環(huán)狀神經激肽a拮抗劑的制作方法

專利名稱：環(huán)狀神經激肽a拮抗劑的制作方法
發(fā)明的背景本發(fā)明涉及作為神經激肽A和其醫(yī)藥上可接受之鹽的拮抗劑的新的環(huán)肽化合物。因此本發(fā)明的目的是提供新的和有用的化合物和其醫(yī)藥上可接受的鹽。
神經激肽A和相關速激肽、物質p和神經激肽B是一組顯示在身體組織內有廣泛分布并產生無數(shù)生物學效應的天然肽。雖然有關于速激肽在中樞神經系統(tǒng)中發(fā)揮作用的證據(jù)，但研究表明它們大部分作用是發(fā)生在外周組織。例如，神經激肽A強有力地接觸呼吸道平滑肌，同時對粘膜分泌、血管舒張及微血管滲漏產生一定作用，從而提示這些化合物主要是用作新的抗支氣管收縮劑。已顯示神經激肽在其中產生平滑肌收縮作用的其他組織包括虹膜括約肌、胃腸道的各個部分、維管結構、包括輸尿管、腎盂和膀胱在內的尿路系統(tǒng)，此提示可使用速激肽拮抗劑作為抗痙攣劑。
本發(fā)明的再一個目的是提供用于治療和預防有需要之病人的各種疾病的化合物，或其醫(yī)藥上可接受的鹽。因為一般認為速激肽參于炎癥和免疫功能。所以它們可用于治療與炎癥相關的疾病，其中所說的炎癥包括哮喘、變態(tài)反應、支氣管炎、鼻炎、Crohn氏病、潰瘍性結腸炎、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、偏頭痛、膀胱炎、超敏感性反應。速激肽拮抗劑亦適用于治療咳嗽、疼痛、外周神經病變、皰疹后神經痛、不良免疫反應、嘔吐、由于血管舒張引起的血流紊亂、眼病如結合膜炎，及皮膚病如接觸性皮炎、特異性皮炎、蕁麻疹等。還可以用速激肽拮抗劑治療焦慮、抑郁、神經病、精神分裂癥及癡呆等各種中樞神經系統(tǒng)疾病。發(fā)明概要本發(fā)明涉及式(1)、(2)、(3)和(4)的化合物及其水合物、立體異構體、電子等排物及醫(yī)藥上可接受的鹽。具體地說，式1的化合物包括有下列結構式的環(huán)六肽或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是芐基，對羥芐基或3-吲哚基甲基；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-CONH2；R3是C1-4線性或分支烷基、X是H，或者R3和X連接在一起形成-(CH2)3-；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥芐基；R5是H、甲基或3-吲哚基甲基；條件是當R2是-(CH2)2-CONH2時R1是對羥芐基，且其上連接有R1的碳是(R)絕對構型的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了下列結構式的新的肽或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是對羥芐基或3-吲哚基甲基，且R5是氫或甲基。
同樣還提供了下列結構式的新的肽或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中B1是C1-4線性或分支烷基、芐基、對羥芐基或3-吲哚基甲基；B2是(CH2)4-NH2、(CH2)-NH2、(CH2)3-NHC(＝NH)NH2或3-吲哚基甲基；B3是對羥芐基或3-吲哚基甲基；B4是H或(CH2)2-CONH2。
同樣，還提供了有下列結構式的新的肽或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是對羥芐基或3-吲哚基甲基；R5是H或甲基，并且Q是對氯芐基、對硝基芐基、對NH2-芐基、對甲氧基芐基、3-吲哚基甲基或下式的基團 X′是H；其中Q或X′，連同它們分別連接的碳和氮可連接形成下列結構式的基團 本發(fā)明還提供治療患有呼吸道疾病之病人的方法，包括給所說的病人投用治療有效量的下列結構式的化合物，或其水合物或電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是芐基、對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-CONH2；R3是C1-5線性或分支烷基，X是H或R3和X連接在一起形成-(CH2)3-；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥基芐基；W是H、甲基或3-吲哚基甲基，Z是H或者W和Z連接在一起形成-(CH2)3-；條件是當R2是(CH2)2-COOH時，R1是對羥芐基，并且其上面連有R1的碳是(R)絕對構型的。
另外，本發(fā)明提供了一種為有其需要的病人提供止痛效果的方法，其包括投用治療上有效止痛量的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物，或其立體異構體、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽。附圖的簡要描述

圖1舉例說明環(huán)肽即環(huán)[Tyr-try-Leu-Arg-Try-Gly](MDL 102，882)在SKLKB82#3細胞中產生對NKA誘導磷脂酰肌醇(PI)更新的劑量相關性拮抗作用的能力。數(shù)據(jù)表示為在基線水平上總磷酸肌醇酯積聚的百分刺激作用，并規(guī)度化為由NKA產生的最大反應。數(shù)據(jù)為四個(4)分立實驗的平均值±S.E.M.。下面列出各劑量反應線并示于圖1中。 NKA(EC50＝5.82nM) NKA＋30nM cyclo[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly] NKA＋300nM cyclo[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly] NKA＋3μM cyclo[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly] cyclo[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]發(fā)明的詳細描述本申請中使用的術語“C1-5線性或分支烷基”是指那些有1-5個碳原子的直鏈或分支鏈烷基基團。例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、環(huán)戊基等。
術語“立體異構體”是個別分子僅僅在其原子的空間方向上不同的所有異構體的總稱。其包括鏡象異構體(對映體)、幾何(順式/反式)異構體及具有一個以上手性中心的化合物的異構體，所說的異構體不是另一個的鏡象(非對映異構體)。就氨基酸來說，可使用如I-UPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature，Eur.J.Biochem.1389-37(1984)中所述的符號D/L或R/S。本文中的術語“(R)絕對構型”是用于描述連接有R1的碳。除甘氨酸外的天然氨基酸均含有手性碳原子。除非另外指出，優(yōu)選的化合物都是L構型的光學活性氨基酸；然而，申請人預期式(1)、(2)、(3)或(4)化合物的氨基酸可以是D或L構型的，或者可以是D和L異構體的混合物，包括外消旋混合物。本申請中使用的符號 是指沒有指明立體化學特征的鍵。式(2)和(4)之氨基酸位置2和式(3)之氨基酸位置14上的符號“D”用于通報存在于那些位置上的氨基酸(當那些氨基酸是甘氨酸時則除外)是“D”構型的。表1中列出α氨基酸的認定的縮寫符號。
表1
“電子等排物”指所連接的氨基酸間的正常肽鍵(-C(O)NH-)是-CH2NH-(還原的)、C(O)N(NH3)(N-甲酰胺)、-COCH2-(硐基)、-CH2(OH)CH2-(羥基)、-CH(NH2)CH2-(氨基)、-CH2CH2-(烴)的修飾形式的，或是顛倒的(-NH(C＝O)-)。本發(fā)明的優(yōu)選化合物不是呈等排形式的。
式(1)、(2)、(3)、(4)和(5)的化合物可以與無毒性的有機或無機酸形成醫(yī)藥上可接受的鹽?？尚纬蛇m當?shù)柠}的無機酸例如包括鹽酸、氫硼酸、硫酸和磷酸，以及酸式堿金屬鹽如正磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀。可形成適當?shù)柠}的有機酸例如包括一、二和三羧酸。這樣的酸例如可以是乙酸、乙醇酸、乳酸、丙硐酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、蘋果酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、唾液酸、2-苯氧基苯甲酸及磺酸，如甲磺酸和2-羥基乙磺酸。
本發(fā)明主題化合物的優(yōu)選實例最好在具有下列基團的式(1)、(2)、(3)、(4)和(5)的化合物中認定，其中R1是芐基、對羥芐基或3-吲哚基甲基；所說的R1值是分別由列D或L氨基酸衍生的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-CONH2；所說的R2值是分別由下列D或L氨基酸衍生的苯丙氨酸、色氨酸或谷氨酰胺；R3是C1-5線性或分支烷基且X是H，或R3和X連接在一起形成-(CH2)3-；所說的R3值或R3與X組合的值分別是由下列D或L氨基酸衍生的甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸或脯氨酸；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥芐基，所說的R4值是分別由下列D或L氨基酸衍生的甘氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸；R5是H、甲基或3-吲哚基甲基；所說的R5值是分別由下列D或L氨基酸衍生的甘基酸、丙基酸或色基酸；B1是C1-5線性或分支烷基、芐基、對羥芐基或3-吲哚基甲基；所說的B1值是分別由下列D或L氨基酸衍生的甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異設氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；B2是(CH2)4-NH2，(CH2)3-NH2，(CH2)3-NHC(＝NH)NH2或3-吲哚基甲基；所說的B2值是分別是D或L氨基酸精氨酸或色氨酸衍生的；B3是對羥芐基或3-吲哚基甲基；所說的B3值是分別是D或L氨基酸酪氨酸或色基酸衍生的；B4是H或(CH2)2-CONH2；所說的B4值是分別由D或L氨基酸甘基酸或谷酰胺衍生的；
Q是對氯芐基，對硝基芐基，對NH2芐基，對甲氨基芐基，或者是下列結構式的基團 并且X′是H；或者其中Q和X′連同它們分別連接的碳和氮一起，可連接形成下列結構式的基團 所說的Q值，或Q和X′組合的值是分別由下列D或L氨基酸衍生的對氯苯丙氨酸、對硝基苯丙氨酸、對NH2-芐基、甲基酪氨酸、萘基丙氨酸、芴基甘氨酸、二苯基丙氨酸、1，2，3，4-甲氫-異喹啉-3-羧酸，或1，2，3，4-四氫-異喹啉-7-羥基-3-羧酸；并且W是H，甲基或3-吲哚基甲基，且Z是H或W與Z連接在一起形成-(CH2)3-。優(yōu)選的式(1)化合物是其中有下列基團的化合物R1是對羥芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H或甲基。
表示優(yōu)選之式(1)化合物的簡寫形式包括結構環(huán)[AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6]或環(huán)結構 其中AA1-AA6是分別表示得出如式(1)所述R_R6殘基之上述氨基酸殘基的通用代號。
最優(yōu)選的式(1)化合物是其中有下列基團的化合物R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H。
式(2)的化合物甚至是式(1)化合物的更優(yōu)選的基團。氨基酸2-5都有固定的立體化學氨基酸2是(D)構型的，而氨基酸3-5都是(L)構型的。表示式(2)化合物的簡寫形式包括結構環(huán)[AA1-trp-Leu-Arg-Trp-AA6]或環(huán)結構 其中trp是D-色氨酸、Leu是L-亮氨酸、Arg是L-精氨酸、Trp是L-色氨酸、并且AA1和AA6是給出如式(2)中所述R1和R6殘基之上述氨基酸殘基的通用記號。
以縮寫形式顯示的，式(1)和(2)之新肽的有代表性的例子包括環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Ala]SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]SEQ.ID 11
環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]SEQ.ID 14環(huán)[tyr-Gln-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 15環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Ala]SEQ.ID 16環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Gly-Trp]SEQ.ID 17環(huán)[Tyr-trp-Pro-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 18環(huán)[Phe-phe-Pro-Arg-Phe-Gly]SEQ.ID 19優(yōu)選的式(3)化合物是其中B1為CH2CH(CH3)2或對羥基芐基，B2為(CH2)3-NHC(＝NH)NH2或3-吲哚基甲基的式(3)化合物。
優(yōu)選的式(3)化合物的簡寫結構可以表示為環(huán)[AA1-A12AA13-AA14-Leu-Arg-Trp-Gly]或環(huán)結構 更優(yōu)選的式(3)化合物包括其中有下列基團的式(3)化合物B1是CH2CH(CH3)2；B2是(CH2)3-NHC(＝NH)NH2；B3是3-吲哚基甲基；以及B4是H；或者B1是對羥基芐基；B2是3-吲哚基甲基；B3是對羥基芐基；以及B4是(CH2)2-COOH。以縮寫形式描述的式(3)之新肽的代表性例子包括環(huán)[Leu-Arg-Trp-Gly-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 20環(huán)[Tyr-Trp-Tyr-glu-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 21優(yōu)選的式(4)化合物是其中有下列基團的式(4)化合物R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R5是H或甲基；X′是H；Q是對氯芐基、對硝基芐基、對NH2-芐基或者是下列的基團 以縮寫形式表示的式(4)新肽的代表性例子包括環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Nal-Gly]SEQ.ID 22環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NO2-Phe)-Gly]SEQ.ID 23環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NH2-Phe)-Gly]SEQ.ID 24環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-Cl-Phe)-Gly].SEQ.ID 25優(yōu)選的式(5)化合物是其中有下列基團的式(5)化合物R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2且X是H；R4是3-吲哚基甲基；W是H或甲基且Z是H，或者W和Z連接在一起形成-(CH2)3-。
表示式(5)之優(yōu)選化合物的簡寫形式包括結構環(huán)[AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6]或環(huán)結構 其中AA1-AA6是分別給出如式(5)所述R1-R6殘基的上述氨基酸殘基的通用代號。
更優(yōu)選的式(5)化合物是其中有列基團的式(5)化合物R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H。
本文以縮寫形式列示的式(5)肽的代表性例子是環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]SEQ.ID 11環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]SEQ.ID 14環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]SEQ.ID 26總地說來，可以按本領域已知的類似的標準化學方法制備相應的線性肽，然后使之環(huán)化以制成式(1)-(5)的化合物。反應流程A概述制備式(1)、(2)、(4)和(5)之環(huán)六肽的一般合成流程，但也可以按該流程制備式(3)的環(huán)八肽。
流程A
流程A提供適于制備式(1)-(5)之化合物的通用合成流程。
AA1、AA2、AA3、AA4和AA5基團可連接到結構(1)之氨基酸衍生物的游離氨基基團上?？捎靡阎碾呐悸?lián)技術將AA1、AA2、AA3、AA4和AA5基團連接到未被保護的游離氨基化合物上。然后可用已知的肽環(huán)化技術使如此連接的線性肽環(huán)化。
一般說來，可將C末端殘基的α氨基去保護并使用述方法通過肽鍵偶聯(lián)下一個適當保護的氨基酸來延長肽。重復該去保護和偶聯(lián)程序直到得到所需的序列?？砂慈缌鞒藺中所示的分步方式，或以片段(兩個至幾個氨基酸)縮合，或全用兩種方法，或按照最初由Merrifield(J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154)描述的固相肽合成法，用組成氨基酸進行這一偶聯(lián)?？墒褂霉滔嗪铣煞椒〞r，將C末端羧酸連接到不溶性載體(通常是聚苯乙烯)上。這些不溶性載體含有一個與α羧基基團充分反應以形成適合于鏈延伸條件但其后又容易被裂解之鍵的基團。載體可以是但不限于氯代一或溴代甲基樹脂、羥甲基樹脂和氨甲基樹脂。這些樹脂中有許多是可從市場上購得的，并且是已摻入了所需之C末端氨基酸的。用于本發(fā)明的許多適當被保護的氨基酸都是可從商業(yè)途徑獲得的。雖然還不能購得氨基酸二苯基甘氨酸和芴基甘氨酸，但可用本領域已知例如Chas-saing，Josien，Lavielle，“Procedings of the Eleventh American PeptideSymposium”和Martin J.ODonnell and Robin L.Polt，J.Org.Chem.，1982，47，266-2666所述的方法合成之。
另外，也可使用自動肽合成儀器合成本發(fā)明的化合物。此外，在Stewart and Young，“Solid Phase Peptide Synthesis”，2nd ed.，PierceChemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，“The ReptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，Vol.1，2，3，5和9，Academic Press，New York，1980-1987；Bodanszky，“PeptideChemistryA Practical Textbook”，Springer-Verlag，New York(1988)；和Bodanszky，et al.，“The Practice of Peptide Synthesis”，Springer-Verlag，New York(1984)中也描述了肽合成方法(上述文獻均列為本文參考文獻)。
可使用標準偶聯(lián)方法如疊氮化物法、混合的碳酸酐(氯代甲酸-異丁酯)法、碳二亞胺(二環(huán)乙基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺或水溶性碳二亞胺)法、活性酯(對硝基苯酯、N-羥基-琥珀酰亞氨酯)法、Woodward試劑K法、羰基二咪唑法、磷試劑如Bop-cl或氧化-還原方法進行兩個氨基酸間、氨基酸和肽間，或兩個肽片段間的偶聯(lián)。這些方法(特別是碳二亞胺法)中的某些可經加入1-羥基苯并三唑得以提高效率?？稍谌芤?液相)或固相中進行這些偶聯(lián)反應。
在偶聯(lián)反應期間必須將組成氨基酸的功能性基團保護起來以避免不期望有的鍵的形成。在Greene，“Protecting groups OrganicChemistry”，John Wiley & Sons，New Yourk(1981)和“The Pep-tidesAnalysis，Synthesis，Biology”，Vol.3，Academic Press，NewYork(1981)(其內容列為本文參考文獻)中列出了可使用的保護基團。
通常使用可被裂解得到羧酸的酯來保護C末端殘基的α-羧基基團?？墒褂玫谋Ｗo基團包括1)烷基如甲基和叔丁基酯，2)芳基如芐基和被取代的芐基酯，或3)可經溫和堿處理或溫和還原方法裂解的酯如三氯乙酯和苯甲酰甲酯。
每個氨基酸的α氨基基團均必須得以保護?？墒褂帽绢I域已知的任何保護基團。其例子包括1)?；腿缂柞！⑷阴！⑧彵蕉柞：蛯妆交酋＃?)芳族氨基甲酰酯型如芐氧基羰基(Cbz或Z)和被取代的芐氧基羰基、1-(對雙苯基)-1-甲基乙氧基-羰基和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂族氨基甲酰酯型如叔丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基和烯丙氧基羰基；4)環(huán)烷基氨基甲酰酯型環(huán)戊氧基羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基型如三苯基甲基和芐基；6)三烷基硅烷型如三甲基硅烷；以及7)含巰醇型如苯基硫代羰基和二硫基琥珀?；?。優(yōu)選的α氨基保護基團是Boc或Fmoc，更好是Fmoc。許多用于肽合成的適當被保護的氨基酸都是可從商業(yè)途徑獲得的。
在偶聯(lián)下一個氨基酸之前裂解掉α氨基保護基團。當使用Boc基團時，選用的方法中是使用三氟乙酸(純凈的或加在二氯甲烷中)，或加于二噁烷中的HCI。然后在偶聯(lián)之前或在原位用堿性溶液如緩沖液，或溶于二氯甲烷或二甲基甲酰胺中的叔胺中和所得到的銨鹽。當使用Fmoc基團時，所選用的試劑是加于二甲基甲酰胺中的哌啶或被取代的哌啶，但也可使用任何仲胺或堿性水溶液。在0℃和室溫間的溫度下進行去保護。
在使用上述任何一類基團制備肽期間，必須保護帶有側鏈功能性的任何氨基酸。本領域技術人員將會理解到，對這側鏈功能性之適當保護基團的選擇和使用取決于肽中的氨基酸和及其他保護基團的存在。當在去保護和偶聯(lián)α氨基基團期間不必除去這些保護基團的情況下，對這些保護基團的選擇是十分重要的。例如，當使用Boc作為α氨基保護基團時，可利用對甲苯磺酰基部分保護氨基酸如Lys和Arg的氨基側鏈。當選用Fmoc保護α氨基時，通?？衫檬宥』鶠榛A的保護基團。例如可使用Boc保護精氨酸。
一旦完成肽的延長即除去所有的保護基團。在使用溶液相合成法時，可根據(jù)所選用的保護基團來確定除去保護基團的方法。這些方法是本領域技術人員已知的。
當利用固相合成法合成時，通常在從樹脂上裂解掉肽的同時除去保護基團。當在合成的使用Boc保護程序時，從樹脂上裂解掉肽的優(yōu)選方法是在0℃下用含無水HF的添加劑如二甲硫、茴香醚、茴香硫醚、對甲酚處理。也可用其他酸性試劑如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物完成肽的裂解。如果使用Pmoc保護程序則用上述試劑切掉N末端Fmoc基團。使用三氟乙酸和各種添加劑如茴香醚等的溶液從樹脂上裂解其他保護基團和肽。
然后從樹脂上去掉線性肽并根據(jù)需要除去任何保護基團，使用常規(guī)方法例如用溶于三甲基甲酰胺中的三乙胺和二苯磷?；B氮化物處理環(huán)化線性肽。在以常用方式如使用層析法純化粗環(huán)肽之前，除去所有保留的保護和功能性基團前體，或轉化成所需的基團。
下列實施例給出典型的合成實驗。這些實施例應理解為舉例說明而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。文中使用的下列術語的意義是“g”代表克；“mmol”代表微摩爾；“ml”指毫升；“bp”代表沸點；“℃”是指攝氏度；“mmHg”是指毫米汞柱；“μL”代表微升；“BrZ”代表溴代芐氧基羰基；“Tos”代表對甲苯磺酰基；“Bzl”代表芐基；“NMP”代表N-甲基吡咯烷硐；“HoBt”代表1-羥基苯并三唑；“DCC”代表N，N-二環(huán)己基碳二亞胺；“DCM”代表二氯甲烷；“DMF”代表二甲基甲酰胺；“DPPA”代表二苯磷?；B氮化物；“TEA”代表三乙胺。實施例1環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6的制備A.線性肽的合成使用Applied Biosystems 430A自動肽合成儀和制造商提供的程序，以標準固相法合成實施例1的肽。使用市售Boc-氨基酸進行下列側鏈保護Tyr(BrZ)，Arg(Tos)，Glu(Bzl)。用三氟乙酸(2％茴香醚)使市售的Boc-Gly-PAM樹脂(0.5mmol，Applied Biosys-tems)去保護，并在NMP中與Boc-氨基酸的HoBt酯(4當量)偶聯(lián)。使Boc-氨基酸與DCC和HOBt反應以生成Boc-氨基酸的HOBt酯。偶聯(lián)進行30分鐘，然后用NMP和DCM洗樹脂。用乙酐?；瘉矸磻陌贰Ｖ貜瓦M行去保護和偶聯(lián)直至完成對被保護肽樹脂的裝配。在使線性肽去保護的同時，在茴香醚(5％)存在下用無水氯化氫(10ml)于0℃處理30分鐘以從樹脂上除掉線性肽。用50％乙酸、水和含水乙腈提取肽并凍干之。B.線性肽的環(huán)化將粗制線性肽溶解于DMF(～5μmol/ml)中并用DPPA(5當量)使之環(huán)化，同時加TEA調到PH9。反應(4-48小時)完成后，除去溶劑并從乙腈/水中凍干粗制環(huán)肽。在70％乙酸中，使用SpectragelGF05柱(2.5×55cm)經凝膠過濾使環(huán)肽脫鹽，并使用0.1％含水TFA和乙腈的各種梯度經反相制備性HPLC(Dynamax C18，21.4×250mm，Rainin)純化之。經分析性HPLC(Vydac 218TP54，4.6×250mm)、FAB-MS和氨基酸分析鑒定純化之肽的特征。Mol Wt861.4AAATyr 0.95(1)；Leu 0.99(1)；Arg 1.01(1)；Gly 1.05(1)。FAB-MS862.4用與實施例1所述者相同的方法完成實施例2-29所述肽的合成。
實施例2環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 7的制備Mol Wt884.4AAALeu 0.96(1)；Arg 0.99(1)；Gly 1.05(1).FAB-MS885.4實施例3環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 8的制備Mol Wt861.4AAATyr 1.00(1)；Leu 0.95(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.05(1).FAB-MS862.3實施例4環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]SEQ.ID 9的制備Mol Wt838.4AAATyr 1.91(2)；Leu 0.91(1)；Arg 1.01(1)；Gly 1.17(1).FAB-MS839.4實施例5環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]SEQ.ID 10的制備Mol Wt875.4AAATyr 0.96(1)；Leu 0.94(1)；Arg 1.05(1)；Ala 1.05(1).FAB-MS876.3實施例6環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]SEQ.ID 11的制備Mol Wt875.4AAATyr 0.97(1)；Leu 0.95(1)；Arg 1.03(1)；Ala 1.04(1).FAB-MS876.3實施例7環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 12的制備Mol Wt861.4AAATyr 0.97(1)；Leu 0.99(1)；Arg 0.98(1)；Gly 1.07(1).FAB-MS862.4實施例8環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 13的制備Mol Wt819.4AAATyr 0.95(1)；Arg 0.99(1)；Gly 1.05(1)；Ala 1.02(1).FAB-MS820.4實施例9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]SEQ.ID 14的制備Mol Wt861.4AAATyr 0.96(1)；Leu 0.99(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.06(1).FAB-MS862.3實施例10環(huán)[tyr-Gln-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 15的制備Mol Wt803.4AAATyr 0.95(1)；Leu 1.01(1)；Arg 0.92(1)；Gly 1.07(1)；Glx 1.04(1).FAB-MS804.5實施例11環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Ala]SEQ.ID 16的制備Mol Wt852.4AAATyr 1.98(2)；Leu 0.96(1)；Arg 1.05(1)；Ala 1.01(1).FAB-MS853.4實施例12環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Gly-Trp]SEQ.ID 17的制備Mol Wt861.4AAATyr 0.83(1)l；Leu 0.89(1)；Arg 1.10(1)；Gly 1.19(1).FAB-MS862.3實施例13
環(huán)[Tyr-trp-Pro-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 18的制備Mol Wt845.4AAATyr 0.90(1)；Arg 1.01(1)；Gly 1.10(1)；Pro 0.98(1).FAB-MS846.3實施例14環(huán)[Phe-phe-Pro-Arg-Phe-Gly]SEQ.ID 19的制備Mol Wt751.4AAAArg 1.03(1)；Gly 1.12(1)；Pro 1.02(1)；Phe 2.82(3).FAB-MS752.3實施例15環(huán)[Leu-Arg-Trp-Gly-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 20的制備Mol Wt1024.6AAALeu 2.00(2)；Arg 1.90(2)；Gly 2.10(2).FAB-MS1025.4實施例16環(huán)[Tyr-Trp-Tyr-glu-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 21的制備Mol Wt1152.5AAATyr 1.94(2)；Leu 1.00(1)；Arg 0.97(1)；Gly 1.03(1)；Glx(1).FAB-MS1153.5實施例17環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Nal-Gly]SEQ.ID 22的制備Mol Wt872.5AAATyr 0.94(1)；Leu 0.98(1)；Arg 1.01(1)；Gly 1.08(1).FAB-MS873.4實施例18環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NO2-Phe)-Gly]SEQ.ID 23的制備Mol Wt867.4AAATyr 0.95(1)；Leu 0.97(1)；Arg 1.02(1)；Gly 1.08(1).FAB-MS868.4實施例19環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NH2-Phe)-Gly]SEQ.ID 24的制備Mol Wt837.4AAATyr 0.97(1)；Leu 0.98(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.06(1).FAB-MS838.4實施例20環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-Cl-Phe)-Gly]SEQ.ID 25的制備Mol Wt857.4AAATyr 0.97(1)；Leu 0.98(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.05(1).FAB-MS857.3實施例21環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Flq)-Gly](I)SEQ.ID 29的制備Mol Wt896.5AAATyr 0.96(1)；Leu 0.99(1)；Gly 1.06(1).FAB-MS897.5實施例22環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Flq)-Gly](II)SEQ.ID 30的制備Mol Wt896.5AAATyr 0.94(1)；Leu 1.01(1)；Gly 1.06(1).FAB-MS897.5實施例23環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Dpa)-Gly](I)SEQ.ID 31的制備Mol Wt898.5AAATyr 0.97(1)；Leu 1.04(1)；Gly 1.00(1).FAB-MS899.5實施例24環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Dpa)-Gly](II)SEQ.ID 32的制備Mol Wt898.5AAATyr 1.00(1)；Leu 1.04(1)；Gly 0.97(1).FAB-MS899.4實施例25環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Me-Tyr)-Gly]SEQ.ID 33的制備Mol Wt852.4AAALeu 0.97(1)；Arg 0.99(1)；Gly 1.04(1).FAB-MS853.4實施例26環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Tiq)-Gly]SEQ.ID 34的制備Mol Wt834.4AAATyr 0.96(1)；Leu 0.98(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.06(1).FAB-MS835.5實施例27環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(tiq)-Gly]SEQ.ID 35的制備Mol Wt834.4AAATyr 0.91(1)；Leu 0.96(1)；Arg 1.03(1)；Gly 1.10(1).FAB-MS835.5實施例28環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Tiq-OH)Gly]SEQ.ID 36的制備Mol Wt850.4AAATyr 0.85(1)；Leu 0.97(1)；Arg 1.00(1)；Gly 1.18(1).FAB-MS851.4實施例29環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]SEQ.ID 26的制備Mol Wt901.5AAATyr 0.94(1)；Leu 0.94(1)；Arg 1.07(1)；Pro 1.04(1).FAB-MS902.5在其他實施方案中，本發(fā)明提供治療患有呼吸道疾病之病人的方法，包括給其投用治療上有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物。術語“呼吸道疾病”是指以支氣管收縮和粘膜過度分泌為特征的疾病或狀態(tài)。特別適于用式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物治療的呼吸道疾病包括哮喘、支氣管炎、鼻炎、咳嗽、咯痰。治療呼吸道疾病的特別優(yōu)選的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物包括環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Ala]SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]SEQ.ID 11環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]SEQ.ID 14環(huán)[tyr-Gln-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 15環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Ala]SEQ.ID 16環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Gly-Trp]SEQ.ID 17環(huán)[Tyr-trp-Pro-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 18環(huán)[Phe-phe-Pro-Arg-Phe-Gly]SEQ.ID 19環(huán)[Leu-Arg-Trp-Gly-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 20環(huán)[Tyr-Trp-Tyr-glu-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 21環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Nal-Gly]SEQ.ID 22環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NO2-Phe)-Gly]SEQ.ID 23環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NH2-Phe)-Gly]SEQ.ID 24環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-Cl-Phe)-Gly]SEQ.ID 25環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]SEQ.ID 26
術語“治療上有效量”是指在單一或多劑投予病人后，在緩解其與呼吸道疾病有關之癥狀上有效的量。文中所說的“緩解(呼吸道疾病)癥狀”是指與沒有治療和給藥時相比降低了疾病的嚴重程度，而不一定使疾病完全消除或治愈。在確定治療有效量或劑量時，臨床診斷醫(yī)師要考慮許多因素，其中包括但不只限于哺乳動物的種系、其體重、年令、一般健康狀況；所涉及的特定疾??；疾病的復雜或嚴重程度；個別病人的反應；投用的特定化合物；給藥方式；所使用之制劑的生物可利用性特征；選擇的劑量；合并使用的治療；及其他相關情況。
推測式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)之化合物的治療有效量可為大約0.1mg-100mg/kg體重/天。優(yōu)選劑量可為大約0.5-10mg/kg體重/天。
此外，本發(fā)明提供了在有所需要的病人體內造成鎮(zhèn)痛效果的方法，其包括給其投用治療有效量的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物。當病人患有急或慢性疼痛時需要鎮(zhèn)痛處理。認定那些病人需要作鎮(zhèn)痛處理是本領域技術人員能夠作到的。為提供鎮(zhèn)痛效果所需的特別優(yōu)選的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物包括環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]SEQ.ID 11環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]SEQ.ID 14環(huán)[tyr-Gln--Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 15環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Ala]SEQ.ID 16環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Gly-Trp]SEQ.ID 17環(huán)[Tyr-trp-Pro-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 18環(huán)[Phe-phe-Pro-Arg-Phe-Gly]SEQ.ID 19
環(huán)[Leu-Arg-Trp-Gly-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 20環(huán)[Tyr-Trp-Tyr-glu-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 21環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Nal-Gly]SEQ.ID 22環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NO2-Phe)-Gly]SEQ.ID 23環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NH2-Phe)-Gly]SEQ.ID 24環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-Cl-Phe)Gly]SEQ.ID 25環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]SEQ.ID 26術語“治療上有效的鎮(zhèn)痛量”是指在給病人進行單劑或多劑用藥后，有效地提供止痛效量所需的量。本文所說的“鎮(zhèn)痛效果”是指與沒有治療和給藥相比降低了疼痛的嚴重程度但不一定完全消除或緩解疼痛。成功地治療也理解為包括例如在不久的未來病人將遭受急性或慢性疼痛的手術前過程中預防病人的疼痛。臨床診斷醫(yī)師在確定治療上有效鎮(zhèn)痛量或劑量時，要考慮許多因素，其中包括但不只限于哺乳動物的品種、其體重、年令和一般健康狀況；所涉及的特殊疾??；疾病的復雜或嚴重程度；投用的持定化合物；給藥方式；所使用之制劑的生物可利用性特征；所選擇的用藥程序；一并使用的治療方法；以及其他相關情況。
預計式(1)、(2)、(3)、(4)和(5)化合物的治療上有效鎮(zhèn)痛量大約0.1mg-100mg/kg體重/天。優(yōu)選的量可約為0.5-10mg/kg體重/天。
此外，本發(fā)明的化合物以其藥理學活性，例如可用作速激肽拮抗劑，特別是神經激肽A拮抗劑。本發(fā)明的一個目的是提供新的和有用的神經激肽A拮抗劑。由于本發(fā)明的化合物是速激肽拮抗劑，所以可用于治療與炎癥相關的疾病，這些疾病包括哮喘、變態(tài)反應、支氣管炎、鼻炎、Crohn氏病、潰瘍性結腸炎、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、偏頭痛、膀胱炎和超敏感性反應。速激肽拮抗劑也適用于治療咳嗽、疼痛、外周神經病、皰疹后神經痛、不良免疫反應、嘔吐、由于血管舒張引起的血流紊亂、眼痛如結膜炎，及皮膚病如接觸性皮炎、特異性皮炎、蕁麻疹等。還可以用速激肽拮抗劑治療焦慮、抑郁、神經病、精神分裂癥及癡呆等各種中樞神經系統(tǒng)疾病。
本發(fā)明的化合物是神經激肽A的強有力的拮抗劑，并且與NK1受體相比較表現(xiàn)出對NK2受體的作用選擇性。據(jù)信本發(fā)明的化合物通過拮抗NK2受體發(fā)揮其抑制作用，并因而釋解神經激肽介導的疾病，包括但不只限于急性和慢性疼痛，以及哮喘和其他炎性肺病。但應明確的是，本發(fā)明并不受用于解釋其最終應用效果所提出之特定理論或機制的限制。
在治療患有上述疾病病人中，可按使化合物以有效量被生物利用的任何劑型和給藥方式包括口服、氣霧吸入和胃腸道外途經投用式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物。例如，可經口服、氣霧化、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鼻內、直腸內、局部等給藥途經投用式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物。一般優(yōu)選口服或氣霧給藥方式。制備配制品的本領域技術人員可以根據(jù)所選化合物的特定性質、被治療的疾病狀態(tài)、疾病的階段及其他相關情況很容易地選擇適當?shù)膭┬秃徒o藥方式(參見Remington′s Pharrmacecutical Sciences，18th Edi-tion，Mack Publishing Co.(1980))。
本發(fā)明的化合物可以單獨或與醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑聯(lián)合給藥，其比例和性質取決于所選化合物的溶解度及化學性質、選用的給藥途經、以及標準藥學實踐。雖然本發(fā)明的化合物本身是有效的，但為了提高其穩(wěn)定性、便于結晶及增加溶解度，可以以其醫(yī)藥上可接受的鹽，例如酸加成鹽的形式配制并使用之。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了含有與一種或多種惰性載體混合之或結合之式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)之化合物的組合物。這些組合物例如可用作檢測標準品，用作大批量裝運的方便形式，或用作藥物組合物。式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)化合物的可檢測量是用本領域技術人員已知和了解的標準檢測方法及技術容易檢測的量。(1)、(2)、(3)、(4)或(5)化合物的可檢測量一般可占組合物重量的約0.001％至75％。惰性載體可以是不降解式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)之化合物或與之發(fā)生共價反應的任何材料。適當?shù)亩栊暂d體的例子是水；含水緩沖液如一般用于高效液相層析(HPLC)分析的緩沖液；有機溶劑如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；以及醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑。
更具體地說，本發(fā)明提供了含有與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑混合或結合之治療有效量式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)化合物的藥物組合物。
按本領域技術人員已知的方法制備該藥物組合物。載體或賦形劑是可用作活性成分之載體或介質的固體、半固體或液體材料。適用的載體或賦形劑是本領域已知的。藥物組合物可以以片劑、膠囊、栓劑、溶液、懸浮液等劑型，經口服、胃腸道外或局部給藥途徑給病人投用。
本發(fā)明的化合物例如可與惰性稀釋劑或可食載體一起口服給藥?？蓪⑵浒b在明膠膠囊內或壓成片劑。為了口服治療給藥，可將化合物與賦形劑摻合并以片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮劑、糖漿劑、水劑、口嚼膠姆等的劑型使用。這些制劑應含有至少4％的作為活性成分的本發(fā)明化合物，但這-比例可根據(jù)劑量有所變化，常規(guī)一般可占單位劑量(重量)的4％至大約70％。存在于組合物中之化合物的量是將被獲得的適當劑量。將本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑制成含有5.0-300mg本發(fā)明化合物的口服劑量單位。
片劑、丸劑、膠囊、錠劑等還可含有一種或多種下列輔助劑粘結劑如微晶纖維素、黃蓍樹膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；分散劑如藻酸、Primogel、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑如膠體二氧化硅；及甜味劑如蔗糖或可以加入的糖精，或香味劑如薄荷、水楊酸甲酯或柑桔味劑。當劑量單位形式是膠囊時，除上述類型的材料外，其可含有聚乙二醇或脂腦油等液體載體。其他劑量單位形式可以含有用于修飾劑量單位之物理形式的其他各種材料，例如包衣劑。因此，可用糖、紫膠或其他腸包衣劑包被片劑或丸劑。糖漿劑除含有本化合物外，還可含有作為甜味劑的蔗糖及某些防腐劑、染料和著色劑及香味劑。用于制備這些組合物的材料應是藥劑純的并且以其所用量應是無毒的。
為了胃腸道外治療給藥，可將本發(fā)明的化合物摻入溶液或懸液中。這些制劑應含有至少0.1％的本發(fā)明化合物，但可在0.1至大約50％(重量)間有所變化。這些組合物中本發(fā)明化合物的量應是將被獲得的適當劑量。本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑應制成含有5.0至100mg本發(fā)明化合物的胃腸道外給藥劑量單位。
也可以氣霧劑形式使用本發(fā)明的式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)化合物。術語氣霧劑是指從膠體性質的系統(tǒng)到由加壓包裝組成之系統(tǒng)的各種系統(tǒng)?？赏ㄟ^液化或壓縮氣體或借助散布活性成分的適當原系統(tǒng)進行釋放。為了釋放活性成分，可以在單相、雙相或三相系統(tǒng)中釋放式(1)化合物的氣霧劑。氣霧劑的釋放包括必要的容器、活化器、閥、輔助容器等。本領域技術人員能夠確定優(yōu)選的氣霧劑。
本發(fā)明式(1)、(2)、(3)、(4)或(5)的化合物也可以局部給藥，這種情況下所用的載體可包括溶液、軟膏或凝膠基質。這些基質例如可包括下列一種或多種物質凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油，稀釋劑如水和乙醇，以及乳化劑和穩(wěn)定劑。局部配方可含有濃度約為0.1至10％(W/V)的式(1)化合物或其藥用鹽。
溶液或懸浮液也可包含一種或多種下列輔助劑無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成的溶劑；抗菌劑如芐醇或羥苯甲酸甲酯；抗氧劑如抗壞血酸或亞硫酸鈉；絡合劑如乙二胺四乙酸；緩沖液如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及調節(jié)離子強度的試劑如氯化鈉或右旋糖。可將胃腸道外給藥的制劑裝在用玻璃或塑料制成的安瓶、一次性注射器或多劑量小瓶內。
本文使用的術語“病人”是指受特定炎癥性疾病狀況影響的溫血動物如哺乳動物。豚鼠、狗、豬、大鼠、小鼠、馬、牛、羊和人等動物均包括在該術語意義的范圍內。實施例29假定的拮抗劑對碘化的速激肽與NK1和NK2受體結合的拮抗作用用粗制組織膜進行受體結合試驗。用豚鼠肺估測推定的速激肽拮抗劑的NK-1受體結合親和力(Keystone Biologicals，Cleveland，OH，保存于-80℃?zhèn)溆?。用表述人空腸NK-2受體的小鼠3T3成纖維細胞即HSKR-1細胞估測對NK-2受體的親和力。在15倍體積含有120mM Nacl和5mMKCl的50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.4，4℃)中用Polytron制備組織或細胞勻漿，并于4℃以48，000xg離心12分鐘。將沉淀物重新懸浮在15倍體積含有10mMEDTA和300mM KCl的50mM Tris-HCl緩沖液中，然后在水上放置30分鐘。按上述條件離心懸浮液并經在50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.4，4℃)中重新懸浮和離心將沉淀物洗兩次。將最后的沉淀物以20mg/ml的濃度重新懸浮在保溫緩沖液中，然后在室溫下至少放置15分鐘備用。以一式兩份向0.1nM下列放射配體中加入250μl膜制備(最終蛋白濃度；肺＝286μg/管，HSKR-1細胞＝100μg/管)以開始受體結合NK-1受體試驗為125I-Bolton-Hunter lys-3標記的物質p(New England Nuclear，比活性2000Ci/mmol)；NK-2受體試驗為125I標記的組氨酸-1-神經激肽A(Ameersham，比活性2000Ci/mmol)，加在終體積為500μl的含500mM Tris-HCl(pH 7.4，室溫)、0.1％牛血清白蛋白、2mMMn-Cl2、40μg/ml桿菌肽、4μg/ml亮抑蛋白酶肽和胰凝乳蛋白酶抑制劑、1μM thiorphan和各種劑量的速激肽拮抗劑的緩沖液中。于室溫下保溫90分鐘(NK-1受體試驗)或2小時(NK-2受體試驗)；加入50mM Tris-Hcl緩沖液(pH7.4，4℃)終正結合并在真空下通過用0.1％聚乙烯亞胺(NK-受體試驗)或0.5％牛血清白蛋白(NK-2受體試驗)預浸漬的GF/B濾膜過濾。非特異性結合限定為在1μM物質p(NK-1受體試驗)或神經激肽A(NK-2受體試驗)(PeptidesInternational，Inc.，Lounisville，KY)存在下的結合。從總結合由減去非特異結合，算出特異性組合，結果特異性結合相當于70-90％總結合。分析所得數(shù)據(jù)并使用累接曲線配合程序(iterative curve fit-ting program)(Graph PAD Inplot，San Diego，CA)以非線性回歸法得到IC50值。用Lowry方法測定蛋白質濃度。
表2中給出了化合物的速激肽受體結合親和性。其中包括環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6在內的幾種化合物表現(xiàn)有對NK-2受體的親和性和選擇性。
表2NK-1和NK-2受體結合親和性
數(shù)據(jù)是2-72次實驗的平均值±S.E.M。實施例30對NK-2受體介導的磷脂酰肌醇更新的拮抗作用。
試驗前2-3天，將培養(yǎng)的SKLKB82#3(轉染到小鼠成纖維細胞系中的牛胃NK-2受體)細胞以125,000細胞/孔的量接種到29乳平板上。試驗前20-24小時細胞內加入0.5ml的0.2μM肌[2-3H(N)]肌醇(American Radiolabeled Chemicals Inc.，比活性20Ci/mmol)。將培養(yǎng)的細胞保持37℃，5％CO2環(huán)境下。試驗當天，吸出培養(yǎng)基并在含有40mg/ml桿菌肽、各4mg/ml亮抑蛋白酶肽和胰凝乳蛋白酶抑制劑、0.1％牛血清白蛋白和1μM thiorphan及10mMLicl的D-MEM/F-培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞。15分鐘后，以0.1ml體積向細胞中加入環(huán)[Try-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6(濃度范圍為0.3nm-10μM)。15分鐘后以不同濃度(0.1nM-10μM，體積為0.1ml)加入NKA或保溫緩沖液(作為對照)并以1ml的終體積保溫60分鐘。吸出培養(yǎng)基并向所有小孔內加入0.1ml甲醇以終止反應。向孔內加入兩等份0.5ml甲醇以將細胞收獲到氯仿抗性管內。向含有甲醇/細胞懸液的各管內加入氯仿(1ml)再加入0.5mlddH2O。然后將試管渦旋15秒鐘并以1,700xg離心10分鐘。取0.9ml等份的水相并放在含有2ml ddH2O的氯仿抗性試管中。旋轉樣品并加樣于1ml50％Bio-Rad AG1-X8(甲酸鹽形式，100-200目)交換柱(Bio-Rad Laboratories，Hercules，(A)上。然后依次用1)10ml daH2O，2)5ml5mM四硼酸二鈉/60mM甲酸鈉，和3)2ml1M甲酸銨/0.1M甲酸洗柱。收集第三洗脫物并在9ml閃爍液中計數(shù)。取50μl等份的有機(底部)相，在閃爍瓶中干燥并在7ml閃爍液中計數(shù)。
就每份樣品計算液相等份的DPM(總磷酸肌醇酯)對50μl有機相等份中的DPM(所摻入的總[3H]-肌醇)的比例。數(shù)據(jù)均作為激動劑誘導的在基線水平以上的[3H]-肌醇磷酸酯積聚的百分數(shù)表示。拮抗劑活性是根據(jù)在環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6存在下對速激肽的劑量反應曲線的右移而顯現(xiàn)的。使用三種或多種拮抗劑濃度進行Schild回歸分析，以得出PAz和斜率值。
構成劑量反應曲線，并使用Bristow et al.，Br.J.Pharmacol.，90211-21(1987)的方法，借助計算機程序(GrophPad Inplot)確定試驗化合物抑制速激肽誘導的磷脂酰肌醇(PI)更新的能力。圖1舉例說明環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6在SKLKB82#3細胞中產生對NKA誘導之PI更新的劑量相關拮抗作用的能力。數(shù)據(jù)表示為在基線水平上的急磷酸肌醇積聚的百分刺激率，并歸一化為由NKA產生的最大反應。這些數(shù)據(jù)證明，環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6沒有激動劑活性(如根據(jù)其既使以高化合物劑量也不能刺激PI重新的表明的)，并且拮抗NKA對SKLKB82#3細胞上NK-2受體的作用(pAz＝8.45(95％置信限＝8.22至8.69)并且斜率＝-0.85(95％置信限＝-0.94至-0.75))。實施例31拮抗NKA和辣椒堿在清醒豚鼠中誘導的呼吸效應使用雄性Duncan Hartley豚鼠(250-350g)進行體內實驗。使用由4個小型有機玻璃盒組成的改良的全身體積描記裝置(其中各有機玻璃盒均通過Validyne DP 45-16分壓轉換器接有其自身的參比盒)同時監(jiān)測4只動物的清醒呼吸曲線的改變。4個盒上均裝有一個空氣供應管(也用于氣霧釋放)和一個空氣排出管。供應和排出管道有同樣的長度，窄的腔徑，由共同的供應室伸出并通入共同的排出室。使用該系統(tǒng)以確證空氣供應和大氣壓的波動保持同相，并由分壓轉換器從凈信號排除之。通過Data Translation DT 2821 A使模擬壓力信號數(shù)字化為D板。以100個樣品/秒/動物的速率收集數(shù)據(jù)。使用下列參數(shù)分析壓力改變的每個周期在最小和最大壓力間確定的上升和下降斜率、超過下降斜率的上升比例，及初始低谷壓力和峰值循環(huán)壓力間改變的大小。使用這些數(shù)值(并觀察動物)用運轉System V UNIX操作系統(tǒng)PCAT 286將壓力循環(huán)特征化為正常呼吸、用力排氣(明顯的腹部隆起)、顯著的呼吸過程(SRES；通常是咳嗽、不太常見的噴涕或以暫時的，可區(qū)別于噪音的極大壓力增加為特征的喘息)和運動/噪音比例。
呼吸困難定義為顯著的，持續(xù)的體積描記壓力增加，而這一壓力增加是與可觀察的向動物費力呼吸移動相關聯(lián)的。
在典型的檢測對各種支氣管收縮劑的呼吸道反應的實驗過程中，使用Devilbiss Ultraned 99超聲波噴霧器釋放氣霧19分鐘(0.33ml/分鐘)并在此期間監(jiān)測動物。在噴霧之前，收集靜息呼吸1分鐘數(shù)據(jù)以確定基線壓力。在初步實驗中，估測各種濃度的支氣管收縮劑，并選定一個有最大數(shù)目的動物表現(xiàn)呼吸困難但反反應的嚴重程度又最小的濃度。因此，以0.05％的終濃度釋放神經激肽A，并以0.001％的終濃度釋放辣椒堿。所有支氣管收縮劑的噴霧載體均為不引發(fā)呼吸效應的磷酸鹽緩沖鹽水(PH7.4)。在接觸氣霧劑之前20分鐘投用環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6。
表3顯示環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6對NKA或辣椒堿氣霧劑誘導之各種呼吸效應的影響。以5mg/kg的劑量(i.v.)，化合物完全抑制了清醒豚鼠的由NKA氣霧劑誘導的呼吸效應。低劑量(0.5-2.5mg/kg，i，v.)環(huán)肽延遲了由速激肽產生之呼吸困難和SRE的發(fā)作。這些數(shù)據(jù)提示，環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6在豚鼠體內是其呼吸道中的NK-2受體抑制劑。
環(huán)肽即環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6還抑制在因辣椒堿氣霧劑釋放而產生之內源性速激肽的反應中所引起的呼吸效應(表3)。雖然環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6只使辣椒堿誘導之呼吸困難的發(fā)生率降低了20％，但呼吸困難的發(fā)作幾乎延遲兩倍；在對辣椒堿反應中產生的SRE的數(shù)目也減少了并且增加了其發(fā)作，此提示化合物的鎮(zhèn)咳性質。
表3環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]對NKA或辣椒堿在清醒豚鼠體內誘導之呼吸效應的影響A.NKA氣霧劑
數(shù)據(jù)是每項實驗得自4-18只動物的平均值±S.E.M。SRE＝顯著的呼吸過程，通常是咳嗽和較少發(fā)生的喘息。箭頭表示與對照組有顯著差異(p＜0.05)。肽＝環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]。
B.辣椒堿氣霧劑
數(shù)據(jù)是每項實驗10只動物的平均值±S.E.M。SRE＝顯著的呼吸過程，通常是咳嗽和較少發(fā)生的喘息。箭頭表示與對照組有顯著差異(p＜0.05)。肽＝環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]。
實施例32對乙酸誘發(fā)之小鼠痛苦表現(xiàn)的抑制作用使用改動的Whittle的方法(Br.J.Pharmacol.222246，1964)檢測本發(fā)明化合物的心痛作用。每組5-10只雄性小鼠的各組動物接受環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6的鞘內注射(0.013-4μg)或乙醇/鹽水載體注射(體積為5μl)。5分鐘后，小鼠接受0.4ml乙酸(0.25％，V/V)腹腔內注射。5分鐘后，觀察小鼠的扭動表現(xiàn)(腹部蠕動)并計數(shù)15分鐘內每只小鼠的扭動次數(shù)。為了計算ED50(在50％小鼠中產生心痛作用的劑量)，試驗四個或多個不同的化合物劑量并借助適當?shù)挠嬎銠C程序對結果進行可數(shù)性分析。
環(huán)肽，環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]SEQ.ID 6抑制了乙酸誘發(fā)的小鼠因痛苦而表現(xiàn)身體扭動，其ED50值為0.18μg(95％置信限＝0.03-0.58)。
序列表(1)一般信息略(2)SEQ.ID NO1的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽
(xi)序列描述SEQ.ID NO1Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa1 5(2)SEQ.ID NO2的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO2Xaa Xaa Leu Arg Trp Xaa1 5(2)SEQ.ID NO3的信息(i)序列特征(A)長度8氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO3Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO4的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀
(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO4Xaa Xaa Leu Arg Xaa Xaa1 5(2)SEQ.ID NO5的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO5Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa1 5(2)SEQ.ID NO6的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO6Tyr Xaa Leu Arg Trp Gly1 5
(2)SEQ.ID NO7的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO7Trp Xaa Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO8的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO8Xaa Xaa Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO9的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸
(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO9Tyr Xaa Leu Arg Tyr Gly1 5(2)SEQ.ID NO10的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO10Tyr Xaa Leu Arg Trp Ala1 5(2)SEQ.ID NO11的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點
(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位6處的Xaa是呈D構型的丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO11Tyr Xaa Leu Arg Trp Xaa1 5(2)SEQ.ID NO12的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO12Tyr Trp Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO13的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO13Tyr Xaa Ala Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO14的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸
(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO14Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO15的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位1(D)其他信息/注＝“定位1的Xaa是呈D構型的酪氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO15Xaa Gln Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO16的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征
(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO16Tyr Xaa Pro Arg Tyr Ala1 5(2)SEQ.ID NO17的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO17Tyr Xaa Leu Arg Gly Trp1 5(2)SEQ.ID NO18的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO18
Tyr Xaa Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO19的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2處的Xaa是呈D構型的苯丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO19Phe Xaa Pro Arg Phe Gly1 5(2)SEQ.ID NO20的信息(i)序列特征(A)長度8氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO20Leu Arg Trp Gly Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO21的信息(i)序列特征(A)長度8氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽
(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位4(D)其他信息/注＝“定位4處的Xaa是呈D構型的谷氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO21Tyr Trp Tyr Xaa Leu Arg Trp Gly1 5(2)SEQ.ID NO22的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是呈D構型的色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是萘基丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO22Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO23的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽
(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2處的Xaa是萘基丙氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是對硝基苯丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO23Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO24的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是萘基丙氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是對NH2-苯丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO24Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO25的信息(i)序列特征
(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D-構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是對氯苯基丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO25Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO26的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的XaaD-構型色氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO26Tyr Xaa Leu Arg Trp Pro1 5(2)SEQ.ID NO27的信息(i)序列特征
(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO27Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa1 5(2)SEQ.ID NO28的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ.ID NO28Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa1 5(2)SEQ.ID NO29的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D-構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是芴基甘氨酸”
(xi)序列描述SEQ.ID NO29Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO30的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa D-構型的色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是芴基甘氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO30Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO31的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa D-構型的色氨酸”
(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的xaa是二苯基丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO31Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO32的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D-構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是二苯基丙氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO32Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO33的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽
(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是甲基酪氨酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO33Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO34的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO34Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO35的信息
(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5(D)其他信息/注＝“定位5處的xaa是呈D構型的1，2，3，4四氫異喹啉-3-羧酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO35Tyr Xaa Leu Arg Xaa Gly1 5(2)SEQ.ID NO36的信息(i)序列特征(A)長度6氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位2(D)其他信息/注＝“定位2的Xaa是D構型色氨酸”(ix)特征(A)名稱/關鍵詞修飾的位點(B)定位5
(D)其他信息/注＝“定位5處的Xaa是1，2，3，4-四氫異喹啉-7-羥基-3-羧酸”(xi)序列描述SEQ.ID NO36Tyr Xaa Leu Arg Xaa G1y1 權利要求
1.下列結構式的化合物或其水合物、立體異構體、電子等排物或其醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是芐基、對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-CONH2；R3是C1-5線性或支鏈烷基且X是H或R3與X連接在一起形成-(CH2)3-；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥基芐基；R5是H、甲基或3-吲哚基甲基；條件是當R2是(CH2)2-CONH2時，R1是對羥芐基并且連接有R1的碳是(R)的絕對構型的。
2.權利要求1的化合物或其水合物、電子等排物或其醫(yī)藥上可接受的鹽，該化合物中R1是對羥苯基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2，且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H或甲基。
3.權利要求2的化合物，其中R5是H。
4.下列結構式的化合物或其水合物，電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基，且R5是H或甲基。
5.權利要求1的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 6環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，或SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 8
6.權利要求1的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]，或SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]，SEQ.ID 11。
7.權利要求1的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]，或SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]，SEQ.ID 14。
8.權利要求1的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[tyr-Gln-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 15環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Ala]，或SEQ.ID 16環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Gly-Trp]，SEQ.ID 17
9.權利要求1的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Pro-Arg-Trp-Gly]或SEQ.ID 18環(huán)[Phe-phe-Pro-Arg-Phe-Gly]，SEQ.ID 19
10.下列結構式的化合物或其生理上可接受的鹽 其中B1是C1-5線性或分支烷基、芐基、對羥芐基或3-吲哚基甲基；B2是(CH2)4-NH2、(CH2)3-NH2-、(CH2)3-NHC(＝NH)NH2或3-吲哚基甲基；B3是對羥芐基或3-吲哚基甲基；B4是H或(CH2)2-CONH2。
11.權利要求10的化合物，其中B1是CH2CH(CH3)2或對羥基芐基，B2是(CH2)3-NHC(＝NH)NH2或3-吲哚基甲基。
12.權利要求10的化合物，其中B1是CH2CH(CH3)2，B2是(CH2)3)-NHC(＝NH)NH2，B3是3-吲哚基甲基并且B4是H，或者B1是對羥基芐基，B2是3-吲哚基甲基，B3是對羥基芐基并且B4是(CH2)2-CONH2。
13.權利要求10的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Leu-Arg-Trp-Gly-Leu-Arg-Trp-Gly]或SEQ.ID20環(huán)[Tyr-Trp-Tyr-glu-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 21。
14.下列結構式的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽 其中R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R5是H或甲基；并且Q是對氯芐基、對硝基芐基、對NH2-芐基、對甲氧基芐基或有下列結構式的基團 X′為H；其中Q和X′，連同它們各自連接的碳和氮可連接形成有下列結構式的基團
15.權利要求14的化合物，其中Q是對氯芐基、對硝基芐基、對NH2-芐基或下列結構式的基團
16.權利要求14的化合物，其中所說的化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Nal-Gly]，SEQ.ID 22環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NO2-Phe)-Gly]，SEQ.ID 23環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-NH2-Phe)-Gly]，SEQ.ID 24環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(p-Cl-Phe)-Gly]，SEQ.ID 25環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Tiq-OH)-Gly]，SEQ.ID 36環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(tiq)-Gly]，SEQ.ID 35環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Tiq)-Gly]，SEQ.ID 34環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Me-Tyr)-Gly]，SEQ.ID 33環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Dpa)-Gly](II)，SEQ.ID 32環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Dpa)-Gly](I)，SEQ.ID 31環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Flg)-Gly](II)或SEQ.ID 30環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-(Flg)-Gly](I)，SEQ.ID 29。
17.含有權利要求1之化合物和醫(yī)藥上可接受之載體的藥物組合物。
18.含有權利要求1的化合物和載體的組合物。
19.含有權利要求10的化合物和醫(yī)藥上可接受之載體的藥物組合物。
20.含有權利要求10的化合物和載體的組合物。
21.含有權利要求14之化合物和醫(yī)藥上可接受之載體的藥物組合物。
22.含有權利要求14的化合物和載體的組合物。
23.下列結構式的化合物或其水合物、立體異構體、電子等排物或其醫(yī)藥上可接受的鹽在制備治療呼吸道疾病之藥物中的應用，所說的化合物中. R1是芐基、對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-COOH；R3是C1-5線性或分支烷基，且X是H，或者R3和H連接在一起形成-(CH2)3-；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥基芐基；W是H、甲基或3-吲哚基甲基，且Z是H，或者W和Z連接在一起形成-(CH2)3-；條件是當R2是(CH2)2-COOH時，R1是對羥基芐基，并且連接有R1的碳是(R)絕對構型的。
24.根據(jù)權利要求23的應用，所說的化合物或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽中R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2并且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H或甲基并且Z是H，或R5和Z連接在一起形成-(CH2)3-。
25.根據(jù)權利要求23的應用，其中化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]，SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]，SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]，SEQ.ID 11環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]，或SEQ.ID 14環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]，SEQ.ID 26。
26.根據(jù)權利要求23的應用，其中所說的呼吸道疾病是哮喘。
27.根據(jù)權利要求10-13中任何一項的化合物用于制備治療呼吸道疾病的藥物。
28.根據(jù)權利要求27的應用，其中所說的呼吸道疾病是哮喘。
29.根據(jù)權利要求14-16中任何一項的化合物用于制備治療呼吸道疾病的藥物。
30.根據(jù)權利要求29的應用，其中所說的呼吸道疾病是哮喘。
31.下列結構式的化合物或其水合物、立體異構體、電子等排物或其醫(yī)藥上可接受的鹽用于制備止痛，所說的化合物中R1是芐基、 對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是芐基、3-吲哚基甲基或(CH2)2-COOH；R3是C1-5線性或分支烷基，且X是H，或者R3和H連接在一起形成-(CH2)3-；R4是H、芐基、3-吲哚基甲基或對羥基芐基；W是H、甲基或3-吲哚基甲基，且Z是H，或者W和Z連接在一起形成-(CH2)3-；條件是當R2是(CH2)2-COOH時，R1是對羥基芐基，并且連接有R1的碳是(R)絕對構型的。
32.根據(jù)權利要求31的應用，所說的化合物或其水合物、電子等排物或醫(yī)藥上可接受的鹽中R1是對羥基芐基或3-吲哚基甲基；R2是3-吲哚基甲基；R3是CH2CH(CH3)2，并且X是H；R4是3-吲哚基甲基；R5是H或甲基，且Z是H，或者R5和Z連接在一起形成-(CH2)3-。
33.根據(jù)權利要求31的應用，其中化合物選自環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 6環(huán)[Trp-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 7環(huán)[tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 8環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Tyr-Gly]，SEQ.ID 9環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Ala]，SEQ.ID 10環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-ala]，SEQ.ID 11環(huán)[Tyr-Trp-Leu-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 12環(huán)[Tyr-trp-Ala-Arg-Trp-Gly]，SEQ.ID 13環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-trp-Gly]，或SEQ.ID 14環(huán)[Tyr-trp-Leu-Arg-Trp-Pro]，SEQ.ID 26。
34.根據(jù)權利要求10-13中任何一項的化合物用于制備止痛約。
35.根據(jù)權利要求14-16中任何一項的化合物用于制備止痛藥。
全文摘要
描述了作為新的環(huán)狀六肽和八肽化合物的神經激肽A拮抗劑。還描述了在神經激肽A所牽涉的各種條件下，使用常規(guī)競爭結合和生物化學檢測法以及常規(guī)生理學試驗證實這些衍生物對神經激肽A的拮抗作用。
文檔編號C07K7/22GK1139931SQ95191462
公開日1997年1月8日 申請日期1995年1月10日 優(yōu)先權日1994年2月3日
發(fā)明者T·J·奧溫, E·M·庫德拉茲, S·H·布克, S·L·哈爾布桑 申請人:默里爾藥物公司