專利名稱：一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法
技術領域：
本發明涉及高分子材料技術領域，尤其涉及一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法。
背景技術：
萊克多巴胺(RAC) 鹽酸(feictopamine hydrochloride)是一種苯酚胺類β 2_腎上腺素激動劑，具有營養再分配作用，增強脂肪分解代謝，促進蛋白質合成，可明顯提高瘦肉率，提高飼料轉化率的作用。但是當人體中累計攝入劑量超過一定值時，易出現毒副反應。目前除了美國批準其可為豬的飼料添加劑外，歐盟、日本等許多國家都將其列為違禁藥物，禁止在畜禽生產上使用。我國農業部2002年3月農牧發[2002] 1號文“關于發布《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》的通知”中明確規定禁止使用RAC，農業部、衛生部、國家藥品監督管理局2002年第176號公告也明令禁止在飼料和動物飲用水中使用RAC。雖然世界各國相繼禁止使用克侖特羅作為飼料添加劑，但RAC的非法添加仍日趨嚴重。與克侖特羅等其它激動劑相比，RAC檢測方法較滯后。目前國內外在檢測食品中RAC的方法有儀器分析方法如波譜法、色譜法及其連用技術；免疫分析方法放射免疫測定法、酶聯免疫測定法、熒光免疫測定法和免疫傳感器法等；生物測定法微生物學測定法(敏感菌抑制法)、放射受體測定法等。其中儀器分析方法準確性和敏感性較高，但儀器比較昂貴，檢測費時且成本高；免疫分析方法具有高效、快速、低成本的特點和一次檢測樣品量大的特點，但出現假陽性的概率較大，易引起誤判。在RAC的免疫分析方法中，由于RAC是小分子化合物，其本身不能使動物產生抗體，需與適當載體蛋白質偶聯才能誘導免疫動物產生相應抗體，因此，制備質量穩定的農藥抗體具有相當的難度，從而限制了免疫分析法的應用范圍。免疫分析中生物抗體對外界環境較為敏感，容易失活，純化條件苛刻而限制其廣泛應用。分子印跡技術是當前發展高選擇性材料的主要方法之一，是模擬抗體抗原相互作用的具有特異選擇性識別位點性質的技術，它利用化學手段合成一種高分子聚合物——分子印跡聚合物(molecularly imprinting polymer，MIP)。MIP能夠特異性吸附作為印跡分子的待測物，在免疫分析中可以取代生物抗體，為克服上述生物抗體的局限性提供了強有力的工具。分子印跡聚合物具有良好的物理、化學性能以及接近或達到天然抗體對抗原的高度親和性和專一性，其特異性結合反應與免疫分析的抗原-抗體結合有許多相似之處。 將免疫分析理論和方法移植于模板分子與分子印跡聚合物的特異性識別反應，建立以模板分子與印跡聚合物特異性識別反應為基礎的分子印跡免疫吸附檢測技術，具有較大的發展和應用空間。
發明內容
本發明的目的在于提供一種采用分子印跡技術與有機無機雜化法相結合的方法、 合成對萊克多巴胺有高選擇性的仿生抗體的方法，本發明的技術方案是
(1)在甲醇和甲苯的混合溶劑中加入萊克多巴胺，甲基丙烯酸，超聲波脫氣5min 后，40°C水浴攪拌反應池，再加入Y-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷和偶氮二異丁腈，然后用8道微量可調移液器將所合成聚合物移到96孔酶標板中，在紫外燈下孵化12h ；(2)將上述的聚合產物用甲醇與冰乙酸作為萃取劑，超聲波連續萃取48h，然后用甲醇作為萃取劑，超聲波萃取12h，然后在40°C溫度條件下干燥10 12h，即得萊克多巴胺仿生抗體；本發明的優點和積極效果是(1)本發明提供的萊克多巴胺仿生抗體以萊克多巴胺為模板分子合成，專一識別萊克多巴胺，具有非常高的選擇性；該仿生抗體用化學合成方法制備，有較高的穩定性、較長的使用壽命和較強的抗惡劣環境能力。(2)本發明聚合反應的仿生抗體以膜的形式分布于96孔酶標板表面，印跡位點分布于分子印跡膜表面，使得模板分子容易洗脫，且傳質速度快。(3)本發明成本低廉，實驗操作簡單，反應條件容易控制，制得的萊克多巴胺分子印跡膜作為仿生抗體用于萊克多巴胺酶聯免疫分析，適用于各種動物源性食品中痕量萊克多巴胺檢測。
具體實施例方式下面結合實施例，對本發明進一步說明；下述實施例是說明性的，不是限定性的， 不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。本發明是將分子印跡技術與有機無機雜化法相結合，在96孔酶標板上合成對萊克多巴胺具有高選擇性吸附功能的仿生抗體，其具體實施例為(1)準確量取體積比為2: 1甲醇與甲苯的混合溶液6mL、萊克多巴胺0.338g、 甲基丙烯酸170 μ L置于圓底燒瓶中，超聲波脫氣5min后，在40°C水浴攪拌反應2h，加入 Y -甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷136 μ L和偶氮二異丁腈60mg，然后用8道微量可調移液器將所合成聚合物移到96孔酶標板中，在紫外燈下孵化12h ；(2)將上述的聚合產物用體積比為9 1的甲醇與冰乙酸混合溶液300mL作為萃取劑，超聲波連續萃取48h，然后用甲醇作為萃取劑，超聲波萃取12h，然后在40°C溫度條件下干燥10 12h，即得萊克多巴胺仿生抗體。
權利要求
1.一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其特征在于1)在甲醇和甲苯的混合溶劑中加入萊克多巴胺，甲基丙烯酸，超聲波脫氣5min后， 40°C水浴攪拌反應池，再加入Y-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷和偶氮二異丁腈，然后用8道微量可調移液器將所合成聚合物移到96孔酶標板中，在紫外燈下孵化12h ；2)將上述的聚合產物用甲醇與冰乙酸作為萃取劑，超聲波連續萃取48h，然后用甲醇作為萃取劑，超聲波萃取12h，然后在40°C溫度條件下干燥10 12h，即得萊克多巴胺仿生抗體。
2.根據權利要求1所述的一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其特征在于所述萊克多巴胺、甲基丙烯酸、Y-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷的摩爾比例為1 2 1。
3.根據權利要求1所述的一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其特征在于所述的反應溶劑甲醇與甲苯的體積比為2 1。
4.根據權利要求1所述的一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其特征在于所述的 96孔酶標板中聚合物溶液的添加量為50 μ L/每孔。
5.根據權利要求1所述的一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其特征在于所述的甲醇與冰乙酸的提取液中甲醇與冰乙酸的體積比為9 1。
全文摘要
本發明涉及一種萊克多巴胺仿生抗體的制備方法，其主要的技術要點是以萊克多巴胺為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，γ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷為交聯劑，96孔酶標板為載體，甲苯為致孔劑，利用分子印跡技術和有機無機雜化技術合成對萊克多巴胺具有高選擇性的仿生抗體。本發明成本低廉，合成過程簡單，反應條件容易控制，所制成的萊克多巴胺仿生抗體可用于萊克多巴胺仿生酶聯免疫分析，適用于對動物源性食品中痕量萊克多巴胺的檢測。
文檔編號C08J9/26GK102336859SQ20101023245
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月21日 優先權日2010年7月21日
發明者方國臻, 王俊平, 王碩, 路晉萍 申請人:天津科技大學