專利名稱：人工合成的果糖胺及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種醫學體外測定試劑，具體說是一種人工合成的果糖胺及其制備方法。
果糖胺是人體內存有的有機化合物，系葡萄糖和蛋白質經非酶促糖基化反應，生成一種具有酮胺結構的物質，醫學上稱之“糖化蛋白質”，亦即果糖胺。果糖胺的人工合成(即體外合成)，在國內、外文獻中末見報道。經文獻及資料查實，朱忠勇主編、實用醫學檢驗學，人民軍醫出版社、1992年1月第1版133頁“糖化血清蛋白測定”一節敘述DMF的合成方法取無水D-葡萄糖90g、嗎啉58g，在60-70℃水浴中攪拌，開始為黃色糊狀物、顏色逐漸加深，20分后移去水浴，緩緩加入丙二酸18g，并不斷攪拌，10分后加入無水乙醇70ml，維持75℃、30分，再加丙酮70ml，此時可見到結晶析出，放4℃冰箱過濾，收集結晶，用無水乙醇重結晶3次，使產物脫色純化、干燥備用。目前，醫學檢驗方面對人體內血清糖化蛋血-果糖胺測定方法的標準參照物是1-脫氧-1-嗎啉果胺(DMF)為參照，因1-脫氧-1-嗎啉果糖在鹼性條件下可能化成1-脫氧-1-氨基-乙酮基，和果糖胺具有相同的酮胺結構，用硝基四氮唑蘭為反應試劑，產生相同結果的反應，其吸收曲線一致，吸收峰范圍為530-550nm。
本發明的目的在于提供一種操作簡便、實用、易掌握，且造價低的人工合成的果糖胺及其制備方法。
為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案一種果糖胺，其特征在于它由白蛋白與D-葡萄糖合成，其配比組成為8.5g/l的生理鹽水1l中白蛋白為20-50g，D-葡萄糖為1000-2000g。
上述的果糖胺制備方法為將白蛋白溶解于8.5g/l生理鹽水中，制備白蛋白溶液，將D-葡萄糖加入所制備的白蛋白溶液中，于37℃水浴中攪拌，至完全溶解為止，轉入40℃-50℃的水浴中，置電磁攪拌器8小時后，放4℃冰箱過夜，冷凍干燥成白色粉末狀。
本發明的積極效果在于合成成本低；合成全過程的溫度要求單一，范圍較寬、易掌握，合成時間及過程固定，不需人照看，其反應步驟簡單，其反應的終產物系根據蛋白質N端的氨基多少決定，計算恒定；合成方法的儀器設備要求低，得率卻高，即使是非本領域的普通技術人員都能實施。
以下結合附圖和實施例對本發明作詳細說明。
圖1為37℃條件下果糖胺合成時間曲線圖；圖2為溫度與果糖胺合成率的關系曲線圖3為40℃-50℃時合成時間與合成率的關系曲線圖；圖4為蛋白含量與果糖胺合成量的關系曲線圖。
實施例1、果糖胺人工合成原材料濃度的選擇。
(1)白蛋白濃度選擇，稱取正常人血清白蛋白(衛生部上海生物制品研究所提供)20g、30g、40g、50g溶解于8.5g/l生理鹽水11中，分別制得白蛋白濃度為20g/l、309/l、40g/l、50g/l，分別加入D-葡萄糖，D-葡萄糖終濃度為1.0kg/l。以相同合成過程制作，觀察合成情況，并以與硝基四氮唑蘭作合成物-果糖胺濃度的監測，以求合成果糖胺基礎母液的制備。合成過程初始期發現白蛋白含量20g/l、3Dg/l的母液加入D-葡萄糖的溶解速度較40g/l、50g/l快。溶解速度20g/l＞30g/l＞40g/l＞50g/l，而合成的果糖胺含量則20g/l＜30g/l＜40g/l，蛋白濃度40g/l與50g/l的果糖胺含量則較接近(如圖4所示)。考慮人體白蛋白平均正常生理值，白蛋白濃度40g/l為較佳選擇的合成基礎母液。
(2)D-葡萄糖濃度的選擇，以40g/l白蛋白為基礎母體，分別配制D-葡萄糖含量為1.0kg/l、1.5kg/l、2.0kg/l三種濃度的葡萄糖白蛋白溶液，用相同方法合成制作。D-葡萄糖溶解速度的觀察1.0kg/l＞1.5kg/l＞2.0kg/l，當葡萄糖含量＞1.5kg/l時，在37℃水液中葡萄糖則過飽和，為了有充足量的葡萄糖和白蛋白作用，使反應完全，通過檢測，證實40g/l白蛋白為基礎母液加入≥1.5kg/lD-葡萄糖，其合成的果糖胺濃度為最高。
2、合成過程設置的溫度與時間。
(1)溫度，考慮合成反應所需溫度，首選考慮人體正常生理溫度-37℃，實踐提示合成時間太長(圖2所示)。反應時水液溫度高則有利合成反應速度，但又不宜過高及保證白蛋白的理化活性和有利反應的快速，選擇40℃-50℃為宜。
(2)合成的時間，固定合成的水液溫度為40℃-50℃，除溶解過程所耗時間外，一般控制8小時為宜。實驗結果提示2、4、6小時果糖胺合成量＜8小時合成量，當合成時間≥8小時，則果糖胺合成量幾乎平衡，不再增加，故較佳合成時間選擇為8小時(如圖3所示)。
綜上所述，本發明的較佳實施例配比組成是稱取正常人血清白蛋白40g、溶解于8.5g/l生理鹽水1l中，稱取D-葡萄糖1.5kg，緩緩加入40g/l白蛋白溶液中，于37℃水浴中攪拌，至完全溶解為止，轉入40℃-50℃的水浴中，置電磁攪拌器8小時后，放4℃冰箱過夜，冷凍干燥成白色粉末狀。
本發明的臨床應用糖基化血清蛋白可以反映二周至一個月內的血糖水平，且不受臨時血糖濃度波動的影響。臨床上的糖尿病人的診斷和血糖水平監控提供了一個很好指標。
權利要求
1.一種果糖胺，其特征在于它由白蛋白與D-葡萄糖合成，其配比組成為8.5g/l的生理鹽水1l中，白蛋白為20-50gD-葡萄糖為1000-2000g。
2.一種制備權利要求1所述的果糖胺的方法，其特征在于將白蛋白溶解于8.5g/l生理鹽水中，制備白蛋白溶液，再將D-葡萄糖加入所制備的白蛋白溶液中，于37℃水浴中攪拌，至完全溶解為止，轉入40-50℃的水浴中，置電磁攪拌器8小時后，放4℃冰箱過夜，冷凍干燥成白色粉末狀。
全文摘要
本發明公開了一種人工合成的果糖胺及其制備方法,它由白蛋白與D－葡萄糖合成,其配比組成為:8.5g/l的生理鹽水1l中:白蛋白為20—50g,D－葡萄糖為1000—2000g。其制備方法:將白蛋白溶解于8.5g/l生理鹽水中,制備白蛋白溶液,將D－葡萄糖加入所制備的白蛋白溶液中,于37℃水浴中攪拌,至完全溶解為止,轉入40℃—50℃的水浴中,置電磁攪拌器8小時后,放4℃冰箱過夜,冷凍干燥成白色粉末狀。
文檔編號C07K14/765GK1169436SQ96116399
公開日1998年1月7日 申請日期1996年6月21日 優先權日1996年6月21日
發明者楊福明 申請人:楊福明