一種從木耳中提取木耳多糖的方法
【專利摘要】本發明涉及一種從木耳中提取木耳多糖的方法，其是選取干木耳為原料，經浸泡、清洗、搗碎后加入纖維素酶，控制酶解條件酶解破除細胞壁；酶解后的木耳渣采取熱水浸提；木耳酶解液與木耳浸提液合并后經過濾，再加入鞣酸溶液去除過濾液中的蛋白，離心收集的多糖溶液采用乙醇溶液醇沉；最后經真空干燥而成多糖產品。本發明的提取方法工藝合理，操作簡單，成分保留全面，多糖得率及純熟高，產品安全性好。
【專利說明】一種從木耳中提取木耳多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及多糖類的制備，尤其是一種從木耳中提取木耳多糖的方法。
【背景技術】
[0002]我們知道，木耳在真菌學分類中屬擔子菌綱，木耳目，木耳科。色澤黑褐，質地柔軟，并可防治缺鐵性貧血及其他藥用功效。主要分布于黑龍江、吉林、福建、臺灣、湖北、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地。木耳子實體含酸性粘多糖，由L-巖藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和葡萄糖醛酸等單糖組成。從木耳中提取的木耳多糖，具有降血糖、降血脂、降低膽固醇、抑制血小板聚集、提高機體免疫功能、抗血栓形成、抗衰老、抗潰瘍、抗放射的功效。
[0003]木耳細胞壁關鍵組分幾丁質和β -葡聚糖，質地堅韌，不易被人體所消化，細胞壁內所含有的多種有效成分很難透過細胞壁，被人體所吸收，因而破壁處理對于開展黑木耳深加工尤為重要，破壁可使黑木耳細胞內富含的功能性成分溶出于水中，提高黑木耳的消化吸收率。
[0004]傳統的木耳多糖的提取方法多采用水提取法和酸堿提取法。木耳細胞粗大、壁厚，水提取多糖難以從胞內溶出；而酸堿提取法易破壞多糖結構，降低其生物利用率。因此，研究開發一種通過纖維素酶酶解細胞壁與熱水浸提相結合的從木耳中提取木耳多糖的方法，以提高多糖的得率及成份全面、結構不被破壞，這對于木耳的綜合利用具有重要的意義。
【發明內容】
[0005]為了克服現有技術中木耳多糖水提取法存在多糖難以從胞內溶出造成提取率低、及酸堿提取法易破壞多糖結構，降低其生物利用率的不足。本發明的目的是提供一種從木耳中提取木耳多糖的方法，該提取方法采用酶酶解破壁與熱水浸提相結合，不僅工藝合理、操作簡單、生產成本低，而且成分保留全面、多糖得率高、產品安全性好。
[0006]本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:一種從木耳中提取木耳多糖的方法，其特征在于:經過下列工藝步驟: a、原料選取選取成熟的、無病蟲害的干木耳為原料；
b、原料處理將步驟(a)所選取的木耳原料加入木耳質量5~10倍的水，浸泡3~4h，再采用清水沖洗干凈，然后送入組織搗碎機加入木耳質量2~4倍的水搗碎成漿狀，得木耳漿液；
C、酶解破壁將步驟(b)所得到的木耳漿液加入木耳質量4~5倍的水，攪拌均勻，控制溫度為45~50°C，調節PH值為6.5~7.0，加入液體固含量0.2%~0.5%的纖維素酶進行酶解，酶解時間為2~3h ;酶解完成后升溫至90~100°C，保持20~30min，滅酶；將滅酶后的木耳固液混合物轉移至離心機中，固液分離，得木耳酶解液和木耳渣；
d、熱水浸提將步驟(c)所得到的木耳渣加入木耳質量5~10倍的水，控制溫度90~100°C，水浴提取I~2h ;將提取完畢后的木耳固液混合物轉移至離心機中，固液分離，得木耳浸提液；
e、過濾將步驟(C)所得到的木耳酶解液與步驟(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100~200目的濾布進行過濾，去除木耳小顆粒及其他不溶性雜質，得木耳過濾液；
f、去除蛋白將步驟(e)所得到的木耳過濾液升溫至85~90°C，然后逐漸向該過濾液中滴加濃度為0.3~0.5%的鞣酸溶液析出過濾液中的蛋白，直到無沉淀產生為止；將蛋白沉淀液送入離心機中，固液分離，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉將步驟(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入濃度為90~95%的乙醇溶液，添加量為多糖溶液質量的40~60%，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止；靜置3~4h，再用100~200目紗布過濾，得多糖沉淀；
h、干燥將步驟(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥機，控制干燥機內真空度-0.09~0.03 kpa，溫度在35~60°C，進行低溫真空干燥，得多糖粉末。
[0007]本發明是選取干木耳為原料，經浸泡、清洗、搗碎后加入纖維素酶，控制酶解條件酶解破除細胞壁；酶解后的木耳渣采取熱水浸提；木耳酶解液與木耳浸提液合并后經過濾，再加入鞣酸溶液去除過濾液中的蛋白，離心收集的多糖溶液采用乙醇溶液醇沉；最后經真空干燥而成多糖產品。本發明的提取工藝采用了纖維素酶酶解細胞壁與熱水浸提相結合的方式，纖維素酶酶解使細胞破壁，極大的提高木耳多糖的溶出率；再將木耳高溫水浸提，酶解破壁后的未能溶出的部分多糖進一步溶解出來，進一步提高了多糖的得率；而后采用易揮發的采用乙醇溶液進一步純化，提高多糖純度。經實驗測定:采用本工藝流程木耳多糖的多糖含量可達40%以上， 木耳多糖的提取率為15%以上。本發明的提取方法工藝合理，操作簡單，成分保留全面，多糖得率高，產品安全性好，提高了對原料的利用程度，降低了生產成本。
【具體實施方式】
[0008]下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明。
[0009]實施例一
一種從木耳中提取木耳多糖的方法，經過下列工藝步驟:
a、原料選取選取成熟的、無病蟲害的干木耳IOOkg作為原料,備用；
b、原料處理將步驟(a)所選取的木耳原料加入木耳質量8倍的水，浸泡3.5h，再采用清水沖洗干凈，然后送入組織搗碎機加入木耳質量3倍的水搗碎成漿狀，得木耳漿液；
C、酶解破壁將步驟(b)所得到的木耳漿液加入木耳質量4.5倍的水，攪拌均勻，控制溫度為48 °C，調節PH值為6.8，加入液體固含量0.3%的纖維素酶進行酶解，酶解時間為
2.5h ;酶解完成后升溫至95°C，保持25min，滅酶；將滅酶后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速2000r/min，進行固液分離，得木耳酶解液和木耳渣；
d、熱水浸提將步驟(c)所得到的木耳渣加入木耳質量8倍的水，控制溫度95°C，水浴提取1.5h ;將提取完畢后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速2000r/min，進行固液分離，得木耳浸提液；
e、過濾將步驟(c)所得到的木耳酶解液與步驟(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用150目的濾布進行過濾，去除木耳小顆粒及其他不溶性雜質，得木耳過濾液；
f、去除蛋白將步驟(e)所得到的木耳過濾液升溫至88°C，然后逐漸向該過濾液中滴加濃度為0.4%的鞣酸溶液析出過濾液中的蛋白，直到無沉淀產生為止；將蛋白沉淀液送入離心機中，控制轉速2000r/min，進行固液分離，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉將步驟(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入濃度為93%的乙醇溶液，添加量為多糖溶液質量的52%，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止；靜置
3.5h，再用150目紗布過濾，得多糖沉淀；
h、干燥將步驟(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥機，控制干燥機內真空度
0.01kpa，溫度在50°C，進行低溫真空干燥，得多糖粉末15.83kg，經測定:該多糖粉末中多糖含量達到44.93%。
[0010]實施例二
一種從木耳中提取木耳多糖的方法，經過下列工藝步驟:
a、原料選取選取成熟的、無病蟲害的干木耳200kg做為原料,備用；
b、原料處理將步驟(a)所選取的木耳原料加入木耳質量10倍的水，浸泡3h，再采用清水沖洗干凈，然后送入組織搗碎機加入木耳質量2倍的水搗碎成漿狀，得木耳漿液；
C、酶解破壁將步驟(b)所得到的木耳漿液加入木耳質量5倍的水，攪拌均勻，控制溫度為50°C，調節PH值為6.5，加入液體固含量0.5%的纖維素酶進行酶解，酶解時間為2h ；酶解完成后升溫至100°C，保持20min，滅酶；將滅酶后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速1800r/min，進行 固液分離，得木耳酶解液和木耳渣；
d、熱水浸提將步驟(c)所得到的木耳渣加入木耳質量10倍的水，控制溫度100°C，水浴提取Ih ;將提取完畢后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速1800r/min，進行固液分離，得木耳浸提液；
e、過濾將步驟(c)所得到的木耳酶解液與步驟(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用200目的濾布進行過濾，去除木耳小顆粒及其他不溶性雜質，得木耳過濾液；
f、去除蛋白將步驟(e)所得到的木耳過濾液升溫至90°C，然后逐漸向該過濾液中滴加濃度為0.5%的鞣酸溶液析出過濾液中的蛋白，直到無沉淀產生為止；將蛋白沉淀液送入離心機中，控制轉速1800r/min，進行固液分離，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉將步驟(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入濃度為95%的乙醇溶液，添加量為多糖溶液質量的40%，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止；靜置4h，再用200目紗布過濾，得多糖沉淀；
h、干燥將步驟(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥機，控制干燥機內真空度0.03kpa，溫度在35°C，進行低溫真空干燥，得多糖粉末30.4kg，經測定:該多糖粉末中多糖含量達到42.6%0
[0011]實施例三
一種從木耳中提取木耳多糖的方法，經過下列工藝步驟:
a、原料選取選取成熟的、無病蟲害的干木耳IOOkg做為原料,備用；
b、原料處理將步驟(a)所選取的木耳原料加入木耳質量5倍的水，浸泡4h，再采用清水沖洗干凈，然后送入組織搗碎機加入木耳質量4倍的水搗碎成漿狀，得木耳漿液；
C、酶解破壁將步驟(b)所得到的木耳漿液加入木耳質量4倍的水，攪拌均勻，控制溫度為45°C，調節PH值為7.0,加入液體固含量0.2%的纖維素酶進行酶解，酶解時間為3h ；酶解完成后升溫至90°C，保持30min，滅酶；將滅酶后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速1500r/min，進行固液分離，得木耳酶解液和木耳渣；
d、熱水浸提將步驟(c)所得到的木耳渣加入木耳質量5倍的水，控制溫度100°C，水浴提取Ih ;將提取完畢后的木耳固液混合物轉移至離心機中，控制轉速1500r/min，進行固液分離，得木耳浸提液；
e、過濾將步驟(c)所得到的木耳酶解液與步驟(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100目的濾布進行過濾，去除木耳小顆粒及其他不溶性雜質，得木耳過濾液；
f、去除蛋白將步驟(e)所得到的木耳過濾液升溫至90°C，然后逐漸向該過濾液中滴加濃度為0.3%的鞣酸溶液析出過濾液中的蛋白，直到無沉淀產生為止；將蛋白沉淀液送入離心機中，控制轉速1500r/min，進行固液分離，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉將步驟(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入濃度為90%的乙醇溶液，添加量為多糖溶液質量的60%，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止；靜置3h，再用100目紗布過濾，得多糖 沉淀；
h、干燥將步驟(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥機，控制干燥機內真空度-0.09kpa，溫度在60°C，進行低溫真空干燥，得多糖粉末15.64kg，經測定:該多糖粉末中多糖含量達到42.76%。
[0012]以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種從木耳中提取木耳多糖的方法，其特征在于:經過下列工藝步驟: a、原料選取選取成熟的、無病蟲害的干木耳為原料； b、原料處理將步驟(a)所選取的木耳原料加入木耳質量5~10倍的水，浸泡3~4h，再采用清水沖洗干凈，然后送入組織搗碎機加入木耳質量2~4倍的水搗碎成漿狀，得木耳漿液； C、酶解破壁將步驟(b)所得到的木耳漿液加入木耳質量4~5倍的水，攪拌均勻，控制溫度為45~50°C，調節PH值為6.5~7.0，加入液體固含量0.2%~0.5%的纖維素酶進行酶解，酶解時間為2~3h ;酶解完成后升溫至90~100°C，保持20~30min，滅酶；將滅酶后的木耳固液混合物轉移至離心機中，固液分離，得木耳酶解液和木耳渣； d、熱水浸提將步驟(c)所得到的木耳渣加入木耳質量5~10倍的水，控制溫度90~100°C，水浴提取I~2h ;將提取完畢后的木耳固液混合物轉移至離心機中，固液分離，得木耳浸提液； e、過濾將步驟(c)所得到的木耳酶解液與步驟(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100~200目的濾布進行過濾，去除木耳小顆粒及其他不溶性雜質，得木耳過濾液； f、去除蛋白將步驟(e)所得到的木耳過濾液升溫至85~90°C，然后逐漸向該過濾液中滴加濃度為0.3~0.5%的鞣酸溶液析出過濾液中的蛋白，直到無沉淀產生為止；將蛋白沉淀液送入離心機中，固液分離，得去除蛋白后的多糖溶液； g、醇沉將步驟(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入濃度為90~95%的乙醇溶液，添加量為多糖溶液質量的40~60%，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止；靜置3~4h，再用100~200目紗布過濾，得多糖沉淀； h、干燥將步驟(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥機，控制干燥機內真空度-0.09~0.03 kpa，溫度在35~60°C，進行低溫真空干燥，得多糖粉末。
【文檔編號】C08B37/00GK103641924SQ201310609349
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月27日 優先權日:2013年11月27日
【發明者】倪海平, 唐茂林, 楊眾, 唐嚴芳 申請人:威海市楨昊生物技術有限公司