專利名稱：一種透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)是一種線性、無支鏈酸性粘多糖，由N-乙酰氨基 葡萄糖和D-葡萄糖醛酸反復(fù)交替組成，是一種價(jià)值很高的醫(yī)藥、化妝品原料。HA具有良好 的親水性、生物相容性和保濕功能，廣泛應(yīng)用于化妝品中，被譽(yù)為天然保濕因子。HA還具有 很好的生物相容性，在體內(nèi)不產(chǎn)生排異反應(yīng)。由于HA獨(dú)特的流變學(xué)性質(zhì)、潤滑性和生物相 容性等物理化學(xué)性質(zhì)，HA可作為彈性材料應(yīng)用于眼外科手術(shù)，治療骨關(guān)節(jié)疾病，并具有促進(jìn) 傷口愈合和一定抗癌效果。HA在藥物緩釋、術(shù)后防粘連和組織工程中也具有重要作用。但是，機(jī)械性質(zhì)較差、在體內(nèi)易被透明質(zhì)酸酶快速降解等缺陷限制了透明質(zhì)酸在 臨床應(yīng)用。為了改善HA的物理、化學(xué)穩(wěn)定性，同時(shí)保持其天然的生物相容性、生物可降解性 和體內(nèi)無排異的特性，人們采用多種途徑對其羥基和羧基進(jìn)行改性修飾?；瘜W(xué)改性方法包 括交聯(lián)、接枝、酯化和復(fù)合改性等。目前，由于復(fù)合改性往往能夠保持兩種原料的最初的特 性而受到人們的關(guān)注。對于復(fù)合改性而言，許多大分子物質(zhì)通過羧基或羥基與HA的羧基形 成交聯(lián)。成功復(fù)合交聯(lián)的物質(zhì)包括羧甲基纖維素鈉、膠原質(zhì)、明膠、聚乳酸、殼聚糖等。海藻 酸鈉(sodium alginate，簡稱SAL)是一種由α-L-古羅糖醛酸和β _D_甘露糖醛酸通過1， 4-糖苷鍵連接而成的酸性粘多糖，廣泛應(yīng)用于食品加工、醫(yī)藥領(lǐng)域，包括藥物緩釋載體、細(xì) 胞培養(yǎng)等。SAL具有良好的生物相容性，一旦形成凝膠后，便具有較好的機(jī)械性質(zhì)。SAL與 其他多糖，如殼聚糖、硫酸軟骨素等的復(fù)合物已見諸報(bào)道，也有人對SAL-HA的復(fù)合物進(jìn)行 了流變學(xué)的考察，但這種復(fù)合物僅是兩種高分子物質(zhì)的混合液。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種透明質(zhì)酸_海藻酸鈉復(fù)合水凝膠及其制備方法。本發(fā)明所提供的透明質(zhì)酸(HA)和海藻酸鈉(SAL)復(fù)合水凝膠是按照包括下述步 驟的方法制備的1)將透明質(zhì)酸和海藻酸鈉溶于水中，得到溶液1，2)將交聯(lián)劑加入所述溶液1中，并用緩沖溶液調(diào)節(jié)PH值為4. 0-5. 5，得到溶液2 ；3)向所述溶液2中加入羧基激活劑并攪拌，攪拌過程中用緩沖溶液調(diào)節(jié)所述溶液 2的pH值在2. 0-5. 5直至形成凝膠，即得到透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。上述溶液1中，透明質(zhì)酸和海藻酸鈉的質(zhì)量比可為1 4-4 1，優(yōu)選質(zhì)量比 為1 2。溶液1中，透明質(zhì)酸和海藻酸鈉的濃度之和可為0.5-1. 5g/100ml，優(yōu)選為 1.0g/100ml。上述步驟2)中所述交聯(lián)劑可選自下述至少一種己二酸二酰胼(ADH)，聚乙二醇 (PEG)，戊二醛和二乙烯基砜(GTA)，優(yōu)選為己二酸二酰胼(ADH)；所述交聯(lián)劑的加入量與所 述溶液1的配比可為0. lg-1. Og IOOmL,優(yōu)選為0. 52g IOOmL0
步驟3)中所述羧基激活劑可選自下述至少一種碳化二亞胺(EDC)，N-羥基琥珀 酰亞胺(NHS)和N，N，N"，N" —四甲基乙二胺(TEMED)，優(yōu)選為碳化二亞胺；所述碳化亞胺 的添加量與所述溶液2的配比可為lOmmol-lOOmmol 1L，優(yōu)選為50mmol IL0步驟3)中所述攪拌可在15°C -40°C條件下進(jìn)行，優(yōu)選為20°C -30°C ；所述攪拌過 程中需用緩沖溶液調(diào)控溶液2的pH值為2. 0-5. 5，優(yōu)選pH值為4. 75。攪拌時(shí)，攪拌的轉(zhuǎn)速 應(yīng)不宜過快，避免導(dǎo)致形成凝膠后變稀。上述步驟2)和步驟3)中所用的緩沖溶液相同，所述緩沖溶液可選自下述任意 一種磷酸鹽緩沖溶液，檸檬酸鹽緩沖溶液和醋酸鹽緩沖溶液；所述緩沖溶液的濃度可為
0.01-0. 5mol/L，pH值為2. 0-4. 5，優(yōu)選為醋酸鹽緩沖溶液，最優(yōu)選濃度為0. lmol/L，pH值為 3. 6的醋酸鹽緩沖溶液。本發(fā)明的方法還包括對步驟3)得到的透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠進(jìn)行洗滌 的步驟。洗滌次數(shù)不應(yīng)少于5次，洗滌時(shí)慢慢翻轉(zhuǎn)凝膠，以使殘余反應(yīng)雜質(zhì)溶于水中而去 除。本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸的分子量可為5.0X105Da_2. 1 X IO6Da,優(yōu)選分子量為
1.5 X IO6Da ；所用的海藻酸鈉粉末的粒度為50目-300目，優(yōu)選為200目。本發(fā)明是在羧基活化劑存在下，由分子結(jié)構(gòu)中具有兩個或兩個以上氨基的高聚物 或低聚物(交聯(lián)劑)與透明質(zhì)酸、海藻酸鈉進(jìn)行酰胺化反應(yīng)交聯(lián)而制得硬度、粘彈性較好的 透明質(zhì)酸_海藻酸鈉復(fù)合交聯(lián)物。獲得的復(fù)合交聯(lián)水凝膠具備HA和SAL的雙重優(yōu)點(diǎn)，一方 面，抗酶降解的能力得到提高，另一方面，水凝膠的機(jī)械性質(zhì)和質(zhì)構(gòu)特征得到改善。復(fù)合交 聯(lián)水凝膠的物理化學(xué)性質(zhì)改善后，具有作為真皮填充物和組織支架材料的潛在用途而用于 外科手術(shù)、組織工程領(lǐng)域。
圖1為本發(fā)明制備透明質(zhì)酸_海藻酸鈉復(fù)合水凝膠的工藝流程圖。圖2為實(shí)施例1制備的透明質(zhì)酸_海藻酸鈉復(fù)合水凝膠的紅外光譜圖。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如 無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實(shí)施例1、透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠的制備及其理化特性驗(yàn)證按照圖1所示的工藝流程圖制備透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠，具體步驟如下①多糖溶解分子量為1. 5 X IO6Da的透明質(zhì)酸(山東福瑞達(dá)生物化工有限公司) 和海藻酸鈉(粒徑為200目篩，10mg/ml的水溶液，在25°C時(shí)其粘度為205mPa *s，青島晶巖 生物科技有限公司)以1 2的比例(質(zhì)量比)溶于水中，令其總濃度為1.0% (g/100ml), 得到溶液1。②添加交聯(lián)劑并調(diào)節(jié)溶液pH 待步驟①中的多糖完全溶解后，將交聯(lián)劑ADH (北京 金源化學(xué)集團(tuán)有限公司)以0.52g 100ml的配比加入所述溶液1中，混合均勻。并對上 述混合溶液進(jìn)行PH調(diào)整，用0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液(pH 3. 6)調(diào)整pH至4. 75，得到溶液2。③添加羧基激活劑向溶液2加入EDC (上海共價(jià)化學(xué)有限公司)，使其EDC濃度 達(dá)到 50mmol/L。④攪拌進(jìn)行反應(yīng)并控制pH 對步驟③中的反應(yīng)液進(jìn)行攪拌并控制pH，加入EDC的 同時(shí)即開始進(jìn)行攪拌，攪拌速度不宜過快，避免形成的凝膠剪切變稀。在室溫下攪拌4h，反 應(yīng)過程中，通過滴加0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液使反應(yīng)液的pH值保持在4. 75，得到透明 質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。⑤凝膠洗滌對步驟④形成的復(fù)合水凝膠，用去離子水反復(fù)洗滌，洗滌次數(shù)應(yīng)不少 于5次，每次洗滌20分鐘以上，洗滌時(shí)慢慢翻轉(zhuǎn)凝膠，使殘余反應(yīng)雜質(zhì)溶于水中而去除。⑥凝膠保存對步驟⑤洗滌后的凝膠在4°C下保存。按照上述方法制得的透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠為無色，具有一定的硬度和 粘彈性。對透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠的特性進(jìn)行測定1、采用FT-IR光譜儀 (Nicolet Nexus, Thermo Electron, USA)測定是否形成共價(jià)鍵；2、采用掃描電鏡(Hitachi SEM-2500，Japan)觀察形成凝膠的微結(jié)構(gòu)；3、采用質(zhì)構(gòu)儀對凝膠的質(zhì)構(gòu)特征進(jìn)行測定(pre test speed 2. Omm/s, test speed 0. 8mm/s, post test speed 2. Omm/s, rupture test distance 4. 0%, distance 50%，temperature 25。C ·) 0紅外光譜圖見圖2，測定結(jié)果表明凝膠形成了新的共價(jià)鍵，透明質(zhì)酸和海藻酸鈉通 過己二酸二酰胼(ADH)交聯(lián)在一起。掃描電鏡表明，凝膠中形成較均勻而孔徑適宜的網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)。質(zhì)構(gòu)儀(Cns-Farnel 1, Britain)測得凝膠硬度為357. 06g，碎裂度為253. 56g，彈性 為 0. 961。溶脹試驗(yàn)真空凍干后的凝膠，稱重后置于去離子水中12h，用濾紙去除表面的水后，稱重，結(jié) 果表明，凝膠吸水可達(dá)自身重的40-50倍?？姑附到庠囼?yàn)?zāi)z樣品置于IOml酶活力為10U/ml的透明質(zhì)酸酶液中，每間隔3h從中取Iml上 清液進(jìn)行測定，然后補(bǔ)充Iml新配制的透明質(zhì)酸酶液至反應(yīng)體系中。測定方法如下5mL濃 H2SO4置于試管中并冷卻至4°C，ImL樣液或標(biāo)準(zhǔn)液小心地置于濃H2SO4層之上，開始輕輕振 搖，然后劇烈振搖，并使之在冰浴中不斷冷卻，接下來將試管在沸騰的蒸餾水中加熱lOmin， 然后冷卻至室溫，加入0. 2mL咔唑試液，再次搖勻，并在沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫， 將反應(yīng)液倒入Icm比色皿中，在530nm下測定吸光度(A530)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測定溶液中透 明質(zhì)酸含量。根據(jù)下列公式計(jì)算凝膠被透明質(zhì)酸酶分解的程度Wi = CiV+ Σ Ci-IVs其中，Ci和Cp1為凝膠在i和i-Ι時(shí)刻被分解下來的HA濃度(mg/ml)，V為酶液總 體積(IOml)，Vs為每次取出的樣品體積(Iml)。結(jié)果表明，隨著處理時(shí)間的延長，凝膠逐漸被透明質(zhì)酸酶分解，在第9h時(shí)，幾乎被 分解完全，而對照組的透明質(zhì)酸凝膠，在3h后即被分解完全。實(shí)施例2、透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠的制備及其理化特性驗(yàn)證按照圖1所示的工藝流程圖制備透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠，具體步驟如下
①多糖溶解分子量為5. OX IO5Da的透明質(zhì)酸(山東福瑞達(dá)生物化工有限公司) 和海藻酸鈉(粒徑為50目蹄，10mg/ml的水溶液，在25°C時(shí)其粘度為IOOmPa · s，青島晶巖 生物科技有限公司)以1 4的比例(質(zhì)量比)溶于水中，令其總濃度為0.5% (g/100ml), 得到溶液1。②添加交聯(lián)劑并調(diào)節(jié)溶液pH 待步驟①中的多糖完全溶解后，將交聯(lián)劑ADH (北京 金源化學(xué)集團(tuán)有限公司)以0. Ig IOOml的配比加入所述溶液1中，混合均勻。并對上述 混合溶液進(jìn)行PH調(diào)整，用0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液(pH 3. 6)調(diào)整pH至4. 75，得到溶 液2。③添加羧基激活劑向溶液2加入EDC (上海共價(jià)化學(xué)有限公司)，使其EDC濃度 達(dá)到 10mmol/L。④攪拌進(jìn)行反應(yīng)并控制pH 對步驟③中的反應(yīng)液進(jìn)行攪拌并控制pH，加入EDC的 同時(shí)即開始進(jìn)行攪拌，攪拌速度不宜過快，避免形成的凝膠剪切變稀。在室溫下攪拌4h，反 應(yīng)過程中，通過滴加0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液使反應(yīng)液的pH值保持在4. 75，得到透明 質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。⑤凝膠洗滌對步驟④形成的復(fù)合水凝膠，用去離子水反復(fù)洗滌，洗滌次數(shù)應(yīng)不少 于5次，每次洗滌20分鐘以上，洗滌時(shí)慢慢翻轉(zhuǎn)凝膠，使殘余反應(yīng)雜質(zhì)溶于水中而去除。⑥凝膠保存對步驟⑤洗滌后的凝膠在4°C下保存。按照上述方法制得的透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠為無色，具有一定的硬度和 粘彈性。紅外光譜測定表明，凝膠形成了新的共價(jià)鍵，透明質(zhì)酸和海藻酸鈉通過己二酸二 酰胼(ADH)交聯(lián)在一起。掃描電鏡表明，凝膠中形成較均勻而孔徑適宜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。質(zhì)構(gòu) 儀(Cns-Farnel 1, Britain)測得凝膠硬度為71. 02g，碎裂度為66. 89g，彈性為0. 97。溶脹試驗(yàn)真空凍干后的凝膠，稱重后置于去離子水中12h，用濾紙去除表面的水后，稱重，結(jié) 果表明，凝膠吸水可達(dá)自身重的55倍?？姑附到庠囼?yàn)?zāi)z樣品置于IOml酶活力為10U/ml的透明質(zhì)酸酶液中，每間隔3h從中取Iml上 清液進(jìn)行測定。結(jié)果表明，隨著處理時(shí)間的延長，凝膠逐漸被透明質(zhì)酸酶分解，在第6h時(shí)，幾乎被 分解完全，而對照組的透明質(zhì)酸凝膠，在3h后即被分解完全。實(shí)施例3、透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠的制備及其理化特性驗(yàn)證按照圖1所示的工藝流程圖制備透明質(zhì)酸_海藻酸鈉水凝膠，具體步驟如下①多糖溶解分子量為2. IXlO6Da的透明質(zhì)酸(山東福瑞達(dá)生物化工有限公司) 和海藻酸鈉(粒徑為300目篩，10mg/ml的水溶液，在25°C時(shí)其粘度為300mPa *s，青島晶巖 生物科技有限公司)以4 1的比例(質(zhì)量比)溶于水中，令其總濃度為1.5% (g/100ml), 得到溶液1。②添加交聯(lián)劑并調(diào)節(jié)溶液pH 待步驟①中的多糖完全溶解后，將交聯(lián)劑ADH (北京 金源化學(xué)集團(tuán)有限公司)以l.Og 100ml的配比加入所述溶液1中，混合均勻。并對上述 混合溶液進(jìn)行PH調(diào)整，用0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液(pH 3. 6)調(diào)整pH至4. 75，得到溶液2。③添加羧基激活劑向溶液2加入EDC (上海共價(jià)化學(xué)有限公司)，使其EDC濃度 達(dá)到 100mmol/L。④攪拌進(jìn)行反應(yīng)并控制pH 對步驟③中的反應(yīng)液進(jìn)行攪拌并控制pH，加入EDC的 同時(shí)即開始進(jìn)行攪拌，攪拌速度不宜過快，避免形成的凝膠剪切變稀。在室溫下攪拌4h，反 應(yīng)過程中，通過滴加0. lmol/L的HAc-NaAc緩沖液使反應(yīng)液的pH值保持在4. 75，得到透明 質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。⑤凝膠洗滌對步驟④形成的復(fù)合水凝膠，用去離子水反復(fù)洗滌，洗滌次數(shù)應(yīng)不少 于5次，每次洗滌20分鐘以上，洗滌時(shí)慢慢翻轉(zhuǎn)凝膠，使殘余反應(yīng)雜質(zhì)溶于水中而去除。⑥凝膠保存對步驟⑤洗滌后的凝膠在4°C下保存。按照上述方法制得的透明質(zhì)酸-海藻酸鈉復(fù)合水凝膠為無色，具有一定的硬度和 粘彈性。紅外光譜測定表明，凝膠形成了新的共價(jià)鍵，透明質(zhì)酸和海藻酸鈉通過己二酸二 酰胼(ADH)交聯(lián)在一起。掃描電鏡表明，凝膠中形成較均勻而孔徑適宜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。質(zhì)構(gòu) 儀(Cns-Farnel 1, Britain)測得凝膠硬度為209. 50g，碎裂度為190. 28g，彈性為1. 14。溶脹試驗(yàn)真空凍干后的凝膠，稱重后置于去離子水中12h，用濾紙去除表面的水后，稱重，結(jié) 果表明，凝膠吸水可達(dá)自身重的20倍?？姑附到庠囼?yàn)?zāi)z樣品置于IOml酶活力為10U/ml的透明質(zhì)酸酶液中，每間隔3h從中取Iml上 清液進(jìn)行測定。結(jié)果表明，隨著處理時(shí)間的延長，凝膠逐漸被透明質(zhì)酸酶分解，在第8h時(shí)，幾乎被 分解完全，而對照組的透明質(zhì)酸凝膠，在3h后即被分解完全。
權(quán)利要求
1.一種透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠的制備方法，包括下述步驟1)將透明質(zhì)酸和海藻酸鈉溶于水中，得到溶液1，2)將交聯(lián)劑加入所述溶液1中，并用緩沖溶液調(diào)節(jié)PH值為4.0-5. 5，得到溶液2 ；3)向所述溶液2中加入羧基激活劑并攪拌，攪拌過程中用緩沖溶液調(diào)控所述溶液2的 pH值在2. 0-5. 5，直至形成凝膠，即得到透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述溶液1中透明質(zhì)酸和海藻酸鈉的質(zhì) 量比為1 4-4 1，優(yōu)選質(zhì)量比為1 2;所述溶液1中透明質(zhì)酸和海藻酸鈉的濃度之和 為 0. 5-1. 5g/100ml，優(yōu)選為 1. 0g/100ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟幻中所述交聯(lián)劑選自下述至少 一種己二酸二酰胼，聚乙二醇，戊二醛和二乙烯基砜，優(yōu)選為己二酸二酰胼；所述交聯(lián)劑 的加入量與所述溶液1的配比為0. lg-l.Og IOOmL,優(yōu)選為0. 52g IOOmL0
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于步驟幻中所述羧基激活劑選自 下述至少一種碳化二亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺和N，N，N"，N" —四甲基乙二胺，優(yōu)選為碳 化二亞胺；所述碳化二亞胺的添加量與所述溶液2的配比為lOmmol-lOOmmol 1L，優(yōu)選為 5Ommol IL0
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于步驟3)中所述攪拌在 15°C -40°C條件下進(jìn)行，優(yōu)選為20°C -30°C ；所述攪拌過程中調(diào)控溶液2的pH值為4. 75。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于步驟2、和步驟幻中中所述緩 沖溶液相同，選自下述任意一種磷酸鹽緩沖溶液，檸檬酸鹽緩沖溶液和醋酸鹽緩沖溶液， 所述緩沖溶液的濃度為0. 01-0. 5mol/L, pH值為2. 0-4. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于步驟幻和步驟幻中中所述緩沖溶液為 醋酸鹽緩沖溶液，優(yōu)選為濃度為0. lmol/L、pH值為3. 6的醋酸鹽緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于所述透明質(zhì)酸的分子量為 5.0X105-2. IX IOfiDa,優(yōu)選分子量為1.5X IO6Da ；所述海藻酸鈉的粒度為50目-300目，優(yōu) 選為200目。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括對步驟幻得到 的透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠用水進(jìn)行洗滌的步驟。
10.權(quán)利要求1-9中任一所述方法制備得到的透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠及其制備方法。該復(fù)合水凝膠是按照包括下述步驟的方法制備得到的1)將透明質(zhì)酸和海藻酸鈉溶于水中，得到溶液1，2)將交聯(lián)劑加入所述溶液1中，并用緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值為4.0-5.5，得到溶液2；3)向所述溶液2中加入羧基激活劑并攪拌，攪拌過程中用緩沖溶液調(diào)控所述溶液2的pH值在2.0-5.5直至形成凝膠，即得到透明質(zhì)酸和海藻酸鈉復(fù)合水凝膠。本發(fā)明為透明質(zhì)酸的改性提供了新的途徑，用本發(fā)明方法制備的復(fù)合改性物具有較高的機(jī)械性能、抗透明質(zhì)酸酶降解能力、生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，在外科手術(shù)、組織工程方面有著潛在的用途。
文檔編號C08B37/04GK102070786SQ20091023760
公開日2011年5月25日 申請日期2009年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月19日
發(fā)明者劉麗, 劉紅芝, 王強(qiáng), 陳永浩 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所