專利名稱：一種苦瓜多糖的提取方法
技術領域：
本發明涉及屬于農、林副產品深加工領域，具體涉及一種苦瓜多糖的提取方法。
背景技術：
苦瓜(Momordica charantiap),別名涼瓜、錦蒸枝、癩葡萄、癩瓜、為葫蘆科、苦瓜屬一年生攀援草本苦瓜的果實，葉互生，掌狀5 7深裂。花小，單性、雌雄同株，黃色，長不超過2cm。果實紡錘形，有瘤狀凸起，成熟時橙黃色。味苦，瓤鮮紅色、味甜明代以前醫書沒有記載苦瓜，明代《救荒本草》、《本草綱目》始列入，疑為三寶太監下西洋時，從南洋群島移至過來。明代醫學家李時珍在不《本草綱目》中稱苦瓜“味苦，性寒涼，無毒，具有除邪，解疲乏，清心明目、益氣壯陽之功”。現代中醫認為，苦瓜有清暑滌熱、明目解毒、赤眼疼痛、熱病煩渴等病癥。苦瓜是一種人工栽培的可再生綠色資源，全國各地均有種植，資源豐富。苦瓜不僅 是佳蔬，也是良藥，它是一種藥食兩用的食療佳品，從苦瓜中提取的多糖物質，具有降低血糖、抑菌抗炎、抗氧化性等多種作用，并能提高免疫力，是一種有益于人類健康的環境友好產品。苦瓜多糖產品外觀為淡黃色至黃棕色固體粉末，易吸濕，可溶于熱水，難溶于醇、酮、醚、氯仿等有機溶劑。多糖具有提高人體的免疫功能等多種生物活性，現代醫學研究表明，苦瓜多糖具有降低血糖、抑菌抗炎、抗氧化性等多種作用。
發明內容
本發明公開一種苦瓜多糖的提取方法，以苦瓜為原料，采用熱水浸提粗多糖，然后用Sevag法除蛋白質、雙氧水脫色，乙醇沉析分離，再經層析法純化，低溫干燥，粉碎，得多糖純品。本發明方法不生成有害物質，苦瓜多糖的活性成分能被保存完整，不污染環境，提取的苦瓜多糖純度高，收率高。
為實現上述目的本發明采用如下技術方案
一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于以苦瓜為原料，采用熱水浸提法或水提膜離法提取粗多糖，然后用Sevag法除蛋白質、雙氧水脫色，乙醇沉析分離，再經層析法純化，低溫干燥，粉碎，得多糖純品，具體步驟如下
(I)熱水浸提法提取粗多糖
a、備料以新鮮的苦瓜為原料，洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；
b、水提將經過粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入蒸餾水，攪拌混勻，微波處理I 2min或超聲波處理10 15min，于pH值7_8和溫度85-95°C左右的條件下浸提3_4h，過濾分離，得第一次浸提濾液，殘渣再加入適當的蒸餾水，攪拌，于95-100°C條件下浸提l_2h，過濾分離，得第二次浸提濾液，合并兩次浸提濾液，待用，浸提時料液比為I ;(18-22)；
c、濃縮把浸提濾液投入真空濃縮器中，減壓、低溫濃縮至浸提濾液原體積1/4左右，得濃縮液，待用；
d、脫色把苦瓜粗多糖濃縮液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量的濃度為20% 30%的雙氧水,混合均勻，靜置，脫色待用；
e、醇析把脫色液投入醇析釜中，在攪拌的條件下，慢慢加入濃度為90-95%的乙醇，直至料液中乙醇體積濃度達到75% 85%為止，然后于-10 _15°C靜置過夜，醇析完全后，再進行離心分離，得下層沉析物為苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗滌苦瓜粗多糖，收集上層液相和洗液，回收乙醇；
f、干燥把洗滌后的苦瓜粗多糖沉析物進行低溫干燥，然后粉碎，得到苦瓜粗多糖；
(2)粗多糖純化
a、溶解把苦瓜粗多糖用適量的蒸餾水溶解，置于高速離心機中，收集上層清液，棄去下層物質；
b、除雜在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入Sevag試劑震蕩，靜置，再離心分離，棄去下層雜質，收集上層液體，將收集的上層液體靜置待分層后，將水相與有機相分開，有機相回收氯仿和正丁醇循環使用，水相為苦瓜粗多糖澄清液，待用，苦瓜粗多糖清液與Sevag試劑的體積比為1:(1-1.5);
C、透析把苦瓜粗多糖澄清液進行透析除雜，透析處理完畢后，取出透析內液，待用；
d、層析把苦瓜粗多糖透析液經過DEAE-32柱層析純化,再上SephadexG_25柱分離，用氯化鈉水溶液洗脫，收集含多糖的洗脫液，得苦瓜多糖純品洗脫液，待用；
e、醇析把含苦瓜多糖的層析液經適當的濃縮之后，進行醇析，再離心分離，收集的下層沉析物為苦瓜多糖，待用，液相的乙醇回收；
f、干燥把苦瓜多糖沉析物洗滌后再進行低溫干燥處理，然后粉碎過80-85目篩，得到苦瓜多糖純品。所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于粗糖純化時所用的Sevag試劑中氯仿與正丁醇的體積比為=(4-5):1。所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于粗糖純化時所述的透析具體操作方法為先用自來水透析45-50h，再用蒸餾水或去離子水透析22-25h。所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于所述的水提膜離法提取粗多糖的具體步驟如下
a、備料以新鮮的苦瓜為原料，洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；
b、水提粉碎的鮮苦瓜加入其重量的20% 50%的蒸餾水，于打漿機中勻漿，然后微波處理lOmin，適當的加熱，浸提IH左右，過濾，回收殘渣加以利用；得上清液，待用。C、脫色把上清液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量濃度為20% 30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色，待用。d、膜離；取褪脫色后的上清液，將其至于膜分離器中，在壓力為0. 05 0. 150MPa的條件下，使使上清液過截留分子量> 6000的中空纖維膜，得到苦瓜粗多糖的濃縮液，待用，采用熱水浸提法相同的方法醇析、干燥得干粗多糖。本發明的有益效果在于
本發明方法采用熱水提法從苦瓜中提取苦瓜多糖的工藝過程為物理分離過程，不生成有害物質，工藝過程可實現清潔生產；以水作為浸提劑，可以節省大量的有機溶劑，并減少了有機溶劑對苦瓜多糖生理活性的破壞作用，提高了產品的質量，減少了對環境的污染。在水提膜離法中，可同時得到苦瓜多糖和苦瓜皂甙兩種活性物質，使苦瓜資源得以充分利用。因此，該工藝是一種資源節約型、環境友好型的綠色生產工藝。
圖I為本發明的工藝流程圖。具體實施例方式 實施例I熱水提取法提取粗多糖
(1)備料將新鮮的苦瓜洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；
(2)水提將經過粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入20倍量的蒸餾水，攪拌混勻，微波處理I 2min (或超 聲波處理10 15min)于pH值7. 5和90°C左右的條件下浸提3H，過濾分離，得第一次浸提濾液，殘渣加入10倍量的蒸餾水，攪拌，于100°C條件下浸提lh，過濾分離，收集殘渣另行綜合利用，合并兩次浸提濾液，待用；
(3)濃縮把浸提濾液投入真空濃縮器中，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/4左右，得濃縮液，待用；
(4)脫色把苦瓜粗多糖濃縮液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量的濃度為30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色待用；
(5)醇析把脫色液投入醇析釜中，在攪拌的條件下，慢慢將適量的95%乙醇，直至料液中乙醇濃度打到75% 85%(V/V)為止，靜置于冰箱，于-10 -15°C過夜，讓醇析完全，離心分離，得沉析物為苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗滌2次，待用；收集液相和洗液，回收乙醇；
(6)干燥把洗滌后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥中于減壓和低溫條件下干燥；或者移至冷凍干燥機中，于減壓和_57°C的條件下冷凍干燥。然后粉碎，得到苦瓜粗多糖。實施例2水提膜離法提取粗多糖
(1)備料將新鮮的苦瓜洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；
(2)水提把粉碎的鮮苦瓜加入其重量的20% 50%的蒸餾水，于打漿機中勻漿，然后微波處理lOmin，適當的加熱，浸提IH左右，過濾，回收殘渣加以利用；得上清液，待用；
(3)脫色把上清液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量濃度為20% 30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色，待用；
(4)膜離取褪脫色后的上清液，將其至于膜分離器中，在壓力為0.05 0. 150MPa的條件下，使使上清液過截留分子量> 6000的中空纖維膜，得到含苦瓜粗多糖的濃縮液，待用，收集透過液，用于提取苦瓜皂甙；
(5)醇析把苦瓜粗多糖濃縮液投入醇析釜中沒在攪拌的條件下，慢慢加人適量的95%的乙醇，直至料液中乙醇濃度達到75% 85% (V/V)為止，靜置于_10-15°C過夜，讓醇析完全，離心分離，得到沉析物我ikugua粗多糖，再用95%乙醇洗滌2次，待用，收集液相和洗液，回收乙醇；
(6)把洗滌后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥中于減壓和低溫條件下干燥；或者移至冷凍干燥機中，于減壓和_55°C的條件下冷凍干燥。然后粉碎，得到苦瓜粗多糖。實施例3苦瓜粗多糖純化
(1)溶解將實施例I和2所得苦瓜粗多糖用適量的蒸餾水溶解，置于高速離心機中，離心分離0. 5h左右，以除去少量不溶物，得清液，待用；
(2)除雜在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入約I倍量的Sevag試劑(氯仿正丁醇=4 :1，V/V)，震蕩0. 5h左右，靜置，讓游離蛋白等雜質充分析出，再離心分離，去除蛋白等雜質，按此處理合格后靜置、分層，將水相與有機相分開，有機相供回收氯仿和正丁醇循環使用，水相為苦瓜粗多糖澄清液，待用；
(3)透析把苦瓜粗多糖澄清液裝入透析設備透析袋中，用自來水透析48h，再用蒸餾水或去離子水透析24h以除去無機鹽、低分子量雜質，透析處理完畢后，取出透析內液，待用；
(4)層析把苦瓜粗多糖透析液經過DEAE-32柱純化，再上S^hadexG-25柱分離，用氯化鈉水溶液洗脫，檢測多糖洗脫峰，用自動分段收集器收集含多糖的洗脫液，得苦瓜多糖純品洗脫液，待用，收集其他洗脫液加以綜合利用；
(5)醇析把含苦瓜多糖的層析液經真空低溫適當的濃縮之后，投入沉析釜中，在常溫的條件下，攪拌，慢慢加入適量的95%乙醇，使料液中含乙醇濃度75% 85% (V/V)為止，靜 置于-10 -15°C過夜，讓苦瓜多糖充分析出，然后進行離心分離，液相送減壓蒸發回收乙醇，沉析物為苦瓜多糖，待用；
(6)干燥把苦瓜多糖沉析物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚各洗滌2次，有機洗液送減壓蒸發回收有機溶劑，把洗凈后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥器中，于減壓和低溫條件下干燥，然后粉碎過80目篩，得到苦瓜多糖純品。
權利要求
1.一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于以苦瓜為原料，采用熱水浸提法或水提膜離法提取粗多糖，然后用Sevag法除蛋白質、雙氧水脫色，乙醇沉析分離，再經層析法純化，低溫干燥，粉碎，得多糖純品，具體步驟如下 (1)熱水浸提法提取粗多糖 a、備料以新鮮的苦瓜為原料，洗凈、晾干、粉碎過20目，待用； b、水提將經過粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入蒸餾水，攪拌混勻，微波處理I 2min或超聲波處理10 15min，于pH值7_8和溫度85-95°C左右的條件下浸提3_4h，過濾分離，得第一次浸提濾液，殘渣再加入適當的蒸餾水，攪拌，于95-100°C條件下浸提l_2h，過濾分離，得第二次浸提濾液，合并兩次浸提濾液，待用，浸提時料液比為I ;(18-22)； c、濃縮把浸提濾液投入真空濃縮器中，減壓、低溫濃縮至浸提濾液原體積1/4左右，得濃縮液，待用； d、脫色把苦瓜粗多糖濃縮液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量的濃度為20% 30%的雙氧水,混合均勻，靜置，脫色待用； e、醇析把脫色液投入醇析釜中，在攪拌的條件下，慢慢加入濃度為90-95%的乙醇，直至料液中乙醇體積濃度達到75% 85%為止，然后于-10 _15°C靜置過夜，醇析完全后，再進行離心分離，得下層沉析物為苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗滌苦瓜粗多糖，收集上層液相和洗液，回收乙醇； f、干燥把洗滌后的苦瓜粗多糖沉析物進行低溫干燥，然后粉碎，得到苦瓜粗多糖； (2)粗多糖純化 a、溶解把苦瓜粗多糖用適量的蒸餾水溶解，置于高速離心機中，收集上層清液，棄去下層物質； b、除雜在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入Sevag試劑震蕩，靜置，再離心分離，棄去下層雜質，收集上層液體，將收集的上層液體靜置待分層后，將水相與有機相分開，有機相回收氯仿和正丁醇循環使用，水相為苦瓜粗多糖澄清液，待用，苦瓜粗多糖清液與Sevag試劑的體積比為1:(1-1.5); C、透析把苦瓜粗多糖澄清液進行透析除雜，透析處理完畢后，取出透析內液，待用； d、層析把苦瓜粗多糖透析液經過DEAE-32柱層析純化,再上SephadexG_25柱分離，用氯化鈉水溶液洗脫，收集含多糖的洗脫液，得苦瓜多糖純品洗脫液，待用； e、醇析把含苦瓜多糖的層析液經適當的濃縮之后，進行醇析，再離心分離，收集的下層沉析物為苦瓜多糖，待用，液相的乙醇回收； f、干燥把苦瓜多糖沉析物洗滌后再進行低溫干燥處理，然后粉碎過80-85目篩，得到苦瓜多糖純品。
2.根據權利要求I所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于粗糖純化時所用的Sevag試劑中氯仿與正丁醇的體積比為=(4-5)1。
3.根據權利要求I所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于粗糖純化時所述的透析具體操作方法為先用自來水透析45-50h，再用蒸餾水或去離子水透析22-25h。
4.根據權利要求I所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于所述的水提膜離法提取粗多糖的具體步驟如下 a、備料以新鮮的苦瓜為原料，洗凈、晾干、粉碎過20目，待用；b、水提粉碎的鮮苦瓜加入其重量的20% 50%的蒸餾水，于打漿機中勻漿，然后微波處理lOmin，適當的加熱，浸提IH左右，過濾，回收殘渣加以利用；得上清液，待用； C、脫色把上清液投入脫色釜中，在攪拌的條件下加入少量濃度為20% 30%的雙氧水，混合均勻，靜置，脫色，待用； d、膜離；取褪脫色后的上清液，將其至于膜分離器中，在壓力為0. 05 0. 150MPa的條件下，使使上清液過截留分子量> 6000的中空纖維膜，得到苦瓜粗多糖的濃縮液，待用，采用熱水浸提法相同的方法醇析、干燥得干粗多糖。
全文摘要
本發明涉及一種苦瓜多糖的提取方法。以苦瓜為原料，加入熱水，進行超聲或微波協助浸提，收集上層清液進行濃縮、脫色、干燥，得到苦瓜粗多糖，將苦瓜粗多糖溶解于水中，離心分離得上清液，對上清液再進行除雜、透析、層析、醇析得沉析物，再經洗滌、干燥得苦瓜多糖純品，本發明方法不生成有害物質，苦瓜多糖的活性成分能被保存完整，不污染環境，提取的苦瓜多糖純度高，收率高，能使苦瓜資源得以充分利用，該工藝是一種資源節約型、環境友好型的綠色生產工藝。
文檔編號C08B37/00GK102746412SQ201210213148
公開日2012年10月24日 申請日期2012年6月26日 優先權日2012年6月26日
發明者李恒勇 申請人:安徽億源生物工程有限公司