專利名稱：生長激素促分泌素的制備方法
背景技術：
由垂體分泌的生長激素刺激身體所有易生長組織生長。此外，生長激素據知在身體的代謝過程中有以下基本作用(1)增加身體中所有細胞的蛋白合成率；(2)降低身體中細胞的碳水化合物利用率；(3)增加游離脂肪酸的活動和其能量的利用。生長激素分泌缺乏可以導致各種疾病，例如侏儒癥。
已知多種釋放生長激素的方式。例如，化學制品例如精氨酸、L-3，4-二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)、高血糖素、后葉加壓素和胰島素引起的血糖過低癥，還有活動，例如睡眠和運動，通過某些方式作用在下丘腦上或許可以降低生長激素釋放的抑止因子的分泌或者增加已知的促分泌素生長激素釋放因子(GRF)或未知的內源生長激素釋放激素的分泌或以上三種作用同時發生來間接引起生長激素由垂體釋放。
當想要增加生長激素水平時，通常是通過提供外源生長激素或通過供給GRF或肽類化合物來解決問題，它們刺激生長激素的產生和／或釋放。無論哪種情況，通過注射供給肽基類化合物是必須的。最初生長激素的來源是從尸體的垂體腺中提取。這導致一種非常昂貴的產品和帶來將與垂體腺來源相關的疾病可能傳染給生長激素接受者的風險。重組體生長激素的已可獲得，雖然不用再冒被傳染疾病的風險，但其還是一種非常昂貴的產品，并且必須通過注射或鼻噴的方式給藥。刺激內源生長激素釋放的另外一些化合物已被開發。
具體地說，在PCT專利WO94／13696和Proc．Natl．Acad．Sci．USA，92，7001-7005(July 1995)中所公開的一些螺環化合物，作為非肽類生長激素促分泌素。這些化合物能刺激天然的或內源的生長激素釋放，因此可以用來處理需要刺激生長激素產生或分泌的情況，例如用于天然生長激素缺乏的人或用于食用或產毛動物，刺激生長激素，從而得到更大量、更高產的動物。
在這里，被公開的優選化合物是螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(苯甲基-氧基)乙基]2-氨基-2-甲基丙酰胺，結構如下
PCT專利WO 94／13696公開了制備該化合物的方法(見實施例18，19和55)。然而，需使用非常貴的氨基酸偶合劑EDC($ 1100／kg)合成該化合物，使用大當量的三氟乙酸作為BOC基團去保護催化劑；貴的色譜提純法和得到“膠狀”最終產物。
本發明的優點包括6步不需分離的高產率方法提供了純度≥99．9％的物質；通過使用DCC[$ 40／kg]代替EDC[$ 1100／kg]降低費用；通過在去保護反應中使用較小當量的甲磺酸作為催化劑代替三氟乙酸減小了對環境的影響，并且最終產物易分離。
發明概述本發明涉及結構如下式的化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’基)羰基]-2-(苯基甲基氧乙基)-2-氨基-2-甲基-丙酰胺及其鹽，特別是甲磺酸鹽的制備方法。
該化合物能刺激天然的或內源的生長激素釋放，因此可以用來處理需要刺激生長激素產生或分泌的情況，例如用于天然生長激素缺乏的人或用于食用或產毛動物，刺激生長激素，從而得到更大量、更高產的動物。
發明說明本發明涉及結構如下式的化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’基)羰基]-2-(苯基甲基氧乙基)-2-氨基-2-甲基-丙酰胺及其鹽，特別是甲磺酸鹽的新制備方法。
本方法從易得的便宜和環境可接受的起始物試劑和溶劑得到所需化合物。本方法無須使用任何色譜提純法，可從螺二氫吲哚磺酰胺中間體直接生產最終產物，而不需要分離任何中間體。
總方法中的各個方法概述如下方案Ⅰ
方案Ⅰ(續)
(其中L是適宜的氨基保護基和X-是適合的陰離子)。
該總方法中，第一方法涉及通式Ⅰ化合物的制備
式中L是氨基保護基，通過通式如下的氨基酸
在惰性溶劑中的酸活化劑和催化劑存在下，與通式如下的化合物偶合制得通式Ⅰ化合物，
本方法適合的酸活化劑包括DCC、EDC、ECAC和BOP，其中優選的酸活化劑是DCC(N，N’-二環己基碳二亞胺)。
本方法適合的催化劑包括HOBT等，其中優選的催化劑是HOBT(羥基苯并三唑)。
本方法適合的惰性溶劑包括乙腈，乙酸異丙脂，乙酸乙脂，丙腈，水，氯化烴如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、鄰二氯苯，苯，甲苯，二甲苯等等，和它們的混合物，其中優選的溶劑或者是乙腈或者是乙酸異丙脂和水。
優選的反應溫度范圍是-40-150℃，和最優選的溫度范圍是20-35℃。
適合的氨基保護基包括芐基、芐氧基甲基、芐氧基羰基、芐磺酰基、2-溴-乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-氯-芐氧基羰基、2-氯-乙氧基羰基、二-t-戊氧基羰基、9-fluoroenyl-甲氧基羰基、異丙氧基羰基、4-甲氧基-芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基苯磺酰基、鄰苯二甲酰基、2，2，2-三氯-t-丁氧基羰基、三氟乙酰基、三苯甲烷、烯丙氧基羰基和乙烯氧基羰基等，其中優選的氨基保護基包括芐氧羰基、t-丁氧基羰基，而其中最優選的是t-丁氧基羰基。
從實效性考慮，優選用上述方法制備后，通式Ⅰ化合物不需分離直接就地進行偶合反應。
該總方法中，第二方法涉及通式Ⅱ化合物的制備
該方法包括通式Ⅰ化合物
式中L是氨基保護基，與氨基去保護試劑反應得通式Ⅱ化合物。
適合的氨基保護基包括芐基、芐氧基甲基、芐氧基羰基、芐磺酰基、2-溴-乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-氯-芐氧基羰基、2-氯-乙氧基羰基、二-t-戊氧基羰基、9-fluoroenyl-甲氧基羰基、異丙氧基羰基、4-甲氧基-芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基苯磺酰基、鄰苯二甲酰基、2，2，2-三氯-t-丁氧基羰基、三氟乙酰基、三苯甲烷、烯丙氧基羰基和乙烯氧基羰基等，其中優選的氨基保護基包括芐氧羰基、t-丁氧基羰基，而其中最優選的是t-丁氧基羰基。
在本方法中，通過使用適合的催化劑可以完成對氨基保護基的去除。去除叔丁氧基羰基保護基可以在一種有強酸的溶劑中進行，例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙脂或乙酸異丙脂。所說的強酸包括甲磺酸、三氟乙酸、鹽酸、氯化氫氣、溴化氫、碘化氫、三氟甲磺酸、樟腦磺酸、硫酸、磷酸和芳基磺酸，例如苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。優選的催化劑包括三氟乙酸、甲磺酸、樟腦磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。最優選的催化劑是甲磺酸。優選的溶劑是甲醇或乙醇，最優選乙醇。
優選的反應溫度范圍是-40-150℃，最優選的溫度范圍是10-40℃。
通過很多方法可完成對芐氧基羰基的去除，例如，在貴金屬或其氧化物存在下以氫催化氫化，例如在極性溶劑如乙醇中的Pd／C。由于存在其它潛在的活性官能團而禁忌催化氫化的情況下，也可以用乙酸中的溴化氫溶液處理，或用TFA和二甲硫混合物處理來去除芐氧羰基。
從效率考慮，優選用上述方法制備通式Ⅱ化合物后，不需分離而就地進行該酸催化去保護反應。
該總方法中，第三方法涉及通式Ⅲ化合物的制備
式中L是氨基保護基，通過通式如下的氨基酸
式中L是氨基保護基在惰性溶劑中和酸活化劑和催化劑存在下，與通式Ⅱ化合物偶合得通式Ⅲ化合物。
本方法適合的酸活化劑包括DCC、EDC、ECAC和BOP，其中優選的酸化劑是DCC(N，N’-二環己基碳二亞胺)。
本方法適合的催化劑包括HOBT等，其中優選的催化劑是HOBT(羥基苯并三唑)。
本方法適合的惰性溶劑包括乙腈，乙酸異丙脂，乙酸乙脂，丙腈，水，氯化烴如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、鄰二氯苯，苯，甲苯，二甲苯等等，和它們的混合物，其中優選的溶劑是乙酸異丙脂和水的混合物，優選的體積比是約40∶60至60∶40，特別優選的體積比是約50∶50。
優選的反應溫度范圍是-40-150℃，最優選10-40℃。
適合的氨基保護基包括芐基、芐氧基甲基、芐氧基羰基、芐磺酰基、2-溴-乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-氯-芐氧基羰基、2-氯-乙氧基羰基、二-t-戊氧基羰基、9-fluoroenyl-甲氧基羰基、異丙氧基羰基、4-甲氧基-芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基苯磺酰基、鄰苯二甲酰基、2，2，2-三氯-t-丁氧基羰基、三氟乙酰基、三苯甲烷、烯丙氧基羰基和乙烯氧基羰基等，其中優選的氨基保護基包括芐氧羰基、t-丁氧基羰基，而其中最優選的是t-丁氧基羰基。
從效率考慮，優選按上述方法制備通式Ⅲ化合物后不需分離就地進行該偶合反應。另一方面，通式Ⅲ化合物也可以分離出來作為另用的中間體。
該總方法中，第四方法涉及通式Ⅳ化合物或其可藥用鹽的制備
該方法包括通式Ⅲ化合物
式中L是氨基保護基，與氨基去保護試劑反應得通式Ⅳ化合物。
適合的氨基保護基包括芐基、芐氧基甲基、芐氧基羰基、芐磺酰基、2-溴-乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-氯-芐氧基羰基、2-氯-乙氧基羰基、二-t-戊氧基羰基、9-fluoroenyl-甲氧基羰基、異丙氧基羰基、4-甲氧基-芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基苯磺酰基、鄰苯二甲酰基、2，2，2-三氯-t-丁氧基羰基、三氟乙酰基、三苯甲烷、烯丙氧基羰基和乙烯氧基羰基等，其中優選的氨基保護基包括芐氧羰基、t-丁氧基羰基，而其中最優選的是t-丁氧基羰基。
在本方法中，通過使用適合的催化劑可以完成對氨基保護基的去除。去除叔丁氧基羰基保護基可以在一種有強酸的溶劑中進行，例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙脂或乙酸異丙脂。所說的強酸包括甲磺酸、三氟乙酸、鹽酸、氯化氫氣、溴化氫、碘化氫、三氟甲磺酸、樟腦磺酸、硫酸、磷酸和芳基磺酸，例如苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。優選的催化劑包括三氟乙酸、甲磺酸、樟腦磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。最優選的催化劑是甲磺酸。優選通式Ⅴ的化合物以其甲磺酸鹽的形式分離。優選溶劑是甲醇或乙醇，和最優選的溶劑是乙醇。
通過很多方法可完成對芐氧基羰基的去除，例如，在貴金屬或其氧化物存在下以氫催化氫化，例如在極性溶劑如乙醇中的Pd／C。由于存在其它潛在的活性官能團而禁忌催化氫化的情況下，也可以用乙酸中的溴化氫溶液處理，或用TFA和二甲硫混合物處理來去除芐氧羰基。
從效率考慮，優選用上述方法制備通式Ⅳ化合物后，不需分離而就地進行該酸催化去保護反應。
該總方法中，第五方法涉及通式Ⅳ化合物的可藥用鹽，特別是它的甲磺酸鹽，即通式Ⅴ化合物的制備
該方法包括通式Ⅳ化合物
與酸，優選甲磺酸反應得通式Ⅴ化合物。
優選通式Ⅴ化合物以甲磺酸鹽的形式被分離。優選的溶劑包括乙酸乙脂和乙醇，最優選的溶劑是乙酸乙脂和乙醇的混合物。
從效率考慮，優選用上述方法制備通式Ⅴ化合物后，不需分離而就地進行鹽反應。
在本發明的優選的方案中，總方法中的各個方法概述如下方案Ⅱ
方案Ⅱ(續)
在該優選方案中，氫化之前，以Darco(20％重量)處理化合物1 CBZ-螺二氫吲哚。氫化反應以在65℃下的乙醇中，在10％ Pd／C上激烈攪拌下進行。
在二環己基碳二亞胺(DCC)和1-羥基苯并三唑(HOBT)存在下，將在乙酸異丙脂和水中的化合物1b溶液與市場上買到的N-BOC-O-芐基-D-絲氨酸偶合。將副產物二環己基脲(DCU)過濾除去后，分離兩相濾液并用1M氫氧化鈉水溶液，0．5M鹽酸水溶液和最后是飽和碳酸氫鈉水溶液依次洗滌有機層。當在iPrOAc／H2O中的游離氨溶液用DCC、HOBT處理后，接著在室溫下加入氨基酸，并反應3-5小時，該偶合反應的結果獲得改進。真空濃縮并將溶劑從乙酸異丙脂轉換成乙醇。該溶劑轉換一般以“加入和排出”三批量體積快速進行以便除去乙酸異丙脂。
在35-40℃下，用乙醇中的甲磺酸(MsOH)(3當量)處理化合物11的BOC-基團。然后，分配到乙酸異丙脂和1M氫氧化鈉水溶液中，得化合物12。
在DCC和HOBT(各1．1當量)存在下，化合物12與N-BOC-α-氨基異丁酸的偶合反應，最好在乙酸異丙脂／水(1∶1)的兩相溶劑系統中進行。過濾除去DCU，分離兩層并用1M氫氧化鈉水溶液，0．5M鹽酸水溶液和最后是飽和碳酸氫鈉水溶液依次洗滌有機層。得化合物14。
為了接著使甲磺酸上的BOC基團斷開，將混合溶劑轉換成乙醇。化合物14的去保護反應比化合物11的去保護反應更困難，它需要乙醇／甲磺酸的濃溶液和加熱至35-40℃。萃取后處理(EtOAc-NaOH)后，分離出游離胺15。有機層用1N NaOH充分洗滌以確保甲磺酸完全被除去。
游離堿15的乙酸乙脂溶液被真空濃縮至少量并通過“加入和排出”2批量體積比90／10的乙酸乙脂／乙醇，接著加入2批量體積的乙酸乙脂共沸干燥(KF＜500mg／ml)。室溫下，用Darco G-60(25％重量)處理在乙酸乙脂中的共沸干燥得到游離堿15的輕微混濁液約10小時。通過過濾劑過濾除去Darco，得游離堿15。
在約50℃，用EtOAc中的15與1．1當量MsOH進行反應，形成它的甲磺酸鹽16。用8％體積的EtOH和1當量水處理游離堿15并加熱至55℃直至其完全溶解。冷卻至室溫并攪拌所得漿液4小時，得結晶物16，稱為晶型Ⅱ[在IPA中的溶解性是12mg／ml]。
當將晶型Ⅱ轉變成晶型Ⅰ時，按上述在EtOAc-EtOH中形成鹽，但不是將55℃的鹽初始液冷卻至45℃而是冷卻至室溫。在45℃開始出現晶體并隨時間變化，漿液變得濃稠。然后升溫至51℃，并將漿液陳化過夜。完成希望的16的晶型Ⅰ轉變。
優選在50-55℃，向游離堿的EtOAc-EtOH溶液中加入晶型Ⅰ的晶種，接著陳化來完成晶型Ⅱ向晶型Ⅰ的轉變。相應地，可以在50-55℃下，用在8％乙醇的乙酸乙脂溶液中的1．1當量甲磺酸處理游離堿15。用大約2％重量的甲磺酸鹽16的晶型Ⅰ作為晶種結晶，然后在55℃陳化過夜，冷卻至室溫并再陳化約2-3小時。在氮氣氣氛下和室溫下，過濾分離產物，35℃下真空干燥并篩分得到甲磺酸鹽16。
甲磺酸鹽16也可通過在約50℃下，向游離堿的EtOAc-EtOH溶液中交替分次加入MsOH(1．1當量)和晶型Ⅰ的晶種來形成，其中加入MsOH和晶種的順序不是關鍵。
在本申請中，所用縮寫有以下含義Bu 丁基Bn 芐基BOC，Boc 叔丁氧基羰基BOP 苯并三唑-1-基氧三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸酯calc． 計算值CBZ，Cbz 芐氧羰基DCC N，N’-二環己基碳二亞胺DIEA 二-異丙基乙基胺DMF N，N-二甲基甲酰胺DMAP 4-二甲氨基吡啶EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDAC 乙基-3-(3-二甲氨基)-丙基碳二亞胺EI-MS電子離子-質譜Et 乙基eq． 當量(s)FAB-MS 快速原子轟擊質譜h，hr小時HOBT，BOBt 羥基苯并三唑HPLC 高效液相色譜iPrOAc 酸異丙酯KHMDS雙(三甲基硅烷基)氨基化鉀LAH 氫化鋰鋁LHMDS雙(三甲基硅烷基)氨基化鋰Me 甲基MF 分子式MHz 兆赫茲MPLC 中壓液相色譜MsOH 甲磺酸NMM N-甲基嗎啉NMR 核磁共振Ph 苯基Pr 丙基prep． 制備TFA 三氟乙酸THF 氫呋喃TLC 薄層色譜TMS 甲基硅烷在上文結構通式和說明書中，以下術語有特定含義本文中術語“肽偶合反應”意思是，在催化劑例如HOBT存在下，使用在惰性溶劑中的酸活化劑，例如EDC、DCC和BOP使羧酸與胺偶合。對該偶合反應適合的惰性溶劑包括乙腈，乙酸異丙脂，乙酸乙脂，丙腈，水，氯代烴如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、鄰二氯苯，苯，甲苯，二甲苯和它們的混合物等。
可變的“L”和術語“氨基保護基”意思是在適合的氨基保護存在下，例如在Green，T．W．，Wuts，P．G．M．有機合成中的保護基，2nded．，JohnWiley & Sons，Inc．，New York，1991中所描述的。適合的保護基可以在去保護之前經受得住中間過程的反應條件。整個方法中的各個方法各自獨立地選擇氨基保護基。
適合的氨基保護基包括芐基、芐氧基甲基、芐氧基羰基、芐磺酰基、2-溴-乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-氯-芐氧基羰基、2-氯-乙氧基羰基、二-t-戊氧基羰基、9-fluoroenyl-甲氧基羰基、異丙氧基羰基、4-甲氧基-芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基苯磺酰基、鄰苯二甲酰基、2，2，2-三氯-t-丁氧基羰基、三氟乙酰基、三苯甲烷、烯丙氧基羰基和乙烯氧基羰基等，其中優選的氨基保護基包括芐氧羰基、t-丁氧基羰基，而其中最優選的是t-丁氧基羰基。
在本方法中，通過使用適合的催化劑可以完成對氨基保護基的去除。去除t-叔丁氧基羰基保護基可以在一種有強酸的溶劑中進行，例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙脂或乙酸異丙脂。所說的強酸包括甲磺酸、三氟乙酸、鹽酸、氯化氫氣、溴化氫、碘化氫、三氟甲磺酸、樟腦磺酸、硫酸、磷酸和芳基磺酸，例如苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。優選的催化劑包括三氟乙酸、甲磺酸、樟腦磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸和p-氯苯磺酸。最優選的催化劑是甲磺酸。優選的溶劑是甲醇或乙醇。
通過很多方法可完成對芐氧基羰基的去除，例如，在貴金屬或其氧化物存在下以氫催化氫化，例如在極性溶劑如乙醇中的Pd／C。由于存在其它潛在的活性官能團而禁忌催化氫化的情況下，也可以用乙酸中的溴化氫溶液處理，或用TFA和二甲硫混合物處理來去除芐氧羰基。
本發明方法中作為起始物使用的胺化合物可以為它們的鹽，例如用有機和無機酸所得的鹽。此類酸的例子如鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、馬來酸、琥珀酸、丙二酸、甲磺酸等。用本發明的方法制得的類似化合物可以以它們的藥用鹽的形式被分離。此外，一些含有酸性官能團如羧基的化合物，可以是它們的無機鹽形式，其陽離子可選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等，以及由有機堿形成的鹽。
以本發明方法制備化合物可以用順序合成路線或匯聚合成路線進行。人們注意到，在某些情況下，上述反應方案的次序可以改變以使反應便于進行或避免得到不希望的反應產物。一般來說，本發明的方法以文中所述的順序方式進行。
一些起始物可在市場上獲得或在文獻中已知和另一些可按照文獻中描述的類似化合物的制備方法制得。進行反應所需的技術和所得反應的提純技術是工藝上已知的。提純操作包括結晶，正相或反相色譜。
以下所提供的實施例只是起進一步說明的目的，而不是打算限制本發明。
實施例1
異哌啶甲酸-N-芐基氨基甲酸脂(3)物質異哌啶甲酸(2)T．C．I．4．02 kg(31．1mol)氯甲酸芐酯(Schweitzerhall)6．91 kg(40．5mol)K2CO310．1 kg(72．9mol)水40．2 L將異哌啶甲酸(2)和K2CO3溶于100L 4頸瓶中的40．2L水中，N2氣氛下機械攪拌并將該溶液冷卻至10℃。保持溫度在9-14℃之間，加入氯甲酸芐脂，加完后將此混合物溫熱至22℃并陳化58小時。在4小時加完氯甲酸芐脂時，混合物pH為9．0。陳化58小時后，pH不改變。
將該反應混合物轉移至200L提取器中并用3*13Kg(15L)IPAC和1*12LEtOAc洗滌。用8L甲苯提取水層。通過HPLC分析知直到洗液中苯甲醇含量從3．8％減低至1．4％。HPLC分析Dupont Zorbax 25cm RXC8柱，1．5ml／min和檢測波長254nm；乙腈／0．1％H3PO4水溶液(35∶65)混合物；保留時間3=6．8min，苯甲醇=3．3min，甲苯=17．3min。
用37％HCl水溶液酸化水相至pH1．8。加入HCl時放出二氧化碳，但放氣易控制。需要10L濃HCl并在1小時內加入。用3*6．6L甲苯提取水相。用2Kg硫酸鈉干燥甲苯提取物并通過Solka-flocTM墊過濾。合并的濾液重17．8Kg。氨基甲酸脂3粗產率是7．89Kg(97％)(將濾液按重量等分蒸發至干得到)。將濾液通過10μ管線中的濾器轉移至100L燒瓶中。在25℃以下，于10m bar壓力下將提取物濃縮至18L。氨基甲酸脂3的最終濃度為440g／L。該濃度的甲苯濾液有助于共沸除去最終的痕量水(最終KF=170mg／L)。產物為99．1面積％純度和僅有0．9面積％的苯甲醇雜質。
實施例2
異哌啶甲酰氯-N-芐基氨基甲酸脂(4)物質異哌啶甲酸-N-芐基氨基甲酸酯7．89kg(30．0mol)in在甲苯中(MW=263．30) 17．9L草酰氯(MW=126．93) 3．94kg(31．0mo1)DMF(MW=73．10) 10mL甲苯 12L向上述步驟所得的氨基甲酸芐脂3的甲苯溶液中加入5mlDMF和10L甲苯。20min內加入草酰氯。在低的氮氣氣流下，于18℃下，將該反應混合物陳化16小時。用HPLC分析反應混合物，仍有1．3％的羧酸3未反應。將反應混合物溫熱至26℃，并加5ml DMF。陳化混合物2．5小時。
用5．0ml叔丁基胺驟停1．0ml等分反應混合物。蒸發后用HPLC分析50℃25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1ml／min，檢測波長220nm；42％乙腈，58％的0．1％H3PO4水溶液。該方法顯示剩余的酸3＜0．05％(用A判斷)和＞3面積％B(＞1％(COCl)2)
在20-25℃下，于10m bar壓力下濃縮混合物至除去5L溶劑。
在上述方法中用t-BuNH2驟冷反應后，濃縮甲苯溶液的典型HPLC結果如下保留時間(min) 面積％ 成分2．1 ＜0．5％羧酸37．8 ＜0．5％芐基氯11．0 ＞99％ Cbz-t-丁基酰胺A12．1 NA 甲苯12．7 ＜0．5％二叔丁基草酰胺B實施例3
哌啶-4-甲醛-1-芐基氨基甲酸脂(5)物質異哌啶甲酰氯-N-芐基氨基甲酸酯(4)3．38kg(12．0mol)在甲苯中(MW=281．74)在5．54kgDIEA(KF=18 mg／L) 1．55kg(15．0mol)10％Pd／C(KF＜20 mg／g) 101g茴香硫醚(MW=124．21，d=1．058) 0．56g將DIEA和茴香硫醚加到上述步驟所得的(4)的甲苯溶液中，并將該催化劑懸浮于該混合物中。將混合物立刻置于5加侖高壓釜中，并在40psi氫壓下和20℃氫化。18小時后，反應吸收70％理論量的氫氣，用叔丁基胺驟停等分部分反應物，顯示剩余14．2面積％的酰氯2。HPLC條件同上。保留時間5=8．1min
第二次向氫化器中加入催化劑(101g)和茴香硫醚(0．54g)的甲苯(1375ml)漿液。23小時后，用叔丁基胺驟停等分部分，HPLC分析顯示剩余1．8面積％的酰氯2。用氮氣清洗混合物并用Solka-flocTM過濾除去催化劑和DIEA·HCl沉淀。用10L甲苯洗滌濾餅。濾液通過10μ管線中的濾器轉移至50L提取器并用2*7．2L 1MHCl水溶液和2*7．2L水洗滌。在10m bar壓力下和25-30℃下濃縮該混合物至剩余5L。
保留時間(min)面積％成分2．1 ＜2 羧酸36．6 ＜1 二聚體28．1 ＞95 醛5HPLC分析醛3含量是94％。
實施例4
CBZ-螺二氫吲哚(9)物質哌啶-4-甲醛-1-芐基 1．71kg(6．89 mol)氨基甲酸酯的甲苯溶液在21．4溶劑中苯肼900mL，981g(9．15mol)三氟乙酸(TFA) 2．20L，3．26kg(28．6mol)NaBH4300g，(7．93mol)甲苯34．4kgMeCN 7．0LMeOH 7．0L
將上述步驟制得的粗醛5溶液通過10μ管線中的濾器轉移至100L反應器中，該反應器裝備有用來冷卻或加熱的涂有特氟隆的銅線圈和機械攪拌器。加入甲苯(34．4Kg)和MeCN(7L)，并將所得溶液冷卻至0℃。在-1-3℃下一次加入苯腈同時不間斷地向反應混合物中通氮氣。
加入苯腈直至TLC和HPLC分析顯示醛5耗盡和苯腈稍微過量(＜5％)。TLC條件硅膠E．Merck Kieselgel G60 F254 0．25mm；乙醚／戊烷(4／1)；和展開劑0．5％硫酸鈰，14％鉬酸銨的10％硫酸水溶液，然后加熱；Rf醛5=0．52、苯腙7=0．61、苯腈6=0．21。HPLC條件30℃25cm Dupont ZorbaxRXC8柱，流速1．0ml／min，檢測波長254nm，剃度洗脫表如下時間(min) 乙腈∶水0 57∶431065∶351575∶251875∶25保留時間苯腈6=4．5min、甲苯=7．2min、苯腙7=11．4min。
0-2℃下陳化反應混合物30分鐘，并在維持2-7℃下加入TFA。30分鐘內將反應混合物溫熱至50℃，并保持17小時。停止向反應混合物中鼓入氮氣，并在反應混合物上維持低氮氣流。5℃下第一小時顏色逐漸變深至深綠色，并形成相對少量的白色晶形沉淀物(三氟乙酸銨)。17小時后HPLC分析(條件如上所述)顯示反應混合物含有91．6％(面積)假吲哚8和1．5％未反應的剩余苯腙。延長混合物的陳化時間不能增加假吲哚8的產率。
將反應混合物冷卻至12℃，加入7．0L MeOH。30分鐘內保持溫度低于15℃，多次加入小量NaBH4(＜20g)。在加入過程中觀察到中等速度放出氫氣，但放氣容易控制并實際不起泡。接近加入過程終點時，顏色迅速從綠色變成棕色，然后變成亮桔色。少量(＜200ml)較重一相被分離(大概為鹽水溶液)。HPLC分析(條件同前)顯示全部假吲哚8已消耗盡(90．4面積％CBZ-二氫吲哚9)；保留時間假吲哚8=7．5min，二氫吲哚9=8．2min。TLC乙酸乙脂為溶劑，硫酸鈰-鉬酸銨著色劑或1％茴香醛著色劑；Rf假吲哚8=0．18，CBZ-二氫吲哚9=0．33。
非常接近反應終點時，顏色從綠色變成相應的橘黃色。使反應完成所需的NaBH4的量特別依賴于加入NaBH4的溫度和速度，但產物的質量和產率實際上不受反應完成條件的影響。30分鐘內將反應混合物冷卻至5℃。然后加入3％NH4OH水溶液(8L)，調節水相pH至7．4，攪拌混合物后，讓其沉降。升溫至15℃。分離下層混濁的黃色水相。用4L 3％的NH4OH水溶液、2*4L水和2*4L鹽水洗滌有機相。洗滌之后的有機相重為53．5Kg，產率為94％。
合并洗過的甲苯溶液和另外兩次類似反應過程的有機相。三次反應中所用醛總量為5．06Kg，(20．5mol)。合并的有機相中檢出的CBZ-二氫吲哚9總重為5．91Kg，(18．3mol，產率90％)。用硫酸鈉(5Kg)干燥合并的有機相，用250g Darco G60碳處理3分鐘，并用Solka-flocTM過濾。在＜25℃和10m bar壓力下真空濃縮濾液至殘余物近干燥。通過在30L IPAC緩慢排放并在50-60℃和200m bar壓力下再濃縮至14L來完成溶劑的轉換。為了得到澄清均相的深橘黃色溶液，將混合物回流加熱。1H NMR分析顯示溶劑轉換后溶液中剩余甲苯大約為6摩爾％。
將溶液冷卻至68℃并加入4g CBZ-二氫吲哚9晶種。6小時內將溶液逐漸冷卻至26℃并在20-26℃下陳化9小時。1小時內將漿液冷卻至2℃，并在2℃陳化1小時。過濾分離產物，用2*2L和5℃的IPAC和2*2L 5℃的MTBE洗滌濾餅。氮氣氣氛下，30℃真空干燥箱內干燥產物，得4．37Kg標題化合物9(74％)，為淺褐色晶形粉末。HPLC分析產物，99．5面積％純度。母液(11L)和洗液中含有1．15Kg(19％)附加產物9和大約3％的CBZ-異哌啶甲酸苯酰肼(保留時間=4．8分鐘)。
實施例5
CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1)物質CBZ-螺二氫吲哚(9) 1．69kg(5．23mol)甲磺酰氯599g(5．23mol)Et3N(KF=151) 635g(6．27mol)THF(KF=41) 12L
將CBZ-螺二氫吲哚9固體裝入一22L燒瓶中，然后通過10μ管線中的濾器將11．5L THF和Et3N轉入燒瓶。將得到的均相溶液冷卻至0℃。在一個1L滴液漏斗中裝入甲磺酰氯和500ml THF。保持0-4℃下，將MsCl的THF溶液加到反應混合物中。加入過程共計5小時并放熱。加入過程中形成大概是三乙胺鹽酸鹽的白色沉淀。HPLC分析顯示加入終點時反應完成(9不能檢測到)。
HPLC條件Dupont Zorbax 25cm RXC8柱，1．5ml／min和檢測波長254nm，剃度洗脫程序如下時間(min)0．1％H3PO4水溶液∶MeCN070∶30370∶3012 20∶8025 20∶80保留時間9=7．6min，1=13．6min。
加入過程完成后，將反應混合物溫熱至18℃并陳化16小時。反應混合物外觀沒變化，加入終點和陳化16小時后作HPLC分析。1小時內，將反應混合物緩慢轉移至激烈攪拌著的裝有30L水和200ml 37％HCl水溶液的50L燒瓶中。將50L燒瓶中的溫度從22℃升至28℃。當淺褐色膠狀固體變成粒狀固體時分離產物。將懸浮水溶液冷卻至22℃并陳化1小時。過濾懸浮液，用2*4L MeOH／水(50／50)洗滌濾餅。HPLC分析顯示母液中有＜0．1％的CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺1。
用加有50ml 28％NH4OH水溶液的MeOH／水(50／50)(4L)洗滌濾餅。用2*4L MeOH／水(50／50)洗滌濾餅，并在氮氣氣氛下，50℃真空干燥箱中干燥固體，得2．03Kg標題產物1(97％)，為灰白色粉末。HPLC分析顯示93．7面積％固體1。
實施例6
分離中間體CBZ-螺假吲哚(8)的任選方法物質哌啶-4-甲醛-1-芐基的氨基甲酸酯(5) 12．37g(0．050mol)苯肼 5．41g(0．050mol)三氟甲酸(TFA) 11．56mL，17．10 g(0．150mol)甲酰氯 500L將CBZ-醛5溶于在備有涂特氟隆的磁力攪拌棒的1L燒瓶中的二氯甲烷中。將所得溶液冷卻至0℃。保持-1-3℃，同時不間斷地向反應混合物中鼓氮氣下，5分鐘內，通過稱過重的注射器加入苯肼。
TLC和HPLC分析顯示CBZ-醛5耗盡和苯肼略微過量(＜2％)。TLC條件硅膠E．Merck Kieselgel G60 F254 0．25mm；乙醚／戊烷(4／1)；和展開劑0．5％硫酸鈰，14％鉬酸銨的10％硫酸水溶液，然后加熱；Rf醛5=0．52、苯腙7=0．61、苯腈6=0．21。HPLC條件30℃25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1．0ml／min，檢測波長254nm，剃度洗脫表如下時間(min) 乙腈∶水0 57∶4310 65∶3515 75∶2518 75∶25保留時間苯腈6=4．5min、甲苯=7．2min、苯腙7=11．4min。
0-2℃陳化反應混合物10分鐘，保持2-7℃下通過注射器加入TFA。30分鐘內將反應混合物溫熱至35℃，并維持17小時。停止向反應混合物中鼓氮氣，在反應混合物上維持低流量氮氣。35℃的第一小時，顏色逐漸變深至粉紅色，然后變成深綠色，并形成少量白色晶型沉淀(三氟乙酸銨)。陳化17小時后，HPLC分析(條件同上)顯示反應混合物含有93面積％假吲哚8和＜0．5％未反應的苯腙。延長該混合物的陳化時間不能增加假吲哚8的產率。
將反應混合物冷卻至10℃，并將含有60ml 28-30％氫氧化銨、90ml水和150g碎冰的混合物在充分攪拌下加入反應混合物。混合物顏色變成赭色。分離有機相并用400mL水，然后用100ml飽和NaCl水溶液洗滌兩次。硫酸鎂干燥有機相并通過5g硅膠墊過濾。蒸發濾液得15．84g假吲哚8(99％)，為淺橙色油。
實施例7
CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺的制備方法(1)不分離中間體CBZ-螺二氫吲哚(9)步驟1CBZ-螺二氫吲哚(9)物質哌啶-4-甲醛-1-芐基的氨基甲酸酯(5) 49．5 g(0．20mol)苯肼(Aldrich) 23．7 g(0．22mol)三氟乙酸(TFA) 75．4 g(0．66mol)甲苯(KF＜250mg／L) 654mLMeCN(KF＜250mg／L)13．3mLNaBH411．3g，(0．30mol)甲苯 20mLMeOH 50mL由654ml甲苯和13．3ml MeCN組成的2％(體積)MeCN的甲苯溶液。向一備有磁力攪拌器的2L 3頸瓶中的617ml上述溶液中通純氮氣5分鐘，使溶液脫氣。脫氣的同時，向該混合物中加入苯肼和TFA。
將CBZ-醛5溶于上述制得的剩余溶液(50ml)中，并通過向溶液中吹氮氣使其脫氣。將燒瓶中的溶液加熱至35℃，2小時內，向苯肼-TFA中緩慢加入醛溶液。35℃下陳化混合物16小時。
HPLC條件50℃ 25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1ml／min，檢測波長220nm；55％MeCN、45％的0．1％H3PO4水溶液。陳化16小時后典型HPLC結果如下保留時間(min) 面積％ 成分1．60．1-0．5苯肼64．1＜0．1 二聚體214．7＜0．1 醛55．0NA 螺二氫吲哚96．3NA 甲苯6．997 螺假吲哚810．3 ＜0．2 其它雜質每個＜0．2％2-3總計將混合物冷卻至-10℃，加入MeOH。注意不超過-2℃下，30分鐘內，分次小量(1ml)加入氫硼化鈉的甲苯懸浮液(20ml)。
面積％成分0．1-1苯肼685-90 CBZ-螺二氫吲哚9＜0．1CBZ-螺假吲哚810-15總計 其它雜質(每個＜3％)1小時內升溫至10℃，加入6％氨水溶液(200ml)。攪拌混合物10分鐘，讓其再沉降10分鐘，并放出下層水相。向有機相中加乙腈(20ml)和MeOH(20ml)并用150ml 15％鹽水洗滌有機相。發現有機相中含有92％產率的CBZ-螺二氫吲哚(9)。
步驟2CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1)物質CBZ-螺二氫吲哚(9)(分子量=322．51) (0．184mol)甲磺酰氯 21．1g(0．184mol)DIEA(KF=150mg／L) 29．7，40．1mL(0．230mol)THF(KF=41mg／L)150mL
將上述步驟1得到的CBZ-螺二氫吲哚9粗溶液在1L三頸瓶(60-70℃，150-200托)中濃縮至剩余250g。加入THF和DIEA，并將所得均相溶液冷卻至0℃。將甲磺酰氯和50ml THF裝入125ml滴液漏斗。保持溫度0-4℃，2小時內向反應混合物中加入MsCl的THF溶液，并將混合物在5-8℃陳化2小時。加入過程輕微放熱。加入過程中形成大概為DIEA-鹽酸鹽的白色沉淀。HPLC條件同上。HPLC分析顯示加入終點后1小時反應完成(檢測不出9)，和9的產率為94％。保留時間1=7．8分鐘。陳化2小時后反應混合物得到典型HPLC結果如下面積％成分＜0．1CBZ-螺二氫吲哚990-92 CBZ-磺酰胺18-10總計 其它雜質(每個＜2％)將混合物溫熱至20℃，并加入200ml 1M HCl水溶液。將混合物溫熱至50℃，分離水相。用100mL水、100ml 5％碳酸氫鈉水溶液和100ml水依次洗滌有機相。將有機相轉移至一個備有機械攪拌器和蒸餾裝置的1L三頸瓶中。常壓下蒸餾混合物(約400ml)至收集150ml餾分。頭餾分溫度達107℃；瓶溫度是110℃。蒸餾過程中向瓶中以一種速度不停地加入正丙醇，維持瓶中體積(約350ml)固定不變。當共計加入525ml n-PrOH和共計收集800ml餾分時，停止蒸餾。
溶劑轉換過程中，頭餾分和瓶溫都從94℃升至98℃。47．5％甲苯和52．5％n-PrOH構成沸點為97．2℃的甲苯和n-PrOH共沸物。3小時內，逐漸將該混合物冷卻至20℃并陳化12小時。發現母液中含有2％甲苯和4mg／ml磺酰胺。通過HPLC測定該磺酰胺在不同的甲苯和n-PrOH混合物中的溶解性在n-PrOH中的甲苯％ 1溶解性(mg／mL)02．3653．0210 4．2320 7．5125 10．3
過濾結晶漿液并用3*100ml n-PrOH洗滌。氮氣氣氛下50℃真空干燥箱中干燥產物16小時，得到65．5g 6(82％來自醛5)，為褐色固體，93．5％純度。
此固體典型的HPLC結果如下面積％成分＜0．1CBZ-螺二氫吲哚9＞99 CBZ-磺酰胺1＜1總計 其它雜質(每個＜0．2％)為了附加提純，60℃下將40．0g n-PrOH結晶了的磺酰胺溶于134mlEtOAc中，并在60℃，用8．0g Darco G-60碳處理1小時。加入2．0gSolka-flocTM后，通過4．0g Solka-flocTM墊過濾漿液，60℃下用90mlEtOAc洗滌該過濾墊。加入碳之前溶液為棕色。通順過濾并無堵塞得金黃色濾液。常壓下，在一個500ml燒瓶中(瓶溫80-85℃)蒸餾濾液至剩余100g(100ml)。3小時內將該溶液冷卻至35℃。35℃1小時內，在充分攪拌下加入116mL環己烷。1小時內將混合物冷卻至20℃并于20℃下陳化12小時。于35℃大量磺酰胺析晶和混合物變稠。20℃下加入環己烷使攪拌困難。陳化后，發現上清液中含有2．5mg l／g。過濾結晶漿液并用77ml 2∶1環己烷-EtOAc和2*77ml環己烷洗滌濾餅。氮氣氣氛下50℃真空干燥箱中干燥產物16小時，得34．2g 1(分子量=400．3)，為白色晶狀固體(粗品1回收率85％，70％來自5，純度＞99．9％(重量))。
實施例8
螺二氫吲哚-甲磺酰胺鹽酸鹽(1a)
物質CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1) 941g(2．35mol)Pearlman’s催化劑20％Pd(OH)2／C 188gTHF 8LMeOH 7L將催化劑懸浮于7L MeOH中，并轉移至5加侖高壓釜中，然后加入1的THF溶液(8L)。在80Psi H2壓下，25℃氫化該混合物。2．5小時后，30分鐘內升溫至35℃。
HPLC分析顯示Cbz-螺二氫吲哚-甲磺酰胺耗盡。HPLC條件25cm DupontZorbax RXC8柱，流速1．5ml／min，檢測波長254nm，剃度洗脫表如下時間(分鐘) 0．1％H3PO4水溶液∶MeCN0 70∶303 70∶3012 20∶8025 20∶80保留時間螺二氫吲哚=7．6分鐘，Cbz-螺二氫吲哚-甲磺酰胺=13．6分鐘。
趁溫熱用氮氣吹洗混合物并通過Solka-flocTM過濾除去催化劑。用4LTHF和2L MeOH洗滌催化劑。10m bar壓力下和＜25℃下，濃縮淺黃色濾液至粘稠油狀物。通過緩慢加入15L EtOAc來完成溶劑的轉換，再濃縮至干。殘余物固化成堅硬的灰白色塊狀物。向該混合物中加入MeOH(1．5L)，加熱至70℃，得均相溶液。將20℃的EtOAc(10．5L)加到70℃的該溶液中。溫度降至40℃，混合物保持均相。
將溶劑MeOH-THF濾液轉換成MeOH，濃縮至所需體積，然后加入EtOAc。依次實驗是非常便利的，它可避免在濃縮EtOAc溶液時殘余物固化。
將用大約等體積氮氣稀釋的氯化氫通入溶液中。15分鐘內升溫至60℃，形成白色鹽酸鹽沉淀。用氮氣稀釋HCl只是為了避免反應混合物倒吸。
在冰浴中冷卻該混合物，并繼續通氯化氫1小時。逐漸降溫至20℃。溫度降至10℃時陳化懸浮液2小時。過濾分離結晶產物，并用3L EtOAc洗滌濾餅。35℃真空箱中干燥，得1．18Kg(86％)的標題產物1a，為灰白色晶狀固體。HPLC分析純度＞99．5面積％。
HPLC條件25cm Dupont Zorbax PXC8柱，流速1．5ml／min，檢測波長230nm；35％MeCN、65％的0．1％乙酸銨水溶液。保留時間1a=5．4分鐘。
實施例9
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(堿)(1b)將從Cbz-氫解的250ml等分濾液，含4．67g 1b(游離堿)濃縮至約10ml。將殘余物溶于20ml EtOAc中，并再濃縮至約10ml。再重復進行一次，并向殘余物中加10mlEtOAc。開始形成晶狀沉淀。一次加入MTBE(20ml)。沉淀出另外的晶狀固體，但上清液中仍含有較大量的溶解性產物，靜置不能產生沉淀。激烈攪拌下，2小時內向混合物中滴加己烷(70ml)。為了避免胺油分出，緩慢滴加己烷是必須的。
將攪拌過的混合物陳化1小時并過濾。用20ml 1∶1 MTBE-己烷，然后用20ml己烷洗滌濾餅。氮氣氣氛下干燥產物，得3．86g(82％)的游離胺1b，為灰白色晶狀固體(純度＞99．5面積％)。HPLC條件25cm Dupont ZorbaxRXC8柱，流速1．5ml／min，檢測波長230nm；35％MeCN、65％的0．1％乙酸銨水溶液。保留時間1b=5．4分鐘。
實施例10A
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(游離堿形式)(1b)
物質CBZ-螺二氫吲哚-磺酰胺(1) 833．5 gr(2．08mol)Pd(OH)2／C(20％重量Pd(OH)2) 124．5(15％)THF 6．5LMeOH19．5LNH4OH(濃) 60mL由于設施的限制，氫化反應進行三次，本操作過程只是指一次過程。將CBZ螺二氫吲哚磺酰胺1溶于THF(6．5L KF=53μg／μl)中，然后加入MeOH(KF=18μg／ml，4L)，接著，加入催化劑并將漿液轉移至5加侖高壓釜中。用剩余的MeOH(2．5L)漂洗。于50 Psi壓力下，將混合物在40℃下加熱24小時。催化劑載荷和反應時間是隨起始物1純度的變化而變化的。該物質特別需要≥15％催化劑和長反應時間。較純的螺二氫吲哚只需5％催化劑和4-6小時反應時間。
反應完成后(用液相分析(0．1％Al)，通過透孔Solka-flocTM過濾該混合物，并用含有NH4OH(0．5％，60ml)的MeOH(13L)洗滌該碳餅。真空濃縮合并的濾液(測定顯示含有1587g螺二氫吲哚胺1b)，并將所得固體分配到甲苯THF(3∶1)(40L)和0．5N NaOH(18L)中。雖然兩層容易分離，但可看到水層中的濃沉淀。用CH2Cl2(15L)提取該水懸浮液。水層和有機層緩慢分離。在加入CH2Cl2之前，加入THF和充足的NaCl來飽和水層。不過，即使使用CH2Cl2，產物也不能全部溶解。
在分批濃縮器中合并甲苯、THF和CH2Cl2層并濃縮。用7L CH3CN沖洗殘余物。最后加入10L CH3CN并將該溶液在氮氣氣氛下放置過夜。
實施例10B
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(游離堿形式)(1b)
物質CBZ-螺二氫吲哚-磺酰胺(1) 3kg(7．49mol)Darco G-60600g乙酸乙酯 36L無水乙醇 189L10％Pd／C 450g氨水 500mlSolka FlocTM 2．5kg乙酸異丙酯65L氮氣氣氛下，60-65℃加熱并攪拌在乙酸乙脂(9L)中的CBZ-螺二氫吲哚(1)(1Kg)和Darco G-60(200g)混合物8小時。60-65℃下過濾除去Darco，用熱乙酸乙脂(3L)洗滌該固體，并合并濾液和洗液。LC測定(重量／重量)證明Darco損失微量。用20L Buchi裝置真空蒸發乙酸乙脂溶液至干，然后用無水乙醇(2*5L)沖洗。然后將該物質在無水乙醇(8L)中成漿，并溫熱至65-70℃并放入20L高壓釜。用無水乙醇(1L)漂洗。向高壓釜中加入10％Pd／C(75g，7．5％重量)的無水乙醇(750ml)漿液，并用另外一部分無水乙醇(250ml)漂洗。
40 Psi氫壓下，65℃，激烈攪拌下氫化反應物3小時，加入第二份10％Pd／C(75g)，另外氫化反應物2小時，然后密封過夜。將反應物(仍保持60-65℃)轉移至20L Buchi裝置并通過“加入和除去”無水乙醇(總計18L)真空脫氣除去甲酸。
本方法再重復進行兩次，將三批物質合并在10加侖玻璃襯里容器中，并通過加入和蒸餾(真空)無水乙醇(2*10L)再次脫氣。向反應中加Solkafloc(0．5Kg)并用乙醇(10L)漂洗。用Estrella濾器過濾Solka flocTM(2Kg)的乙醇(20L)漿液。將所得混合物溫熱至60-65℃，然后用泵將其通過熱的濾器。在此溫度下轉移至兩個配衡的不銹鋼接收器中。起始容器、濾器、泵和管路用熱氨水(500ml)的無水乙醇(25L)混合物(60-65℃)漂洗。在兩個不銹鋼接收器中合并濾液和洗液。
用10μ濾筒的管線中濾器將此批反應物轉移至容器，然后真空濃縮至少量(約15L)。通過“加入和除去”3批體積的乙酸異丙脂(總計45L)用乙酸異丙脂代替乙醇，每次保持體積約15L。溶劑轉換完成后，GC分析含有＜1％的殘留乙醇。加入乙酸異丙脂(20L)稀釋反應物至約33L，該螺二氫吲哚-胺1b(LC分析為1．855Kg)的乙酸異丙脂溶液用于本方法的下一階段。
實施例11A
Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)物質螺二氫吲哚-氨(1b) 1587g(5．966 moles)氨基酸(10) 1938g(6．563 moles)
DCC1334．5g(6．563 moles)HOBT 884g(6．563 moles)CH3CN 25L0．5N NaOH 18L0．5N HCl18LNaHCO3鹽 18LiPrOAc 28L氮氣氣氛和室溫下，依次用固體HOBT(844g，1．1當量)、熔融的DCC(1334．5g，1．1當量)(在60℃熱水中加熱約1小時)和最后用固體氨基酸10(1938g)順序處理在CH3CN或iPrOAc∶水(25L)中的螺二氫吲哚胺1b。攪拌此混合物3小時，隨時間變化產生DCU濃沉淀和LC分析顯示剩余約0．5面積％的胺1b。加入IPAC(9L)，通過Solka flocTM過濾漿液，并用IPAC(19L)洗滌濾餅。用0．5N NaOH(18L)、0．5N HCl(18L)和飽和NaHCO3(18L)順序洗滌合并的有機溶液。當產生乳濁液時用水洗滌除去乳化物。
真空濃縮有機層并將殘余物溶于MeOH或EtOH(最后體積10L)。產率為89％(3026g)。
使用另外的肽偶合劑如羰基二咪唑或形成混合酐如碳酸仲丁脂，由于前體化合物差向異構體化程度高，得到低產率的11和／或14。其它肽偶合劑價格過于昂貴。
實施例11B
Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)物質螺二氫吲哚胺(1b) 1．855kg(6．96mol)乙酸異丙酯 29L二環己基碳二亞胺(DCC) 1．58kg(7．65mol)1-羥基苯并三唑(HoBt) 1．03kg(7．62mol)N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸 2．26kg(7．65mol)1M氫氧化鈉水溶液 26L0．5M HCl水溶液 26L飽和的碳酸氫鈉水溶液 26L無水乙醇 50L將水(20L)加入反應容器中攪拌著的螺二氫吲哚胺1b(1． 855Kg)的乙酸異丙脂(33L)溶液中。接著在氮氣氣氛下和室溫下依次順序加入以下化學試劑DCC(1．58Kg，1．1當量)、HOBt(1．03Kg，1．1當量)和最后加入N-BOC-O-芐基-D-絲氨酸(2．26kg，1．1當量)。用乙酸異丙脂(7L)漂洗該試劑。氮氣氣氛下和室溫下攪拌反應物5小時至LC顯示產物／起始物的比例為99．4／0．6。然后通過僅使用布和紙板的Estrella濾器和泵將混合物過濾至另一容器。用乙酸異丙脂(22L)漂洗發送容器，在這里就是指洗滌濾器、泵和管路，洗滌后的漂洗液置接收容器中。攪拌該容器中的兩相混合物10分鐘，然后讓其沉降15分鐘。分離下層水層并將有機溶液室溫下放置過夜。
第二天，用1M氫氧化鈉水溶液(26L)，然后用0．5M HCl水溶液(26L)然后最后用飽和碳酸氫鈉水溶液(26L)洗滌有機溶液。LC分析為3．787Kg，來自起始物CBZ-螺二氫吲哚(1)(3Kg，7．49mol)，總產率為93％。真空濃縮產物(內溫=13-15℃，外溫=40℃，真空=29”)至少量(約15L)和通過“加入和除去”乙醇(50L)將溶劑轉換成乙醇，仍保持體積約15L．GC顯示剩余＜1％乙酸異丙脂。此溶液被用于該方法的下一階段。
實施例12A
O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(游離堿形式)(12)物質Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11) 3026g(5．57mol)甲磺酸(MsOH) 1．16L(17．9mol)MeOH 10LiPrOAc 24L0．5N NaOH35L
Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚11的10L MeOH(或EtOH)溶液以純凈MsOH(1．16L)處理約30-40分鐘(初始溫度16℃，終止溫度28℃)。氮氣下將該暗紅色溶液陳化過夜。然后將混合物泵入含24LiPrOAc和35L 0．5NNaOH的100L提取器中。水層的pH為7。加入NaOH(6M)直至pH≥10．5。隨著pH的增加，溶液顏色由紅變黃。分離兩層，NMR分析顯示有機相(24L)含13mol％MeOH／iPrOAc[5％體積]。LC分析為24．8Kg。
實施例12B
O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(游離堿形式)(12)物質Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11) 3．787kg(6．96mol)甲磺酸 2．006kg(20．87mol)乙酸異丙酯 38L1M氫氧化鈉水溶液16L50％氫氧化鈉水溶液 1．6L將甲磺酸(2．006Kg，1．355L，約3當量)加到在反應器中攪拌著的Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)(3．787Kg)的乙醇溶液(總體積約15L)中。反應物溫熱至35-40℃。7小時后，LC顯示起始物耗盡，將反應物冷卻至室溫過夜。第二天，在攪拌下向反應物中加水(44L)。將反應物冷卻至5℃，攪拌30分鐘，然后通過管線濾器(裝有10μ濾筒)濾入接收器。然后將反應物重新倒吸回該容器中。用水(10L)漂洗該容器和管路，漂洗后的水再倒吸入該容器。加入乙酸異丙脂(38L)，接著，加1M氫氧化鈉水溶液(16L)。將反應物冷卻至10-15℃，下層水層的pH約為7，加入50％氫氧化鈉水溶液(1．6L)(Ph＞10)。10-15℃攪拌反應物25分鐘，然后讓其沉降10-15分鐘。分離下層水層(78．1Kg)。LC分析顯示水溶液中含有28．4g 12(理論值的0．85％)。有機溶液體積=51L。 LC分析顯示3．057Kg，來自CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺(1)(3Kg，7．49mol)的總產率為92％。此溶液用于下一階段。
實施例13A
Boc-氨基異丁酰基O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)物質螺二氫吲哚胺(11)2481g(5．57 moles)氨基酸肽(13)1247．1g(6．16 moles)
DCC 1266．7g(6．16 moles)HOBT827g(6．16 moles)IPAc52LH2O 37L0．5N NaOH36L0．5N HCl 36L飽和NaHCO336L用IPAc稀釋胺12的IPAc溶液至總體積為39L并加37L水。然后氮氣下，室溫下依次用固體HOBT(827g)、熔融的DCC(1266．7g)和氨基酸13處理此兩相混合物。攪拌反應混合物2小時，LC分析顯示起始物12消失(＜0．3％面積％)。通過Solka flocTM過濾混合物并用13L IPAc洗滌固體。可將所得兩相混合物存儲過夜。
將混合物轉移至100L提取器，分離水層并依次用36L 0．5N NaOH、0．5NHCl和飽和NaHCO3順序洗滌有機層。產量3160g(81％來自螺二氫吲哚，±5％體積的測量誤差)。將此溶液濃縮至少量體積，和用乙醇(2*4L)沖洗。如果需要，中間體化合物14可以通過加水使其結晶分離。
使用另外的肽偶合劑如羰基二咪唑或形成混合酐，如碳酸仲丁脂，高度差向異構，以低產率形成14。其它肽偶合劑價格過于昂貴。
實施例13B
Boc-氨基異丁酰基O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)物質螺二氫吲哚胺(12) 3．057kg(6．89mol)二環已基碳二亞胺(DCC) 1．56kg(7．56mol)1-羥基苯并三唑(HOBt) 1．02kg(7．55mol)Boc-2-氨基異丁酸 1．54kg(7．58mol)乙酸異丙酯 32L1M NaOH水溶液38L0．5M HCl水溶液 38L飽和NaHCO3水溶液38L無水乙醇 45L
氮氣氣氛下和室溫下，將水(49L)加到在反應容器中攪拌著的螺二氫吲哚胺12(3．057Kg)的乙酸異丙脂溶液(總體積約51L)中。依次加入以下化學試劑DCC(1．56Kg，約1．1當量)，HOBt(1．02Kg，約1．1當量)和最后N-Boc-2-氨基異丁酸13(1．54Kg，約1．1當量)。室溫下激烈攪拌混合物2小時，LC顯示反應完成。通過使用泵和Estrella濾器將混合物濾入另一容器。用乙酸異丙脂(22L)漂洗容器、濾器、泵和管路，并濾入接收容器。然后攪拌2相混合物5分鐘并讓兩層分離。安全地分離下層水層(水層重=51．1Kg)。然后依次用1M NaOH水溶液(38L)、0．5M HCl水溶液(38L)和最后用飽和NaHCO3水溶液(38L)洗滌有機溶液。
有機溶液用泵通過管線濾器(10μ濾筒)轉移至另一容器，為使溶劑轉換成乙醇。用乙酸異丙脂(10L)漂洗容器、泵、過濾器和管路，然后收入接收容器。合并濾液和洗液，總體積=75L(用浸量尺測量)。LC分析得到4．395KgBoc-氨基異丁酰基O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)，即由起始物CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺(1)計的總產率為93％。
將反應物真空濃縮至少量(約15L)，并通過“加入和除去”無水乙醇(總計45L)使乙酸異丙脂轉換成乙醇。溶劑轉換的終點。GC顯示剩余＜1％的乙酸并丙脂。此溶液(25L)含4．395Kg 14，用于下一階段。如果需要，中間體化合物14可通過加水使其結晶分離。
實施例14A
氨基異丁酰基O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(15)
物質Boc螺二氫吲哚(14)3160kg(5．03 moles)甲磺酸(MsOH) 979mL(15．1 moles)EtOH6．2LH2O 30L1N NaOH11LEtOAc 26LDarco 60活性炭 1Kg將Boc螺二氫吲哚14溶于6．2L EtOH中，并用MsOH(979ml)處理。溫度從20℃升至30℃并讓反應進行一夜。20℃下12小時后，仍剩余15 A％起始物，因此將此混合物在35℃加熱6小時。反應完成(＜0．1 A％14)，將反應物冷卻至20℃，加入30L水，并通過帶有聚丙烯濾膜的玻璃漏斗過濾除去殘余的DCU。將混合物轉移至100L提取器并加入26L EtOAc。通過加入冷的1N NaOH(11L)和1L 50％NaOH堿化水層。加冰保持溫度低于14℃。較高溫度將導致嚴重的乳化問題。
50℃下，約21”Hg壓下蒸餾有機層至KF＜1000μg／ml。較低KF值導致更有效的炭處理和在鹽形成階段中的更佳回收率。KF值為160μg／ml得700g左右。用乙酸乙脂稀釋溶液至總體積為31L(LC測定為2．40Kg)。加入活性炭(Darco G-60)并將混合物攪拌24小時。通過Solka FlocTM過濾混合物并用乙酸乙脂(16L)洗滌濾餅，檢驗為2．34Kg。
實施例14B
氨基異丁酰基O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(15)
物質Boc螺二氫吲哚(14)4．395kg(6．99 mol)甲磺酸 2．017kg(20．99 mol)乙酸乙酯 185L1M NaOH水溶液 16L50％NaOH水溶液 2．6LDaxco G-60 900gSolka FlocTM2．5kg室溫下，將甲磺酸(2．017Kg，1．36L，約3當量)加到反應容器中攪拌著的Boc螺二氫吲哚14(4．395Kg)的乙醇溶液(總體積約25L)中。反應物溫熱至35-40℃，攪拌過夜。第二天，反應物含有約1．1A％起始物，繼續反應4小時，然后LC顯示產物／起始物比例為99．6／0．4。真空濃縮反應物至約15L，然后用水(44L)稀釋。反應物冷卻至5℃，攪拌30分鐘，然后通過Sparkler管線過濾器(含10μ濾筒)，用泵過濾至另一容器，除去少量殘余的DCU。
容器、泵、濾器和管路用水(10L)漂洗，并將洗滌液加入容器中。向容器中加入乙酸乙脂(36L)，和將攪拌著的混合物冷卻至10℃。于10℃下，加入1M NaOH冷(5-10℃)水溶液(16L)和50％ NaOH冷(5-10℃)水溶液(2．6L)，升溫至14℃。小于14℃下，攪拌所得混合物15分鐘，然后分離出下層水層。
真空濃縮反應物至約20L體積，然后加入乙酸乙脂(35L)和乙醇(5L)的混合物，并保持體積約20L。蒸餾終點時KF值是9160mg／ml。通過“加入和除去”乙酸乙脂(總計40L)，將溶劑轉換成乙酸乙脂。蒸餾終點時KF值是446mg／ml。用乙酸乙脂(10L)稀釋反應物。
將Darco G-60(900g)加到此渾濁混合物中。用乙酸乙脂(6L)漂洗。室溫下攪拌此混合物過夜。第二天，將Solka FlocTM(0．5Kg)加到容器中攪拌的混合物中，然后在少量乙酸乙脂中攪拌Solka FlocTM(2．0Kg)將其裝填入Estrella濾器。多余溶劑通過含10μ濾心的Sparkler管線濾器抽濾除去。用泵通過濾器從容器轉移漿液，然后再通過另一濾器轉移至2*40L不銹鋼接收器中。外觀檢查顯示母液澄清和干凈。用乙酸乙脂(22L)漂洗容器，并漂洗上述管路至不銹鋼瓶。將兩瓶中的內容物轉移至反應容器并使溶液充分混合。
該溶液(58L)的KF值為2950mg／ml，因此通過真空濃縮再干燥至20-25L。通過加入乙酸乙脂(25L)稀釋該溶液至46L(浸量尺測量)。KF值是363mg／ml。加乙酸乙脂(17L)稀釋溶液至62L，并用于本方法的最后階段。
實施例15A
螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(苯甲基-氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的甲磺酸鹽(16)物質胺(15) 2340g(4．43 moles)甲磺酸(MsOH) 316mL(4．88 moles)EtOAc 60LEtOH 4．8L8％EtOH的EtOAc溶液 20L加乙酸乙脂調節上述步驟所得15的溶液體積至60L和加EtOH(4．8L)。45℃下，加入在3L EtOAc中的MsOH(316ml)。向深紅色均相溶液中加入496g標題化合物的晶形Ⅰ的晶種(基于游離胺的重量為10％的晶種)。反應溫度升至約48℃，于52℃陳化反應物1．5小時。分析顯示標題化合物(晶形Ⅰ)轉化完成。(少于10％晶種需較長時間陳化(＞3小時))。漿液冷卻至20℃，過夜，氮氣下，在離心機中過濾。用20L 8％EtOH／EtOAc洗滌濾餅。過濾過程中通氮氣是必要的，因為濕結晶非常容易吸濕。35℃下，真空干燥結晶，得2．7Kg標題化合物(晶形Ⅰ)(總產率56％)，(99．9A％純度，＜0．1％對映體)。
如上所述通過加MsOH，在EtOAc-EtOH中形成鹽和將該鹽的初溶液(55℃)冷卻至45℃時，完成了晶形Ⅱ向晶形Ⅰ的轉變。在該溫度下，開始出現晶體并隨時間變化，漿液變稠。然后，升溫至51℃并陳化漿液過夜。完成16晶形Ⅰ的轉變是人們所期望的。本方法也可用來制備16晶形Ⅰ的晶種。
實施例15B
螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(苯甲基-氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的甲磺酸鹽(16)物質胺(15) 3．1kg(5．86 mol)甲磺酸 620g(6．45 mol)乙酸乙酯37L無水乙醇8．7L螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’基)羰基]-2-(苯基甲基氧乙基)-2-氨基-2-甲基-丙酰胺甲磺酸鹽(晶形Ⅰ)70g(0．11mol)將無水乙醇(6．4L)加到在反應容器中的胺15(3．1kg)的乙酸乙脂溶液中(總體積約62L)。將反應混合物溫熱至50℃，于50-54℃，約5分鐘內加入甲磺酸(620g，412ml，1．1當量)的乙酸乙脂(11L)溶液。向反應混合物中加標題化合物(晶形Ⅰ)的晶種(70g)使其結晶，氮氣氣氛下，55℃下加熱和攪拌所得漿液過夜。
第二天，冷卻漿液至15-20℃，放置2小時，然后氮氣氣氛下通過50cm聚丙烯濾膜。用無水乙醇／乙酸乙脂(2．3L／26L)混合物洗滌固體產物。取出白色固體產物在35℃Apex真空干燥箱中干燥適宜時間(大約兩天)。干燥的標題化合物(3．352Kg)過Jackson-Crockatt篩，得3．347Kg，包括晶種70g，實為3．277Kg。
N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(苯甲基-氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的甲磺酸鹽的(晶形Ⅰ)，為無水多晶型物，其特征通過以下性質表現熔點168-171℃和在異丙醇中的溶解度為4．6mg／ml。氮氣氣氛下，10℃／分鐘，開口容器中的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(苯甲基-氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的甲磺酸鹽的(晶形Ⅰ)的DSC曲線顯示為單獨吸熱過程，熔化的峰溫約180℃和外推開始溫度(熔點)為約170℃，吸熱約53J／g。
晶型Ⅰ的特征在于，其X-射線粉末衍射圖形，反射于大約6．5、14．7、16．9、17．1、17．9、19．5、21．1、21．7和22．0°(2θ)。使用Philips APD3720自動粉末衍射儀和銅Kα射線。保持室溫下，從2°至40°(2θ)測量樣品。
HPLC條件IC保留時間ZorbaX RX-C8(4．6mm×25cm)，λ=210nm，流速=1．5ml／min。
化合物1 60∶40 CH3CN-H2O(1％H3PO4)RT=5．0 min化合物1b 35∶65 CH3CN-H2O(0．1 W％NH4OAc)RT=6．2min化合物10 60∶40 CH3CN-H2O(0．1 H3PO4)RT=2．9min化合物11 60∶40 CH3CN-H2O(0．1％ H3PO4)RT=5．4min化合物12 40∶60 CH3CN-H2O[pH 5．25 NaH2PO4(6．9g／L of H2O)(用NaOH調pH)]RT=5．6 min化合物14 60∶40 CH3CN-H2O(0．1％ H3PO4)RT=4．65min化合物15 40∶60 CH3CN-H2O[pH=5．25 NaH2PO4(6．9 g／L H2O)](用NaOH調pH)RT=4．9minIC保留時間Zorbax RX-C8(4．6mm×25 cm)，λ=210nm，流速=1．2ml／min，柱溫=48℃溶劑A=0．05％ H3PO4+0．01％三乙胺／水溶劑B=乙腈梯度洗脫程序時間 ％A ％B0 min 95 535 min 10 9038 min 95 540 min 95 5保留時間(分鐘)化合物125．2化合物1b 8．5化合物10 20．5化合物11 26．3化合物12 14．8化合物14 25．6化合物15 15．7
參照本發明的某些特別具體實施方案，敘述和解釋了本發明，熟悉本技術領域的人，可以在不脫離本發明精神和范圍的情況下，對方法和方案進行不同的修改、改變、改進、替換、刪除或增加。例如，除本文上述的特定條件外，其它反應條件可以根據由本發明方法制備化合物所用的試劑和方法的改變而改變。同樣，按照和依據具體的取代基不同的生產條件，可改變起始化合物的特定反應性，而所希望的結果的變化或差別預期與本發明的目的和實際相一致。因此，試圖以權利要求的范圍來限定本發明，和這些權利要求概括地解釋是合理的。
權利要求
1．通式Ⅴ化合物的制備方法
該方法包括(1)在第一惰性溶劑中的第一酸活化劑存在下和在第一催化劑存在下，下式氨基酸
與下式化合物偶合
得通式Ⅰ化合物
其中L是氨基保護基，接著(2)通式Ⅰ化合物與第一氨基去保護劑反應，得通式Ⅱ化合物
接著(3)在第二惰性溶劑中的第二酸活化劑存在下和在第二催化劑存在下，通式Ⅱ化合物與下式氨基酸偶合
其中L是氨基保護基，得通式Ⅲ化合物
其中L是氨基保護基，接著(4)通式Ⅲ化合物與第二氨基去保護劑反應，得通式Ⅳ化合物或其可藥用鹽
接著通式Ⅳ化合物與甲磺酸反應，得通式Ⅴ化合物。
2．通式Ⅰ化合物的制備方法
其中L是氨基保護基，在惰性溶劑中的酸活化劑存在下和在催化劑存在下，下式氨基酸
與下式化合物偶合，
得通式Ⅰ化合物。
3．權利要求2的方法，其中酸活化劑是DCC。
4．權利要求2的方法，其中催化劑是HOBT。
5．權利要求2的方法，其中溶劑選自以下溶劑乙腈、乙酸異丙脂、乙酸乙脂、丙腈、水、氯化烴類如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、鄰二氯苯、苯、甲苯、二甲苯等，和它們的混合物。
6．權利要求5的方法，其中溶劑選自以下溶劑乙酸異丙脂、水和乙腈。
7．權利要求2的方法，其中反應溫度為20-35℃。
8．權利要求2的方法，其中通式Ⅰ化合物的氨基保護基選自t-丁氧基-羰基。
9．權利要求2的方法，該方法不需要分離通式Ⅰ化合物，就地進行以下制備反應。
10．通式Ⅱ化合物的制備方法
該方法包括通式Ⅰ化合物與氨基去保護劑反應，得通式Ⅱ化合物，
其中L是氨基保護基。
11．權利要求10的方法，其中通式Ⅰ化合物的氨基保護基選自t-丁氧基-羰基。
12．權利要求10的方法，其中氨基去保護劑是甲磺酸。
13．權利要求10的方法，該方法不需要分離通式Ⅱ化合物，就地進行以下制備反應。
14．通式Ⅲ化合物的制備方法
其中L是氨基保護基，在惰性溶劑中的酸活化劑存在下和在催化劑存在下，下式氨基酸
其中L是氨基保護基，與通式Ⅱ化合物偶合
得通式Ⅲ化合物。
15．權利要求14的方法，其中酸活化劑是DCC。
16．權利要求14的方法，其中催化劑是HOBT。
17．權利要求14的方法，其中溶劑乙酸異丙脂∶水。
18．權利要求17的方法，其中溶劑乙酸異丙脂∶水的比例大約是40∶60至60∶40(體積)。
19．權利要求14的方法，其中反應溫度是20-35℃。
20．權利要求14的方法，其中通式Ⅲ化合物的氨基保護基選自t-丁氧基-羰基。
21．權利要求14的方法，該方法不需要分離通式Ⅲ化合物，就地進行以下制備反應。
22．通式Ⅳ化合物或其藥用鹽的制備方法
該方法包括通式Ⅲ化合物與氨基去保護劑反應，得通式Ⅳ化合物
式中L是氨基保護基。
23．權利要求22的方法，其中通式Ⅲ化合物的氨基保護基選自t-丁氧基-羰基。
24．權利要求22的方法，其中氨基去保護劑是甲磺酸。
25．權利要求22的方法，該方法在含有乙醇的溶液中進行。
26．權利要求22的方法，該方法不需要分離通式Ⅳ化合物，就地進行以下的制備反應。
27．通式Ⅴ化合物的制備方法
該方法包括通式Ⅳ化合物與甲磺酸反應，
得通式Ⅴ化合物。
28．權利要求27的方法，該方法在含有乙酸乙脂和乙醇的溶液中進行。
全文摘要
本發明涉及化合物N－[1(R)－[(1,2－二氫－1－甲磺酰基—螺[3H－吲哚－3,4’－哌啶]－1’－基)羰基]－2－(苯甲基—氧基)乙基]－2－氨基－2－甲基—丙酰胺及其鹽的新制備方法,其結構如上式(1)和它能刺激天然的或內源性生長激素釋放能力。該化合物可以用來治療需要刺激生長激素產生或分泌的疾病,例如用于天然生長激素缺乏的人或用于食用或產毛動物,以刺激生長激素,從而得到更大、更高產的動物。
文檔編號C07D471/00GK1204334SQ96199084
公開日1999年1月6日 申請日期1996年10月23日 優先權日1996年10月23日
發明者P·G·豪頓, I·豪皮斯, A·莫利納, J·E·林奇, R·P·沃蘭特 申請人:麥克公司