專利名稱：一種制備中、低分子量硫酸軟骨素的方法及所得產物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法及所得產物，具體地講，本發明涉及一種分子量在2,000-30,000道爾頓之間的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法及所得產物。
背景技術：
硫酸軟骨素是一種以豬、牛、羊等動物的軟骨組織和鯊魚等水產品的軟骨為原材料，利用生化提取工藝技術制得的大分子的酸性粘多糖類。硫酸軟骨素的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋅鹽等廣泛應用于醫藥、保健產品、食品、化妝品、寵物飼料等，例如硫酸軟骨素可以作為降血脂藥，用于臨床治療高血脂癥，而硫酸軟骨素A鈉注射液則具有降低血脂、抗動脈粥樣斑塊形成、抗凝以及降低機體耗氧量的作用，可以用于治療動脈粥樣硬化疾病、心絞痛、高血脂癥等。硫酸軟骨素具有多種生理功能，在維持組織和免疫機能上起著重要作用，可以用于防治冠心病、治療偏頭痛等神經性疼痛、改善老年性關節功能退化等。
現在市售的硫酸軟骨素藥品主要有口服固體劑型(片劑、膠囊劑)、注射劑、滴眼劑等藥品。所有藥品采用的原料藥，均為分子量波動范圍較大的硫酸軟骨素A與硫酸軟骨素C的水溶性聚合體，或者為硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C的鈉鹽。
硫酸軟骨素產品通常是以一種平均分子量約40,000-50,000道爾頓的水溶性聚合物形式存在。其中，硫酸以醚鍵連接在重復結合起來的二糖上。硫酸軟骨素產品通常為硫酸軟骨素A和硫酸軟骨素C這兩種主要構型的混合物。
硫酸軟骨素的生產方法主要有三種酸降解、堿降解、酶解法，以其鈉鹽較為常見，還可根據需要，生產硫酸軟骨素鉀鹽、鈣鹽或鋅鹽，如CN 99112553.3和CN 99112554.1中公開了硫酸軟骨素及其生產方法。不同工藝方法生產的硫酸軟骨素分子量不同，一般在20,000-50,000道爾頓之間。普通硫酸軟骨素藥品存在分子量波動大、口服吸收差、生物利用度低、療效不穩定等缺點。但迄今為止，對于硫酸軟骨素藥品的分子量范圍，仍沒有明確的國家藥品標準要求。
一般來說，低分子量硫酸軟骨素是指平均分子量小于10,000道爾頓的硫酸軟骨素；中分子量硫酸軟骨素則是指平均分子量在10,000-30,000道爾頓范圍的硫酸軟骨素；普通分子量硫酸軟骨素產品的平均分子量均大于30,000道爾頓。表1給出了各種市售硫酸軟骨素原料的平均分子量。最近，我們用GPC法(中國藥典2000年版二部附錄VH)檢測了國內不同公司生產的普通分子量硫酸軟骨素產品十四份，包括牛、豬、鯊魚硫酸軟骨素，平均分子量在47,500-85,000道爾頓之間，我們很容易得出這樣的結論目前我國生產并主要出口國際市場的普通硫分子量酸軟骨素產品，普遍存在分子量波動大、口服吸收差、生物利用度低、療效不穩定等缺點。
表1市售硫酸軟骨素原料的平均分子量樣品編號 軟骨來源及純度 平均分子量1牛，90％ 69,4002鯊魚，90％85,7003牛，90％ 57,6004牛，90％ 59,9005牛，90％ 54,8006鯊魚，90％83,4007牛，90％ 59,9008牛，90％ 62,5009牛，85％ 45,70010 牛，90％ 51,10011 牛，90％ 73,60012 牛，95％ 51,10013 鯊魚，90％47,50014 牛，90％ 62,400藥用硫酸軟骨素原料的生產工藝和技術，通常必須得到國家藥品行政管理部門的正式批準，所生產的硫酸軟骨素藥用注射原料的平均分子量在5,000-50,000道爾頓之間，硫酸軟骨素A的平均分子量為50,000道爾頓，硫酸軟骨素C的平均分子量為25,000道爾頓。現有的硫酸軟骨素A鈉注射劑等藥品仍然由分子量波動范圍較大的硫酸軟骨素原料藥制備而得。
硫酸軟骨素的生物活性隨分子量不同而各異，其藥理活性與分子量有著密切的關系。美國專利US3,405,120已證明，中、低分子量的硫酸軟骨素的藥理活性較普通分子量的軟骨素強，對防治動脈粥樣硬化、風濕性炎癥和傷口愈合等具有更好的療效。國外已經有低分子量硫酸軟骨素的制備方法，包括酸水解法(美國專利US3,405,120)、離子交換樹脂法(日本特許70-04734、74-30817)和酶解法(日本專利申請平8-518573)等。例如，美國專利US3,405,120中公開的酸水解法可以用于制備低分子量的硫酸軟骨素，該方法通過對酸水解過程中的水解溫度、水解時間、酸的濃度、水解的pH值等條件進行控制，而得到低分子量的硫酸軟骨素。但是，一方面，該專利并未公開中分子量的硫酸軟骨素制備過程中所需的酸水解條件；另一方面，在該專利所公開的方法步驟中，進行結晶沉淀之前沒有脫除雜蛋白的步驟，而且其分子量的控制完全是由反應條件所決定的，實際上任何反應條件下都不能保證不生成其它分子量的硫酸軟骨素，所以該專利所制備的產品純度不夠。
現代醫學實驗已經證實，分子量較小的硫酸軟骨素比分子量較大的硫酸軟骨素，更易被人體吸收，如口服給藥后，分子量較小的硫酸軟骨素較容易被胃腸吸收。美國馬里蘭大學以Caco-2細胞為吸收模型，對本班牙Bioiberica公司生產的平均分子量為16,900、8,000、4,000道爾頓的原料樣品進行了實驗研究(Spring 2000，Vol.3，No.1JANA)。代表胃腸吸收率的細胞膜滲透系數(PermeabilityCoefficient)分另為10.1×106cm/sec、12.5×10-6cm/sec和16.2×10-6cm/sec。而目前市售的幾種普通分子量硫酸軟骨素原料的細胞膜滲透系數則分別為0.00、1.03、3.63×10-6cm/sec。這種實驗的結果表明，中、低分子量硫酸軟骨素產品的體內吸收均明顯優于普通分子量的產品，分子量越小吸收率越高。
迄今為止，尚沒有一種既可以隨心所欲地調節分子量大小、又能充分保證質量純度的、適于制備中、低分子量硫酸軟骨素的方法。
發明內容
本發明目的之一是提供一種制備中、低分子量硫酸軟骨素的方法，該方法可以制備生物利用度高、純度高的低分子量的硫酸軟骨素或其鹽，而且所得產品的分子量大小可以根據需要進行相對精確地調節。
在本發明中，制備中、低分子量硫酸軟骨素的方法包括如下步驟(2)將普通分子量的硫酸軟骨素進行酸水解；(3)上述酸水解后的產物進行堿中和，調節至pH＝8-11的堿性條件下，然后進行離心分離，除去雜蛋白的沉淀；(4)將上述步驟(2)所得的上清液調pH至中性，然后采用超濾膜進行單級超濾或多級超濾，截留除去大分子量的硫酸軟骨素和雜質；(5)將步驟(3)所得的濾液用納濾膜進行納濾濃縮，截留脫除平均分子量小于2,000道爾頓的硫酸軟骨素和雜質；(6)將步驟(4)所得的濃縮液進行噴霧干燥或者加入乙醇進行結晶沉淀，得到中、低分子量硫酸軟骨素；本發明中，所說的硫酸軟骨素可以是選自于硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素A的鈉鹽、硫酸軟骨素A的鉀鹽、硫酸軟骨素A的鈣鹽、硫酸軟骨素A的鋅鹽、硫酸軟骨素A的鐵鹽、硫酸軟骨素A的鎂鹽、硫酸軟骨素A的鋁鹽、硫酸軟骨素B、硫酸軟骨素C、硫酸軟骨素C的鈉鹽、硫酸軟骨素C的鉀鹽、硫酸軟骨素C的鈣鹽、硫酸軟骨素C的鋅鹽、硫酸軟骨素C的鐵鹽、硫酸軟骨素C的鎂鹽和硫酸軟骨素C中的一種或其中幾種的混合物，優選是選自于硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素A的鈉鹽、硫酸軟骨素A的鉀鹽、硫酸軟骨素A的鈣鹽、硫酸軟骨素C、硫酸軟骨素C的鈉鹽、硫酸軟骨素C的鉀鹽和硫酸軟骨素C的鈣鹽中的一種或其中幾種的混合物。
上述方法中，步驟(1)中的普通分子量的硫酸軟骨素可以是市售的硫酸軟骨素。如果采用的是市售的硫酸軟骨素粗品，則可以直接進行酸水解。當然，也可以直接由動物軟骨組織進行制備，先通過堿液提取、酶解等方法得到硫酸軟骨素粗品，再進行酸水解。這樣，在酸水解之前可以包括堿液提取和/或酶解等步驟，但這些步驟不是必需的。
上述步驟(1)中酸水解所使用的酸可以是選自于鹽酸、硫酸、硝酸和草酸中的一種，而且最好選用酸度較高的水解條件，例如選用濃度為0.1-5N的酸。酸水解的作用是得到中、低分子量的硫酸軟骨素。如果用市售硫酸軟骨素進行酸水解，則酸水解溫度可以控制在40-90℃范圍內，優選為50-80℃。水解時間一般可以控制在1-28小時內，優選為2-8小時。溫度太高時水解反應的速度過快，不利于中分子量硫酸軟骨素的生成。因此，如果目的產物是中分子量硫酸軟骨素，則應選擇相對較低的水解溫度和相對較短的反應時間；如果目的產物是低分子量硫酸軟骨素，則應選擇相對較高的水解溫度和相對較長的反應時間。
實際上，步驟(1)除了采用酸水解法以外，還可以采用其他方法，例如離子交換樹脂法、酶解法等。
上述步驟(2)中，先用堿性物質將步驟(1)酸水解產物的pH值調至弱酸性范圍可以終止酸水解反應，所用的堿性物質可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鈣、碳酸氫鈉等，優選為碳酸氫鈉、碳酸鈉等弱堿；然后，繼續調節至pH＝8-11，保溫放置1-2小時，待堿性蛋白沉淀析出后，然后進行離心分離，除去雜蛋白的沉淀，尤其是除去堿性雜蛋白的沉淀。離心分離時，優選使用連續流離心機進行雜蛋白的分離。與傳統的濾布、馬槽過濾法相比，這種分離方式的效果好、損耗低、生產效率高。
上述步驟(3)中，超濾的作用是除去低分子量硫酸軟骨素中的大分子雜質，例如蛋白質、多糖等，并截留分子量不合要求的硫酸軟骨素。所謂的超濾(簡稱UF)是指以壓力為推動力，利用超濾膜的不同孔徑對液體進行分離的物理篩分過程。超濾的截留分子量(CWCO)一般為6,000到50萬。實際上，超濾和納濾(NF)都屬于膜分離技術，即利用分離膜對混合物中各組分的選擇滲透作用性能的差異，以外界能量或化學位差為推動力對雙組分或多組分混合的氣體或液體進行分離、分級、提純和富集的方法。超濾使用的濾膜能截留不同分子量大小的雜質，截留的平均分子量范圍在3,000-50,000道爾頓左右。由于中、低分子量硫酸軟骨素的黏度相對較大，對超濾膜的污染較為嚴重。因此，優選采用聚丙烯腈膜、硫化聚砜膜等。
上述步驟(3)中的超濾可以是單級超濾或者多級超濾。優選采用多級超濾，如三級超濾，因為多級超濾可以更有效地起到除雜和截留大分子量硫酸軟骨素的作用。
步驟(3)中所述的超濾膜可以選擇截留分子量在2,000-30,000道爾頓之間的超濾膜。
如果目的產物是中分子量硫酸軟骨素，則步驟(3)中應選擇截留分子量在10,000-30,000道爾頓之間的超濾膜。例如，生產20,000-30,000道爾頓之間的硫酸軟骨素時，可以選則截留分子量為20,000道爾頓的超濾膜和截留分子量為30,000道爾頓的超濾膜，分別進行超濾，使得經過步驟(3)之后，濾液中的硫酸軟骨素基本上為20,000-30,000道爾頓的中分子量硫酸軟骨素。
如果目的產物是低分子量硫酸軟骨素，則步驟(3)中應選擇截留分子量在2,000-10,000道爾頓之間的超濾膜。例如，生產3,000-6,000道爾頓之間的硫酸軟骨素時，可以選則截留分子量為3,000道爾頓的超濾膜和截留分子量為6,000道爾頓的超濾膜，分別進行超濾，使得經過步驟(3)之后，濾液中的硫酸軟骨素基本上為3,000-6,000道爾頓的中分子量硫酸軟骨素。
所以，只要能夠得到各種截留分子量的超濾膜，那么就可以精確地制備各種分子量范圍的中、低分子量的硫酸軟骨素。利用截留分子量不同的超濾膜，可以分離出不同分子量范圍的中、低分子量的硫酸軟骨素產品，例如可以制備分子量分別為2,000-4,000、5,000-7,000、10,000-14,000、18,000-20,000、24,000-26,000道爾頓的硫酸軟骨素。
上述步驟(4)中的納濾可以起到濃縮、除去小分子雜質如鹽類的作用。所謂納濾(簡稱NF)是指分離膜的孔徑處于納米級，適宜于分離分子量在200～2,000、分子尺寸約為1nm的溶解組分的膜工藝。NF膜分離需要的跨膜壓差一般為0.5～2.0MPa，比用反滲透膜達到同樣的滲透能量所必需施加的壓差低0.5～3MPa。根據操作壓力和分離界限，可以定性地將NF排在反滲透和超濾之間，也有人把NF稱為″低壓反滲透″或″疏松反滲透″。NF技術發展很快，NF膜組件于80年代中期已經商品化。納濾的截留能力大于超濾，能截留平均分子量在200-2,000道爾頓左右的物質。與超濾和反滲透相比，納濾的優點是既能截留透過超濾膜的那部分小分子量的有機物，又能透析反滲透膜所截留的無機鹽——即濃縮與脫鹽同步進行；而且在同等的外加壓力下，納濾的通量要比反滲透大得多；當通量一定時，納濾所需的壓力要比反滲透的低得多。所以用納濾方法替代反滲透方法，“濃縮”過程可更有效、快速地進行，并達到較大的“濃縮”倍數。單純采用超濾，即使是多級超濾也只能起到濃縮的作用而達不到除鹽的目的，并且濃縮的效率低。因此，本發明采用納濾的方法進行濃縮、除鹽，要比超濾更為有效、簡便、快捷，大大提高了工業化生產的效率。
優選地，上述步驟(4)中的納濾濃縮是截留脫除平均分子量小于2,000道爾頓的硫酸軟骨素和雜質，尤其是除去無機鹽和水分。
上述步驟(5)中，通過納濾得到的低分子量硫酸軟骨素濃縮液，可以直接干燥，如采用噴霧法進行干燥；也可以在濃縮液中添加乙醇(2-8倍)等有機溶劑進行結晶沉淀，然后進行干燥。如果選用乙醇法進行沉淀，則乙醇的濃度優選為95％。干燥時優選采用真空干燥。與傳統的乙醇沉淀、結晶、干燥工序相比，噴霧干燥法具有生產效率高、損耗低、產品無乙醇殘留、水分易于控制、便于工業化生產、便于進行制劑半成品的深加工等優點。
本發明的另一個目的是提供一種平均分子量在10,000-30,000道爾頓之間的中分子量的硫酸軟骨素產品，該產品采用以上所述的方法進行制備，可以用于制備各種中分子量硫酸軟骨素的口服劑型，例如片劑、膠囊、口服液和顆粒劑。該口服劑型應該包含中分子量硫酸軟骨素、中分子量硫酸軟骨素的鹽、藥物中可以接受的輔料的一種或幾種，還可以與其它無配伍禁忌的藥物制成復方制劑。
本發明的又一個目的是提供一種平均分子量在2,000-10,000道爾頓之間的低分子量的硫酸軟骨素產品，該產品采用以上所述的方法進行制備。更優選地，本發明可以采用以上所述的方法制備平均分子量在2,000-8,000道爾頓之間的低分子量的硫酸軟骨素產品。本發明所得的低分子量硫酸軟骨素純度高、分子量分布窄，不僅可以用于制備各種口服劑型，也可以用于制備各種注射劑型。
本發明的方法采用超濾膜、納濾膜法分級純化硫酸軟骨素，具有高效、節能、無污染等特點，所得產品純度高，而且可以隨意控制產品的分子量分布。
以下結合實施例，來進一步說明本發明，但本發明不局限于這些實施例，任何在本發明基本精神上的改進或替代，仍屬于本發明權利要求書中所要求保護的范圍。
具體實施例方式
實施例1中分子量硫酸軟骨素的制備將4.5升去離子水置于玻璃燒杯中，水浴加熱至70℃，加入250克市售硫酸軟骨素(平均分子量48,000道爾頓)，攪拌溶解，溶液加入36％鹽酸145亳升，加入去離子水至5升，使溶液的鹽酸度約為0.3N。保溫并攪拌反應6小時后，迅速冷卻，加入10％氫氧化鈉水溶液，使溶液的pH在10.5左右，然后用離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用截留分子量10,000道爾頓的超濾元件(聚砜中空纖維超濾膜，上海一鳴過濾技術有限公司)進行三級超濾，然后用納濾元件(國家海洋局杭州水處理技術開發中心)進行濃縮，濃縮液加入95％乙醇結晶，60℃真空干燥，得到215.6克白色分子量硫酸軟骨素(平均分子量11,200)。
實施例2中分子量硫酸軟骨素的制備將4.5升去離子水置于玻璃杯中，水浴加熱至80℃，加入300克市售硫酸軟骨素(平均分子量48,000道爾頓)粗品，攪拌溶解，溶液加入45克草酸，加入去離子水至5升，使溶液的草酸濃度約為0.1N。保溫并攪拌反應8小時后，迅速冷卻，加入50克碳酸鈣，使溶液的pH在9.5左右，然后用離心機除去雜蛋白的沉淀和草酸鈣沉淀。所得的上清液，用截留分子量20,000道爾頓的超濾膜過濾，納濾膜進行濃縮，濃縮液加入95％乙醇結晶，60℃真空干燥，得到276.8克白色分子量硫酸軟骨素(平均分子量16,300)。
實施例3中分子量硫酸軟骨素的制備將650升去離子水置于還夾層反應罐內，加熱到73℃，加入40公斤市售普通分子量硫酸軟骨素(平均分子量48,000道爾頓)粗品，攪拌溶解，溶液加入36％鹽酸11.2升，使溶液的鹽酸濃度約為0.2N。保溫并攪拌反應4小時后，迅速冷卻，加入7.0公斤碳酸鈉，使溶液的pH在10.5左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用截留分子量20,000道爾頓的超濾膜過濾，納濾膜進行濃縮，濃縮液進行噴霧干燥，得到37公斤白色中分子量硫酸軟骨素(平均分子量19,400)實施例4中分子量硫酸軟骨素的制備將經粉碎的新鮮動物軟骨(牛氣管)40公斤置夾層反應鍋內，加入100升20％氫氧化鈉溶液，40℃攪拌提取4小時后過濾，殘渣用適量的堿液再次提取，合并兩次濾液。用HCl調節pH至8.0-9.0，加入0.5％胰酶，45-48℃水解4-6小時，HCl調節pH至6.5-7.0，加熱至70-80℃，加入白陶土或滑石粉、活性炭攪拌吸附30分鐘，過濾。將上述濾液用納濾設備濃縮，使硫酸軟骨素的濃度為5％左右，加入適量濃鹽酸，使水解液的酸度為0.3N，在75℃條件下，攪拌水解5小時，用碳酸鈉調節pH至10.0左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用截留分子量為20,000的超濾裝置進行三級超濾，納濾濃縮、除鹽，進行噴霧干燥，得到平均分子量為13,500道爾頓中分子量硫酸軟骨素產品1.05公斤。
實施例5低分子量硫酸軟骨素的制備將1,300升去離子水置于夾層反應罐內，加熱至65℃，加入30公斤市售硫酸軟骨素(平均分子量59,000道爾頓)粗品，攪拌溶解，溶液加入36％鹽酸26升，加入去離子水至1500升，使溶液的鹽酸濃度約為0.2N。保溫并攪拌反應10小時后，迅速冷卻，加入4％氫氧化鈉水溶液，使溶液的pH值在9.0左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用超濾膜進行過濾，再用納濾膜進行濃縮，濃縮液進行噴霧干燥，得到27.6公斤白色低分子量硫酸軟骨素(平均分子量3700道爾頓)。
實施例5低分子量硫酸軟骨素的制備將1,300升去離子水置于夾層反應罐內，加熱至80℃，加入30公斤市售硫酸軟骨素(平均分子量51,000道爾頓)粗品，攪拌溶解，溶液加入13.5公斤草酸，加入去離子水至1500升，使溶液的鹽酸濃度約為0.1N。保溫并攪拌反應12小時后，迅速冷卻，加入16公斤碳酸鈣，分離草酸鈣沉淀后，使溶液的pH值在9.5左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用超濾膜過濾，納濾膜進行濃縮，濃縮液加入3倍量的95％乙醇，結晶，干燥，得到22.8公斤白色低分子量硫酸軟骨素(平均分子量6300道爾頓)。
實施例7低分子量硫酸軟骨素的制備將650升去離子水置于夾層反應罐內，加熱至73℃，加入40公斤市售硫酸軟骨素(平均分子量51,000道爾頓)粗品，攪拌溶解，溶液加入36％鹽酸11.2升，加入去離子水至1,500升，使溶液的鹽酸濃度約為0.2N。保溫并攪拌反應8.5小時后，迅速冷卻，加入6.8公斤碳酸鈉，使溶液的pH值在10.0左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液用超濾膜過濾，納濾膜進行濃縮，濃縮液進行噴霧干燥，得到37公斤白色低分子量硫酸軟骨素(平均分子量4400道爾頓)。
實施例8低分子量硫酸軟骨素的制備按常規方法由粉碎的動物軟骨，經堿提取、酸中和、酶水解后，加入36％的鹽酸，使溶液的酸度在0.1-5N，在35-95℃的條件下，酸水解3-12小時，加堿使溶液的pH值在10.5左右，然后用連續流離心機除去雜蛋白的沉淀。所得的上清液進行超濾，除去大分子雜質，再進行納濾濃縮后，最后進行噴霧干燥，得到平均分子量小于10,000道爾頓的低分子量硫酸軟骨素產品。
權利要求
1.一種中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，所說的中、低分子量硫酸軟骨素是平均分子量在2,000-30,000道爾頓范圍內的硫酸軟骨素，所說的方法包括如下步驟(1)將普通分子量的硫酸軟骨素進行酸水解；(2)將上述酸水解后的產物進行堿中和，調節至pH＝8-11的堿性條件下，然后進行離心分離，除去雜蛋白的沉淀；(3)將上述步驟(2)所得的上清液調pH至中性，然后采用超濾膜進行單級超濾或多級超濾，截留除去大分子量的硫酸軟骨素和雜質；(1)將步驟(3)所得的濾液用納濾膜進行納濾濃縮，截留截留脫除平均分子量小于2,000道爾頓的硫酸軟骨素和雜質；(4)將步驟(4)所得的濃縮液進行噴霧干燥或者加入乙醇進行結晶沉淀，得到中、低分子量的硫酸軟骨素。
2.如權利要求1所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的普通分子量的硫酸軟骨素是市售的硫酸軟骨素或者是直接由動物軟骨組織制得的。
3.如權利要求1或2所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(1)中酸水解所使用的酸是選自于鹽酸、硫酸、硝酸和草酸中的一種，其濃度為0.1-5N，酸水解的溫度控制在40-90℃的范圍內。
4.如權利要求1或2所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的離心分離是在連續流離心機中進行的。
5.如權利要求1或2所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所速的超濾是采用超濾膜進行三級超濾。
6.如權利要求1或2所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的超濾膜的截留的分子量在2,000-30,000道爾頓之間。
7.如權利要求1或2所述的中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的納濾濃縮是采用納濾膜截留脫除平均分子量小于1,500道爾頓的硫酸軟骨素和雜質；
8.一種按照權利要求1-7之一所述方法制得的中分子量硫酸軟骨素，該中分子量硫酸軟骨素的平均分子量在10,000-30,000道爾頓之間。
9.一種按照權利要求1-7之一所述方法制得的低分子量硫酸軟骨素，該低分子量硫酸軟骨素的平均分子量在2,000-10,000道爾頓之間。
10.如權利要求9所述的低分子量硫酸軟骨素，其特征在于，所述低分子量硫酸軟骨素的平均分子量在2,000-8,000道爾頓之間。
全文摘要
本發明公開了一種中、低分子量硫酸軟骨素的制備方法及所制得的硫酸軟骨素。本發明的制備方法主要包括以下步驟酸水解、堿中和、分離、超濾、納濾、噴霧干燥或者加入乙醇進行結晶沉淀。本發明采用超濾和納濾的方法，基本上可以隨心所欲地制備2,000－30,000道爾頓范圍內的、任何分子量分布的中、低分子量硫酸軟骨素；而且本發明的連續流分離技術和噴霧干燥技術具有高效、節能、無污染等特點，所得的產品純度高，而且便于人體的吸收和利用。
文檔編號C08B37/00GK1513883SQ20031011930
公開日2004年7月21日 申請日期2003年12月3日 優先權日2003年5月7日
發明者湯毅, 湯 毅 申請人:湯毅, 湯 毅