3天后用尿糖試紙檢測鼠尿，用血糖儀測空腹血糖，尿糖呈陽性(+++)、BG≥12.0mmol/L為糖尿病大鼠。
[0009]試驗分組及處理方法=Wistar大鼠60只，共分5組，每組12只，如表1所示:空白對照組、模型對照組、高血糖+產品組(高、中、低3個劑量)。空白對照組和模型對照組灌胃生理鹽水，體積均為1.5ml。高血糖+產品分為高(500mg/ (kg *bw))、中(250mg/ (kg *bw))、低(125mg/(kg.bw))三個劑量組灌胃產品溶液。實驗時間為4周，各組取空腹靜脈血，用血糖儀測血糖濃度，實驗數據用spssl7.0處理。具體實驗結果見表2~4。
[0010]
【權利要求】
1.復合酶法提取黃參多糖的方法，包括以下工藝步驟: (1)微波提取:將黃參干燥、粉碎成粉末后以1: 30~1: 40 g/mL料液比加水，調節pH =5~7后，于55~65°C、微波功率為200~300W下微波提取8~13min ； (2)復合酶水解:微波提取后，在攪拌下先用黃參干質量1.5%~2.5%的纖維素酶水解2~4h，再用黃參干質量0.3%~0.5%的木瓜蛋白酶水解2~4h，然后于90~95°C滅酶10~15min，冷卻至室溫，得提取液； (3)濃縮、沉淀:提取液離心，取上清液，雙層濾紙抽濾I~2次后，減壓濃縮至體積為提取液體積的1/4~1/5，再加入體積為濃縮液3~4倍體積量的乙醇，充分攪拌后靜置過夜；離心，取下層沉淀，冷凍干燥得黃參提取物。
2.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:黃參粉末的粒度為60目以上。
3.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:纖維素酶的活力為5萬 U/g。
4.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:木瓜蛋白酶的活力為65萬U/g。
5.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:復合酶水解工藝中，攪拌速度為800~1200r/min。
6.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:濃縮、沉淀工藝中，離心的速度為4000~4500 r/min，離心時間為10~15min。
7.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:濃縮、沉淀工藝中，減壓濃縮的工藝條件為:壓力0.07~0.09Mpa，溫度60~70°C。
8.如權利要求1所述復合酶法提取黃參多糖的方法，其特征在于:濃縮、沉淀工藝中，冷凍干燥的工藝條件為:冷井溫度為-60~_70°C，真空度為I~10pa，冷凍時間為5~8h，連續抽真空12~16h。
【文檔編號】C08B37/00GK104072628SQ201410254367
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月10日 優先權日:2014年6月10日
【發明者】張繼, 宋珅, 程昉, 殷振雄, 劉琴, 趙保堂, 丁昊, 安珂, 付亞娟 申請人:西北師范大學