一種具有生物特異性識別的溫敏性含糖聚合物的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，包括：（1）將4～12g壬二酸二乙烯酯、4g?D-半乳糖與50～100mL的吡啶混合，振蕩溶解之后加入枯草芽孢桿菌產的蛋白酶1.2-2.0g，于40～50℃振蕩反應1-5天，得到壬二酸半乳糖乙烯酯；（2）將0.2～0.4g上述壬二酸半乳糖乙烯酯與0.15～0.60g的N-乙烯基己內酰胺NVCL混合，然后加入偶氮二異丁氰AIBN和DMF，抽真空，充氮氣，自由基聚合反應結束后，純化得到P（OVNG-co-NVCL）。本發明得到的溫敏性含糖聚合物在擁有接近人體溫度的相變溫度條件下，同時具備良好的生物識別特性。
【專利說明】一種具有生物特異性識別的溫敏性含糖聚合物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于溫敏性聚合物的制備領域，特別涉及一種具有生物特異性識別的溫敏性含糖聚合物的制備方法。
【背景技術】
[0002]聚N-乙烯基己內酰胺屬于乙烯基化的內酰胺化合物，是一種水溶性的溫敏聚合物，其LCST值正好于人體生理溫度范圍內，它不僅具有離子型水溶性維生素、熱敏感性、而且還具有生物相容性。
[0003]半乳糖聚合物具有較好的生物相容性，較低的毒性，以及特異性識別特性，還具有支持細胞生長的優勢。糖環所帶的較多的羥基集團提高了含糖聚合物的水溶性，使其能夠在水溶性的環境中很好地溶解，并釋放其中的物質。
[0004]以上兩種聚合物在生物醫藥和日用化學品等領域的應用越來越顯著，近年來制備同時具有較高生物相容性，較低的細胞毒性，同時又具有接近人體溫度的相變溫度的親水性聚合物也成為了熱門，利用具有雙重特性的聚合物進行藥物的包埋，緩釋等應用也越來越廣泛。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種具有生物特異性識別的溫敏性含糖聚合物的制備方法，該方法綠色安全，具有穩定的可重復性。
[0006]本發明的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，包括:
[0007](I)將4~12g壬二酸二乙烯酯、4g D-半乳糖與50~IOOmL的吡啶混合，振蕩溶解之后加枯草芽孢桿菌產的蛋白酶1.2-2.0g,于40~50°C振蕩反應1-5天，得到壬二酸半乳糖乙稀酷；
[0008](2)將0.2~0.4g上述壬二酸半乳糖乙烯酯與0.15~0.60g的N-乙烯基己內酰胺NVCL混合，然后加入偶氮二異丁氰AIBN和DMF，抽真空，充氮氣，自由基聚合反應結束后，純化得到 P (OVNG-co-NVCL)。
[0009]步驟(1)所述的壬二酸半乳糖乙烯酯是經過柱層層析提純得到的，洗脫劑為乙酸乙酯。
[0010]步驟(2)中所述的自由基聚合反應為于70°C恒溫反應8h。
[0011]步驟(2)中所述的純化為重復進行甲醇溶解-乙醚聚沉操作。
[0012]步驟(2)中所述的AIBN的加入量為反應底物(壬二酸半乳糖乙烯酯+N-乙烯基己內酰胺)總質量的1%~3%，DMF的用量為lmL。
[0013]用pH7.4的PBS緩沖液將上述溫敏聚合物材料配成濃度I~3mg/10mL的溶液，在226nm條件下測定P (OVNG-co-NVCL)的相轉變溫度；
[0014]將ImL 的 P(OVNG-co-NVCL)溶液，ImL 的 PAN-FITC 溶液，100 ~120mg 的 CaCl2, I ~2mg BSA順序加入到密封遮光的反應瓶中，于4°C冰箱里進行交聯；交聯反應結束，將交聯反應液轉移到透析袋中，室溫下，在PBS緩沖液中透析48h，直至透析液無色，熒光顯微鏡下觀察溫敏材料的生物識別特性。其中P(OVNG-co-NVCL)的濃度是I~2mg/mL，PAN-FITC的濃度是I~1.5mg/mL，交聯反應時間是lh。
[0015]本發明制備了一種具有生物特異性識別的溫敏性含糖聚合物材料，通過酶促合成和自由基聚合得到具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物材料，該材料具有接近于人體體溫的相轉變溫度，同時能與花生凝集素蛋白特異性的識別。
[0016]有益效果:
[0017](I)本發明的方法綠色安全，酶促合成可重復性高，自由基聚合操作簡單。
[0018](2)本發明的溫敏性含糖聚合物材料有接近于人體體溫的相轉變溫度，同時能與花生凝集素蛋白特異性的識別。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1:P(OVNG-co-NVCL)的紅外圖譜；
[0020]圖2:P(OVNG-co-NVCL)的相轉變溫度；
[0021]圖3:P(OVNG-co-NVCL)與花生凝集素的特異性識別。
【具體實施方式】
[0022]下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
[0023]本發明中所述的PBS緩沖液都是指pH7.4的磷酸鹽緩沖液。
[0024]實施例1
[0025]P (OVNG-co-NVCL, OVAG: NVCL= 1:1 (mol/mol))，具體步驟如下:
[0026]取IOg壬二酸二乙烯酯，4g D-半乳糖,70mL吡唳，1.5g枯草芽孢桿菌蛋白酶于250mL的反應瓶中，45°C的振蕩器中反應3天；得到的壬二酸二乙烯半乳糖酯取4g與
1.5gNVCL，0.1lg的AIBN于DMF中，充氮氣70V反應8個小時后，產物反復經過甲醇溶解，乙醚聚沉得到P (OVNG-co-NVCL)。
[0027]實施例2
[0028]P (OVNG-co-NVCL, OVNG: NVCL=1: 4 (mol/mol))，具體步驟如下:
[0029]取IOg壬二酸二乙烯酯，4g D-半乳糖,70mL吡唳，1.5g枯草芽孢桿菌蛋白酶于250mL的反應瓶中，45°C的振蕩器中反應3天；得到的壬二酸二乙烯半乳糖酯取2g與
2.98gNVCL, 0.099g的AIBN于DMF中，充氮氣70°C反應8個小時后，產物反復經過甲醇溶解，乙醚聚沉得到P (OVNG-co-NVCL)。
[0030]實施例3
[0031]P (OVNG-co-NVCL, OVNG: NVCL=1: 6 (mol/mol))，具體步驟如下:
[0032]取IOg壬二酸二乙烯酯，4g D-半乳糖,70mL吡唳，1.5g枯草芽孢桿菌蛋白酶于250mL的反應瓶中，45°C的振蕩器中反應3天；得到的壬二酸二乙烯半乳糖酯取2g與
4.47gNVCL，0.13g的AIBN于DMF中，充氮氣70°C反應8個小時后，產物反復經過甲醇溶解，乙醚聚沉得到P(OVAN-co-NVCL)。
[0033]實施例4
[0034]P (OVNG-co-NVCL, OVAG: NVCL=1: 8 (mol/mol))，具體步驟如下:
[0035]取IOg壬二酸二乙烯酯，4g D-半乳糖,70mL吡唳，1.5g枯草芽孢桿菌蛋白酶于250mL的反應瓶中，45°C的振蕩器中反應3天；得到的壬二酸二乙烯半乳糖酯取2g與5.96NVCL，0.16g的AIBN于DMF中，充氮氣70°C反應8個小時后，產物反復經過甲醇溶解，乙醚聚沉得到P (OVNG-co-NVCL)。
[0036]實施例5
[0037]P (OVNG-co-NVCL)相轉變溫度的測定，具體步驟如下:
[0038]取IOmgP (OVNG-co-NVCL)聚合物，溶于 ρΗ7.4 的 PBS 緩沖液中，配成 lmg/10mL 的溶液，于226nm的波長下，測定該聚合物溶液隨著溫度的變化其透過率的大小，計算出材料的相轉變溫度。[0039]實施例6
[0040]P (OVNG-co-NVCL)與花生凝集素的特異性識別特性的測定，具體步驟如下:
[0041]取1.3mg P (OVNG-co-NVCL)溶于 ImLPBS 中，取 ImL 濃度為 lmg/mL 的 PAN-FITC，IIOmgCaCl2, 2mgBSA于反應瓶中，避光反應lh，后轉移到透析袋中在PBS中透析48小時，觀察聚合物材料與花生凝集素的特異性識別特性。
【權利要求】
1.一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，包括: (1)將4~12g壬二酸二乙烯酯、4gD-半乳糖與50~IOOmL的吡啶混合，振蕩溶解之后加入枯草芽孢桿菌產的蛋白酶1.2-2.0g,于40~50°C振蕩反應1-5天，得到壬二酸半乳糖乙稀酷； (2)將0.2~0.4g上述壬二酸半乳糖乙烯酯與0.15~0.60g的N-乙烯基己內酰胺NVCL混合，然后加入偶氮二異丁氰AIBN和DMF，抽真空，充氮氣，自由基聚合反應結束后，純化得到 P (OVNG-co-NVCL)o
2.根據權利要求1所述的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，其特征在于:步驟(1)所述的壬二酸半乳糖乙烯酯是經過柱層層析提純得到的。
3.根據權利要求2所述的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，其特征在于:所述的柱層層析提純中所用的洗脫劑為乙酸乙酯。
4.根據權利要求1所述的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的自由基聚合反應為于70°C恒溫反應8h。
5.根據權利要求1所述的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的純化為重復進行甲醇溶解-乙醚聚沉操作。
6.根據權利要求1所述的一種具有生物識別特性的溫敏性含糖聚合物的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的AIBN的加入量為反應底物總質量的1%~3%，DMF的用量為ImL0
【文檔編號】C08F218/14GK103539885SQ201310390878
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年8月30日 優先權日:2013年8月30日
【發明者】朱利民, 石萌, 權靜, 金成成 申請人:東華大學