一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法

專利名稱：一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切地說它是一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物。
癌癥是一種不易治愈的惡性腫瘤，雖然目前有很多治療癌癥的藥物和方法，如化學療法，放射療法和中醫藥療法，但是化學療法和放射療法的副作用較大，長期使用后造成病人抵抗力下降，會發生厭食和脫發現象，病人難以忍受化疔和放疔過程中產生的副作用，病人的生存質量并沒有得到較大的提高，中醫療法雖然副作用較低，但療效不夠顯著，對中晚期癌癥患者的療效不夠明顯。因而開發療效顯著適合各期癌癥病人的中藥是治療癌癥的一個發展方向。真菌的孢子或者菌絲的形態變形可以作為篩選活性化合物的指標，這些形態上的異常包括卷曲、膨脹、高度分支、念球形成以及生長受到抑制(Richmond，D.V.Adv.Appl.Microbiol.1975，19，289，Brain，P.W.Ann.Bot.1949，13，59，Betina，V.and Micekova，D.z.Allg.Mikrobiol.1973，13，287；Isono，K，Kobinata，K.and Suzuki，S.Agric.Biol.Chem.1968，32，792)。小林久芳等人以植物病原真菌稻瘟霉pyricularia oryzae菌絲形態變形為篩選指標，建立了一種用于篩選真菌二次代謝產物中抗真菌、抗癌化合物的定量活性篩選模型(Kobayashi，H.，Nanikoshi，M，Yoshimoto，T.and YokochiT.J.Antibiotics1996，49，873)，并且獲得細胞毒活性很強的rhizoxin(Tsuruo，T.，Oh-hara，T.，Iida，H.，Tsukagoshi，S.，Sato，Z.，Matsuda，I.，Iwasaki，S.，Okuda，S.，Shimizu，F.，Sasagawa，K，Fukami，M，Fukuda，K.and Arakawa，MCancer Res.1986，46，381)和抗真菌活性很強的fusarielinA(Kobayashi，H.，Sunaga，R.，Furihata，K，Morisaki，N.and Iwasaki，S.J.Antibiotics1995，48，42)。作者首次將該活性模型用于中草藥的活性篩選中。根據上數模型可以研究出一種以植物和中草藥為原料提取一種治療癌癥的甾體皂甙化合物。
本發明的目的是提供一種以植物和中草藥為原料提取出一種能夠治療癌癥的甾體皂甙類化合物，它不但對各種癌癥有較好的療效，而且長期使用還無毒副作用。
本發明的目的是通過如下方案實現的，它是以植物和中藥材為原料提取的化合物，其特征在于將植物或中藥材經乙醇提取，再用正丁醇萃取，再利用包括吸附樹脂柱層析、真空液相柱層析、硅膠柱層析、Sephadex柱層析、中低壓柱層析以及制備型高壓液相(HPLC)柱層析等分離手段，從天然植物或者中藥中獲得的具有通式(Ⅰ)、(Ⅱ)甾體皂甙類化合，或者通過合成以及半合成手段獲得具有通式(Ⅰ)、(Ⅱ)的甾體皂甙類化合物，通式(Ⅰ)、(Ⅱ)化合物的結構如下
通式(I)中R1＝由單糖、雙糖、三糖、四糖、五糖、六糖所組成的各種形式的直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄搪(β-D-glucose)、a-D-葡萄糖(a-D-glucose)、a-L-鼠李糖(a-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-glucose)、a-D-半乳糖(a-D-glucose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、a-D-甘露糖(a-D-mannose)、a-D-阿拉伯糖(a-D-arabinose)、β-D-阿拉伯糖(β-D-arabinose)、a-D木糖(a-D-xylose)、β-D-木糖(β-D-xylose)、a-D-核糖(a-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、a-D-來蘇糖(a-D-lyxose)、β-D-來蘇糖(β-D-lyxose)、a-L-夫糖(a-L-fucose)。
R2＝CH3，CH2OH，=CH2X=O，NC25為R構型或者S構型通式(II)中R1＝由單糖、雙糖、三糖、四糖、五糖、六糖所組成的各種形式的直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、a-D-葡萄糖(a-D-glucose)、a-L-鼠李糖(a-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-galactose)、a-D-半乳糖(a-D-galactose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、a-D-甘露糖(a-D-mannose)、a-D-阿拉伯糖(a-D-aradinose)、β-D-阿拉伯糖(β-D-aradinose)、a-D-木糖(a-D-xylose)、β-D-木糖(β-D-xylose)、a-D-核糖(a-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、a-D-來蘇糖(a-D-lyxose)、β-D來蘇糖(β-D-lyxose)、a-L-夫糖(a-L-fucose)。
R2＝CH3，CH2OH，＝CH2R3＝H，CH3C22為R構型或者S構型C25為R構型或者S構型采用上述化合物的單體或選擇其中任意兩個或多個單體以任意比例進行組合的復方形式，使之與適宜的賦形劑相結合按常規方法制成的口服給藥的內用劑型及非口服給藥的注射劑和外用劑型。
所用活性物質為通式為(Ⅰ)中，R1＝-β-D-Glc-a-L-RhaR2＝CH3，X＝N，C25為R構型的化合物-β2-solamargine。
所用活性物質為通式(Ⅰ)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH3，X＝N，C25為R構型的化合物-solamargine。
所用活性物質為通式(Ⅰ)中，R1＝-β-D-Glc-a-L-RhaR2＝CH3，X＝O，C25為R構型的化合物-prosapogenin A of dioscin。
所用活性物質為通式(I)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH3，X＝O，C25為R構型的化合物-dioscin。
所用活性物質為通式(I)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<
β-D-GlcR2＝CH3，X=O，C25為R構型的化合物-gracillin。
所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH3，R3=H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-protoneodioscin所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH3，Ra=H，C22和C25均為R構型的化合物-protoneodioscin。
所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
β-D-GlcR2＝CH3，R3＝H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-protoneogracillin。
所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
β-D-GlcR2＝CH3，R3＝H，C22和C25均為R構型的化合物-protogracillin。
所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH8，R3＝CH8，C22為R構型或者S構型，C25為S構型的化合物-methylprotoneodioscin。所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
β-L-RhaR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotoneodioscin。所用活性物質為通式(II)中，
α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
β-D-GlcR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotoneogracillin。
所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<
α-D-GlcR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotogracillin。所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<
α-L-RhaR2＝CH2OH，R3＝H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-hypoglaucinF。
所述劑型為片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑。
所述賦型劑為淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素。
本發明的優點是對各期癌癥病人均有較好的療效，同時長期使用無毒副作用，還可與各種賦型劑結合，可以制成口服給藥的劑型也可以制成非口服給藥的注射劑型和外用劑型，因而使用方便，可以根據病人的不同情況因病施治，以取得較好的療效。
下面結合附圖和實施例對本發明進行進一步詳細的描述。


圖1為甾體皂甙化合物gracillin體外抑瘤量效關系圖實施例1.甾體皂甙化合物solamargine的提取分離茄科植物Solanum lyratum的干燥全草1kg用60％乙醇室溫浸提，濃縮浸提液得乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用正丁醇萃取，得到相應的正丁醇萃取物10.7g。經硅膠柱層析，梯度洗脫得到5個流分RB-1～RB-5。其中RB-3經硅膠柱層析和制備薄層層析得化合物solamargine(57.7mg)。
2.甾體皂甙化合物prosapogeninA of dioscin，dioscin,gracillin和protogracillin的提取分離姜科植物Costus speciosus的干燥根莖1kg用60％乙醇室溫浸提，濃縮浸提液得乙醇提取物得到95g乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用正丁醇萃取，得到相應的正丁醇萃取物8.5g。經硅膠柱層析梯度洗脫得4個流分DB-l～DB-4。DB-2經硅膠柱層析得到單體化合物prosapogeninA of dioscin(20.7mg)，dioscin(22.8mg)，gracillin(32.9mg)和protogracillin(245mg)。
3.實施例1、2中甾體皂甙化合物solamargine，prosapogeninA of dioscin，dioscin，gracillin和protogracillin的結構鑒定。
利用光譜技術，包括紫外、紅外、質譜及核磁共振譜分析(1D-NMR和2D-NMR)，鑒定了實施例1、2中甾體皂甙化合物solamargine，prosapogeninA of dioscin，dioscin，gracillin和protogracillin的結構。運用2D-NMR技術，尤其是通過HMBC譜解決了甾體皂甙元上取代基的位置和糖的連接順序及連接位置，并對全部氫信號和碳信號進行正確的歸屬(見表1～表5)。
4.實施例1中甾體皂甙化合物soamargine的體外抑瘤實驗實施例1中甾體皂甙化合物soamargine對于人體3個癌系共計6個瘤株HT-29(結腸癌colon)、HCT-15(結腸癌colon)、LNCap(前列腺癌prostate)、PC-3(前列腺癌prostate)、T47D(乳腺癌breast)和MDA-MB-231(乳腺癌breast)的體外抑瘤活性實驗(結果見表6)，活性測試采用MTT法。其中結腸癌的HT-29和HCT-15瘤株以及前列腺癌的LNCap和PC-3瘤株均用含有10％小牛血清(FCS)、100IU/ml青霉素(penicillin)及100μg/ml(streptomycin)的RPMI1640培養基進行培養。乳腺癌的T47D和MDA-MB-231瘤株則用含有10％小牛血清(FCS)、100IU/ml青霉素(penicillin)、100μg/ml(streptomycin)及5μg/ml胰島素的RPMI1640培養基進行培養。細胞經24小時培養后，在96孔板的每一個孔中加入0.2ml含1000個瘤細胞的細胞懸液，在37℃下培養5天。而后，每一個中加入50μl的MTT溶液(2mg/ml)，繼續培養4小時。去除培養基，每孔中加二甲基亞砜(DMSO)200μl溶解細胞10分鐘。而后，96孔板在540nm處用microtiter plate reader(DynatechMR5000)進行讀數。以不加檢品(solamargine)的細胞作為對照(100％存活率)，計算出樣品solamargine的IC50值。
5.實施例2中甾體皂甙化合物gracillin的體外抑瘤實驗實施例2中甾體皂甙化合物gracil1in對于人體9個癌系共計55個瘤株的體外抑瘤活性實驗(結果見表7、圖1)。這9個癌系包括白血病(Leukemia)、肺癌(Non-Small CellLung Cancer)、中樞神經瘤(CNS Cancer)、結腸癌(Colon Cancer)、黑色素瘤(Melanoma)、卵巢癌(Ovarian Cancer)、腎癌(Renal Cancer)、前列腺癌(Prostate Cancer)和乳腺癌(Breast Cancer)。
6.甾體皂甙化合物prosapogenin A of dioscin25g與微晶纖維素90g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機打成φ6mm，重量300mg的片劑。本片劑中每片含皂甙prosapogeninA of dioscin60mg。結合病癥，每次2～3片，每日服用2～3次。
7.甾體皂甙化合物gracillin10g與玉米淀粉90g混合，加水制成軟材，過12目篩造粒，干燥，得顆粒劑。本顆粒劑中，每500mg中含皂甙gracillin50mg。結合癥狀，每次1.0～2.0 g，每日服用2～3次8.甾體皂甙化合物protoneodioscin40g與乳糖110g、硬脂酸鎂10g混合，以每500mg填充膠囊。本膠囊劑中，每個膠囊含皂甙protoneodioscin125mg。結合癥狀，每次1～2個，每日服用2～3次。
9甾體皂甙化合物protodioscin10g，加水300ml溶解，加橙皮甙4ml，加單糖漿至1000ml得糖漿劑。本糖漿劑1ml中含皂甙protodioscin10mg。結合癥狀，每次10～15ml，每日服用2～3次。
10.甾體皂甙化合物protoneogracillin和protogracillin各50g與微晶纖維素90g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機打成φ6mm的片劑，并用CAP薄膜包衣，制成重量300mg的腸溶制劑。本腸溶片中每片含皂甙protoneogracillin和protogracillin各75mg。結合癥狀，每次1～2片，每日服用2～3次。
11.甾體皂甙化合物methylprotoneogracillin20g和methylprotodioscin10g與乳糖85g、硬脂酸鎂5g混合，以每600mg填克腸溶膠囊。本腸溶膠囊劑中，每個膠囊含皂如methylprotoneogracillin100mg和nethylprotodioscin50mg。結合癥狀，每次1～2個，每日服用2～3次12.甾體皂甙化合物methyl protoneogracillin20g以普通注射劑制備法，用加熱到60℃的注射用蒸餾水1000ml溶解，用NaCl調解等張，封入安瓶。本注射劑10ml中含皂如methyl protoneogracillin200mg。結合癥狀，每次肌肉注射10ml，每日注射2次。表1.實施例1、3中甾體皂甙化合物solamargine，prosapogeninA of dioscin，dioscin，gracillin和protogracillin的理化常數和光譜數據Solamargine白色無定形粉末；Lieberman-Burchard和Dragendoff反應均呈陽性；m.p.＞300℃；[a]24D-102°(pyridine；c0.10)；IR(KBr):vma x＝3400，2950，1380，1040，912＜890，805cm-1，FAB-MS(pos.):n/z＝890(M+Na)+，868(M+H)+，722(M+H-Rha)+，558(M+H-Rha×2-H2O)+，414 (M+H-Rha×2-Glc)+，396 (M+H-Rha×2-Glc-H2O)+，1H-NMR(500MHz，C5D5N)和13C-NMR(125MHz，C5D5N)表2和表3ProsapogeninA of dioscin白色無定形粉末；Lieberman-Burchard反應陽性；m.p.238-240℃(de c.)；[a]13:-90.3°(pyridine；c0.01)；IR(KBr):vmax＝3400，2930，1630，1451，1040，980，912(897cm-1，FAB-MS(pos.):m/z＝723(M+H)+，577(M+H-Rha)+，415(M+H-Rha-Glc)+；1H-NMR(500MHz，C5D5N)和13C-NMR(125MNz，C5D5N)表2和表3Dioscin白色針晶；Lieberman-Burchard反應陽性；m.p.281-282℃(dec.)；[a]13:-104.0°(pyridine；c0.01)；IR(KBr):Vmax＝3422，2937，1637，1454，1381，1044，912(899cm-1；FAB-MS(pos.):m/z＝869(M+H)+，723(M+H-Rha)+，577(M+H-Rha×2)+，415(M+H-R×2-Glc)+，1H-NMR(500MHz，C5D5N)和13C-NMR(125MHz，C5D5N)表2和表3Gracillin白色無定形粉末；Lieberman-Burchar反應陽性；m.p.284-285℃(dec.).[a]13:-80.3°(pyridine；c0.01)；IR(KBr)；Vmax＝3420，2940，1639，1454，1381，1046，914(900，815cm-1；FAB-MS(pos.):m/z＝885(M+H)+，723(M+H-Glc)+，577 (M+H-Rha-Glc)+，415(M+H-Glc×2Rha)+，1H-NMR(500MHz，C5D5N)和13C-NMR(125MHz，C5D5N)表4和表5Protogracillin白色無定形粉末；Lieberman-Burchard和Enrlich反應均呈陽性；m.p.254-256℃(dec.)；[a]13:-72.9°(pyridine；c0.01)；FAB-MS(pos.):m/z＝1047(M+H-H2O)+，885(M+H-H2O-Glc)+，729(M+H-H2O-Glc-Rha)+，577(M+H-H2O-Glc×2-Rha)+，415(M+H-H2O-Glc×-Rha)+；1H-NMR(500MHz，C5D5N)和13C-NMR(125MHz，C5D5N)表4和表5表2.實施例1、2中甾體皂甙化合物solamargine，prosapogeninA of dioscin和dioscin的1H、13C-NMR的化學位移值(甙元部分，δppm，溶劑為C5D5N)Position prosapogeninA ofdioscindioscin solamargineH C H C H C10.97，1.94(o) 37.60.98，1.72(o) 37.5 0.95，1.71(o) 37.521.89，2.14(o) 30.21.82，2.07(o) 30.2 1.83，2.05(o) 30.133.94(m)78.03.86(m) 78.2 3.85(m) 78.042.73，2.81(m) 39.12.69，2.78(m) 39.0 2.69，2.78(m) 38.95 141.0 140.9140.865.31(br.d) 121.8 5.32(br.d) 121.85.30(br.d) 121.771.46，1.87(o) 32.41.49，1.87(o) 32.2 1.45，1.85(o) 32.181.55(o)31.81.54(o) 31.7 1.47(o) 31.690.90(o)50.40.89(o) 50.4 0.85(o) 50.110 37.237.2 37.1111.43(o)21.11.42(o) 21.1 1.40(o) 21.0121.09，1.69(o) 39.91.09，1.68(o) 39.9 1.03，1.60(o) 39.413 40.540.5 40.9141.08(o)56.71.07(o) 56.7 1.02(o) 56.3151.44，2.03(o) 32.31.47，2.02(o) 32.3 1.45，2.01(o) 32.5164.54(o)81.14.53(o) 81.1 4.90(o) 82.1171.80(o)63.01.79(o) 62.9 2.01(o) 62.6180.83(s)16.30.82(s) 16.3 0.80(s) 16.2191.05(s)19.41.04(s) 19.4 1.03(s) 19.4201.94(o)42.01.94(o) 42.0 2.18(o) 42.0211.13(d，6.9) 15.01.12(d，7.0)15.0 1.26(d，7.0)15.122 109.3 109.398.7231.69(o)31.91.43(o) 31.9 1.35，1.80(o) 33.4241.57(o)29.31.56(o) 29.3 1.15，1.60(o) 29.2251.58(o)30.61.57(o) 30.6 1.89(o) 29.2263.49，3.57(m) 66.93.48，3.57(m) 66.9 2.93，3.21 46.7270.69(d,6.5)17.30.69(d.6.0) 17.3 0.74(d.6.8) 18.9表3.實施例1、2中甾體皂甙化合物solamargine，prosapogenin A of dioscin和dioscin的1H、13C-NMR的化學位移值(糖鏈部分，δppm，溶劑為C5D5N)Position prosapogeninA ofdioscin dioscin solamargineH C H C H CGlc(inner)1’ 5.02(d，7.2) 100.5 4.92(d，7.2)100.3 4.92(o) 100.22’ 4.26(o) 77.94.18(o) 77.94.18(o) 77.73’ 4.26(o) 79.74.18(o) 77.94.18(o) 77.94’ 4.14(t，9.0) 71.94.34(o) 78.84.36(o) 78.55’ 3.87(m) 78.33.62(m) 76.93.62(m1) 76.96’ 434，4.49(o) 62.84.06，4.20(o) 61.44.18，4.07(o)61.2Rha(1→2)1” 6.35(d，1.0) 102.1 6.32(d，1.0)102.0 6.37(d，1.0) 102.02” 4.77((dd，1.0，3.5) 72.64.78(dd，1.0，3.5) 72.54.81(dd，1.0，3.5) 72.53” 4.60(dd，3.5，9.0) 72.94.58(dd，3.5，9.0) 72.84.60(dd，3.5，9.5) 72.74” 4.34(o) 74.24.32(o) 74.14.34(o) 73.95” 4.97(m) 69.54.91(o) 69.54.94(o) 69.56” 1.76(d，6.5) 18.71.74(d，6.5)18.61.74(d，6.5)18.6Rha(1→4)1 5.79(d，1.0)102.9 5.83(d，1.0)102.82 4.64(dd，1.0，3.5) 72.54.66(dd，1.0，3.5) 72.53 4.49(dd，3.5，9.0) 72.74.52(dd，3.5，9.5) 72.84 4.28(o) 73.94.31(o) 74.15 4.84(o) 70.44.92(o) 70.46 1.59(d,6.5) 18.51.60(d，6.5)18.5表4.實施例2中甾體皂甙化合物gracillin和protogracillin的1H、13C-NMR的化學位移值(甙元部分，δppm，溶劑為C5D5N)No. gracillin· protogracillinHC HC10.92，1.72(o) 37.50.96，1.74(o) 37.521.94，2.10(o) 30.11.86，2.10(o) 30.133.95(m) 77.93.94(o) 77.942.74，2.80(m) 38.72.72，2.79(m) 38.75140.8 140.865.32(br.d) 121.9 5.32(br.d) 121.971.40，1.87(o) 32.21.47，1.92(o) 32.481.54(o) 31.71.59(o) 31.790.80(o) 50.30.90(o) 50.31037.137.2111.41(o) 21.11.45(o) 21.1121.08，1.66(o) 39.91.12，1.73(o) 40.01340.540.7141.06(o) 56.61.08(o) 56.6151.43，2.03(o) 32.21.46，2.04(o) 32.5164.53(o) 81.14.92(o) 81.1171.79(o) 62.91.94(o) 63.9180.82(s) 16.30.89(s) 16.5191.05(s) 19.41.05(s) 19.4201.94(o) 42.02.22(m) 40.8211.13(d，6.9)15.01.32(d，6.5)16.522109.3 110.7231.63(o) 31.71.72，2.02(o) 37.0241.56(o) 29.31.68，2.03(o) 28.4251.57(o) 30.61.92(o) 34.3263.49，3.57(m) 66.93.62，3.94(o) 75.2270.69(d,6.5) 17.31.02(d,6.7) 17.5表5.實施例2中甾體皂甙化合物gracillin和protogracillin的1H、13C-NMR的化學位移值(糖鏈部分，δppm，溶劑為C5D5N)No. gracillin · protogracillinH C H CC-3糖鏈Glc(inner)1’4.94(d，7.3)100.04.93(o) 100.12’4.20(o) 77.0 4.18(o) 77.03’4.18(o) 89.6 4.16(o) 89.54’4.06(o) 69.6 4.03(o) 69.65’3.82(m) 77.7 3.80(m) 77.96’4.24，4.43(o) 62.4 4.24，4.42(o)62.4Rha(1→2)1”6.39(d，1.0)102.26.35(d，0.9) 102.22”4.89(dd，1.0，3.5) 72.5 4.85(o) 72.53”4.57(o) 72.8 4.55(o) 72.84”4.32(o) 74.1 4.28(o) 74.15”4.93(o) 69.6 4.90(o) 69.66”1.75(d，6.5)18.7 1.74(d，6.0) 18.7Glc(1→3)1 5.11(d，7.3)104.65.09(d，7.2) 104.52 4.01(o) 75.0 4.00(o) 75.03 4.16(o) 78.5 4.18(o) 78.54 4.12(o) 71.5 4.10(t，9.0，9.0)71.75 4.02(o) 78.7 4.00(o) 77.96 4.28，4.55(o) 62.4 4.28，4.52(o)62.4C-26糖鏈Glc1′ 4.79(d，7.6)104.92′ 4.00(o) 75.23′ 4.18(o) 78.54′ 4.19(o) 71.55′ 3.93(o) 78.66′ 4.36，4.51(o) 62.8表6.實施例1中甾體皂甙化合物solamargine體外抑瘤實驗a化合物IC50(μM)HT-29 HCT-15 LNCap PC-3T47DMDA-MB-231solamargine 2.3±0.72.1±0.61.6±0.42.1±0.71.9±0.21.5±0.1Vp16b0.4 1.0 0.3 12.6＜0.1 0.4a體外抑瘤實驗包括人體3個癌系共計6個瘤株HT-29(結腸癌colon)、HCT-15(結腸癌colon)、LNCap(前列腺癌prostate)、PC-3(前列腺癌prostate)、T47D(乳腺癌breast)和MDA-MB-231(乳腺癌breast)。b陽性對照品表7-實施例2中甾體皂甙化合物gracillin體外抑瘤實驗aCellLines GI50 TGI LC50CellLinesG150TGI LC50LeukemiaMelanomaCCRF-CEM ＞100 ＞100＞100LOXIMVI 2.385.90＞100HL-60(TB) 3.35 ＞100MALME-3M1.573.286.83K-562 ＞100 ＞100＞100M14 3.14＞100 ＞100MOLT-4 ＞100 ＞100＞100SK-MEL-21.933.626.79RPMT-8226 3.82＞100 SK-MEL-28 1.954.088.53SR ＞100 ＞100＞100SK-MEL-51.913.857.79Non-SmallCell UACC-2572.124.469.36LungCancer UACC-62 3.31＞100 ＞100EKVX 2.384.81 9.74 OvarianCancerHOP-62 2.665.30 ＞100IGROV1 1.763.306.20HOP-92 1.814.27 ＞100OVCAR-3 2.003.967.82NCI-H226 2.004.25 OVCAR-4 1.853.898.19NCI-H231.963.59 6.55 OVCAR-5 2.094.258.65NCI-H322M 1.913.71 7.22 OVCAR-8 3.19＞100 ＞100NCI-H460 3.15＞100＞100 RenalCancerNCI-H522 1.863.56 6.82 786-0 2.004.34Co1onCancer ACHN2.003.646.62COLO2051.954.05 8.43 CAKI-1 3.505.077.34HCC-2998 1.954.08 8.52 RXF393 2.174.439.02HCT-1163.58＞100＞100SN12C 1.733.306.28HCT-15 2.034.83 ＞100TK-10 2.225.15＞100HT29 2.76＞100 UO-31 2.073.837.07KM12 2.495.72 ＞100 ProstateCancerSW-620 0.205 4.39 ＞100PC-32.164.258.35CNSCancer DU-145 2.315.13＞100SF-268 2.064.23 8.66 BreastCancerSF-295 2.415.91 ＞100MCF-7 2.646.23＞100SF-539 2.567.65 ＞100NCI/ADR-RES 2.466.18＞100SNB-19 2.053.76 6.89 MDA-MB-435 1.844.37＞100SNB-75 1.963.84 7.52 MDA-N 1.763.306.19U251 2.33＞100＞100BT-549 1.743.687.74T-47D 2.736.42＞100a體外抑瘤實驗包括人體9個癌系共計55個瘤株
權利要求
1.一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，它是以植物和中藥材為原料提取的化合物，其特征在于將植物或中藥材經乙醇提取，再用正丁醇萃取，再利用包括吸附樹脂柱層析、真空液相柱層析、硅膠柱層析、Sephadex柱層析、中低壓柱層析以及制備型高壓液相(HPLC)柱層析等分離手段，從天然植物或者中藥中獲得的具有通式(I)、(II)甾體皂甙類化合，或者通過合成以及半合成手段獲得具有通式(I)、(II)的甾體皂甙類化合物，通式(I)、(II)化合物的結構如下
通式(I)中R1＝由單糖、雙糖、三糖、四糖、五搪、六糖所組成的各種形式的直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、a-D-葡萄糖(a-D-glucose)、a-L-鼠李糖(a-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-glucose)、a-D-半乳糖(a-D-glucose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、a-D-甘露糖(a-D-mannose)、a-D-阿拉伯糖(a-D-arabinose)、β-D-阿拉伯糖(β-D-arabinose)、a-D木糖(a-D-xylose)、β-D-木糖(β-D-xylose)、a-D-核糖(a-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、a-D-來蘇糖(a-D-lyxose)、β-D-來蘇糖(β-D-lyxose)，a-L-夫糖(a-L-fucose)。通式(Ⅱ)中R1＝由單糖、雙糖、三糖、四糖，五糖、六糖所組成的各種形式的直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、a-D-葡萄糖(a-D-glucose)，a-L-鼠李糖(a-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-galactose)，a-D-半乳糖(a-D-galactose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、a-D-甘露糖(a-D-mannose)，a-D-阿拉伯糖(a-D-aradinose)、β-D-阿拉伯糖(β-D-aradinose)、a-D-木糖(a-D-xylose)，β-D-木糖(β-D-xylose)、a-D-核糖(a-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)，a-D-來蘇糖(a-D-lyxose)，β-D來蘇糖(β-D-lyxose)、a-L-夫糖(a-L-fucose)。
2.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化舍物及其制備方法，其特征在于R2＝CH8，CH2OH，＝CH2X＝O，NC25為R構型或者S構型
3.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，其特征在于R2＝CH8，CH2OH，＝CH2R8＝H，CH3C22為R構型或者S構型C25為R構型或者S構型
4.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，其特征在于所用活性物質為通式為(I)中，R1＝-β-D-Glc-a-L-RhaR2＝CH3，X=N，C25為R構型的化合物-β2-solamargine所用活性物質為適式(I)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH3，X＝N，C25為R構型的化合物-solamargine所用活性物質為通式(I)中，R1＝-β-D-Glc-a-L-RhaR2＝CH3，X＝O，C25為R構型的化合物-prosapogenin A of dioscin所用活性物質為通式(I)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH3，X＝O，C25為R構型的化合物-dioscin。所用活性物質為通式(I)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<β-D-GlcR2＝CH3，X＝O，C25為R構型的化合物-gracillin。
5.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，其特征在于所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH3，R3＝H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-protoneodioscin所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH3，R3＝H，C22和C25均為R構型的化合物-protoneodioscin所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<β-D-GlcR2＝CH3，R3＝H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-protoneogracillin所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<β-D-GlcR2＝CH3，R3＝H，C22和C25均為R構型的化合物-protogracillin所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH3，R3=CH3，C22為R構型或者S構型，C25為S構型的化合物-methylprotoneodioscin所用活性物質為通式(II)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<β-L-RhaR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotoneodioscin所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-Rh aR1＝-β-D-Glc<β-D-GlcR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotoneogracillin所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝-β-D-Glc<α-D-GlcR2＝CH3，R3＝CH3，C22為R構型或者S構型，C25為R構型的化合物-methylprotogracillin所用活性物質為通式(Ⅱ)中，α-L-RhaR1＝β-D-Glc<α-L-RhaR2＝CH2OH，R3＝H，C22為R構型，C25為S構型的化合物-hypoglaucinF。
6.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，其特征在于所述劑型為片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑。
7.根據權利要求1所述的一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物及其制備方法，其特征在于所述賦型劑為淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素。
全文摘要
本發明是一種治療癌癥的甾體皂甙類化合物，它對癌癥不但具有較好的療效，而且還無毒副作用。它是由植物或中藥材經乙醇提取再用正丁醇萃取，再利用包括吸附樹脂柱層析、真空液相柱層析、硅膠柱層析、Sephadex柱層析、中低壓柱層析以及制備型高壓液相(HPLC)柱層析等分離手段，從天然植物或者中藥中獲得的化合物，或者通過合成以及半合成手段獲得的。它可制成各種劑型，根據病人的狀況，治療各期的癌癥患者。
文檔編號C07J75/00GK1237583SQ98114030
公開日1999年12月8日 申請日期1998年6月1日 優先權日1998年6月1日
發明者姚新生, 胡柯, 董愛軍 申請人:沈陽藥科大學