作為抗病毒劑的修飾的苯并咪唑核苷的制作方法

專利名稱：作為抗病毒劑的修飾的苯并咪唑核苷的制作方法
本申請涉及U.S.申請號60/010,463，申請日1996年1月23日的美國申請中的相關內容。
本發明涉及具有抗病毒活性和改進代謝穩定性的核苷類似物。更具體地，本發明涉及修飾的苯并咪唑核苷，列舉的化合物如具有氟化糖類部分的苯并咪唑核苷(例如，2’-氟-呋喃糖基部分或3’-氟-呋喃糖基部分)。
在整個本申請中，各種出版物，專利，及公開的專利申請涉及相同的引證；這些文獻的全面引用可在說明書結尾即權利要求書之前找到。涉及本申請的出版物，專利及公開的專利申請的內容在此引作參考作為對本發明涉及的現有技術更詳細的描述。
苯并咪唑核苷作為可能的抗病毒劑特別具有魅力，因為它們有能力避免生物活性嘌呤(雙環)核苷失活的一些主要途徑，例如，通過腺苷脫氨酶的脫氨化和用嘌呤核苷磷酸化酶的苷鍵裂解。例如，目前治療HCMV包括使用藥物如更昔洛韋(也稱DHPG)，膦甲酸，和cidofovir。但是已經證明已知的苯并咪唑核苷如5，6-二氯-1-(β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(DRB)僅具有邊緣水平活性或者通常不可接受的細胞毒性，或者兩者兼而有之，因此，大大降低了其在治療病毒感染中的應用。最近已經發現苯并咪唑化合物，如TCRB(2，5，6-三氯-1-(2’-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑)和2-溴-5，6-二氯-1-(2’-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(BDCRB)對于抗HCMV感染是有用的，參見，Townsend等人，1993，1994，1995。
已經合成了許多苯并咪唑核苷并且在證實化合物的抗人巨細胞病毒(HCMV)活性優于更昔洛韋和膦甲酸試驗的努力中試驗其抗病毒活性和細胞毒性。前面已經描述了多取代苯并咪唑類如5，6-二氯-1-(β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(DRB)和一些密切相關的衍生物的抗病毒活性。它們對特定病毒，如RNA鼻病毒和DNA單純性皰疹病毒1型和2型的活性也已經報道。
幾種5’-脫氧核糖基苯并咪唑類似物，包括2，5，6-三氯-1-(β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(TCRB)在抑制病毒生長濃度的情況下對HCMV顯示非常強的活性和低的細胞毒性。已經報道了TCRB和雜環及碳水化合物修飾的衍生物間的結構活性關系。參見，例如，Ravenkar等人，1968a，1968b；Townsend等人，1992年3月；Zou等人，1992；Saluja等人，1992。但是，這些公開沒有公開本發明目的化合物的結構或合成。
雜環經過修飾已經得到比TCRB更具活性的類似物。但是，大多數這些類似物比TCRB細胞毒性更大，結果使化合物的治療指數只得到一點兒改進。有人試圖通過用阿拉伯糖，木糖或無環類似物取代核糖來修飾碳水化合物部分，但得到的化合物活性小于TCRB。多少有些令人驚奇地是，TCRB的5’-脫氧衍生物，2，5，6-三氯-(β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑所顯示的活性約是TCRB的10倍，而且具有比TCRB更好的治療指數。
最近研究TCRB的藥物動力學和代謝已經說明其在大鼠中的藥物半衰期約為0.6小時及在猴中的藥物半衰期為0.5-0.7小時(Good等人，1994)。短半衰期可能與化合物的代謝不穩定性有關，例如，從苯并咪唑中裂解糖部分。
本發明一方面涉及具有上述氟化糖類修飾的苯并咪唑核苷。在一個實例中，氟化糖類部分包括2’-氟-呋喃糖基部分或3’-氟-呋喃糖基部分。
本發明另一方面涉及治療動物患者病毒感染的藥物組合物，該組合物包括治療有效量一種或多種上述本發明修飾的苯并咪唑核苷。
本發明再一方面涉及治療動物病毒感染的方法，包括使用治療有效量一種或多種上述本發明修飾的苯并咪唑核苷的步驟。
本發明還一方面涉及抑制病毒感染細胞中病毒(例如HCMV)增殖的方法，包括在適當的條件下將細胞與治療有效量一種或多種上述本發明修飾的苯并咪唑核苷接觸使病毒增殖被抑制。
本發明另一方面涉及預防性治療易于病毒(例如HCMV)感染的細胞的方法，即在適當的條件下將細胞與治療有效量一種或多種上述本發明修飾的苯并咪唑核苷接觸使病毒感染得到預防。
顯然，本發明一方面的優選特征和特點適用于本發明任何其它方面。


圖1是說明具有氟化糖類部分修飾的苯并咪唑核苷的化學合成方法的流程圖。
圖2是說明具有氟化糖類部分修飾的苯并咪唑核苷的另一種化學合成方法的流程圖。
圖3是說明具有氟化糖類部分修飾的苯并咪唑核苷的另一種化學合成方法的流程圖。A.本發明抗病毒化合物本發明涉及具有抗病毒活性，低毒性，改進的代謝穩定性和較長半衰期的修飾的苯并咪唑核苷。
本發明化合物可以被描述為“修飾的苯并咪唑核苷”，其中在取代的苯并咪唑的1-位的糖類部分(即R1)已經被衍生成，例如，氟化糖類部分。本發明化合物可由下式表示
其中R1是氟化糖類部分，及R2，R4，R5，R6和R7是苯并咪唑取代基。苯并咪唑取代基的實例包括-H，鹵素(例如，-F，-Cl，-Br，-I)，-NO2，-NR2(其中R獨立地為-H或具有1-6個碳原子的烷基)，-OR(其中R為-H或具有1-6個碳原子的烷基)，-SR(其中R為-H，具有1-10個碳原子的烴基)，及-CF3。
在一個實例中，本發明化合物可由上式表示，其中R1是氟化糖類部分，R2是-H，-F，-Cl，-Br，-I，或-NR2(其中R獨立地為-H或具有1-6個碳原子的烷基)；R4，R5，R6和R7是獨立地為-H，-F，-Cl，-Br，或-I。
在一個實例中，本發明化合物可由上式表示，其中R1是氟化糖類部分，R2是-H，-F，-Cl，-Br，-I，或-NR2(其中R獨立地為-H或具有1-6個碳原子的烷基)；R5和R6是獨立地為-H，-F，-Cl，-Br，或-I；及R4和R7是-H。
在另一個實例中，本發明化合物可由上式表示，其中R1是氟化糖類部分，R2，R5和R6是-H，-F，-Cl，-Br或-I；及R4和R7是-H。
在另一個實例中，本發明化合物可由上式表示，其中R1是氟化糖類部分，R2是-NR2(其中R獨立地為-H或具有1-6個碳原子的烷基)；R5和R6是獨立地為-H，-F，-Cl，-Br，或-I；及R4和R7是-H。
在另一個實例中，本發明化合物可由上式表示，其中R1是氟化糖類部分，R2，R5和R6是獨立地為-H和-Cl；及R4和R7是-H。
此處所用術語“糖類部分”指單糖部分，優選的糖類部分為環狀形式，例如，從呋喃糖型(5-員環)衍生的或從吡喃糖型(6-員環)衍生，但是更優選從呋喃糖型衍生的。糖類部分的實例包括呋喃蘇糖基(從蘇糖，四碳糖衍生)；呋喃赤蘚糖基(從赤蘚糖，四碳糖衍生)；呋喃核糖基(從核糖，五碳糖衍生)；呋喃阿糖基(也稱為呋喃阿拉伯糖基，從阿拉伯糖，五碳糖衍生)；呋喃木糖基(從木糖，五碳糖衍生)。具有進一步修飾的糖類部分的實例包括“脫氧”，“酮基”，和“脫氫”衍生物，例如，2’-脫氧-呋喃核糖基；3’-脫氧-呋喃核糖基；3’-酮基-2’-脫氧-呋喃核糖基；2’，5’-二氫呋喃-2’-基；和2’，3’-二氫呋喃-2’-基。糖類部分可以是其任何對映異構體，非對映異構體，或立體異構體形式，包括，例如，D-或L-型。本發明修飾的苯并咪唑核苷可以是任何立體化學異構體，包括，例如，α-或β-異頭物形式。
此處所用術語“氟化糖類部分”指已經衍生的至少包括一個氟原子(即-F)的糖類部分。例如，從戊糖(5-碳)衍生的呋喃糖基(5-員環)經常具有2’-羥基，3’-羥基，和5’-羥基。這種糖類的氟代衍生物可以通過，例如，用氟取代一個或多個羥基制備。氟化糖類部分的實例包括2’-氟-呋喃糖基和3’-氟-呋喃糖基。優選的氟化糖類部分的實例包括2’-氟-呋喃阿糖基和3’-氟呋喃木糖基。
此處所用術語“氟化糖類部分”還包括保護的氟化糖類部分。例如，氟化糖類部分可以包括一個或多個保護形式的2’-羥基，3’-羥基，和/或5’-羥基，例如，作為酯(例如，乙酸酯，-O(C＝O)CH3)，苯甲酸酯(即-OC(＝O)C6H5)，或醚(例如，三苯甲基醚，-OC(C6H5)3)。
在整個申請中公開的和要求保護的化合物的結構，命名或編號定義是一致的。本發明化合物包括但不限于下列化合物。
2，5，6-三氯-1-(2’-氟呋喃阿糖基)苯并咪唑(其中R1是2’-氟-呋喃阿糖基；R2是-Cl；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；和R7是-H) (例如化合物6)；2，5，6-三氯-1-(3’-氟呋喃木糖基)苯并咪唑(其中R1是3’-氟-呋喃木糖基；R2是-Cl；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；和R7是-H)(例如化合物7)；5，6-二氯-1-(2’-氟呋喃核糖基)苯并咪唑(其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-H；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；和R7是-H)(例如化合物15)；2-溴-5，6-二氯-1-(2’-氟呋喃核糖基)苯并咪唑(其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-Br；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；和R7是-H)(例如化合物19)。
2-異丙氨基-5，6-二氯-1-(2’-氟呋喃核糖基)苯并咪唑(其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-NH(CH(CH3)2)；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；和R7是-H) (例如化合物20)。
本發明化合物用于以下提供的方法中或者用作制備本發明其它化合物的中間體。應當理解，即使沒有特別說明，有關上述任何本發明化合物將包括其可藥用鹽及其結合物。B.本發明抗病毒化合物的使用方法如下所述，本發明化合物是有效的抗病毒藥物，并且對HCMV和HSV-1特別有效，同樣，當與載體結合時，提供試管內、體外或體內抑制病毒再生和增殖的組合物。例如，化合物可以與任何液體載體結合，如無菌或水溶液以及下述可藥用載體。
本發明化合物可以與其它抗病毒藥物結合提供一種有效的結合物。“有效結合物”將包括本發明化合物與其它本發明化合物或者本發明化合物與其它本發明以外的化合物(如更昔洛韋，AZT，和膦甲酸)的化學上配伍的結合物，只要這種結合不消弱本發明化合物的抗病毒活性。
本發明化合物可以用于已經使用抗病毒藥物齊多夫定(AZT)的AIDS患者中HCMC和HSV-1感染的治療。與AZT的結合治療可以提供比更昔洛韋和AZT的結合治療更低的毒性的優點。本發明化合物與AZT的結合可以在人培養細胞中產生比單獨使用這些藥物小的細胞毒性(即拮抗)。相反，更昔洛韋與AZT的結合可以在人細胞中產生比單獨使用這些藥物高的細胞毒性。
本發明還提供降低或抑制HCMV或HSV-1感染的細胞或細胞群中HCMV或HSV-1的復制和增殖的方法，即將細胞或細胞群與有效量的本發明化合物在適當條件下接觸，使病毒復制和增殖受到抑制。本領域技術人員可以通過記錄病毒滴度的減少或感染細胞存活數的增加與未處理，感染細胞比較，很容易地確定HCMV或HSV-1復制和增殖是否減少或被抑制。測定細胞濃度的方法是本領域技術人員已知的并且列舉如下。應當理解，通過抑制和減少病毒復制和增殖也可以抑制和減少病毒感染性，而且，適于對HCMV或HSV-1感染的細胞進行處理。
為了本發明目的，“細胞”將包括但不限于哺乳動物細胞，例如小鼠細胞，大鼠細胞，土撥鼠細胞，猿細胞，或人細胞。用本發明化合物，組合物和方法有效治療的病毒包括DNA和RNA病毒，特別是皰疹病毒。皰疹病毒，或herpesviridae的實例是單純性皰疹病毒1(HSV-1)，單純性皰疹病毒2(HSV-2)，水痘-帶狀皰疹(VZV)，EB病毒(EBV)，人巨細胞病毒(HCMV)，人皰疹病毒6(HHV-6)，人皰疹病毒7(HHV-7)，和人皰疹病毒8(HHV-8)。本發明化合物特別適用于治療HCMV和HSV-1感染。
有效量很容易由本領域技術人員確定并可根據細胞，發作的病毒和治療目的變化。例如，在細胞培養中使用藥物，重要的是藥量對細胞沒有細胞毒性。
“適當條件”包括玻璃試管內，體外或體內。當本方法在玻璃試管內進行時，通過用抗病毒有效量的化合物培養細胞可以達到有效接觸的目的，進而有效地抑制細胞或細胞培養物中病毒的復制和增殖。可以直接將化合物加到培養基中或在加入細胞中之前與載體合并。玻璃試管內，該方法特別適用于抑制病毒復制，增殖以及實驗室內細胞培養物的感染。在體外，化合物用于給病人輸入血液和血漿前抑制病毒的復制和增殖。
本發明化合物和方法在玻璃試管內的用途還提供了篩選新藥或化合物(提供類似的或提高的抗病毒活性)的強有力的生物檢測方法。使用下述方法，在如本發明化合物相同條件下檢測要試驗的藥物。試驗藥物的抗病毒和細胞毒性可以與本發明化合物比較。
盡管下面所示本發明化合物對HCMV和HSV-1特別有效，但是本領域技術人員可以通過使用這里所述方法及其它本領域技術人員熟知的方法很容易地確定用本發明化合物有效治療的其它病毒。屬于本發明范圍的可治療的其它病毒包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)和肝炎病毒。
當該方法在患者如人體內實施時，可將化合物加到可藥用載體中并且系統或局部給藥于患者，如患者為人或哺乳動物如小鼠，大鼠，土撥鼠，或猿。
該組合物還可以給藥于易于或有感染病毒，如HCMV或HSV-1感染危險的患者或個體。因此，本發明還提供了抑制宿主病毒復制，增殖和/或病毒感染的預防方法，即在適當條件下給宿主使用預防有效量的化合物或組合物使病毒復制，增殖和感染受到抑制。“預防有效量”指能夠抑制受到病毒威脅的宿主的病毒感染，復制和增殖的并且對所要治療的細胞和宿主沒有毒性的量。
應當理解，通過預防或抑制患者或個體的病毒增殖，感染和復制，本發明組合物和方法還提供治療，預防或改善與病毒感染相關的癥狀或失調，所包括的疾病如，失明，單核細胞增多癥，再狹窄(HCMV)；水痘，帶狀皰疹(水痘-帶狀皰疹病毒)；傳染性單核細胞增多癥，小腺，發燒，和Burkittis淋巴瘤(EB病毒)；感冒瘡(單純性皰疹病毒1)；生殖器皰疹(單純性皰疹病毒2)；玫瑰感染(infantum)薔薇疹(人皰疹病毒6，人皰疹病毒7)；卡波濟肉瘤(人皰疹病毒8)。因此，本發明還提供了改善，預防或治療與病毒感染如HCMV或HSV-1感染相關的失調或綜合征，例如，再狹窄，機會致病菌感染(如視網膜感染，胃腸感染，肺炎，CNS感染)和子宮感染的方法，即在適當條件下給治療對象施用有效量的本發明化合物，使失調或綜合征得以改善，預防或治療。
在整個治療過程中，可以連續或間歇式在體內單劑量給藥。確定最有效給藥方式和劑量的方法是本領域技術人員已知的，并且將依據治療使用的組合物，目標病毒，治療目的，要治療的細胞，及要治療的患者而變化。單次或多次給藥的劑量和方案由治療醫生選擇。化合物給藥的適當劑型和方法可以在下面找到。
本發明所有氟代苯并咪唑核苷都顯示抗HCMV和HSV-1活性，并且許多具有可接受的細胞毒性。應當理解，相對細胞毒性而言顯示相當高抗病毒活性(即好的選擇性)的本發明化合物是優選的。還應當理解，本發明的抗病毒治療包括治療病毒感染，以及在某些情況下需要的預防性治療，例如，免疫下降患者，如骨髓和器官移植患者以及特別易于感染HCMV或HSV-1的HIV攜帶者。
本發明化合物和組合物可用于藥物的制備和根據常規方法，例如，作為藥物組合物中的活性成分給人或其它動物給藥進行抗病毒治療。本發明化合物可作為可藥用制劑和/或“前藥”提供，包括但不限于酯，特別是羧酸酯(優選C1至C20)，如5’-乙酰基和2’，3’，5’-三乙酰基前藥和可藥用鹽如硫醇鹽，檸檬酸鹽和乙酸鹽。
本發明藥物組合物可以片劑，錠劑，粒劑，囊劑，丸劑，安瓿，栓劑或噴霧劑形式進行表面，口服，鼻內，胃腸外或吸入給藥。它們還可以是活性成分在水性或非水性稀釋劑，漿液，顆粒或粉末中形成的軟膏，凝膠，糊劑，乳膏，噴劑，洗液，懸浮液，溶液和乳液形式。除了本發明化合物之外，藥物組合物中還可以含有其它藥物活性化合物或許多本發明化合物。
更具體地，這里所指作為活性成分的本發明制劑中的化合物在治療中可以適當途徑給藥，包括經口，直腸，鼻，表面(包括皮膚，吸入，頰和舌下)，陰道，胃腸外(包括皮下，肌肉內，靜脈內和皮膚)和肺給藥。還應該理解，優選的的途徑將根據患者的病情和年齡，所要治療的病毒和感染的性質而改變。
適于上述各種病毒感染如HCMV和HSV-1治療的劑量一般在每天每公斤患者體重約0.1-250mg范圍，優選的范圍約為每天每公斤患者體重1-100mg，最優選在每天每公斤患者體重約5-20mg范圍。除非另有說明，活性成分的所有重量按本發明制劑的母化合物的鹽或酯的重量計算，因此重量按比例增加。優選在一天中將所需劑量按適當間隔分成兩，三，四，五，六或更多次給藥。這些子劑量可以單位劑量形式給藥，例如，每單位劑量形式可以含有約10-1000mg，優選約20-500mg，最優選約100-400mg活性成分。應該理解，本發明化合物和組合物的合適劑量取決于病毒感染的種類和嚴重性，而且患者與患者之間有所不同。最佳劑量的確定一般考慮到本發明抗病毒治療的治療效果的水平與任何危險或有害的副作用的平衡。
理想地，活性成分給藥后應使血漿中活性化合物的峰值濃度達到約2-100μM，優選約5-70μM，最優選約1-50μM。這是可以達到的，例如，通過靜脈注射約0.1-5％活性成分的鹽水(任意)溶液，或口服給藥含有0.1-250mg/kg活性成分的片劑，囊劑或糖漿。通過連續滴注(約為0.01-5.0mg/kg/h)保持理想的血液濃度，或以約0.4-15mg/kg活性成分的量斷續滴注。有效結合的使用被認為可以提供這樣的治療結合物，其要求每種抗病毒劑成分的總劑量比單獨使用單個治療化合物或藥物所要求的劑量低，因此減少了副作用如細胞毒性。
雖然活性成分可以單獨給藥，但最好在藥物制劑中至少含有一種上述活性成分和一種或多種可藥用載體以及任意含有其它治療劑。每種載體在與制劑中其它成分的相容性方面必須是“可接受的”，而且對患者是無害的。
制劑包括那些適于經口，直腸，鼻，表面(包括皮膚，吸入，頰和舌下)，陰道，胃腸外(包括皮下，肌肉內，靜脈內和皮膚)和肺給藥的制劑。制劑一般可以單位劑量形式存在并可用藥物學領域任何已知方法制備。這些方法包括將活性成分與一種或多種輔助成分構成的載體締合的步驟。總之，制劑是通過均一和最佳地將活性成分與液體載體或精細粉碎的固體載體或兩者混合制備的，如果必要，將產物成形。
適于口服給藥的本發明制劑可以是分散的單元，如囊劑，扁囊劑或片劑，每個含有預先確定量的活性成分；粉劑或粒劑；溶液或水性或非水性液體懸浮液；油包水液體乳劑或水包油液體乳劑。活性成分也可以藥團，藥糖劑或糊劑形式存在。
片劑可以通過任意與一種或多種補充成分一起壓縮或鑄模壓制而成。壓縮的片劑可以在適當機器中用自由流動如粉末或顆粒形狀的活性成分制成，其中可以任意混入結合劑(如聚維酮，明膠，羥丙基甲基纖維素)，潤滑劑，惰性稀釋劑，防腐劑，崩解劑(如甘醇酸鈉淀粉，交叉連接的聚維酮，交聯的羧甲基纖維素鈉)，表面活性劑或分散劑。鑄模壓制的片劑可以在適當機器中用惰性液體稀釋劑濕潤粉狀化合物然后鑄壓而成。可以任意將片劑包衣或修飾，并可用多種比例的，例如，羥丙基甲基纖維素將活性成分制成緩慢或控制釋放的制劑，使其按照所要求的方案釋放。片劑也可以是腸包衣形式，使活性成分在部分腸道內釋放而不是在胃中釋放。
適于在口腔內局部給藥的制劑包括含有活性成分的糖錠劑，其中調味劑，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃著膠，為基本原料；含有活性成分并以惰性物質如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠為基本原料的錠劑；以及在適當液體載體中含有活性成分的漱口液。
本發明局部給藥的藥物組合物可以制成軟膏，乳膏，懸浮液，洗液，粉劑，溶液，糊劑，凝膠，噴霧劑，氣熔膠或油的形式。或者，制劑可以包括浸有活性成分和任意一種或多種賦形劑或稀釋劑的補片或包扎物如繃帶或橡皮膏。
對于眼或其它外部組織如嘴和皮膚感染，制劑最好制成含有適量，例如，約0.075-20％w/w，優選約0.2-25％w/w，最優選約0.5-10如，約0.075-20％w/w，優選約0.2-25％w/w，最優選約0.5-10％w/w，活性成分的局部用軟膏或乳膏。如果要制成軟膏，既可以將活性成分與石蠟也可以與不溶于水的軟膏基質混合。或者，將活性成分與水包油乳膏基質混合制成乳膏。
如果需要，乳膏基質中的水相可以是，例如，至少30％w/w多元醇，即有兩個或多個羥基的醇，如丙二醇，丁-1，3-二醇，甘露糖醇，山梨糖醇，甘油和聚乙二醇，以及它們的混合物。表面制劑最好含有能提高活性成分通過皮膚或其它受作用部位吸收和穿透性能的化合物。這種提高穿透皮膚能力的化合物的實例包括二甲亞砜及其相關類似物。
本發明乳劑中的油相可以用已知方法由已知成分構成。雖然該相可以只含一種乳化劑，但最好是由至少一種乳化劑與脂肪或油或二者的混合物構成。優選親水乳化劑與作為穩定劑的親油乳化劑混合。還優選含油和脂兩者的乳化劑。乳化劑與或不與穩定劑一起形成所謂的乳化蠟，而且，蠟與油和/或脂一起形成所謂的軟膏基，軟膏基構成乳膏制劑的油狀分散相。
適用于本發明制劑的乳化劑和乳化穩定劑包括Tween 60，Span 80，十六基十八烷醇，十四烷醇，甘油一硬脂酸酯和月桂基硫酸鈉。
因為活性化合物在可用于乳化的藥物制劑的大多數油中的穩定性很低，所以，制劑所用的合適的油或脂要根據能否達到所需的潤膚性能進行選擇。因此，乳膏應該最好是非油脂，未著色和具有適當稠度的可洗產物，以避免從管或其它容器中漏出。可以使用直鏈或支鏈的單-或二元烷基酯如二異己二酸酯，硬脂酸異鯨蠟酯，可可油脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸異丙酯，油酸癸酯，棕櫚酸異丙酯，硬脂酸丁酯，棕櫚酸2-乙基己酯或一種稱為Crodamol CAP的支鏈酯，其中最后三種酯是優選的。它們可以根據性質需要單獨使用，或結合使用。或者使用高熔點脂類如白軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適于眼局部給藥的制劑還包括滴眼劑，其中活性成分溶解于或懸浮于適當載體中，水性溶劑尤其適合于活性成分。在這種制劑中活性成分的濃度優選約為0.5-20％，約0.5-10％更好，最好是約1.5％w/w。
直腸給藥的制劑可以是用適當基質如可可油或水楊酸鹽制成的栓劑。
適于陰道給藥的制劑可以是除含有活性成分外還含有本領域技術人員已知的載體的陰道栓劑，塞劑，乳膏，凝膠，糊劑，泡沫或噴劑。
適于鼻內給藥且載體為固體的制劑包括粒徑約為20-500μm的粗糙粉末，它以吸入的方式給藥，即將裝有粉末的容器拿近鼻子，使粉末迅速通過鼻通道被吸入。載體為液體的制劑適合于，例如，噴鼻，滴鼻給藥，或用噴霧器進行噴霧給藥，這些制劑包括活性成分的水性或油性溶液。
適于胃腸外給藥的制劑包括水性或非水性等滲滅菌注射液，其中可以含有抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑和使制劑在患者的血液中等滲的溶質；水性或非水性滅菌懸浮液，包括懸浮劑和增稠劑，脂質體或其它微粒系統，它使化合物到達血液或者一個或多個器官。該制劑可以裝在單劑量或多劑量密封容器中，例如，安瓿和小瓶中，并可以儲存在凍干條件下，在使用前只需要當即加入無菌液體載體如注射用水即可使用。當場(制成的)注射溶液或懸浮液可以由前面所述各種無菌粉末，顆粒或片劑制成。
優選的單位劑量制劑是含有上述日劑量或單位，日亞劑量或適當活性成分的制劑。
應該理解，除了上面特別提到的成分外，本發明制劑還可以含有本領域常用的其它試劑，只要它們適合于制劑類型，例如，適于口服給藥的制劑另外可以含有甜味劑，增稠劑和調味劑。
本發明各式化合物還可以獸用的制劑形式使用，例如，它可用本領域常規方法制備。C修飾的糖取代苯并咪唑的制備一般化學步驟在Thomas-Hoover Unimelt儀上測到的熔點是未經修正的。在360或300MHz得到Bruker WP 360 SY或Bruker 300 SY的核磁共振(NMR)譜。元素分析由密執安大學化學系分析實驗室完成。質譜由密執安大學化學系質譜實驗室完成。快速柱色譜用硅膠60(230-400目，ICN)和Still等人所述技術(Still等人，1978)完成。薄層色譜(TLC)在預洗過的(prescored)硅膠GHLF板(Analtech，Newark，DE，USA)上進行。用UV光(243nm)照射或噴灑20％甲醇硫酸，接著在熱盤中焦化使化合物可見。除非另有說明，蒸發過程在40℃以下水浴中減壓(水吸氣器)進行。
氟化核苷通常用兩種不同的途徑之一合成。一種途徑是將氟引入適當保護的核苷，而另一種途徑是將雜環與氟化的糖衍生物縮合(例如，化學或酶催化)。這兩種方案都經過研究。苯并咪唑核苷的氟化修飾的苯并咪唑核苷的一種合成方法如圖1所示。在此方法中，苯并咪唑核苷，如2，5，6-三氯-1-呋喃糖基-苯并咪唑，用三苯甲基氯(即TrCl)，二甲氨基吡啶(DMAP)和吡啶在80℃處理4天，得到2’，5’-二(三苯甲基化)物和3’，5’-二(三苯甲基)化合物。2’，5’-二(三苯甲基化)化合物與DAST(即SF3NEt2)的吡啶和二氯甲烷(即CH2Cl2)反應，接著與三氟乙酸(即CF3COOH)反應，得到3‘-脫氧-3’-氟化合物，2，5，6-三氯-1-(3’-脫氧-3’-氟-呋喃糖基)苯并咪唑。在一個實例中，化合物是2，5，6-三氯-1-(3’-脫氧-3’-氟-β-呋喃木糖基)苯并咪唑(化合物7)。類似地，用DAST(即SF3NEt2)的吡啶和二氯甲烷(即CH2Cl2)處理3’，5’-二(三苯甲基)化合物，接著用三氟乙酸(即CF3COOH)處理，得到2‘-脫氧-2’-氟化合物，2，5，6-三氯-1-(2’-脫氧-2’-氟-呋喃糖基)苯并咪唑。在一個實例中，化合物是2，5，6-三氯-1-(2’-脫氧-2’-氟-β-呋喃阿糖基)苯并咪唑(化合物6)。
幾種嘌呤與2’-脫氧-2’-氟-阿拉伯呋喃糖基衍生物的糖基化作用已經測定(Chu等人，1989；Pankiewicz等人，1992)。正如本文所述，人們對化合物1的適當保護的衍生物與二烷基氨基三氟化硫(DAST)的氟化作用也有所研究。雖然已有報道說DAST會是幾種核苷的有效氟化劑，但眾所周知保護的呋喃糖部分的構造對獲得想要的來自β-邊的弱親核氟的攻擊是至關重要的(Krezeminski等人，1991；Pankiewicz等人，1993)。由于離去基團在2’-位的置換，呋喃糖環呈現不利于反-消去作用的構型是重要的。這樣的構型可以通過在C-5’和C-3’使用龐大的保護基引入(Theim等人，1985)。
2，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(化合物2)是在類似文獻(Blank等人，1970)所述反應條件下合成的。用TrCl和DMAP的吡啶在80℃對化合物1進行三苯甲基化反應4天，以38％綜合產率得到雙三苯甲基衍生物2，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(化合物2)和2，5，6-三氯-1-(2，5-二-O-三苯甲基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(化合物3)的混合物。試圖通過增加反應時間，反應溫度或用堿代替DMAP催化反應來改進產率，但沒有成功。化合物2和3不可能用快速柱色譜法分離，但可以用薄層色譜法分離(EtOAc/己烷1∶2，侵入四分之三)。這些化合物從乙醚中進行分級結晶更容易分離，得到比例為1∶3的化合物3和2。證實化合物3是2，5-二-O-三苯甲基衍生物，化合物2是3，5-二-O-三苯甲基衍生物是根據同核去偶實驗得出的結論。
雖然所要的3，5-二-O-三苯甲基衍生物(化合物2)只能以10％的產率從化合物1得到，但其異構體2，5-二-O-三苯甲基衍生物(化合物3)卻能以30％的產率得到。用DAST和吡啶的CH2Cl2對化合物3進行氟化可以71％的產率得到2，5，6-三氯-1-(2，5-二-O-三苯甲基-3-脫氧-3-氟-β-D-呋喃木糖基)苯并咪唑(化合物5)。用相同的條件對化合物2進行氟化可以63％的產率得到2，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(化合物4)。用10％CF3COOH的CHCl3對化合物4和5二者進行脫保護，可以良好的產率分別得到脫保護核苷2，5，6-三氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(化合物6)和2，5，6-三氯-1-(3-脫氧-3-氟-β-D-呋喃木糖基)苯并咪唑(化合物7)。
由于氟代衍生物6和7是用DAST從先形成的β-呋喃核糖基核苷(化合物1)合成的，所以，它們分別是β-呋喃阿拉伯糖基和β-呋喃(Herdewijn等人，1989)。對化合物6和7分別被稱為β-阿拉伯呋喃糖基和β-呋喃木糖基衍生物的進一步支持要追溯到以下事實二者都顯示出C7-H和F之間的遠程偶合，化合物6這種偶合作用(J＝1.9Hz)比化合物7(J＝1.7Hz)稍微大一些。這表明氟和雜環是在呋喃糖環的同一面。最后，對于阿拉伯糖衍生物化合物6，1’-H和F之間的偶合是17.7Hz，這種偶合作用指出1’-H和F之間的鄰位反關系(Wright等人，1969)。化合物2和32，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(2)和2，5，6-三氯-1-(2，5-二-O-三苯甲基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(3)將化合物1(5.0g，0.014mol)，DMAP(1.25g，0.014mol)和TrCl(12.0g，0.043mol)的無水吡啶(100mL)混合物在80℃加熱3天。在第2天和第3天加入TrCl(12.0g，0.043mol)。3天后用MeOH(60mL)淬滅反應。減壓濃縮反應混合物，并與甲苯(3×100mL)共蒸發。將所得剩余物在甲苯(150mL)中攪拌，過濾，并將濾液蒸發至干。所得黃色泡沫經快速色譜純化(甲苯0.5L，然后是甲苯/EtOAc 20∶1，5cm×20cm)。合并含有雙三苯甲基化合物的餾分和減壓除去溶劑之后得到化合物2和3的混合物(4.5g，38％)。從EtOEt重結晶得到幾乎全為化合物3的物質，但濾液中化合物2居多。從EtOEt中再結晶兩次將化合物3進一步純化成基本純的物質，得到3.0g(25％)化合物3為白色晶體。將幾乎只含化合物2的濾液蒸發至干，然后從EtOAc/己烷重結晶，得到1.0g(8.4％)純化合物2為白色晶體。
化合物2mp 174-175℃；Rf0.19(甲苯/EtOAc 20∶1)；Rf0.62(EtOAc/己烷1∶2)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.06(s，1H)，8.02(s，1H)，7.13-7.42(m，30H，三苯甲基)，6.24(d，1H，2’-OH，J2’，OH＝6.2Hz)，6.18(d，1H，1’-H，J1’，2’＝8.3Hz)，4.76(m，1H，2’-H，用D2O沖洗變成四重峰J1’，2’＝7.9Hz，J2’，3’＝5.3Hz)，4.23(d，1H，3’-H，J2’，3’＝5，4Hz)，2.93(m，1H，4′-H)，2.86(dm，1H，5’-H)，2.64(dm，1H，5’-H).C50H39Cl3N2O4的元素分析計算值 C，71.65；H，4.69；N，3.34；實測值 C，71.50；H，4.85；N，3.24。
化合物3mp 193-195℃；Rf0.19(甲苯/EtOAc 20∶1)；Rf0.62(EtOAc/己烷1∶2)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.93(s，1H)，7.54(s，1H)，7.01-7.41(m，30H，三苯甲基)，6.22(d，1H，1’-H，J1’，2’＝8.4Hz)，5.39(d，1H，3’-OH，J3’，OH＝6.0Hz)，4.50(dd，1H，2’-H，J1’，2’＝8.4Hz，J2’，3’＝4.4Hz)，4.09(m，1H，4’-H)，3.58(t，1H，3’-H，J3’，OH＝6.0Hz，J2’，3’＝4.4Hz用D2O沖洗變成雙峰 J2’，3’＝4.4Hz)，3.04(dd，1H，5’-H)，3.18(dd，1H，5’-H).C50H39Cl3N2O4·1/2H2O的元素分析計算值C，70.88；H，4.76；N，3.31；實測值C，70.93；H，4.80；N，3.31。化合物42，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(4)將3’，5’-二-O-三苯甲基化合物(化合物2)(0.3g，0.36mmol)溶解于無水CH2Cl2(10mL)。在溶液中加入吡啶(0.3mL，3.6mmol)和DAST(0.24mL，1.8mmol)，并在室溫攪拌反應混合物24hr。再在反應混合物中加入CH2Cl2(200mL)，并用飽和NaHCO3(100mL)萃取混合物，用水(100mL)洗滌。有機相用硫酸鎂干燥，過濾并真空除去溶劑。所得漿液經快速色譜純化(EtOAc/己烷1∶2，2cm×15cm)，收集含有產物的餾分并真空除去溶劑，從EtOH重結晶后得到0.20g(67％)化合物4為白色固體。
化合物4mp 145℃；Rf0.57(EtOAc/己烷1∶2)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ7.65(d，1H，C7-H，J＝3.7Hz，遠程偶合到F)，7.62(s，1H，C4-H)，7.19-7.45(m，30H，Tr)，6.10(dd，1H，1’-H，J1’，F＝24.7Hz，J1’，2’＝2.3Hz)，4.57(m，1H，4’-H)，4.28(dm，1H，3’-H，J3’，F＝15.9Hz)，3.60(dd，1H，2’-H，J2’，F＝50.3Hz，J1’，2’＝2.3Hz)，3.50(m，1H，5’-H)，3.27(m，1H，5’-H).C50H38Cl3FN2O3的HRMSm/z分析，計算值838.1932；實測值838.1949。C50H38Cl3FN2O3的元素分析計算值 C，71.47；H，4.56；N，3.33；實測值 C，71.15；H，4.72；N，3.37。化合物52，5，6-三氯-1-(2，5-二-O-三苯甲基-3-脫氧-3-氟-β-D-呋喃木糖基)苯并咪唑(5)將2’，5’-雙三苯甲基化合物(化合物3)(1.2g，1.44mmol)溶解于無水CH2Cl2(30mL)。在溶液中加入吡啶(1.1mL，14.4mmol)和DAST(1.0mL，7.2mmol)，并在室溫攪拌反應混合物24hr。再在反應混合物中加入CH2Cl2(200mL)，并用飽和NaHCO3(100mL)萃取混合物，用水(100mL)洗滌。有機相用硫酸鎂干燥，過濾并真空除去溶劑。所得漿液經快速色譜純化(EtOAc/己烷1∶2，4cm×15cm)，合并含有產物的餾分并減壓除去溶劑，從EtOH重結晶后得到0.85g(70％)化合物5為白色固體。
化合物5mp＞240℃(分解)；Rf0.6(EtOAc/己烷1∶2)1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73(s，1H)，7.17-7.40(m，31H，C4-H和三苯甲基)，6.17(d，1H，1’-H，J1’，2’＝4.5Hz)，4.54(dd，1H，2’-H，J1’，2’＝4.5Hz，J2’，F＝20.9Hz)，4.14(dm，1H，4’-H，J4’，F＝31.4Hz)，3.99(dd，1H，3’-H，J3’，F＝50.6Hz，J3’，4’＝2.1Hz)，3.50(m，1H，5’-H)，3.27(m，1H，5’-H).C50H38Cl3FN2O3的HRMS m/z分析，計算值838.1924；實測值838.1957。C50H38Cl3FN2O3·1/2H2O的元素分析計算值C，70.72；H，4.63；N，7.88；實測值C，70.82；H，4.77；N，3.35。化合物62，5，6-三氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(6)
將化合物4(0.10g，0.12mmol)溶解于10％CF3COOH的CHCl3(10mL)，并在塞好的燒瓶中于室溫攪拌60分鐘。真空蒸發反應混合物至干，所得油狀剩余物經快速色譜純化(EtOAc/己烷5∶1，2cm×15cm)，收集所要餾分并真空除去溶劑，將白色剩余物從MeOH/H2O結晶后得到25mg(60％)化合物6為白色晶體。
化合物6mp 223℃；Rf0.43(EtOAc/己烷5∶1)；1H-NMR(360MHz，DMSO-d6)δ8.29(d，1H，C7-H，J＝1.9Hz，遠程偶合到 F)，7.93(s，1H，C4-H)，6.44(dd，1H，1’-H，J1’，F＝17.7Hz，J1’，2’＝4.5Hz)，6.02(d，1H，3’-OH，D2O可交換)，5.31-5.35(m，1.5H，5’-OH和0.5 of2’-H，5’-OHD2O 可交換)，5.25(dm，0.5H，2’-H，J2’，F＝53.2Hz，J2’，3’＝2.7Hz)，4.42(dm，1H，3′-H，D2O沖洗變成dddJ3’，F＝24.2Hz，J2’，3’＝2.7Hz 和J3’，4’＝5.9Hz)，3.71-3.86(m，3H，4’-H和5’-H)；13C-NMR(90MHz，DMSO-d6)δ140.81，140.60，134.07，126.07，125.68，119.88，115.61，97.38(2’C，J2’C，F＝192.5Hz)，84.98(1’C，J1’C，F＝17.4Hz)，82.89(4’C)，73.25(3’C，J2’C，F＝24.4Hz)，59.05(5’C，J5’C，F＝9.9Hz)；C12H10Cl3FN2O3的HRMS m/z分析，計算值353.9741；實測值353.9735。C12H10Cl3FN2O3的元素分析計算值 C，40.53；H，2.83；N，7.88；實測值 C，40.55；H，2.94；N，7.48。化合物72，5，6-三氯-1-(3-脫氧-3-氟-β-D-呋喃木糖基)苯并咪唑(7)將化合物5(0.28g，0.32mmol)溶解于10％CF3COOH的CHCl3(20mL)，并在塞好的燒瓶中于室溫攪拌45分鐘。真空蒸發反應混合物至干，所得油狀剩余物經快速色譜純化(EtOAc/己烷5∶1，2cm×15cm)，收集所要餾分并蒸發至干，從MeOH/H2O結晶后得到85mg(74％)化合物7為白色晶體。
化合物7mp 238℃；Rf0.42(EtOAc/己烷5∶1)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.01(s，1H，C4-H)，7.93(d，1H，C7-H，J＝1.7Hz，遠程偶合到 F)，6.29(d，1H，2’-OH，D2O可交換)，5.91(d.1H，1’-H，J1’，2’＝4.6Hz)，5.17(dd，1H，3’-H，J3’，F＝52.8Hz)，5.14(t，1H，5’-OH，D2O可交換)，4.63(dm，1H，2’-H，J2’，F＝22.6Hz，用D2O沖洗變成dd J2’F＝22.6Hz和J1’，2’＝4.6Hz)，4.30(dm，1H，4’-H，J4’，F＝28.5Hz)，3.69-3.84(m，2H，5’-H)；13C-NMR(90MHz，DMSO-d6)δ141.80，140.94，132.19，125.967，120.40，113.61，113.53，96.90(3’C，J3’C，F＝184.1Hz)，91.14(1’C，J1’C，F＝4.6Hz)，80.46(4’C，J4’C，F＝19.8Hz)，77.81(2’C，J2’C，F＝26.89Hz)，57.71(5’C，J5’C，F＝9.96Hz)；C12H10Cl3FN2O3的HRMS m/z分析，計算值353.9741；實測值353.9747。C12H10Cl3FN2O3的元素分析計算值 C，40.53；H，2.83；N，7.88；實測值 C，40.77；H，2.88；N，7.56。氟化糖與苯并咪唑的偶合修飾的苯并咪唑核苷的另一種合成方法如圖2所示。在該方法中氟化的糖類化合物被合成，然后與苯并咪唑反應形成所要的化合物。例如，2’，3’-和5’-位被苯甲酰基保護(即-OC(＝O)C6H5)和1’-位被乙酸基保護(即-OC(＝O)CH3)的呋喃糖被轉化成1’-脫氧-1’-溴-2’-脫氧-2’-氟-3’，5’-苯甲酰基-呋喃糖(見Howell等人，1995)。這種溴代呋喃糖與苯并咪唑如2，5，6-三氯苯并咪唑在有4埃分子篩的1，2-二氯乙烷(即ClCH2CH2Cl)中于80℃反應2天，生成2，5，6-三氯-1-(2’-脫氧-2’-氟-3’，5’-苯甲酰基-呋喃糖基)苯并咪唑異構體的混合物，接著用氨(即NH3)的甲醇(即CH3OH)脫保護，得到2，5，6-三氯-1-(2’-脫氧-2’-氟-呋喃糖基)苯并咪唑。在一個實例中化合物是2，5，6-三氯-1-(2’-脫氧-2’-氟-β-呋喃阿糖基)苯并咪唑(化合物6)。
我們通過將氟化的阿拉伯呋喃糖化合物(如化合物8和9)偶合成苯并咪唑(如2，5，6-三氯-苯并咪唑，化合物6)對化合物6的合成進行了研究。最初，我們試圖用Vorbruggen條件和試圖將化合物6的堿性鹽糖基化，但沒有成功。用類似Montgomery等人(Montgomery等人，1986)所述條件卻成功地完成了化合物6與1-溴-3，5-二-O-苯甲酰基-2-脫氧-2-氟-α-D-阿拉伯呋喃糖(化合物9；Tann等人，1985；Howell等人，1988)的縮合。即，在80℃在4埃分子篩存在下將化合物6與化合物9在二氯乙烷中縮合，得到所要的2，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脫氧-2-氟-β-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(化合物12)及其α-異構體(化合物11)。化合物12之所以被稱作β-異頭物以及化合物11被稱作α-異頭物部分地是由于它們的質子譜。化合物17的氟和1’-H之間的偶合常數是J1’，F＝23.1Hz，表示質子與氟的鄰位反關系。對于化合物16該常數是J1’，F＝17.4Hz，表示質子與氟的鄰位順關系(Wright等人，1969；Tann等人，1985；Howell等人，1988；Reichman等人，1975)。對異頭物命名的另一個根據可追溯到以下事實化合物16中為7.91ppm的C7-H通過與氟的遠程偶合分裂(由于C7-H和F之間的偶合使信號為雙重峰，J＝3.2Hz)，在化合物17的7.79ppm處的C7-H觀察不到這種情況(這種條件下信號是單峰)。
對縮合條件的進一步研究表明異頭物的比例很大程度上取決于縮合條件。在非極性溶劑如二氯乙烷和苯中，上述縮合條件下得到的幾乎都是β-異頭物化合物17(α/β之比為1/5-1/10)。但是，在極性較強的溶劑如乙腈和硝基甲烷中α-異頭物化合物16(α/β之比為5/1-10/1)是主要產物。在非極性溶劑如二氯乙烷中的產率(80％，β/α＝8/1)明顯好于在極性溶劑如乙腈中的產率(9％，β/α＝1/7)。
在甲醇氨中的化合物12經過脫保護得到與上述化合物6性質一致的化合物。因此，已經開發出合成化合物6的另一途徑，該方法可以近50％的產率由雜環(化合物6)和溴代糖(化合物15)得到化合物6，而用以前方法只能有近5％的產率。化合物11和122，5，6-三氯-1-(3，5-二-O-三苯甲基-2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(12)及其α-異構體(11)將2-氟代糖化合物8(1.20g，2.6mmol；Tann等人，1985)溶解于CH2Cl2(10mL)，然后加入33％HBr的CH3COOH溶液(2.64mL，10.4mmol)。將反應混合物在塞好的燒瓶中攪拌6hr。在反應混合物中加入CH2Cl2(100mL)，然后依次用冰冷的飽和NaHCO3(100mL)和冰冷的水(100mL)洗滌有機相。CH2Cl2溶液經硫酸鎂干燥，過濾和減壓除去溶劑，得到化合物9的無色漿液。
將該漿液溶解于ClCH2CH2Cl(10mL)，并加到事先制好的含有2，5，6-三氯-苯并咪唑(化合物10)(0.6g，2.6mmol)和活化的4埃分子篩的ClCH2CH2Cl(10mL)溶液中。將所得混合物在80℃和惰性氣體中加熱2天，然后在反應混合物中加入CH2Cl2(100mL)和飽和NaHCO3溶液(100mL)。分離有機相并用水(100mL)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并真空除去溶劑。所得固體經快速色譜純化(EtOAc/己烷1∶2，4cm×15cm)。收集快速流出的含有核苷的餾分，濃縮至干并從MeOH/H2O結晶，然后從EtOH重結晶，得到0.12g(8％)化合物11為白色晶體。緩慢流出的含有核苷的餾分中摻雜有少量化合物10。收集這些摻雜的餾分，濃縮至干并在第二個柱上重新色譜分離(5％MeOH的CHCl3，4cm×15cm)。收集適當餾分并減壓除去溶劑后得到白色固體，將其從MeOH/H2O重結晶，得到1.0g(72％)化合物12。
化合物11mp78-80℃；Rf0.60(EtOAc/己烷1∶2)；Rf0.9(5％MeOH于CHCl3)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ8.12和8.00(2m，4H)，7.79(s，1H)，7.72(s，1H)，7.24-7.63(m，6H，苯甲酰基)，6.64(dd，1H，1’-H，J1’，2’＝3.9Hz，J1’，F＝17.4Hz)，5.82(dd，1H，2’-H，J2’，F＝18.7Hz，J2’，3’＝1.9Hz)，5.63(dm，1H，3’-H，J3’，F＝49.3Hz)，4.94(m，1H，4’-H)，4.88(dd’1H，5’-H)，4.67(dd，1H，5’-H)；C26H18Cl3FN2O5的HRMS m/z分析，計算值562.0265；實測值562.0276。C26H18Cl3FN2O5的元素分析計算值C，55.39；H，3.22；N，4.97；實測值 C，55.74；H，3.23；N，4.87。
化合物12mp 88-90℃；Rf0.36(EtOAc/己烷1∶2)；Rf0.67(5％MeOH于CHCl3)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ8.07-8.18(m，4H)，7.91(d，1H，C7-H，J＝3.2Hz遠程偶合到F)，7.43-7.73(m，7H，苯甲酰基和C4-H)，6.40(dd，1H，1’-H，J1’2’＝2.7Hz，J1’，F＝23.1Hz)，5.78(dd，1H，3’-H，J3’，F＝19.0Hz，J3’，4’＝3.8Hz)，5.39(dd，1H，2’-H，J1’，2’＝2.7Hz，J2’，F＝50.3Hz)，4.91(m，2H，5′-H)，4.57(q，1H，4’-H，J3’，4’＝3.6Hz)；C26H18Cl3FN2O5的HRMS m/z分析，計算值562.0265；實測值562.0254。C26H18Cl3FN2O5的元素分析計算值C，55.39；H，3.22；N，4.97；實測值C，55.38；H，3.23；N，4.83。化合物62，5，6-三氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)苯并咪唑(6)將化合物12(0.5g，0.9mmol)溶解于甲醇氨，并將溶液在室溫攪拌6hr。真空除去溶劑，剩余物經快速色譜純化(EtOAc/己烷5∶1，2cm×15cm)。收集適當餾分并蒸發至干，從MeOH中結晶后得到與前面化合物6性質一致的0.23g(74％)白色固體。
修飾的苯并咪唑核苷的另一種合成方法如圖3所示。在該方法中含有氟化的糖類部分的尿苷衍生物與苯并咪唑在酶N-脫氧呋喃核糖基轉移酶存在下反應，生成所要的化合物。該化合物的苯并咪唑部分可以進一步被衍生，例如在2-位，得到2-取代的苯并咪唑核苷(例如，2-Br，2-NR2)。化合物155，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(15)將用Codington等人(Codington等人，1968)所述方法制備的2’-脫氧-2’-氟代尿苷(化合物13)(0.99g，4mmol)溶解于800mL檸檬酸鹽緩沖液(50mM，pH6.0)。加入用Townsend等人(Townsend等人，1970)所述方法制備的5，6-二氯苯并咪唑(化合物14)(0.30g，1.6mmol)，然后將反應置于50℃的水浴。加入N-脫氧-呋喃核糖基轉移酶(60,000單位，見Cook等人，1990)，然后將反應混合物輕柔搖動過夜。再加入5，6-二氯苯并咪唑(化合物14)(0.30g，1.6mmol)，并繼續反應2天。加入Celite(50-60g)，然后過濾反應混合物。通過在80℃加熱，接著冷卻到室溫，得到酶的沉淀。用乙酸乙酯(3×)萃取產物。真空除去乙酸乙酯，剩余物在75g堿性氧化鋁上繼續色譜純化，用95∶5(v/v)至9∶1(v/v)至2∶1(v/v)至1∶1(v/v)的氯仿/甲醇梯度洗脫。合并含有產物的餾分并真空除去溶劑，得到0.54g(67％)化合物15。
化合物15MS(FAB+)m/z，321，M+1.1H-NMR(DMSO-d6)δ8.62(s，1H，H-2)，8.19(s，1H，Ar-H)，7.96(s，1H，Ar-H)，6.35(dd，1H，H-1’，J1’，2’＝3.5Hz，J1’ F＝14.9Hz)，5.74(br s，1H，OH)，5.23(dt，1H，H-2’，J1’，2’＝3.5Hz，J2’，3’＝4.4Hz，J2’，F＝52.4Hz)，5.23(brs，1H，OH)，4.35(dt，1H，H-3’，J2’，3’＝4.4Hz，J3’，4’＝5.3Hz，J3’，F＝15.9Hz)，3.98(m，1H，H-4’)，3.66(dd，2H，H-5’，J＝3.4Hz，J＝12.5Hz).化合物165，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-3，5-二乙酰基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(16)將化合物15(0.45g，1.4mmol)溶解于吡啶(20mL)并煮沸除去水。將溶液在冰浴中冷卻到0℃。加入乙酸酐(260μL，2.9mmol，2當量)，允許反應混合物升至室溫同時攪拌過夜。加入甲醇(3mL)并真空除去溶劑。與甲苯(3×)共蒸發除去殘余的吡啶。剩余物在水和乙酸乙酯之間分配。乙酸乙酯溶液經硫酸鎂干燥，過濾和真空除去溶劑后得到0.56g(98％)化合物16。該產物無需進一步純化即可使用。
化合物16MS(FAB+)m/z，405，M+1.1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.59(s，1H，H-2)，8.05(s，1H，Ar-H)，8.01(s，1H，Ar-H)，6.45(dd，1H，H-1’，J1’，2’＝4.8Hz，J1’，F＝14.8Hz)，5.75(dt，1H H-2’，J＝5.2Hz，J2’，F＝51Hz)，5.40(m，1H，H-3’)，4.43(m，1H，H-4’)，4.28(m，2H，H-5’)，2.13(s，3H，乙酰基-CH3)，2.02(s，3H，乙酰基-CH3).化合物17，18和192-溴-5，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-3，5-二乙酰基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(17)，2-溴-5，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-5-二乙酰基-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(18)，和2-溴-5，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(19)將化合物16(0.55g，1.4mmol)溶解于二噁烷(25mL)并煮沸除去水。將溶液在120℃油浴中加熱回流。加入N-溴琥珀酰亞胺(NBS，0.48g，2.8mmol，2當量)，并將反應混合物回流4分鐘。加入第二批NBS(0.48g，2.8mmol，2當量)，并將繼續回流6分鐘。將反應混合物拿離熱源，用氯仿(40mL)稀釋，并冷卻到室溫。溶液用飽和碳酸氫鈉洗滌(2×)，硫酸鎂干燥并過濾。真空除去溶劑，剩余物在75g硅膠上色譜純化，用乙酸乙酯/己烷(1∶1，v/v)洗脫。合并含有產物的餾分并真空除去溶劑，得到化合物17。通過在甲醇和乙醇(各17mL)中用溶解于4.2mL水的碳酸鈉(0.22g，2.1mmol，2當量)處理完成乙酰基的水解。將反應混合物在室溫攪拌過夜。用水(40mL)稀釋溶液。用乙酸乙酯萃取產物(2×)。乙酸乙酯溶液用硫酸鎂干燥，過濾并真空除去溶劑。剩余物在75g硅膠上色譜純化，用乙酸乙酯/己烷(1∶4，v/v)然后是(1∶2，v/v)梯度洗脫。較快洗脫出的產物是5’-乙酰基化合物(化合物18，0.17g)，第二種洗脫的產物是二羥基化合物(化合物19，0.03g)。
化合物18MS(FAB+)m/z，399，M+1.1H-NMR(DMSO-d6)δ8.46(s，1H，Ar-H)，7.95(s，1H，Ar-H)，6.22(dd，1H，H-1’，J1’，2’＝5.4Hz，J1’，F＝14.5Hz)，5.82(d，1H，OH-3’，J＝5.6Hz)，5.45(t，1H，OH-5’，J＝4.5Hz)，5.29(dt，1H，H-2’，J＝5.2Hz，J2’，F＝53Hz)，4.3(m，1H，H-3’)，4.0(m，1H，H-4’)，3.7(m，2H，H-5’).
化合物191H-NMR(DMSO-d6)δ8.00(s，1H，Ar-H)，7.90(s，1H，Ar-H)，6.25(dd，1H，H-1’，J1’，2’＝5.1Hz，J1’，F＝16.5Hz)，5.95(d，1H，OH-3’，J＝6Hz)，5.40(dt，1H，H-2’，J＝5.3Hz，J2’，F＝53Hz)，4.4-4.1(m，4H，H-3’，4’，5’)，2.13(s，3H，CH3-乙酰基).化合物20 2-異丙氨基-5，6-二氯-1-(2-脫氧-2-氟-β-D-呋喃核糖基)苯并咪唑(20)將化合物18(0.06g，0.14mmol)溶解于乙醇(4mL)，并加入異丙胺(1.3mL)。將溶液封閉在90℃油浴中加熱17hr。真空除去溶劑，剩余物在6g硅膠上色譜純化，用氯仿/甲醇(95∶5，v/v)洗脫。合并含有產物的餾分并真空除去溶劑，得到化合物20(0.03g，57％)。
化合物20MS(APCH+)m/z，378，M+1.1H-NMR(DMSO-d6)δ7.66(s，1H，H-2)，7.37(s，1H，Ar-H)，6.92(d，1H，NH J＝7.7Hz)，6.17(dd，1H，H-1’，J1’，2’＝5.3Hz，J1’，F＝15.4Hz)，5.73(d，1H，OH-3’，J＝5.7Hz)，5.63(t，1H，OH-5’，J＝4.3Hz)，5.12(dt，1H，H-2’，J＝5.3Hz，J2’，F＝53Hz)，4.29(dt，1H，H-3’)，4.02(m，1H，CH)，3.94(m，1H，H-4’)，3.68(m，2H，H-5’)，1.16(d，6H，CH3，J＝6.5Hz).D.抗病毒活性和細胞毒性的測定細胞和病毒將KB細胞(利用American Type Culture Collection(ATCC)12301Parklawn Drive，Rockport，MD20852(ATCC CCL 17))，一種由表皮口腔癌衍生的建立的人細胞系，在Hanks鹽(MEM(H))并補充有5％胎牛血清構成的最小基本培養基(MEM)(Sigma)中培養。人前皮纖維細胞(HFF細胞)(由密執安大學醫院提供)和非洲綠猴腎細胞(BSC-1) (ATTC CCL 26)在Earl鹽(MEM(E))并補充有10％胎牛血清構成的MEM中培養。根據常規方法和Shipman等人(Shipman等人，1976)所述方法讓細胞傳代繁殖。簡而言之，根據常規方法用0.05％胰蛋白酶加0.02％EDTA在HEPES緩沖的鹽溶液中將細胞傳代到1∶2-1∶10稀釋度。HFF細胞只傳到1∶2稀釋度。
將衣阿華大學Dr.Mark Stinski贈送的HCMV的Towne菌株的純分離菌斑塊P0用于所有實驗。還用到康涅狄格大學Dr.Sandra K.Weller提供的HSV-1的KOS菌株。HCMV和HSV-1存儲形式的制備和滴定按本領域技術人員已知的以及Turk等人(Turk等人，1987)和Shipman等人(Shipman等人，1990)所述方法進行。簡而言之，高滴定HSV-1儲藏液可制備如下。將KB細胞的幾乎融合的單層培養物在裝有25mM HEPES并補充有5％胎牛血清和0.127g/升L-精氨酸(VGM，病毒生長基)MEM(E)緩沖液的32oz.玻璃瓶中培養。以低輸入復雜度使培養物感染以減少殘缺病毒的形成。當細胞的細胞病理學達到“3-4+”后通過劇烈搖動收集細胞，并通過離心(800×g，5min.)濃縮。將所得病毒池儲存在-76℃，直到實驗時恢復使用。
用BSC-1細胞的單層培養物滴定HSV-1。用6孔一組的盤子以3×105細胞/孔的配置培植細胞。補充有10％胎牛血清的MEM(E)被用作培養基。22-24hr后90％的細胞融合，用至少3個10倍稀釋度的0.2mL病毒懸浮液給3倍量的細胞接種以便測定，并在潮濕的4％CO2-90％空氣中孵化1小時以利于病毒吸收。病毒吸收后用5％血清加0.5％甲基纖維素(4000CPS)的5mL MEM(E)覆蓋細胞形成的膜，并繼續孵化2-3天。用0.1％紫晶的20％甲醇固定細胞和給細胞著色，用肉眼清點斑塊個數。
通過以較少感染度(m.o.i.)，即每個細胞形成0.01個斑塊單位(p.f.u.)，感染HFF細胞來制備HCMV儲藏液。細胞生長基每4天更換一次直到所有細胞的細胞病理學明顯(將近21天)。上清液作為病毒儲藏液保存。4天后經過3個凍-化循環使細胞分裂，細胞加培養基作為另一種病毒源被保留，在液氮中貯存。
將HCMV滴定到24孔一組的盤中，按5×104HFF細胞/孔培植，培養方法如上。當細胞達到70-80％融合時每個孔中加入0.2mL病毒懸浮液，吸收過程如上所述。使用至少3個將每個制品稀釋10倍的制品。病毒吸收后在維持培養基[1.1g/升NaHCO3，100單位/mL青霉素G，100μg/mL鏈霉素和5％胎牛血清構成的MEM(E)]中用0.5％甲基纖維素(4000CPS)覆蓋細胞形成的膜，并在潮濕的4％CO2-90％空氣中孵化1小時孵化培養物。用至少放大10倍的量感染5-7天后可見病毒斑塊。感染后7-12天將細胞暴露于0.1％紫晶的20％甲醇溶液10分鐘以固定細胞和給細胞著色。用Nikon Profile Projector顯微鏡放大20倍清點斑塊個數。抗病毒活性的測定采用類似作為參考的上述病毒滴度實驗和Townsend等人(Townsend等人，1995)所述方法用HFF細胞的單層培養物進行HCMV斑塊和降低產率實驗。化合物抗HSV-1活性用Townsend等人(Townsend等人，1995)所述ELISA測定法進行評估。
化合物對HCMV復制的作用用斑塊和產率降低測定法進行測量。對于前者，采用上述方法用每孔約50p.f.u.HCMV感染24孔培養盤中的HFF細胞。病毒吸收后將溶解于生長基中的化合物以4-6倍所選濃度加到兩倍孔中。在37℃孵化7-10天后按上述方法對細胞形成的膜進行固定，著色和通過顯微鏡清點斑塊個數。藥物的作用用斑塊數量減少的百分比計算，即在各種藥物濃度下的斑塊數量與無藥物時的斑塊數量之比。DHPG(9-(1，3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌呤)在所有實驗中被用作陽性對照。產率降低測定法按Townsend等人(Townsend等人，1995)所述方法進行。
Townsend等人(Townsend等人，1995)所述的ELISA方法被用來測定抗HSV-1活性。藥物的作用用病毒滴度減少的百分比計算，即在各種藥物濃度下的病毒滴度與無藥物時的滴度之比。在所有實驗中阿昔洛韋被用作陽性對照。細胞毒性的測定用兩種不同的方法評價化合物的細胞毒性。第一種，通過對未受用于斑塊測定的病毒影響的細胞的顯微檢測測定二次(固定)HFF細胞的細胞毒性。第二種，通過紫晶著色和分光光度法定量分析從著色細胞上洗脫的顏色測定兩個繁殖雙倍時間內化合物對KB細胞的作用。這種方法被用來分析9-(1，3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌呤和疊氮胸苷(見Prichard等人，1991)。
本發明兩種氟化糖苯并咪唑核苷的抗病毒活性和細胞毒性數據，以及與已知抗病毒劑TCRB和9-(1，3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌呤的比較數據列于表1。
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本發明三種氟化糖苯并咪唑核苷的抗病毒活性和細胞毒性數據列于表2。
將HCMV菌株AD169在96孔盤內的單層人胚胎肺細胞(MRC5細胞)中培養。以每個細胞約0.01個感染病毒顆粒的比例注入細胞后以6種不同濃度一式三份地在相應孔中加入試驗化合物。相同濃度的化合物也加到含有單層未感染的細胞的孔中以便評價細胞毒性。將盤培養5天，通過顯微檢測估計最小細胞毒劑量。通過印跡和定量的具體DNA雜交法(類似于Gadler方法(見Gadler，1983))對各孔中的HCMV DNA進行測量以估算抗病毒效果IC50。
簡而言之，雜交用的探針用粘粒pC7531和pCS37(見Sullivan等人，1993)制成。粘粒分別含有102,000-143,300核苷和51,600-92,900核苷構成的HCMV AD169序列。該探針是用核酸酶Xbal切割之后由α-[32P]-dCTP采用隨機引物和T7 DNA聚合酶(Pharmacia)標記的兩個粘粒的1∶1混合物。該探針經過在99℃加熱2分鐘改性，并經過無菌Corning0.45μm濾膜(25933-200)過濾。
膜的預雜交過程在45℃的6X SSPE (SSPE0.18M NaCl，10mMNaPO4(pH7.7)，1mM EDTA)，1％Ficoll，1％聚乙烯基吡咯烷，1％BSA，0.5％SDS和50μg/mL鮭魚血清DNA中進行2-12hr。
用含有各加熱變性的探針為1×106cpm/mL的雜交溶液(6XSSPE，0.5％SDS，50μg/mL鮭魚血清DNA)代替預雜交溶液。雜交過程在65℃進行16hr，然后洗滌該膜如下6X SSPE及0.5％SDS，室溫，2×2分鐘；1X SSPE及0.5％SDS，65℃，2×15分鐘；0.1XSSPE及0.5％SDS，65℃，一次1小時。
將膜涂干，并用PhosphoImager(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)包成定量分析用的Saran包。將PhosphoImager的屏幕暴露于印跡16-24小時。每個樣品的粗計數用ImageQuant軟件(MolecularDynamics，Sunnyvale，CA)計算，通過減去局部膜本底得到凈計數。
將藥物稀釋孔的計數與未處理對照孔的計數比較得到響應曲線，用來計算IC50值。根據Hill方程進行加權線性回歸計算IC50值。
上述本發明實例是為了說明本發明，而不是為了也不應該以任何方式構成對下面權利要求書所要求的發明的限制。另一方面，在本發明范圍之內的提高和改進對本發明所涉及的領域中的技術人員都將是顯而易見的。E.參考文獻下列作為參考的出版物，專利及公開的專利申請的內容在此引作本發明公開的參考，以對本發明涉及的現有技術進行更詳細的描述。Blank，H.U.；Frahne，D.；Myles，A.；Pfleiderer，W.，“Uber dieTrityllierung von Adenosin-Derivate.”，《利比希化學年鑒》，1970年，第742卷，第34-42頁Chu，C.K.；Matulic-Adamic，J.Huang，J.-T.；Chou，T.-C.；Burchenal，J.H.；Fox，J.J.；Watanabe，K.A.，“核苷135，一些9-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-9H-嘌呤的合成及其生物活性”，《化學藥物公告》，1989年，第37卷，第336頁Codington，J.F.；Doerr，I.L.；Fox，J.J.，《有機化學雜志》，1964年，第29卷，第558頁Cook等人，《生物化學雜志》，1990年，第265卷，第2682頁Devivar，R.V.等人，《醫藥化學雜志》，1994年，第37卷，第2942-2949頁Gadler，《抗生素化學(Antimicrob.Agent Chemother.)》，1983年，第24卷，第370-374頁Good等人，《抗病毒劑研究(增刊1)》，1994年，第23卷，第103頁Herdewijn，P.；Aerchot，A.；Kerremans，L.，“糖部分氟化的核苷的合成；二乙氨基三氟化硫在氟化核苷合成中的應用”，《核苷和核苷酸》，1989年，第8卷，第65-96頁，以及其中的參考文獻Howell等人，《有機化學雜志》，1995年，第50卷，第3644-3647頁Howell，H.G.；Brodfuehrer，P.R.；Brundige，S.P.；Benigne，，D.A.；Sapino，C.，“抗病毒核苷；一種立體特異的全部合成的2’-氟-2’-脫氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基核苷”，《有機化學雜志》，1988年，第53卷，第85-88頁Krezeminski，J.；Nawrot，B.；Pankiewicz，K.W.；Watahabe，K.A.，“9-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)次黃嘌呤的合成；在制備嘌呤核苷方法中首次直接引入2’-β-氟取代基；直接對2’-脫氧-2’-取代的阿拉伯核苷合成的研究”，《核苷和核苷酸》，1991年，第19卷，第781-798頁Montgomery，J.A.；Shortnacy，A.T.；Carson，D.A.；Secrist III，J.A.，“9-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)鳥嘌呤2’-脫氧鳥苷的一種代謝穩定的細胞毒類似物”，《醫藥化學雜志》，1986年，第29卷，第2389-2392頁Pankiewicz，K.W.；Krezeminski，J.；Ciszewski，L.A.；Ren，W.Y.；Watanabe，K.A.，“9-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤和次黃嘌呤的合成；C3’-內至C2’-內形成的漂移對2‘-羥基與DAST反應過程的影響”，《有機化學雜志》，1992年，第57卷，第553-559頁Pankiewicz，K.W.；Watanabe，K.A.，《一種通過直接接近合成2’-氟-和3’-氟取代的嘌呤核苷的方法；作為抗腫瘤劑和抗病毒劑的核苷》，Chu，C.K.；Baker，D.C.編輯，Plenum出版社，紐約，1993年，第55-71頁Prichard，M.N.等人，《抗病毒綜述》，1991年，第35卷，第1060-1065頁Reichman，U.；Watanabe，K.A.；Fox，J.J.，“2-脫氧-2-氟-D-阿拉伯呋喃糖衍生物的實用合成方法”《碳水化合物綜述》，1975年，第42卷，第233-240頁Revenkar，R.G.和Townsend，L.B.，《雜環化學雜志》，1968年，第5卷，第477-483頁Revenkar，R.G.和Townsend，L.B.，《雜環化學雜志》，1968年，第5卷，第615-620頁Saluja，S.等人，“某些2-取代的-5，6-二氯苯并咪唑無環核苷的合成和抗病毒活性”，Poster#146，醫藥化學專業，第204屆美國化學學會年會，華盛頓特區，1992年8月23-28日Shipman，C.，Jr.等人，《抗生素化學》，1976年，第9卷，第120頁Shipman，C.，Jr.等人，《病毒學方法雜志》，1990年，第28卷，第101-106頁Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra，A.，“用調節溶液進行制備性分離的快速色譜技術”，《有機化學雜志》，1978年，第43卷，第2923-2925頁Tamm，I.，《科學》，1954年，第120卷，第847-848頁Tann，C.H.；Brodfuehrer，P.R.；Brundige，S.P.；Sapino，C.；Howell，H.G.，“氟代碳水化合物在合成中的應用；1-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘尿嘧啶(β-FMAU)和1-(2-脫氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘尿嘧啶(β-FIAU)胸腺嘧啶(β-FMAU)的有效合成”，《有機化學雜志》，1985年，第50卷，第3644-3647頁Thiem，J.；Rash，D.，“尿苷衍生物的合成和Perkow反應”，《核苷和核苷酸》，1985年，第4卷，第487頁Townsend和Revankar，《化學綜述》，1970年，第70卷，第389頁Townsend，L.B.和Drach，J.C.，第5屆抗病毒研究國際會議，溫哥華，British Columbia，1970年3月Townsend，L.B.等人，《醫藥化學雜志》，1995年，第38卷，第4098-4105頁Townsend，L.B.等人，美國專利5,248,672，公開于1993年9月28日Townsend，L.B.等人，美國專利5,360,795，公開于1994年11月1日Turk，，S.R.等人，《抗生素化學》，1987年，第31卷，第544-550頁V.Sullivan，K.K.Biron，C.L.Talarico，S.C.Stanat，M.G.Davis，L.S.Pozzi和D.M.Coen，《抗生素化學》，1993年，第37卷，第19-25頁Wright，J.A.；Taylor，N.F.；Fox，J.J.，核苷LX，氟代碳水化合物XXII，“2-脫氧-2-氟-D-阿拉伯糖和9-(2-脫氧-2-氟-α和β-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤的合成”，《有機化學雜志》，1969年，第34卷，第2632-2636頁Zou，R.等人，“一些在苯部分改性的TCRB類似物的設計，合成和抗病毒評價”，Poster#142，醫藥化學專業，第204屆美國化學學會年會，華盛頓特區，1992年8月23-28日
權利要求
1.下面結構式所示修飾的苯并咪唑核苷及其可藥用鹽，
其中R1是氟化糖類部分；R2是-H，-F，-Cl，-Br，-I或-NR2，其中R獨立地為-H或具有1-6個碳原子的烷基；R4是-H，-F，-Cl，-Br或-I；R5是-H，-F，-Cl，-Br或-I；R6是-H，-F，-Cl，-Br或-I；R7是-H，-F，-Cl，-Br或-I。
2.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中所說氟化糖類部分包括2’-氟-呋喃糖基部分或3’-氟-呋喃糖基部分。
3.權利要求2的修飾的苯并咪唑核苷，其中所說氟化糖類部分包括選自以下基團的部分2’-氟-呋喃蘇糖基；3’-氟-呋喃蘇糖基；2’-氟-呋喃赤糖基；3’-氟-呋喃赤糖基；2’-氟-呋喃核糖基；3’-氟-呋喃核糖基；2’-氟-呋喃阿糖基；3’-氟-呋喃阿糖基；2’-氟-呋喃木糖基；及3’-氟-呋喃木糖基。
4.權利要求3的修飾的苯并咪唑核苷，其中所說氟化糖類部分包括選自以下基團的部分2’-氟-呋喃核糖基；2’-氟-呋喃阿糖基；及3’-氟-呋喃木糖基。
5.權利要求4的修飾的苯并咪唑核苷，其中所說氟化糖類部分具有一個或多個保護形式的羥基。
6.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中R1是2’-氟-呋喃阿糖基；R2是-Cl；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；及R7是-H。
7.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中R1是3’-氟-呋喃木糖基；R2是-Cl；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；及R7是-H。
8.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-H；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；及R7是-H。
9.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-Br；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；及R7是-H。
10.權利要求1的修飾的苯并咪唑核苷，其中R1是2’-氟-呋喃核糖基；R2是-NH(CH(CH3)2)；R4是-H；R5是-Cl；R6是-Cl；及R7是-H。
11.含有根據權利要求1-10任何一個中的化合物和可藥用載體的組合物。
12.根據權利要求1-10任何一個中的化合物的用途，包括單獨或結合用于抑制或防止病毒感染藥物的制備。
13.一種抑制病毒感染的細胞中病毒增殖的方法，包括在適當條件下將所說細胞與有效量的權利要求1-10任何一個中的化合物接觸，使病毒增殖得到抑制。
14.一種抑制HCMV感染的細胞中HCMV增殖的方法，包括在適當條件下將所說細胞與有效量的權利要求1-10任何一個中的化合物接觸，使HCMV增殖得到抑制。
15.一種預防性治療易感染病毒細胞的方法，包括在適當條件下將所說細胞與有效量的權利要求1-10任何一個中的化合物接觸，使病毒感染得到預防。
16.一種預防性治療易感染HCMV細胞的方法，包括在適當條件下將所說細胞與有效量的權利要求1-10任何一個中的化合物接觸，使HCMV感染得到預防。
全文摘要
本發明涉及具有抗病毒活性和改善了代謝穩定性的核苷類似物。更具體地,本發明涉及修飾的糖類苯并咪唑核苷,列舉的化合物如具有氟化糖類部分的苯并咪唑核苷(例如,2’－氟－呋喃糖基部分或3’－氟－呋喃糖基部分),可用式(Ⅰ)表示,其中R
文檔編號C07H19/052GK1258300SQ97192559
公開日2000年6月28日 申請日期1997年1月22日 優先權日1997年1月22日
發明者L·B·湯森德, J·C·達拉克, G·A·弗里曼 申請人:密歇根大學董事會, 格拉克索集團有限公司