含有稠合雙環的化合物及其制備方法
                            
            
                            
            文檔序號：3596874閱讀：772來源：國知局
            
                            
                        
            
                        
            
                        
            
                            專利名稱：含有稠合雙環的化合物及其制備方法
            
技術領域：
            本發明涉及含有稠合雙環的新化合物，這些化合物可用作血管緊張素轉化酶抑制劑。其中的一些化合物還具有中性肽鏈內切酶抑制活性。本發明還涉及含有這些選擇性或雙重作用的抑制劑的藥物組合物以及使用這些組合物的方法。本發明還涉及制備這些新化合物的方法、新的中間體以及制備這些中間體的方法。
            
本發明的新的稠合雙環抑制劑包括式(Ⅰ)化合物及其可藥用鹽( 其中  
            
  X為O或S-(O)t;
            
R1和R12獨立地選自氫、烷基、鏈烯基、環烷基、取代的烷基、取代的鏈烯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、環烷基亞烷基、芳基亞烷基、取代的芳基亞烷基和雜芳基亞烷基，或R1和R12與它們所連的碳原子一起形成環烷基環或苯并稠合的環烷基環;
            
R2為氫、 或R11-S-;
            
R3、R5和R7獨立地選自氫、烷基、取代的烷基、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、雜芳基-(CH2)p-、 R4為烷基、環烷基-(CH2)p-、取代的烷基、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-或雜芳基-(CH2)p-;
            
R5為烷基、取代的烷基、環烷基-(CH2)p-、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、或雜芳基-(CH2)p-;
            
R8為氫、低級烷基、環烷基或苯基;
            
R9為氫、低級烷基、低級烷氧基或苯基;
            
R10為低級烷基或芳基-(CH2)p-;
            
R11為氫、烷基、取代的烷基、環烷基-(CH2)p-、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、雜芳基-(CH2)p-，或者-S-R11形成對稱的二硫化物，其中R11為 m為0或1;
            
Y為CH2、S-(O)t或O，其條件是僅當m為1時Y為S-(O)t或O;
            
n為1或2;
            
p為0或1-6的整數;
            
q為0或1-3的整數;
            
r為0或1;和t為0、1或2。
            
術語“烷基”是指具有至多7個碳原子的直鏈或支鏈基團。術語“低級烷基”是指具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈基團，并且它為上述術語烷基的優選亞組。
            
術語“取代的烷基”是指這樣的1-7個碳原子的直鏈或支鏈基團，其中一個或多個優選一、二或三個氫被羥基、氨基、氰基、鹵素、三氟甲基、-NH(低級烷基)、-N(低級烷基)2、低級烷氧基、低級烷硫基或羧基所替代。
            
術語“低級烷氧基”和“低級烷硫基”是指與氧或硫連接的如上定義的低級烷基。
            
術語“環烷基”是指3-7個碳原子的飽和環，最優選的是環丙基、環丁基、環戊基和環己基。
            
術語“鏈烯基”是指具有一或二個雙鍵的3-7個碳原子的直鏈或支鏈基團。優選的“鏈烯基”為具有一個雙鍵的3-5個碳原子的直鏈基團。
            
術語“取代的鏈烯基”是指具有一或二個雙鍵的3-7個碳原子的直鏈或支鏈基團，其中的一個氫被羥基、氨基、鹵素、三氟甲基、氰基、-NH(低級烷基)、-N(低級烷基)2、低級烷氧基、低級烷硫基或羧基所替代。
            
術語“亞烷基”是指具有至多7個碳原子的直鏈或支鏈基團，即-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH2- 等。
            
術語“芳基”是指苯基、1-萘基和2-萘基。術語“取代的芳基”是指具有選自下列基團的取代基的苯基、1-萘基和2-萘基低級烷基、低級烷氧基、低級烷硫基、鹵素、羥基、三氟甲基、氨基、-NH(低級烷基)或-N(低級烷基)2，該術語還指二-和三取代的苯基、1-萘基或2-萘基，其中所述取代基選自甲基、甲氧基、甲硫基、鹵素、羥基和氨基。
            
術語“雜芳基”是指含有一或二個O和S原子和/或一至四個N原子的5或6元不飽和環，其條件是環中的雜原子總數為4或更少。該雜芳基環可與合適的碳或氮原子連接。優選的雜芳基包括2-、3-或4-吡啶基、4-咪唑基、4-噻唑基、2-和3-噻吩基以及2-和3-呋喃基。術語雜芳基還包括雙環，其中含有O、S和N原子的五或六元環(如上定義)與苯或吡啶環稠合。優選的雙環基為2-和3-吲哚基以及4-和5-喹啉基。所述單或雙環雜芳基環在其合適的碳原子上還可被低級烷基、鹵素、羥基、芐基或環己基甲基取代。另外，如果所述單或雙環有一個合適的N-原子，那么該N原子還可被下列N-保護基取代如 、2，4-二硝基苯基、低級烷基、芐基或二苯甲基。
            
其中A為 ;X為O或S;
            
和Y為CH2、O或S的式Ⅰ化合物的制備可通過使式(Ⅱ)的含有酰硫基側鏈的化合物(Ⅱ) 與式(Ⅲ)的稠合雙環化合物偶合，
            
  其中R3為氫、或酸保護基如甲基、乙基、叔丁基或芐基。上述反應可在有機溶劑(如二氯甲烷)中在偶合劑存在下進行，偶合劑如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺、二環己基碳化二亞胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻或羰基二咪唑。另外，式Ⅱ的酰硫基羧酸在偶合之前可以被轉化為活化形式如酰氯、混合酐、對稱酐、活化酯等。
            
用本領域已知的方法，可將式Ⅳ產物轉化為式Ⅰ的硫醇產物(其中R2為氫，及R3為氫)。例如，當R6為甲基及R3為甲基或乙基時，將式Ⅳ化合物用氫氧化鈉的甲醇溶液處理接著用酸的水溶液處理得到其中R2和R3均為氫的產物。
            
可將其中R2為氫的式Ⅰ產物用式(Ⅴ)的酰鹵酰化，
            
  其中R2為-S-R11且R11為烷基、取代的烷基、環烷基-(CH2)p-、芳基-(CH2)p-，取代的芳基-(CH2)p-或雜芳基-(CH2)p-的式Ⅰ產物的制備是通過使式Ⅰ中R2為氫的產物與式(Ⅶ)的磺酰基化合物在含水醇溶劑中反應得到所需產物。式Ⅶ化合物在文獻中是已知的或者可用已知方法制備，例如參見Smith等人，Biochemistry，14，p766-771(1975)。
            
式Ⅰ中R2為SH的產物的制備是通過使式Ⅰ中R2為氫的產物與式Ⅶ中R11為三苯基甲基或三烷基甲硅烷基的化合物反應，接著在酸性條件下除去三苯基甲基或三烷基甲硅烷基。
            
按照已知的方法，例如參見Ondetti等，U.S.4，105，776，用碘直接氧化式Ⅰ中R2為氫的產物可制得式Ⅰ的對稱二硫化物產物。
            
其中R12為氫的式Ⅱ的酰硫基側鏈化合物已公開于文獻中，例如參見Ondetti等人，U.S.4，105，776和4，339，600;Haslanger等人，U.S.4，801，609;Delaney等人，U.S.4，722，810等。
            
式Ⅱ中R1和R12均不是氫且r為0的酰硫基側鏈化合物的制備可通過使式(Ⅷ)的取代的羧酸 與雙[[(4-甲氧基)苯基]甲基二硫化物在二異丙基氨基化鋰存在下反應得到式(Ⅸ)化合物。
            
  用強酸如三氟甲磺酸處理式Ⅸ化合物除去甲氧基芐基保護基，接著用式Ⅴ的酰鹵或式Ⅵ的酐酰化得到其中R1和R12均不是氫且r為0的式Ⅱ化合物。
            
另外，式Ⅷ的取代的羧酸可與二異丙基氨基化鋰和硫反應得到式(Ⅹ)的硫醇。
            
  然后可用式Ⅴ的酰鹵或式Ⅵ的酐酰化式Ⅹ的硫醇得到其中R1和R12均不是氫且r為0的式Ⅱ化合物。
            
式Ⅱ中R1和R12均不是氫且r為1的酰硫基側鏈化合物的制備可通過使式(Ⅺ)的取代的羧酸 在吡啶中與對甲苯磺酰氯反應得到式(Ⅻ)的內酰胺， 用式(ⅩⅢ)的硫代酸銫在二甲基甲酰胺存在下處理式Ⅻ的內酰胺，
            
  得到所需的其中R1和R12均不是氫且r為1的式Ⅱ酰硫基側鏈化合物。
            
式Ⅰ中A為 X為O或S，且Y為CH2、O或S的化合物的制備可通過使式(ⅩⅣ)的酸 其中R7為酸保護基，與式Ⅲ的稠合雙環化合物在如上定義的偶合劑存在下偶合得到式(ⅩⅤ)產物  
            
另外，式ⅩⅣ酸在偶合反應之前可被轉化為活化形式如酰氯。
            
Warshawsky等人在歐洲專利申請534，396和534，492中描述了式ⅩⅣ酸。
            
式Ⅰ中A為 X為O或S，且Y為CH2、O或S的化合物的制備是通過使式(ⅩⅥ)的酮酸或酯 與式Ⅲ的稠合雙環化合物在還原條件下反應得到式(ⅩⅦ)產物。
            
  式ⅩⅥ的酮酸和酯已公開于文獻中。例如參見Ruyle，U.S.4，584，294和Parsons等人，U.S.4，873，235。
            
另外，式Ⅲ的稠合雙環化合物可與式(ⅩⅧ)的三氟甲磺酸酯反應
            
  得到式ⅩⅦ產物。
            
式Ⅰ中A為R4 ，X為O或S，且Y為CH2、O或S的化合物的制備可通過使式(ⅩⅨ)的膦酰基氯化物 其中R5為低級烷基或芐基，與式Ⅲ的稠合雙環化合物偶合得到式(ⅩⅩ)產物。
            
  優選地，式Ⅲ化合物中的R3為低級烷基或芐基。然后例如通過氫化除去R3和R5酸保護基得到相應的其中R3和R5均為氫的式Ⅰ產物。
            
式ⅩⅨ的膦酰基氯化物在文獻中是已知的，例如參見Karanewsky等人，US 4，432，971和4，432，972，以及Karanewsky，U.S.4，460，579。
            
式Ⅰ中X或Y或兩者均為S-(O)t且t為1或2的產物可通過用已知的氧化劑(如間氯過苯甲酸、過乙酸、單過氧鄰苯二甲酸、鎂鹽六水合物等)氧化式Ⅳ、ⅩⅤ、ⅩⅦ或ⅩⅩ化合物來制備。通過控制氧化劑的用量和反應時間，可得到其中t為1或2的產物。
            
式Ⅰ中R5或R7為 的酯產物的制備可通過用式(ⅩⅪ)化合物 其中L為離去基團如氯、溴或甲苯磺酰氧基，處理相應的其中R5或R7為氫，且R3為酸保護基的式Ⅰ化合物，接著除去R3酸保護基。
            
式Ⅰ中R3為
            
  的酯產物的制備可通過用式ⅩⅪ化合物處理相應的其中R3為氫和R2為 的式Ⅰ化合物。
            
按照下列方法(也為本發明的一部分)，可制備式Ⅲ的稠合雙環化合物。例如，當Y為CH2時，式(ⅩⅩⅡ)的N-保護的氨基酸 可與式(ⅩⅩⅢ)氨基酸酯偶合，  
            
得到式(ⅩⅩⅣ)的二肽， 其中P1為氨基保護基(如芐氧羰基或叔丁氧羰基)或與N原子一起形成保護基的基團如鄰苯二甲酰亞氨基;P2為羥基或巰基保護基;且R3為容易除去的酯保護基。當X為S時優選的P2保護基為酰基如乙酰基或苯甲酰基特別是乙酰基。當X為O時優選的P2保護基為酰基、四氫吡喃基、受阻的甲硅烷基和三苯甲基基團，特別是三苯基甲基和1，1-二甲基乙基二甲基甲硅烷基。該偶合反應優選在偶合劑存在下進行，偶合劑如六氟磷本苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻、乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺或甲磺酰氧基苯并三唑。
            
可選擇性地除去式ⅩⅩⅣ中間體的P2保護基，例如當P2為乙酰基或苯甲酰基時用甲醇鈉的甲醇溶液處理;或者當P2為乙酰基、苯甲酰基、三苯甲基、四氫吡喃基或1，1-二甲基乙基二甲基甲硅烷基時用酸如對甲苯磺酸的甲醇溶液處理。然后將所得產物進行酸催化的環化反應，優選用強酸(如三氟乙酸、對甲苯磺酸)或市場上可買到的聚苯乙烯磺酸鹽聚合物型離子交換樹脂(如Amberlyst 15 )處理。該環化反應可在非質子傳遞溶劑如二氯甲烷或氯仿中進行從而得到式(ⅩⅩⅤ)中間體 在除去P2保護基之后且在環化反應之前，可將式ⅩⅩⅣ化合物(其中X為O)轉化為相應的其中X為S的化合物。該轉化可用幾種方法進行。例如，在除去P2基團后，用三苯基膦、偶氮二羧酸二異丙酯和硫代乙酸處理式ⅩⅩⅣ化合物。然后將所得的硫代乙酸酯化合物用甲醇鈉的甲醇溶液處理得到相應的硫醇化合物，然后將該硫醇化合物按上述方法環化。
            
在另一方法中，在除去P2基團后，用已知方法處理式ⅩⅩⅣ化合物得到式(ⅩⅩⅥ)化合物 其中L為離去基團如甲磺酰氧基、對甲苯磺酰氧基、碘或溴。例如，在除去P2保護基后用甲磺酰氯處理式ⅩⅩⅣ化合物得到其中L為甲磺酰氧基的式ⅩⅩⅥ化合物。
            
然后用硫代乙酸銫處理式ⅩⅩⅥ化合物得到相應的硫代乙酸酯化合物。用甲醇鈉的甲醇溶液處理得到相應的硫醇化合物，然后將其按上述方法環化。
            
另外，在合適的溶劑如二氯甲烷或氯仿中通過用強酸如三氟乙酸、對甲苯磺酸或市場上可買到的聚苯乙烯磺酸鹽聚合物型離子交換樹脂(如Amber lyst 15 )處理可將式ⅩⅩⅣ中X為O的化合物直接轉化為式ⅩⅩⅤ中間體。
            
然后除去式ⅩⅩⅤ化合物的N-保護基，例如當P1與N原子一起形成鄰苯二甲酰亞氨基時用肼-水合物處理;或當P1為芐氧羰基時用碘代三甲基甲硅烷或鈀/炭和甲酸銨或氫氣處理;或當P1為叔丁氧羰基時，用鹽酸的二噁烷溶液或其他強酸處理，從而得到式Ⅲ的稠合雙環化合物。
            
在另一方法中，當Y為CH2時，式ⅩⅩⅡ的N-保護的氨基酸可與式(ⅩⅩⅤⅡ)的羥基氨基酸酯偶合 得到式(ⅩⅩⅤⅢ)的二肽，
            
  其中P1和P2定義如上。該偶合反應優選在偶合劑如甲磺酰氧基苯并三唑或乙基-3-(二甲基氨基)丙基碳化二亞胺存在下進行。
            
然后將羥基化合物ⅩⅩⅤⅢ氧化成式(ⅩⅩⅠⅩ)醛， 該氧化反應是通過用草酰氯/二甲亞砜處理，接著用在非質子傳遞溶劑如二氯甲烷中的叔胺處理來進行的。然后按上述方法處理式ⅩⅩⅠⅩ的醛除去P2保護基，然后按上述方法進行酸催化的環化反應得到式ⅩⅩⅤ中間體。
            
其中m為1的式ⅩⅩⅢ起始原料的制備可通過選擇性地保護L-ε-羥基正亮氨酸的N原子，得到式(ⅩⅩⅩ)化合物，
            
  其中P3為N保護基。例如，P3和N原子可形成鄰苯二甲酰亞氨基。然后處理式ⅩⅩⅩ的N-保護的L-ε-羥基正亮氨酸從而引入R3酸保護基，例如這可通過在堿存在下用甲基碘處理或用在甲醇中的強酸處理來實現，其中R3為甲基。接著氧化該酯得到式(ⅩⅩⅪ)醛， 然后在強酸催化劑和相應的醇即HO-烷基(其中烷基與式ⅩⅩⅫ原甲酸酯中的烷基一樣)存在下，用式(ⅩⅩⅫ)原甲酸酯處理式ⅩⅩⅪ醛得到式(ⅩⅩⅩⅢ)化合物  
            
  當P3和N原子形成鄰苯二甲酰亞氨基時，(例如)通過用水合肼處理除去N保護基P3，得到式ⅩⅩⅢ中m為1的起始原料。
            
式ⅩⅩⅢ中m為0的起始原料的制備可通過保護谷氨酸γ-芐酯的N原子得到式(ⅩⅩⅩⅣ)化合物 其中P3為N保護基(如叔丁氧羰基)或P3與N原子可形成鄰苯二甲酰亞氨基。然后按上述方法處理式ⅩⅩⅩⅣ的N保護的谷氨酸從而引入R3酸保護基得到式(ⅩⅩⅩⅤ)化合物。
            
  當R3為低級烷基時，水解除去式ⅩⅩⅩⅤ化合物中的芐基酯基得到式(ⅩⅩⅩⅥ)化合物。
            
  選擇性地還原化合物ⅩⅩⅩⅥ，例如用乙硫醇、乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺和二甲基氨基吡啶處理接著用三乙基甲硅烷、鈀/炭和乙腈處理得到式(ⅩⅩⅩⅦ)醛 然后按上述方法用式ⅩⅩⅫ的原甲酸酯處理式ⅩⅩⅩⅦ醛，并按上述方法除去N保護基P3，得到式ⅩⅩⅢ中m為0的起始原料。
            
式ⅩⅩⅦ的羥基氨基酸酯起始原料的制備可通過使乙酰氨基丙二酸二乙酯溶液與攪拌著的氫化鈉懸浮液反應，接著與式(ⅩⅩⅩⅧ)的乙酸鹵代烷基酯反應 其中鹵素為Br、I或Cl，從而得到式(ⅩⅩⅩⅨ)化合物。
            
  用氫氧化鈉處理式ⅩⅩⅩⅨ的二乙酯溶液并加熱，然后酸化并再加熱得到式(ⅩL)的羥基氨基酸。
            
  然后用豬腎酰基酶或其它合適的水解酶處理式ⅩL羥基氨基酸得到式(ⅩLⅠ)的被拆分的羥基氨基酸。
            
  接著用常規方法，將式ⅩLⅠ的羥基氨基酸轉化為式ⅩⅩⅦ的酯。例如，用三甲基甲硅烷基氯在甲醇中處理式ⅩLⅠ的羥基氨基酸得到式ⅩⅩⅦ的甲酯鹽酸鹽。
            
式ⅩⅫ起始原料可按下列方法制備。當X為O時，使式(ⅩLⅡ)的羥基α-氨基酸反應從而引入P1和P2保護基， 例如，在碳酸鈉存在下用N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺處理式ⅩⅩⅡ酸，接著用氯三苯基甲烷和三乙胺處理得到式ⅩⅩⅡ起始原料(其中Ⅹ為O，P1與N原子一起形成鄰苯二甲酰亞氨基，P2為三苯甲基)。另外，用N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺在碳酸鈉水溶液和丙酮中處理式ⅩLⅡ酸，接著用叔丁基二甲基甲硅烷基氯或式Ⅴ或Ⅵ的酰化劑處理，得到式ⅩⅩⅡ起始原料，其中Ⅹ為O，P1為芐氧羰基，P2為叔丁基二甲基甲硅烷基或酰基如乙酰基。
            
當Ⅹ為S且n為1時，可用鋅粉和硫酸水溶液處理N，N′-雙[(苯基甲氧基)羰基]-L-胱氨酸得到式(ⅩLⅢ)的硫醇化合物。
            
  然后處理式ⅩLⅢ的硫醇化合物從而引入P2保護基。例如，用乙酐處理式ⅩLⅢ硫醇化合物得到式ⅩⅩⅡ起始原料，其中Ⅹ為S，n為1，P2為乙酰基，且P1為芐氧羰基。
            
當Ⅹ為S且n為2時，L-蛋氨酸可在N原子上被保護。例如，將其與氯甲酸芐酯或N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺反應得到N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-蛋氨酸，然后在酸催化劑如對甲苯磺酸存在下用醇、烷基-OH處理進行酯化。用氧化劑如N-氯琥珀酰亞胺在含水溶劑中處理得到式(ⅩLⅣ)亞砜 然后用酸酐如乙酐處理式ⅩLⅣ亞砜得到式(ⅩLⅤ)化合物，  
            
接著用堿金屬氫氧化物處理，然后(例如)用還原劑如硼氫化鈉處理除去甲醛，再用酸酐如乙酐處理得到式ⅩⅫ起始原料，其中X為S，n為2，P2為乙酰基，P1為芐氧羰基。
            
式Ⅲ的稠合雙環化合物(其中Y為S或O、m為1)的制備可通過使式ⅩⅫ的N-保護的氨基酸與式(ⅩLⅥ)的氨基酸酯進行偶合， 其中P1和P2如前定義，R3為酸保護基。該偶合反應優選在偶合劑存在下進行，偶合劑如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻或乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺。
            
可選擇性地除去式ⅩLⅦ中間體中的P2保護基，例如，當P2為酰基如乙酰基或苯甲酰基時，用甲醇鈉的甲醇溶液處理;和當P2為三苯甲基、四氫吡喃基或受阻的甲硅烷基時，用酸如對甲苯磺酸的甲醇溶液處理。然后，按上述方法，將所得產物進行酸催化的環化反應得到式(ⅩLⅧ)中間體。
            
  其中X為S和n為2的式ⅩLⅧ中間體的制備也可通過處理式ⅩLⅦ化合物(其中X為O且n為2)從而選擇性地除去P2基團，并按上述方法將羥基轉化為硫醇，接著進行酸催化的環化反應。
            
然后除去式ⅩLⅧ化合物中的N-保護基，例如，當P1與N原子一起形成鄰苯二甲酰亞氨基時，用肼一水合物處理，或當P1為芐氧羰基時，用碘代三甲基甲硅烷或鈀/炭和甲酸銨或氫氣處理得到式Ⅲ的稠合雙環化合物。
            
其中Y為O的式ⅩLⅥ起始原料的制備可通過使式(ⅩLⅨ)的N-鄰苯二甲酰亞氨基保護的氨基酸酯
            
  與三氯乙亞胺酸烯丙酯在三氟甲磺酸存在下反應得到式(L)化合物。
            
  在甲醇中用溴氧處理式L化合物，然后用二甲硫處理，接著在對甲苯磺酸存在下用式ⅩⅩⅫ的原甲酸酯處理，得到式(LⅠ)的保護的化合物  
            
用水合肼處理除去N-保護基得到式ⅩLⅥ中Y為O的起始原料。
            
式ⅩLⅥ中Y為S的起始原料的制備可通過使式(LⅡ)的半胱氨酸酯 與式(LⅢ)的溴代醛縮醇(LⅢ)Br-CH2-CH-(O-烷基)2在氫化鈉和碘化鉀的存在下反應得到式(LⅣ)的氨基酸酯。
            
  式Ⅰ化合物除了在其側鏈上的其它可能的不對稱中心外，在其結構的稠合雙環部分還含有三個不對稱中心。盡管優選上述稠合雙環產物的旋光純形式，但所有這些形式均在本發明的范圍之內。上述方法可以使用外消旋體、對映體或非對映體作為起始原料。當制備非對映體化合物時，可用常規色譜方法或分級結晶方法分離。優選地，與橋頭碳連接的氫原子的取向如下所示 式Ⅰ中R3、R5和/或R7為氫的化合物可以可藥用鹽的形式分離。為此目的，合適的鹽為堿金屬鹽(如鈉和鉀鹽);堿土金屬鹽(如鈣和鎂鹽);由氨基酸(如精氨酸、賴氨酸等)衍生的鹽;由胺(如烷基胺如叔丁胺、叔戊胺等，取代的烷基胺如芐胺，二烷基胺，取代的二烷基胺如N-甲基葡糖胺，三烷基胺，取代的三烷基胺)衍生的鹽，以及季銨鹽。這些鹽的制得是通過使化合物的酸形式與提供所需離子的堿在鹽能夠沉淀的介質中或在含水介質中反應，然后冷凍干燥。
            
優選的本發明化合物是其中的 R3為氫或1-4個碳原子的低級烷基;
            
r為0或1;
            
R11為1-4個碳原子的低級烷基;
            
R1為芳基-CH2-、取代的芳基-CH2-、雜芳基-CH2-、環烷基-CH2-(其中環烷基為3-7個碳原子)、或1-7個碳原子的直鏈或支鏈烷基，且R12為氫;或R1和R12與它們連接的碳原子一起形成5-7個碳原子的環烷基環;
            
R5為1-4個碳原子的低級烷基或苯基;
            
n為1或2;
            
m為0或1;
            
X為O或S;和Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時Y為O或S。
            
最優選的是如下化合物，其中R2為氫或 ，特別是氫;
            
R3為氫;
            
r為0或1，特別是1;
            
R1為芐基、環丙基甲基、或3-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是芐基;
            
R12為氫;
            
n為1或2;
            
m為0或1;
            
X為O或S;和Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時Y為O或S。
            
一個最優選的化合物是[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸，即下式化合物 的化合物是雙重抑制劑，它具有抑制血管緊張素轉化酶和中性肽鏈內切酶的活性。式Ⅰ中A為 的化合物為選擇性抑制劑，它具有抑制血管緊張素轉化酶的活性。因此，式Ⅰ化合物及其可藥用鹽可用于治療血管緊張素轉化素酶抑制劑表現為有效的生理病癥。這些病癥包括以血壓、眼內壓和血管緊張素原酶異常為特征的疾病，包括心血管疾病特別是高血壓和充血性心力衰竭、青光眼以及腎病如腎衰竭、糖脲病性腎病、以及用環孢菌素或其它免疫抑制劑治療后的腎損傷。據報道血管緊張素轉化酶抑制劑表現出有效的其它病癥包括肝硬變、抑制動脈粥樣硬化的進程、預防或治療高血壓性或糖尿病性視網膜病、改善在心肌梗塞形成過程中或之后的心肌機能障礙、以及預防血管成形術后的休息病(restinosis)。雙重抑制劑也可用于治療中性肽鏈內切酶抑制劑表現出有效的生理病癥。這些病癥還包括心血管疾病特別是高血壓、血內醛甾酮過多(hyperaldosteronemia)、腎病、青光眼以及急性或慢性疼痛的減輕。因此，式Ⅰ化合物可用于降低血壓，而且式Ⅰ的雙重抑制劑由于它們具有利尿和促尿鈉排泄性能因此也可用于此目的。所述雙重抑制劑特別用于治療充血性心力衰竭。
            
式Ⅰ化合物及其可藥用鹽可以有效量給藥，其量類似于血管緊張素轉化酶抑制劑以前用的量。例如，對于哺乳動物宿主如人，式Ⅰ化合物可以大約0.1mg至大約100mg/kg體重/天、優選大約0.5mg至大約25mg/kg體重/天的劑量給藥。式Ⅰ化合物優選口服給藥，但腸胃外途徑如皮下、肌肉內和靜脈內也可用作局部給藥途徑。日劑量可以單次給藥或以可分成全天內給藥3-4次的劑量給藥。
            
式Ⅰ的抑制劑可與人ANF99-126混合給藥，該混合物含有大約1至大約100mg/kg體重的式Ⅰ的抑制劑和大約0.001至大約0.1mg/kg體重的人ANF99-126。
            
式Ⅰ抑制劑可與其它類型的藥物活性化合物混合給藥。例如，利尿劑、鈣離子通道阻滯劑、鉀離子通道活化劑、膽固醇降低劑、β-阻滯劑等。
            
式Ⅰ的抑制劑或其可藥用鹽以及其它可藥用成分可為了上述藥物用途而進行配制。口服給藥的合適組合物包括片劑、膠囊劑和酏劑;用于腸胃外給藥的合適組合物包括無菌溶液和懸浮液。用于治療青光眼的合適組合物也包括局部組合物如溶液、軟膏劑和固體插入劑，如U.S.4，442，089中所述。大約10-500mg活性成分與生理上可接受的賦形劑、載體、粘合劑、防腐劑、穩定劑、調味劑等以被可接受的藥物實踐所需要的單位劑型混合。
            
下列實施例用于說明本發明。所給溫度為攝氏度。除非另有說明，用硅膠進行薄層色譜(TLC)。
            
實施例1[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-羥基丁酸三乙胺鹽用N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺(5.570g，25.4mmol)處理L-高絲氨酸(3.0g，25.2mmol)和碳酸鈉(2.670g，25.2mmol)的水(60ml)溶液。在室溫下攪拌2小時后，溶液用6N鹽酸酸化并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)，并濾至三乙胺(4.0ml)的二氯甲烷(40ml)溶液中。濃縮該混濁的溶液并用乙酸乙酯和乙醚研制得到5.11g白色固體的標題化合物;m.p.142-144℃。TLC(5%乙酸的乙酸乙酯溶液)，Rf＝0.36;[α]D＝-6.2°(c＝0.8，氯仿)。
            
元素分析C18H26N2O5計算值C 61.70;H 7.48;N 7.99
            
實測值C 61.45;H 7.47;N 7.84。
            
b).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(三苯基甲氧基)丁酸三乙胺鹽將步驟(a)產物(1.890g、5.4mmol)在氯仿(20ml)中的均相溶液用三乙胺(80μl)處理，接著用固體氯代三苯基甲烷(1.590g，5.70mmol)處理。在室溫下攪拌2.5小時后，將溶液在乙酸乙酯和0.1N鹽酸(150ml)間分配。有機層用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)并過濾至三乙胺(1.0ml)的二氯甲烷(30ml)溶液中。濃縮溶液得到油狀物，再溶于少量二氯甲烷和乙酸乙酯中，用乙醚研制直至溶液變成混濁。混合物中放入晶種并在室溫下放置。過濾收集所得的沉淀，用乙酸乙酯和乙醚洗滌，真空干燥得到2.538g白色固體標題化合物;m.p.＝165-170℃(分解)。TLC(10%甲醇的氯仿溶液)，Rf＝0.23;[α]D＝+7.0°(c＝1.2，氯仿)。
            
c).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-6-羥基己酸用N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺(1.495g，7.0mmol)處理(+)-L-ε-羥基正亮氨酸[按Bodanszky等人的方法制備，J.Med.Chem.，1978，21，1030-1035](1.030g，7.0mmol)和碳酸鈉(745mg，7.0mmol)的水(12ml)溶液，并將混合物在室溫下攪拌2小時。將溶液過濾，冷卻至0℃，用6N鹽酸酸化得到白色沉淀。過濾收集固體并在80℃下真空干燥1小時得到1.297g標題化合物;m.p.162-163℃;[α]D＝-35.7°(c＝1.3，甲醇)。
            
d).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-6，6-二甲氧基己酸甲酯用甲基碘(3.0ml，6.84g，48.2mmol)處理步驟(c)產物(3.752g，13.5mmol)和碳酸銫(2.178g，6.7mmol)的二甲基甲酰胺(44ml)的漿狀液。在室溫下攪拌2小時后，混合物用乙酸乙酯稀釋，依次用含有少量亞硫酸氫鈉的水、水、50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提得到無水油狀的中間體酯(3.825g)。油狀物用TLC(1∶1丙酮∶己烷)分析為均一的，Rf＝0.37。
            
將-78℃的草酰氯(1.37ml，2.00g，15.7mmol)的無水二氯甲烷(58ml)溶液通過滴加入無水二甲亞砜(2.24ml、2.47g，31.6mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液進行處理。10分鐘后，加入上面的醇-酯(3.825g，13.1mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。再經15分鐘后，加入三乙胺(8.0ml)，然后混合物在-78℃下攪拌5分鐘，然后溫熱至0℃，混合物用乙酸乙酯/乙醚稀釋，依次用1N鹽酸、水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提得到粗的所需醛。油狀物用TLC(1∶1丙酮∶己烷)分析為均一的，Rf＝0.48。
            
將上述醛的甲醇(17ml)和二氯甲烷(17ml)溶液用原甲酸三甲酯(1.7ml)處理，接著用對甲苯磺酸一水合物(180mg)處理。混合物在室溫下攪拌1.5小時，然后在乙酸乙酯和50%飽和碳酸氫鈉間分配。有機層用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。殘余物用快速色譜法(Merck硅膠，1∶1乙酸乙酯∶己烷)純化，純化的產物級分經乙酸乙酯/己烷結晶得到白色針狀的分析純的標題產物(3.452g，第一批;215mg，第二批);m.p.69-70℃。TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.35;[α]D＝-27.4°(c＝1.5，氯仿)。
            
元素分析 C17H21NO5計算值C 60.89;H 6.31;N 4.18;
            
實測值C 60.80;H 6.32;N 4.16。
            
e).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(三苯基甲氧基)-1-氧代丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯用肼一水合物(378μl，390mg，7.80mmol)處理步驟(d)的產物(2.540g，7.57mmol)的甲醇(18ml)漿狀液。混合物在10分鐘內變成均相。室溫攪拌3天后，將所得的漿狀物過濾、汽提、在二氯甲烷中成漿。再次過濾并汽提得到無色油狀的粗中間體胺。同時用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(3.519g，7.95mmol)在0℃下處理步驟(b)的三乙胺鹽產物(4.622g，7.80mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液。混合物攪拌35分鐘，然后用上述胺的二氯甲烷(15ml)溶液處理。0℃下保持10分鐘，室溫下保持2小時后，溶液在乙醚和水間分配。有機層用50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)，過濾并汽提。將殘余物用快速色譜法(Merck硅膠，6∶4乙酸乙酯∶己烷)純化，得到3.580g白色泡沫狀的純標題化合物。TLC(6∶4乙酸乙酯∶己烷)，Rf＝0.32;[α]D＝+26.2°(c＝0.6，氯仿)。
            
f).[S-(R＊，R＊)]-2-[(2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-羥基-1-氧代丁基)氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯用對甲苯磺酸一水合物(520mg)處理步驟(e)產物(5.420g，8.0mmol)的甲醇(60ml)溶液。室溫下攪拌1.5小時后，混合物在乙酸乙酯和稀碳酸氫鈉間分配。分離各相，水層再用乙酸乙酯萃取。合并的有機萃取液用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。將殘余物進行快速色譜法(Merck硅膠，用8∶2乙酸乙酯∶己烷，接著用5%甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫)純化得到2.860g無色油狀的標題產物。TLC(7∶3乙酸乙酯∶己烷)，Rf＝0.26;[α]D＝+18.7°(c＝1.3，氯仿)。
            
g).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用Amberlyst 15離子交換樹脂(240mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃、二氯甲烷預洗滌)處理步驟(f)產物(2.10g，4.95mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液。室溫下攪拌2.5小時后，將溶液過濾、汽提并用快速色譜法(Merck硅膠，用6∶4乙酸乙酯∶己烷，接著用100%乙酸乙酯洗脫)純化得到1.40g白色泡沫狀的標題產物。
            
h).(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸將亞硝酸鈉(10.3g，280mmol)加到D-苯基丙氨酸(30.0g，181mmol)和溴化鉀(73.5g)的硫酸(2.5N，365ml)溶液中，歷時1小時，同時保持反應混合物的溫度為0℃。混合物0℃下攪拌1小時，然后室溫下放置1小時。用乙醚萃取反應溶液，乙醚液用水反萃取，乙醚層用硫酸鈉干燥，真空除去乙醚，蒸餾油狀殘余物得到25.7g(R)-2-溴-3-苯丙酸;b.p.141℃(0.55mmHg);[α]D＝+14.5°(c＝2.4，氯仿)。
            
將硫代乙酸(7ml，97.9mmol)和氫氧化鉀(5.48g，97.9mmol)的乙腈(180.5ml)混合物在氬氣氛室溫下攪拌1 3/4 小時。混合物在冰浴中冷卻，在10分鐘內加入(R)-2-溴-3-苯丙酸(20.4g，89mmol)的乙腈(20ml)溶液。將反應混合物在氬氣氛室溫下攪拌5小時，過濾、真空除去乙腈。將油狀殘余物再溶于乙酸乙酯中，用10%硫酸氫鉀和水洗滌。真空除去乙酸乙酯得到19.6g粗產物。使用異丙醚作為結晶溶劑，經其二環己胺鹽純化粗產物。經乙酸乙酯重結晶制得分析樣品(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己胺鹽;m.p.146-147℃;[α]D＝-39.6℃(c＝1.39，氯仿)。
            
元素分析C11H12O3S·C12H23N計算值C，68.11;H，8.70;N，3.45;S，7.91;
            
實測值C，67.93;H，8.71;N，3.37;S，7.94。
            
將該二環己胺鹽分配在5%硫酸氫鉀和乙酸乙酯間得到(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸，從而再次得到游離酸，[α]D＝-70.1°，(c＝1.91，氯仿)元素分析C11H12O3S計算值C，58.91;H，5.39;S，14.30實測值C，58.73;H，5.41;S，14.53。
            
i).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用肼一水合物(85μl，88mg，1.75mmol)處理步驟(g)產物(620mg，1.66mmol)和甲醇(10ml)溶液，并將溶液在室溫下攪拌44小時。過濾混合物，用甲醇洗滌固體。汽提濾液、用二氯甲烷研制、再過濾并汽提得到混濁油狀的粗胺(大約400mg)。
            
將冷的(0℃)(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(410mg，1.83mmol)和三乙胺(250μl，182mg，1.80mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液用上述胺(作為在8ml二氯甲烷中的溶液)處理，接著用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(808mg，1.83mmol)處理。澄清的幾乎無色的溶液在0℃下攪拌40分鐘，然后在室溫下攪拌2小時。混合物在乙酸乙酯/乙醚和水間分配。有機層依次用50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。殘余物通過快速色譜法(Merck硅膠，60-70%乙酸乙酯的己烷溶液)純化得到602mg白色泡沫狀的純標題產物;TLC(6∶4乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.27。
            
j).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸用1N氫氧化鈉(7ml，通過氬氣鼓泡去氧)處理0℃的步驟(i)產物(590mg，1.32mmol)的甲醇(10ml，通過氬氣鼓泡去氧)溶液。攪拌15分鐘后，將溶液溫熱至室溫，再在氬氣氛下連續攪拌4.5小時。混合物用5%硫酸氫鉀酸化，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮至大約3ml。殘余物在乙酸乙酯和少量己烷中成漿。過濾收集所得固體，真空干燥得到413mg標題產物;m.p.180.5℃(分解)。TLC(2%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.39;[α]D＝-37.6°(c＝0.36，甲醇)。
            
HPLCYMC S3 ODS柱(6.0×150mm);用下列試劑洗脫40%A90%水-10%甲醇-0.2%磷酸和60%B10%水-90%甲醇-0.2%磷酸;在220nm處測出流速為1.5ml/min;tR＝6.73min(95.7%)。
            
元素分析C20H28N2O4S·0.12乙酸乙酯計算值C，58.05;H，6.24;N，6.95;S，7.96;
            
實測值C，58.23;H，6.34;N，6.83;S，7.81。
            
實施例2[3R-[3α(S＊)，6α，9αβ]]-六氫-3-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸a).N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-半胱氨酸將N，N′-雙[(苯基甲氧基)羰基]-L-胱氨酸(4.658g，9.16mmol)的甲醇(35ml)溶液用2N硫酸(23ml)處理，接著用鋅粉(2.442g，37.3mmol)分批處理。混合物在70℃下加熱1.5小時。趁熱過濾，用旋轉蒸發器濃縮。用乙醚萃取殘余物溶液，乙醚萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。將殘余物(油狀物)溶于四氯化碳中，冷卻至0℃，放入晶種，緩慢得到沉淀。過濾收集固體，用冷的四氯化碳洗滌得到2.648g產物。汽提母液，用快速色譜法(Merck硅膠，用乙酸乙酯，接著用4%乙酸的乙酸乙酯溶液洗脫)，結晶后，得到另外的產物(246mg)，產物的總產量為2.894g。TLC(5%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.58。
            
b).S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-半胱氨酸用乙酐(8.0ml，8.66g，84.8mmol)處理步驟(a)產物(2.70g，10.6mmol)的含有碳酸氫鉀(2.140g，21.4mmol)的水(30ml)，經氬氣鼓泡去氧)的均相溶液。室溫下保持10分鐘后，混合物用10%鹽酸酸化，用乙醚萃取。乙醚萃取液用水和鹽水洗滌兩次，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提得到油狀物。殘余物與甲苯共沸三次，與乙醚/己烷共沸兩次。之后，結晶油狀物。殘余物用乙醚/己烷研制，過濾收集固體，得到2.19g純標題產物。TLC(5%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.56。
            
c).(S)-2-[[N-[(苯基甲氧基)羰基-S-乙酰基-L-半胱氨酰基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯用肼一水合物(176μl，182mg，3.63mmol)處理(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-6，6-二甲氧基己酸甲酯[按實施例1(d)所述方法制備，1.158g，3.45mmol)的甲醇(12ml)漿狀液。10分鐘內，混合物變成均相。在室溫下攪拌67小時，將所得漿狀液過濾、汽提、在二氯甲烷中成漿、再次過濾并汽提得到無色油狀的粗中間體胺。同時，用三乙胺(555μl，403mg，3.98mmol)處理一部分步驟(b)產物(1.185g，3.98mmol)的二氯甲烷(14ml)的漿狀液。將即得的均相溶液冷卻至0℃，用上述胺的二氯甲烷(7ml)溶液處理，然后用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(1.762g，3.98mmol)處理。混合物在0℃攪拌2.5小時，然后在室溫下攪拌45分鐘。除去溶劑，殘余物在乙酸乙酯和水間分配。有機層用50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)，過濾并汽提。用快速色譜法(Merck硅膠，65∶35乙酸乙酯∶己烷)純化殘余物得到1.15g白色泡沫狀的純標題產物。TLC(75∶25乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.42。
            
元素分析C22H32N2O8S計算值C，54.53;H，6.66;N，5.78;S，6.62;
            
實測值C，54.79;H，6.72;N，5.77;S，6.95。
            
d).[3R-(3α，6α，9αβ)]-六氫-3-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸甲酯用甲醇鈉(25%(重量)的甲醇液，490μl，463mg，2.14mmol)在0℃下處理步驟(c)產物(1.040g，2.15mmol)的甲醇(12ml)的去氧(用氬氣鼓泡)溶液。20分鐘后，混合物用飽和氯化銨使其中止反應，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。殘余物再溶于二氯甲烷(200ml)中，在室溫下與Amberlyst 15離子交換樹脂(820mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃、二氯甲烷預洗滌)一起攪拌。3小時后，將溶液過濾、汽提并用快速色譜法(Merck硅膠，65∶35乙酸乙酯∶己烷)純化得到757mg無色油狀的標題產物。TLC(75∶25乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.58。
            
e).[3R-(3α，6α，9αβ)]-六氫-3-氨基-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸甲酯在室溫下用碘代三甲基甲硅烷(620μl，872mg，4.36mmol)處理步驟(d)產物(752mg，1.99mmol)的無水二氯甲烷(15ml)溶液。攪拌3小時后，混合物用水使其中止反應，用少量10%鹽酸處理，用乙醚萃取。分離各層，乙醚層用水反萃取。合并的水層用10%氫氧化鈉使之呈堿性(PH13)，并用二氯甲烷萃取兩次。將合并的二氯甲烷萃取液干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提得到290mg無色油狀的粗標題產物。TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.38。
            
f).[3R-[3α(S＊)，6α，9αβ]]-六氫-3-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸甲酯用步驟(e)產物(287mg，1.17mmol)的6ml二氯甲烷溶液處理冷的(0℃)(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(294mg，1.31mmol)和三乙胺(180μl，131mg，1.29mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液。然后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(575mg，1.30mmol)。澄清幾乎無色的溶液在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌1小時。通過旋轉蒸發除去溶劑。殘余物在乙酸乙酯和5%硫酸氫鉀間分配。有機層依次用水、50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。將殘余物用快速色譜法(Merck硅膠1∶1乙酸乙酯∶己烷)純化得到412mg白色泡沫狀的純標題產物。TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.27;[α]D＝-107.0°(c＝0.6，氯仿)。
            
g).[3R-[3α(S＊，6α，9αβ]]-六氫-3-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸用1N氫氧化鈉(5ml，通過用氬氣鼓泡去氧)處理步驟(f)產物(406mg，0.90mmol)的甲醇(5ml，通過用氬氣鼓泡去氧)的0℃溶液。攪拌1小時后，將溶液溫熱至室溫，在氬氣氛中再繼續攪拌1.25小時。混合物用5%硫酸氫鉀酸化，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。將殘余物用快速色譜法(Merck硅膠，2%乙酸的乙酸乙酯溶液)純化兩次。用HPLC測試產物級分。將所需級分合并、汽提并與乙酸乙酯共沸兩次。殘余物溶于少量乙酸乙酯中，用己烷研制。汽提溶劑，殘余物在己烷中成漿、汽提并真空干燥得到98.3mg硬的白色泡沫狀的標題產物。TLC(2%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.46;[α]D＝-57.0°(c＝0.4，氯仿)。
            
HPLCYMC S3 ODS柱(6.0×150mm);用下列試劑洗脫40%A90%水-10%甲醇-0.2%磷酸和60%B10%水-90%甲醇-0.2%磷酸;在220nm處測出的流速為1.5ml/min;tR＝8.33min(95.0%)。
            
元素分析C18H22N2O4S2·0.2乙酸乙酯計算值C，54.79;H，5.77;N，6.80;S，15.56;
            
實測值C，54.59;H，6.04;N，6.59;S，15.16。
            
實施例3[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(乙酰硫基)-1-氧代丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯用偶氮二甲酸二異丙酯(860μl，883mg，4.37mmol)處理冷的(0℃)三苯基膦(1.143g，4.36mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液。5分鐘內產生白色漿狀物。30分鐘后，加入[S-(R＊，R＊)-2-[(2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-羥基-1-氧代丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯[按實施例1(f)所述方法制備，928mg，2.19mmol]的四氫呋喃(8ml)溶液，接著加入純硫代乙酸(312μl，332mg，4.36mmol)。混合物在0℃攪拌1.25小時，然后在50%飽和碳酸氫鈉和乙酸乙酯間分配。乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。殘余物再溶于乙酸乙酯中，用少量己烷處理從而沉淀出氧化三苯膦。過濾混合物，將濾液用快速色譜法(Merck硅膠，65∶35乙酸乙酯∶己烷)純化得到894mg無色油狀的標題產物。TLC(75∶25乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.43。
            
b).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯在0℃下用甲醇鈉(25%(重量)甲醇溶液，1.05ml，4.6mmol)處理步驟(a)產物(814mg，1.65mmol)的甲醇(15ml)的去氧(用氬氣鼓泡)的溶液。5分鐘后，混合物用飽和氯化銨使其中止反應，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)，過濾并汽提。殘余物再溶于二氯甲烷(180ml)中，在室溫下與Amberlyst 15離子交換樹脂(285mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃、二氯甲烷預洗滌)一起攪拌，46小時后，將溶液過濾，汽提并用快速色譜法(Merck硅膠，1∶1乙酸乙酯∶己烷)純化得到314mg白色泡沫狀的標題產物，將泡沫狀物用乙醚研制后得到白色固體標題產物;m.p.＝147-148℃。TLC(75∶25乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.56;[α]D＝-143.2°(c＝0.6，氯仿)。
            
c).[4S-[4α(R＊，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用肼一水合物(42μl，43.3mg，0.86mmol)處理步驟(b)產物(280mg，0.72mmol)的甲醇(8ml)溶液，溶液在室溫下攪拌67小時。過濾混合物并用甲醇洗滌固體。汽提濾液，用二氯甲烷研制，再次過濾并汽提得到黃色油狀的粗胺(大約205mg)。
            
將冷的(0℃)(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(178mg，0.79mmol)和三乙胺(111μl，80mg，0.80mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液用上述胺(作為7ml二氯甲烷溶液)處理，接著用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(353mg，0.80mmol)處理，溶液在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌2小時。汽提溶劑，殘余物在乙酸乙酯和5%硫酸氫鉀間分配。有機層依次用水、50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提。將殘余物用快速色譜法(Merck硅膠，1∶1乙酸乙酯∶己烷)純化得到272mg白色泡沫狀的純標題產物。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用1N氫氧化鈉(8ml，通過用氬氣鼓泡去氧)處理室溫下的步驟(c)產物(227mg，0.49mmol)的甲醇(5ml，通過用氬氣鼓泡去氧)溶液。攪拌1小時后，混合物用10%鹽酸酸化，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮。所得固體在乙酸乙酯中成漿。并過濾收集。將濾液用快速色譜法(Merck硅膠，1%乙酸的乙酸乙酯溶液)純化，合并所需的級分，汽提并用乙酸乙酯/乙醚研制得到另外的固體。合并固體得到總量150mg的標題產物;m.p.216-217℃(分解)。TLC(2%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.56。[α]D＝-72.6°(c＝0.28，二甲基甲酰胺)。
            
HPLC YMC S3 ODS柱(6.0×150mm);用下列試劑洗脫40% A90%水-10%甲醇-0.2%磷酸和60% B10%水-90%甲醇-0.2%磷酸;在220nm處測出流速為1.5ml/min;tR＝9.48min(97.4%)。
            
元素分析C19H24N2O4S2·0.14乙酸乙酯
            
計算值C，55.82;H，6.02;N，6.66;S，15.24;
            
實測值C，55.53;H，6.01;N，6.63;S，14.91;
            
實施例4[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代-5-(苯基甲氧基)戊酸向γ-芐基-L-谷氨酸酯(17.49g，73.70mmol)的含水(180ml)碳酸鈉(7.81g，73.70mmol)和二噁烷(120ml)溶液中加入N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺(16.50g，75.27mmol，1.02eq.)，室溫下攪拌4.5小時后，反應混合物用6N鹽酸(30ml)酸化，用乙酸乙酯(2×400ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用50%鹽水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮并真空干燥得到粗油狀物(41.4g)。向粗殘余物的乙醚(100ml)溶液中加入二環己基胺(14ml)。在冷藏箱中放置過夜后，旋轉蒸發除去乙醚。經乙酸乙酯/己烷結晶油狀殘余物。過濾收集所得沉淀，用己烷洗滌并真空干燥得到21.21g標題產物的二環己基胺鹽。將此二環己基胺鹽的乙酸乙酯(200ml)懸浮液用5%硫酸氫鉀(3×50ml)、鹽水(50ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到13.5g白色泡沫狀的標題產物。
            
TLC(3%乙酸的9∶1乙酸乙酯∶庚烷溶液)Rf＝0.30。
            
b).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代-5-(苯基甲氧基)戊酸甲酯向步驟(a)產物(13.22g，36.0mmol)和碳酸銫(5.86g，18.0mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液中加入甲基碘(8.1ml，129.6mmol，3.6eq.)。將該黃色溶液攪拌2.5小時，然后在乙酸乙酯(300ml)和水(250ml)間分配。乙酸乙酯萃取液用5%碳酸氫鈉(200ml)和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到13.68g黃色油狀物。殘余物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用30%乙酸乙酯/己烷洗脫。合并所得的級分并濃縮得到10.0g標題產物。TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.45。
            
c).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(羧基)丁酸甲酯向步驟(b)產物(10.0g，26.22mmol)的乙酸乙酯(115ml)溶液中加入20%氫氧化鈀/炭催化劑(1.90g)，并將所得的懸浮液在氫氣氛(鼓泡)下攪拌2.5小時。將混合物過濾，用乙酸乙酯充分洗滌，濃縮并真空干燥得到7.29g白色固體的粗標題產物;m.p.137-138℃。TLC(10%甲醇/二氯甲烷)Rf＝0.43。
            
d).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代-5-(乙硫基)戊酸甲酯在0℃氬氣氛下向步驟(c)產物(7.27g，24.95mmol)的二氯甲烷(125ml)溶液中加入乙硫醇(4.81ml、64.92mmol，2.6eq.)、4-二甲基氨基吡啶(609mg、4.99mmol、0.2eq.)和乙基-3-(3-二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(5.27g，27.47mmol，1.1eq.)。0℃下攪拌2小時、室溫下攪拌1小時后，將反應混合物濃縮、用乙酸乙酯(400ml)稀釋、用5%硫酸氫鉀(200ml)、飽和碳酸氫鈉(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，用硫酸鈉干燥。過濾、濃縮并真空干燥得到8.30g標題產物，為粗油狀物。TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.47。
            
e).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代戊酸甲酯在氬氣氛下向步驟(d)產物(8.30g，24.75mmol)和10%鈀/炭(1.24g)的乙腈(150ml)懸浮液中用滴加入三乙基甲硅烷(7.91ml，49.5mmol，2 eq.)來處理。室溫下攪拌45分鐘后，將混合物過濾、濃縮并真空干燥，粗殘余物通過5×25cm硅膠柱進行色譜法純化，用25%乙酸乙酯/己烷(4L)洗脫，接著用35%乙酸乙酯/己烷(2L)洗脫，合并所需級分得到5.60g標題產物。
            
TLC(1∶1，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.32。
            
f).(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用原甲酸三甲酯(3.8ml，34.59mmol，1.7eq.)和對甲苯磺酸一水合物(280mg)處理步驟(e)產物(5.60g，20.34mmol)的甲醇(60ml)和二氯甲烷(40ml)溶液。室溫下攪拌1.5小時后，將反應混合物用2ml飽和碳酸氫鈉使之中止反應、濃縮并在乙酸乙酯(400ml)和水(100ml)間分配。乙酸乙酯萃取液用飽和碳酸氫鈉(100ml)、鹽水(100ml)洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾并濃縮得到粗油狀物。粗殘余物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用30%乙酸乙酯/己烷(2L)洗脫。合并所需級分，濃縮并真空干燥得到6.20g標題產物。
            
TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.40。
            
g).(S)-2-氨基-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用肼一水合物(0.98ml，20.14mmol，1.05eq.)處理步驟(f)產物(6.16g，19.18mmol)的甲醇(125ml)溶液。室溫下攪拌6天后，將所得漿狀物過濾、濃縮、與二氯甲烷研制、過濾、濃縮并真空干燥得到3.57g標題產物，為混濁的油狀物。
            
TLC(10% 甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.41。
            
h).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(三苯基甲氧基)-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯在0℃下用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻試劑(8.67g，19.60mmol，1.05eq.)處理(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(三苯基甲氧基)丁酸三乙胺鹽[按實施例1(b)所述方法制備，11.62g，19.60mmol，1.05eq.]的二氯甲烷(100ml)溶液。混合物在0℃下攪拌45分鐘，然后用步驟(g)產物(3.57g，18.67mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液處理，0℃下保持10分鐘，室溫下保持2小時后，溶液在乙酸乙酯(300ml)和水(100ml)間分配。乙酸乙酯層用50%飽和碳酸氫鈉(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物通過5×25cm硅膠柱進行色譜法純化，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫，得到8.58g標題產物。
            
TLC(1∶1，乙酸乙酯∶己烷)，Rf＝0.20。
            
i)[S-(R＊，R＊)]-2-[(2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-羥基-1-氧代丁基)氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用對甲苯磺酸一水合物(850mg)處理步驟(h)產物(8.58g，12.91mmol)的甲醇(100ml)溶液。室溫下攪拌3.5小時后，混合物在乙酸乙酯(200ml)和10%飽和碳酸氫鈉(100ml)間分配，分離各相，水層再用乙酸乙酯(100ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾并濃縮。殘余物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用8∶2乙酸乙酯∶己烷(1L)洗脫，接著用1%甲醇的乙酸乙酯溶液(2L)洗脫。合并所需級分、濃縮并真空干燥得到4.33g標題產物。
            
TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.21。
            
j).[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用Amberlyst 15離子交換樹脂(400mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃和二氯甲烷預洗滌)處理步驟(i)產物(1.89g，4.48mmol)的二氯甲烷(90ml)溶液。室溫下攪拌3小時后，將溶液過濾、濃縮并通過5×15cm硅膠柱進行快速色譜法純化，用6∶4乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到1.51g白色泡沫狀的標題產物。TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.32。
            
k).[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用肼一水合物(109μl，2.24mmol，1.05eq.)處理步驟(j)產物(764mg，2.13mmol)的甲醇(15ml)溶液，溶液在室溫下攪拌4天。將混合物過濾并用甲醇洗滌固體。濃縮濾液，用二氯甲烷研制、再次過濾并濃縮。殘余物通過2×15cm硅膠柱進行色譜法純化，用3%甲醇的二氯甲烷溶液(3L)洗脫，接著用10%甲醇的二氯甲烷溶液(1L)洗脫。合并所需的級分并濃縮，得到451mg油狀的標題產物。
            
TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.18。
            
l).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯將(S)-2-乙酰硫基-3-苯丙酸的二環己基胺鹽[按實施例1(h)所述方法制備，870mg，2.14mmol，1.14eq.]的乙酸乙酯(70ml)懸浮液用5%硫酸氫鉀(5×20ml)、50%鹽水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、濃縮并真空干燥過夜得到(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸。
            
將上述游離酸溶于無水二氯甲烷(10ml)中，冷卻至0℃(冰鹽浴，用三乙胺(298μl，2.14mmol)處理，接著用步驟(k)產物(430mg，1.88mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(947mg，2.14mmol，1.14eq.)處理。將所得溶液在0℃攪拌50分鐘，然后在室溫下攪拌3小時。濃縮反應混合物，用乙酸乙酯(150ml)稀釋，用0.5N鹽酸(50ml)、水(50ml)、飽和碳酸氫鈉(50ml)、水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾并蒸發至干。將粗產物吸附在硅藻土Celite 上，通過硅膠柱(5×10cm)進行色譜法純化，用60%乙酸乙酯/己烷(3L)洗脫。合并所需的級分并濃縮，得到779mg純標題產物。
            
TLC(6∶4乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.17。
            
m).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(1)產物(754mg，1.74mmol)的甲醇(15ml)溶液，冷卻至0℃(冰鹽浴)，然后用滴加入前面已吹洗過(氬氣，30分鐘)的1.0N氫氧化鈉(12ml)溶液來處理，同時在加入過程中以及反應過程中保持用氬氣鼓泡。反應混合物在0℃攪拌3小時，在0℃下用5%硫酸氫鉀酸化至pH1，然后用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的有機萃取液用50%鹽水(100ml)、鹽水(100ml)洗滌、干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥得到白色泡沫狀物。殘余物通過2.5×15cm硅膠柱進行色譜法純化，用乙酸乙酯(500ml)和0.3%乙酸乙酯溶液(1L)洗脫。合并所需的級分，用氯仿汽提并真空干燥過夜(于50℃，用五氧化二磷)得到白色泡沫狀的標題產物。
            
m.p.88-92℃;[α]D＝-63.8°(c＝1.0，甲醇)TLC(1%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.24。
            
1H-NMR400MHz;CDCl3δ1.80-2.31(m′S，7H)，3.10(m，1H)，3.27(m，1H)，3.63(m，1H)，4.0(m，1H)，4.20(m，1H)，4.49(m，1H)，4.75(m，1H)，5.23(m，1H)，7.19-7.30(m′s，5H)，7.52(d，1H，J＝6Hz).
            
13C-NMR 100MHz;CDCl3δ26.4，32.0，32.6，41.2，44.2，53.0，59.4，70.6，89.47，126.9，128.4，129.3，137.4，171.2，171.6，174.8.
            
元素分析C18H22N2O5S·0.85H2O計算值C，54.91;H，6.07;N，7.12;S，8.14實測值C，54.85;H，5.68;N，7.18;S，8.14。
            
HPLCtR＝13.5min(96.7%，UV220);YMCS-3 ODS(C-18)6.0×150mm;30%B∶A-100%B∶A，25分鐘線性梯度洗脫(A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸，B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸)流速為1.5ml./min。
            
實施例5[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-(乙酰硫基)-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用偶氮二甲酸二異丙酯(943μl，4.79mmol)處理0℃的三苯基膦(1.26g，4.79mmol，1.5eq.)的無水四氫呋喃(15ml)溶液。將所得白色漿狀物攪拌30分鐘，然后用[S-(R＊，R＊)]-2-[(2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-羥基-1-氧代丁基)氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯[按實施例4(i)所述制備，1.35g，3.20mmol]的無水四氫呋喃(15ml)溶液處理，接著用純硫羥乙酸(343μl，4.79mmol)處理。混合物在0℃下攪拌1.5小時，然后在乙酸乙酯(150ml)和50%碳酸氫鈉(100ml)間分配。乙酸乙酯層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾、濃縮、吸附在硅藻土Celite 上，并真空干燥。粗物質通過2.5×15cm硅膠柱進行色譜法純化，用1∶1乙酸乙酯∶己烷(1L)和6∶4乙酸乙酯∶己烷(1L)洗脫。合并所需的級分、濃縮并真空干燥，得到1.35g油狀標題產物。TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.42。
            
b).[S-(R＊，R＊)]-2-[(2-鄰苯二甲酰亞氨基-4-巰基-1-氧代丁基)氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯0℃下用甲醇鈉(25%(重量)的甲醇溶液，1.52ml，6.63mmol，2.4eq.)處理步驟(a)產物(1.33g，2.76mmol)的甲醇(25ml)的去氧(用氬氣鼓泡)溶液。3分鐘后，混合物用飽和氯化銨(3ml)使之中止反應，用水稀釋，用乙酸乙酯(100ml)萃取。乙酸乙酯萃取液用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。殘余物通過5×15cm硅膠柱進行色譜法純化，用1∶1(3L)乙酸乙酯∶己烷接著用8∶2(2L)乙酸乙酯∶己烷洗脫。將含有所需產物的級分合并并濃縮得到853mg油狀標題化合物，TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.43。
            
c).[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-鄰苯二甲酰亞氨基-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用Amberlyst 15離子交換樹脂(700mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃和二氯甲烷預洗滌)處理步驟(b)產物(847mg，1.93mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。室溫下攪拌17小時后，將溶液過濾、濃縮并通過2.5×15cm硅膠柱進行快速色譜法純化，用1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫得到691mg白色泡沫狀的標題產物。TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.48。
            
d).[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用肼一水合物(122μl，2.52mmol，1.05eq.)處理步驟(c)產物(899mg，2.40mmol)的甲醇(17ml)溶液，溶液在室溫下攪拌3天。過濾混合物并用甲醇洗滌固體。濃縮濾液，用二氯甲烷研制，再過濾、濃縮并真空干燥得到572mg混濁油狀的標題產物。TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.13。
            
e).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸的二環己基胺鹽[按實施例1(h)所述方法制備，1.045g，2.58mmol 1.1eq.]的乙酸乙酯(100ml)懸浮液用5%硫酸氫鉀(5×25ml)、50%鹽水(25ml)和鹽水(25ml洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、濃縮并真空干燥1小時，得到(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸。
            
將上述游離酸溶于無水二氯甲烷(10ml)中，冷卻至0℃(冰鹽浴)，用三乙胺(360μl，2.58mmol)、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(1.141g，2.58mmol)處理，然后用步驟(d)產物(572mg，2.34mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液處理。將所得溶液在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫上攪拌2.5小時。濃縮反應混合物，用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用0.5N鹽酸(50ml)、水(50ml)、飽和碳酸氫鈉(50ml)、水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾并蒸發至干。將粗產物吸附在硅藻土Celite 上，通過硅膠柱(5×10cm)進行色譜法純化，用25%(5L)、30%(2L)、35%(2L)和40%(2L)乙酸乙酯/己烷洗脫。合并混合的級分，再進行色譜法純化，并用同樣梯度的洗脫劑洗脫。合并所需級分并濃縮，490mg純標題產物。
            
TLC(1∶1，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.16。
            
f).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(e)產物(490mg，1.09mmol)的甲醇∶四氫呋喃(8ml∶4ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃(冰鹽浴)，然后用滴加入前面已吹洗過(氬氣、30分鐘)的1.0N氫氧化鈉溶液(10ml)來處理，同時在加入過程中以及反應過程中用氬氣鼓泡，反應混合物在0℃攪拌3小時，在0℃下用5%硫酸氫鉀酸化至pH2，然后用乙酸乙酯(3×75ml)萃取。合并的有機萃取液用鹽水(75ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥得到白色泡沫狀物(489mg)。殘余物通過2.5×15cm硅膠柱進行色譜法純化，用9∶1乙酸乙酯∶庚烷(400ml)和0.5%乙酸的9∶1乙酸乙酯∶庚烷(1L)溶液洗脫。濃縮所需級分，用二氯甲烷/庚烷汽提，并真空干燥得到428mg產物。純物質經乙酸乙酯/甲醇/己烷混合物重結晶。過濾收集晶體，用乙醚充分洗滌，40℃下用五氧化二磷真空干燥過夜，得到305mg白色晶狀的標題產物;m.p.206-208℃;[α]D＝-96.3°(c＝1.0，甲醇)。TLC(5%乙酸的9∶1乙酸乙酯∶庚烷溶液)Rf＝0.29。
            
1H-NMR 400MHz;CDCl3w/2 滴 CD3ODδ 1.94(m，1H)，2.02(d，1H，J＝9Hz)，2.08(m，1H)，2.20-2.55(m′s，4H)，2.95(m，1H)，3.08(m，1H)，3.23(m，1H)，3.27(m，1H)，3.59(m，1H)，4.54(t，1H，J＝7.3Hz)，4.60(m，1H)，5.23(m，1H)，7.18-7.34(m′s，5H)，7.63(d，1H，J＝6Hz).
            
13C-NMR100MHz;CDCl3w/2 滴 CD3ODδ27.6，31.1，32.1，32.9，41.1，44.0，52.8，60.4，62.2，126.77，128.3，129.0，137.4，170.2，171.4，172.6.
            
元素分析C18H22N2O4S2·0.08H2O計算值C，54.60;H，5.64;N，7.07;S，16.19;
            
實測值C，54.65;H，5.54;N，7.02;S，15.80。
            
HPLCtR＝13.0min(98.8%，UV220);YMCS-3 ODS(C-18)6.0×150mm;40%B∶A-100%B∶A，25分鐘線性梯度洗脫(A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸;B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸);流速為1.5ml./min。
            
實施例6[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸實施例5的產物也可按下列步驟制備
            
a).N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酸將N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺(23.57g，94.58mmol)加到L-高絲氨酸(10.24g，85.98mmol)和碳酸氫鈉(7.95g，94.58mmol，1.1eq.)在水(100ml)和丙酮(100ml)混合物中的溶液中。混合物在室溫下攪拌過夜。減壓下(旋轉蒸發)除去丙酮，水溶液用二氯甲烷(2×75ml)洗滌。然后水層通過加入6N鹽酸酸化至PH2，用乙酸乙酯(2×250ml)萃取，合并的乙酸乙酯層用水(2×100ml)和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾、濃縮并真空干燥得到19.54g白色固體的標題化合物。TLC(乙酸乙酯∶正丁醇∶乙酸∶水;2∶1∶1∶1)Rf＝0.74。
            
b).N-[(苯基甲氧基)羰基]-O-(三苯基甲基)-L-高絲氨酸向步驟(a)產物(19.51g，77.04mmol)的氯仿(250ml)懸浮液中加入三乙胺(12.35ml，88.59mmol，1.15eq.)。用三苯基甲基氯(24.70g，88.59mmol)處理該均相混合物，并將反應混合物攪拌3小時。減壓下(旋轉蒸發)濃縮反應混合物，在乙酸乙酯(400ml)和5%硫酸氫鉀(200ml)間分配。乙酸乙酯層用5%硫酸氫鉀(200ml)、水(2×200ml)和鹽水(200ml)洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮得到45.4g物質。將殘余物通過10×30cm硅膠柱進行色譜法純化，用6∶4乙酸乙酯∶己烷(2L)洗脫，接著用1%乙酸的8∶2乙酸乙酯∶己烷溶液洗脫，得到8.76g純標題化合物。
            
c).(S)-2-氨基-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用肼一水合物(531μl，10.95mmol，1.05eq.)處理(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-5，5-二甲氧基戊酸甲酯[按實施例4(f)所述方法制備，3.35g，10.43mmol)的甲醇(70ml)溶液，溶液在室溫下攪拌6天，過濾混合物，用甲醇洗滌固體。濃縮濾液，用二氯甲烷研制，再過濾，濃縮并真空干燥得到1.89g混濁油狀的標題產物。
            
TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.39。
            
d).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-(三苯基甲氧基)-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯將步驟(b)產物(5.28g，10.65mmol，1.1eq.)的無水二氯甲烷(50ml)溶液在0℃下用三乙胺(1.48ml，10.65mmol)處理，接著用步驟(c)產物(1.85g，9.68mmol)的無水二氯甲烷(30ml)溶液和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(4.71g，10.65mmol，1.1eq.)處理。混合物在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌2小時，反應混合物在乙酸乙酯(300ml)和水(150ml)間分配。乙酸乙酯層用50%飽和碳酸氫鈉(200ml)和鹽水(2×200ml)洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾、濃縮、吸附在硅藻土Celite 上，用7×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用40%乙酸乙酯/己烷(3L)洗脫，接著用50%(2L)乙酸乙酯/己烷洗脫，得到4.84g標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.22。
            
e).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-羥基-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用對甲苯磺酸-水合物(300mg)處理步驟(d)產物(4.80g，7.18mmol)的甲醇(70ml)溶液。室溫下攪拌2小時后，混合物在乙酸乙酯(400ml)和25%飽和碳酸氫鈉(200ml)間分配。分離各相，水層再用乙酸乙酯(100ml)萃取，合并的乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾并濃縮。殘余物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用7∶3(1L)、8∶2(1L)乙酸乙酯∶己烷洗脫，接著用10%甲醇的乙酸乙酯(2L)溶液洗脫。合并所需級分、濃縮并真空干燥得到2.92g標題產物。
            
TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)Rf＝0.09。
            
f).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-(乙酰硫基)-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯用偶氮二甲酸二異丙酯(2.29ml，11.65mmol)處理0℃的三苯基膦(3.06g，11.65mmol，1.7eq.)的無水四氫呋喃(40ml)溶液。將所得白色漿狀物攪拌30分鐘，然后用步驟(e)產物(2.92g，6.85mmol)的無水四氫呋喃溶液處理，接著用純硫羥乙酸(833μl，11.65mmol)處理。混合物在0℃下攪拌2小時，然后在乙酸乙酯(300ml)和50%碳酸氫鈉(200ml)間分配。乙酸乙酯層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥、過濾、濃縮、吸附在硅藻土Celite 上，真空干燥。粗產物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用1∶1乙酸乙酯∶己烷(3L)洗脫。合并所需的級分、濃縮并真空干燥，得到2.58g灰白色固體的標題產物。
            
TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)Rf＝0.40。
            
g).[S-(R＊，R＊)]-2-[[2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-巰基-1-氧代丁基]氨基]-5，5-二甲氧基戊酸甲酯0℃下用甲醇鈉(25%(重量)的甲醇溶液，3.62ml，15.84mmol，3eq.)處理步驟(f)產物(2.56g，5.28mmol)的甲醇(50ml)的去氧(用氬氣鼓泡)溶液。10分鐘后，混合物用飽和氯化銨(40ml)使其中止反應，用水(100ml)稀釋，并用乙酸乙酯(300ml)萃取，乙酸乙酯萃取液用水(100ml)和鹽水(150ml)洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。殘余物通過5×20cm硅膠柱進行色譜法純化，用1∶1(3L)乙酸乙酯∶己烷洗脫。合并所需的化合物并濃縮得到1.99g油狀標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)Rf＝0.43。
            
h).[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用Amberlyst 15離子交換樹脂(620mg，依次用6N鹽酸、水、四氫呋喃和二氯甲烷預洗滌)處理步驟(g)產物(2.16g，4.88mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液。室溫下攪拌3小時后，將溶液過濾、濃縮并通過5×20cm硅膠柱進行快速色譜法純化。用6∶4乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到1.34g白色泡沫狀的標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)Rf＝0.51。
            
i).[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用碘代三甲基甲硅烷(632μl，4.44mmol，1.4eq.)處理步驟(h)產物[1.20g，3.17mmol，用甲苯汽提三次，并真空干燥過夜]的無水二氯甲烷(40ml)溶液，并在室溫氬氣氛下攪拌1.5小時。混合物用水(50ml)使之中止反應，用10%鹽酸(5ml，PH1)處理，用乙酸乙酯(50ml)洗滌，水相用10%氫氧化鈉處理，用二氯甲烷萃取(三次)，用硫酸鈉干燥合并的萃取液、過濾、濃縮并真空干燥得到396mg澄清油狀的標題產物。TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.10。
            
j).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用三乙胺處理(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸的無水二氯甲烷溶液。然后加入步驟(i)產物的二氯甲烷溶液，接著加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻。按實施例5(e)所述方法處理所得溶液，得到[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯。
            
用氬氣吹洗上述甲酯產物的甲醇∶四氫呋喃的懸浮液，并冷卻至0℃，然后用已吹洗過的1.0N氫氧化鈉溶液處理。按實施例5(f)所述方法處理得到標題產物。
            
實施例7[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(3-環己基-2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽用碘代三甲基甲硅烷(389μl，2.73mmol，1.4eq.)處理[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯[按實施例6(h)所述方法制備，738mg，1.95mmol，用甲苯汽提三次，并真空干燥過夜]的無水二氯甲烷(25ml)溶液，并在室溫氬氣氛下攪拌。2小時后，反應混合物用附加量的碘代三甲基甲硅烷(40μl)處理并攪拌30分鐘。混合物用甲醇∶二噁烷(9∶1;9.7ml)的0.4M鹽酸溶液使其中止反應，并攪拌5分鐘。真空(旋轉蒸發)除去揮發物。殘余物在水和乙酸乙酯間分配。分離出的乙酸乙酯層用水洗滌，合并的水相用乙酸乙酯洗滌。將水相冷卻至0℃，用1.0N氫氧化鈉調節pH至10.3(用pH計測定)。用二氯甲烷萃取水相(三次)，然后水相用鹽飽和并再用二氯甲烷萃取(三次)，將合并的萃取液用硫酸鈉干燥、過濾、濃縮并真空干燥得到4.55mg澄清油狀的游離胺。
            
TLC(10%甲醇的二氯甲烷溶液)Rf＝0.28。
            
將上述游離胺溶于乙酸乙酯(5ml)中，用對甲苯磺酸一水合物(354mg，1eq.)的乙酸乙酯(1ml)溶液處理。馬上生成白色晶體。將晶體貯存在冷藏箱(5℃)中30分鐘，然后過濾收集，用乙醚充分洗滌，真空干燥過夜，得到639mg白色固體的標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)-3-環己基丙酸二環己胺鹽用氮氣吹洗500ml Parr氫化燒瓶中的D-苯基丙氨酸(5.20g，31.5mmol)的2M鹽酸(75ml)溶液，并用氧化鉑(640mg，2.82mmol)處理，氫化是在密封的燒瓶中于P0＝42.4psi下開始進行的，若必要可再加氣體。在6小時內總的氫氣吸收達到83.4psi(理論值為83.8psi)。反應混合物用氮氣吹洗，用硅藻土Celite 過濾，用熱水洗滌濾餅。濃縮濾液至大約40ml，在5℃下貯存過夜。收集所得的固體，用少量冷水洗滌并真空干燥(60℃)得到5.46g(R)-2-氨基-3-環己基丙酸鹽酸鹽。
            
在室溫下向攪拌著的上述鹽酸鹽(2.81g，13.5mmol)的2.5N硫酸(32ml)溶液中加入溴化鉀(10.0g，84mmol)。將反應混合物冷卻至-4℃，在1小時內分批加入固體亞硝酸鈉(1.75g，25.4mmol)，同時保持溫度低于0℃。反應開始起泡并形成油狀物。加完后，將反應混合物攪拌1小時，然后溫熱至室溫，再攪拌1小時，然后用乙醚萃取反應混合物兩次。將萃取液干燥(硫酸鎂)、過濾并蒸發得到2.3g無色油狀的(R)-2-溴-3-環己基丙酸。
            
在10分鐘內在0℃氬氣氛下向攪拌著的硫代乙酸鉀(1.07g，9.36mmol)的無水乙腈(15ml)漿狀液中加入(R)-2-溴-3-環己基丙酸(2.20g，9.36mmol)的乙腈(3ml)溶液。將反應溫熱至室溫并攪拌16小時，過濾所得的漿狀液并蒸發。殘余物再溶于乙酸乙酯中，用5%硫酸氫鉀溶液洗滌一次、干燥(硫酸鈉)并蒸發。將黃色油狀殘余物(2.21g)溶于乙醚中，用二環己基胺(1.8ml，9.0mmol)的5ml乙醚溶液處理。用玻璃棒擦刮燒瓶表面得到2.38g白色晶狀的標題產物;m.p.159-161℃，[α]D＝-41.2°(c＝1.0，氯仿)。
            
元素分析C23H41NSO3計算值C，67.11;H，10.04;N，3.40;S，7.79;
            
實測值C，66.95;H，10.12;N，3.25;S，7.89。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-3-環己基-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將化合物(S)-2-(乙酰硫基)-3-環己基丙酸二環己基胺鹽(285mg，0.69mmol，1.05eq.)的乙酸乙酯(15ml)懸浮液用5%硫酸氫鉀(3×10ml)、50%鹽水(10ml)和鹽水(10ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾、濃縮、用二氯甲烷汽提(兩次)并真空干燥1小時，得到油狀的(S)-2-(乙酰硫基)-3-環己基丙酸。
            
將上述游離酸溶于無水二氯甲烷(5ml)中，冷卻至0℃(冰浴)，用三乙胺(96μl，0.69mmol，1.05eq.)處理，然后用步驟(a)產物(275mg，0.66mmol)、三乙胺(92μl，0.66mmol)處理，最后用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(305mg，0.69mmol)處理。所得溶液在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌2小時。濃縮反應混合物，用乙酸乙酯稀釋，用5%硫酸氫鉀(20ml)、50%飽和碳酸氫鈉(20ml)、鹽水(20ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾并蒸發至干。粗產物吸附在硅藻土Celite 上，用硅膠柱(2.5×10cm)進行色譜法純化，用40%(1L)乙酸乙酯/己烷洗脫。合并所需級分并濃縮，得到246mg純標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)，Rf＝0.53。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(3-環己基-2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(c)產物(245mg，0.54mmol)的甲醇(6ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃，接著滴加入已吹洗過(氬氣，30分鐘)的1.0N氫氧化鈉溶液(5ml)進行處理，同時在加入和反應過程中保持用氬氣鼓泡。反應混合物在0℃攪拌2小時，在0℃用5%硫酸氫鉀酸化至pH2，然后用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并的有機萃取液用50%鹽水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾并蒸發至干。殘余物通過2.5×10cm硅膠柱進行色譜法純化，用7∶3乙酸乙酯∶庚烷(300ml)和1%乙酸的7∶3乙酸乙酯∶庚烷(500ml)溶液洗脫。濃縮所需級分，用二氯甲烷汽提，真空干燥得到172mg白色泡沫狀的標題產物;[α]D＝-116.9°(c＝0.5，甲醇)，TLC(1%乙酸的乙酸乙酯溶液)Rf＝0.35。
            
1H-NMR 400MHz;CDCl3δ0.91(m，2H)，1.22(m，3H)，1.44(m，1H)，1.55(m，1H)，1.68(m′s，5H)，1.83(m，1H)，1.97(m′s，2H)，2.12(m，1H)，2.19-2.40(m′s，3H)，2.53(m，1H)，2.96(m，1H)，3.38(m′s，2H)，4.62(t，1H，J＝6.8Hz)，4.70(m，1H)，5.25(m，1H)，7.55(d，1H，J＝6.4Hz).
            
13C-NMR100MHz;CDCl3δ26.0，26.1，27.5，31.5，32.3，33.0，33.3，35.2，40.7，43.0，52.9，60.6，62.5，170.9，172.7，175.3.
            
元素分析C18H28N2O4S2計算值C，53.98;H，7.05;N，6.99;S，16.01;
            
實測值C，53.97;H，7.18;N，6.84;S，15.75。
            
HPLCtR＝16min(＞99%，UV217);YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;50%B∶A-100%B∶A，25分鐘線性梯度洗脫(A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸;B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸);流速為1.5ml/min。
            
實施例8[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代己基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-2-溴已酸室溫下將溴化鉀(15.9g，133mmol)加到攪拌著的D-正亮氨酸(5.0g，38mmol)的2.5N硫酸(77ml)溶液中。反應混合物冷卻至-10℃，分批加入固體亞硝酸鈉(3.94g，57mmol)，同時保持溫度在-10°至-5℃之間。加完后，將泡沫狀反應混合物攪拌1小時，然后溫熱至室溫，再攪拌1小時。然后用乙醚萃取反應混合物兩次，乙醚萃取液用水洗滌一次、干燥(硫酸鎂)、過濾并蒸發得到3.3g粗標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)已酸二環已基胺鹽在室溫氬氣氛下向攪拌著的硫代乙酸鉀(2.11g，18.5mmol)的50ml無水乙腈漿狀液中加入步驟(a)產物(3.27g，16.8mmol)的26ml乙腈溶液。將反應混合物攪拌5小時。過濾所得漿狀液并蒸發。殘余物再溶于乙醚中，用5%硫酸氫鉀溶液洗滌一次，再用鹽水洗滌一次、干燥(硫酸鎂)并蒸發。殘余物溶于乙醚(64ml)中，用二環己基胺(3.4ml，16.8mmol)處理。真空濃縮乙醚溶液，用己烷研制得到的白色固體。經乙醚/己烷重結晶得到標題產物。濃縮母液并重結晶兩次得到總產量為2.2g的標題產物;m.p.145-147℃;[α]D＝-33.8°(c＝1.08，氯仿)。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代己基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(b)產物的二環己基胺鹽(255mg，0.69mmol，1.05eq.)的乙酸乙酯(15ml)懸浮液用5%硫酸氫鉀(3×5ml)和鹽水(10ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾、濃縮，用二氯甲烷汽提(兩次)并真空干燥1小時得到油狀的游離酸。
            
將上述油狀物溶于無水二氯甲烷(6ml)中，冷卻至0℃(冰浴)，用三乙胺(96μl，0.69mmol，1.05eq.)處理，然后用[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[按實施例7(a)所述方法制備，275mg，0.66mmol)、三乙胺(92μl，0.66mmol)處理，最后用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(305mg，0.69mmol)處理。所得溶液在0℃攪拌1小時，然后在室溫下攪拌2小時。濃縮反應混合物，用乙酸乙酯稀釋，用5%硫酸氫鉀(20ml)、50%飽和碳酸氫鈉(20ml)、鹽水(20ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾并蒸發至干。粗產物吸附在硅藻土Celite 上，通過硅膠柱(2.5×10cm)進行色譜法純化，用40%(1L)乙酸乙酯/己烷洗脫，合并所需級分并濃縮，得到258mg純標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，8∶2)Rf＝0.54。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代己基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(c)產物(255mg，0.54mmol)的甲醇(5ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃，接著滴加入已吹洗過(氬氣，30分鐘)的1.0N氫氧化鈉溶液(5ml)進行處理，同時在加入和反應過程中保持用氬氣鼓泡。反應混合物在0℃攪拌2小時，在0℃用5%硫酸氫鉀酸化至pH2，然后用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并的有機萃取液用50%鹽水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾并蒸發至干。殘余物通過2.5×10cm硅膠柱進行色譜法純化，用7∶3乙酸乙酯∶庚烷(300ml)和1%乙酸的7∶3乙酸乙酯∶庚烷(500ml)溶液洗脫。濃縮所需級分，用二氯甲烷汽提，真空干燥得到170mg白色泡沫狀的標題產物;[α]D＝-135.1°(c＝0.5，甲醇)，TLC(1%乙酸的乙酸乙酯溶液)，Rf＝0.32。
            
1H-NMR 400MHz;CDCl3δ0.89(t，3H，J＝7Hz)，1.32(m，4H)，1.73(m，1H)，1.96(m，2H)，2.00(d，1H，J＝8.6Hz)，2.11(m，1H)，2.32(m′s，3H)，2.52(m，1H)，2.98(m，1H)，3.32(m′s，2H)，4.61(t，1H，J＝7.1Hz)，4.72(m，1H)，5.25(m，1H)，7.63(d，1H，J＝6.4Hz)，13C-NMR100MHz;CDCl3δ13.8，22.2，27.6，29.2，31.4，32.6，33.1，35.3，43.0，52.8，60.5，62.42，170.7，172.5，174.0.
            
元素分析C15H24O4N4S2O·0.08H2O計算值C，49.79;H，6.73;N，7.74;S，17.72;
            
實測值C，49.90;H，6.92;N，7.63;S，17.57。
            
HPLCtR＝9.4min(＞99%，UV220);YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;50%B∶A-100%B∶A，25分鐘線性梯度洗脫(A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸;B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸);流速為1.5ml/min。
            
實施例9[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-4-甲基戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-2-溴-4-甲基戊酸室溫下將溴化鉀(9.5g，80mmol)加到攪拌著的D-亮氨酸(3.0g，23mmol)的2.5N硫酸(47ml)溶液中。將反應混合物冷卻至-10℃，分批加入固體亞硝酸鈉(2.4g，34mmol)，同時保持溫度在-10°至-5℃之間。加完后，將反應混合物攪拌1小時，然后溫熱至室溫，再攪拌1小時。然后用乙醚萃取反應混合物兩次，乙醚萃取液用水洗滌一次、干燥(硫酸鎂)、過濾并蒸發得到2.7g粗標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)-4-甲基戊酸二環己基胺鹽在室溫氬氣氛下向攪拌著的硫代乙酸鉀(1.7g，15.0mmol)的50ml無水乙腈漿狀液中加入步驟(a)產物(2.6g，13mmol)的17ml乙腈溶液。將反應混合物攪拌4小時。過濾所得漿狀液并蒸發。殘余物再溶于乙醚中，用5%硫酸氫鉀溶液洗滌一次，再用鹽水洗滌一次、干燥(硫酸鎂)并蒸發。殘余物溶于乙醚(64ml)中，用二環己基胺(2.7ml、14mmol)處理。從溶液中馬上沉淀出白色固體。過濾溶液，收集白色固體，得到2.0g標題產物;m.p.153-158℃;[α]D＝-54.5℃，(c＝0.61，氯仿)。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-4-甲基戊基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用5%硫酸氫鉀水溶液(3×5ml)洗滌攪拌著的步驟(b)的二環己基胺鹽產物(234mg，0.63mmol)的乙酸乙酯(15ml)懸浮液。干燥有機萃取液(無水硫酸鎂)、過濾并經己烷中蒸發兩次。將所得油狀物溶于二氯甲烷(6ml)中，并在0℃氮氣氛下攪拌。向此溶液中加入三乙胺(88μl，0.63mmol)，然后加入[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[按實施例7(a)所述方法制備，249mg，0.6mmol]、額外量的三乙胺(84μl，0.60mmol)，10分鐘后，加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(279mg，0.63mmol)。1小時后，將反應混合物溫熱至室溫并攪拌2小時。在低于30℃下蒸發所得的無色溶液，將油狀殘余物再溶于乙酸乙酯中，溶液用5%硫酸氫鉀溶液洗滌一次，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次，用鹽水洗滌一次。將有機層干燥(硫酸鎂)、過濾并蒸發到5g硅膠上。用快速色譜法(2.5×15cm柱，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到203mg白色固體的標題產物;m.p.101-103℃，[α]D＝-157.5°(c＝1.04，氯仿)，TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.19。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-4-甲基戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氮氣吹洗步驟(c)產物(184mg、0.44mmol)的5ml甲醇溶液并冷卻至0℃。向該溶液中滴加入5ml氮氣吹洗過的1M氫氧化鈉。在反應過程中用氮氣向溶液中緩慢鼓泡。2小時后，反應混合物用2ml 6M鹽酸酸化，用乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液、干燥(硫酸鎂)并蒸發。經己烷中再蒸發，用甲醇/水研制殘余物，得到晶狀固體的標題產物132mg，m.p.94-96℃;[α]D＝-158.6°(c＝0.42，甲醇)，TLC(乙酸乙酯∶己烷∶乙酸，4∶4∶0.1)Rf＝0.13。
            
元素分析C15H24N2S2O4·0.75H2O計算值C，48.17;H，6.87;N，7.49;S，17.15;
            
實測值C，48.33;H，6.51;N，7.37;S，16.82。
            
HPLCRt＝17.6min(99.2%)YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;0%至100%B∶A，25min線性梯度洗脫和保持15min，1.5ml/min;
            
A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸;
            
B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸;
            
220nm。
            
實施例10[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸a).2，2，2-三氯亞氨酸2-丙烯基酯向80%氫化鈉(945mg，31.5mmol;用25ml己烷洗滌兩次)的無水乙醚(30ml)懸浮液中滴加入2-丙烯-1-醇(21.4ml，18.3g，315mmol)的無水乙醚(45ml)溶液來處理，室溫下氬氣氛下攪拌20分鐘，然后冷卻至0℃(冰鹽浴)，在15分鐘內加入三氟乙腈(30ml或42.3g，0.30mol)，并將棕色溶液在0℃攪拌40分鐘，在10℃攪拌10分鐘，并在室溫下攪拌10分鐘。濃縮反應混合物至漿狀物，用甲醇(1.2ml)的戊烷(30ml)溶液處理，劇烈攪拌5.0分鐘。過濾淺棕色沉淀，用戊烷(2×30ml)洗滌，合并的濾液濃縮得到淺棕色液體。將液體再溶于戊烷(30ml)中，攪拌幾分鐘，過濾所得懸浮液，所得沉淀用戊烷(30ml)洗滌，重復該步驟至少一次以上。濃縮澄清濾液并真空干燥得到54.0g標題化合物，為淺紅色液體，該產物以在己烷中的溶液形式在10℃貯存。
            
b).N-鄰苯二甲酰基-L-絲氨酸甲酯用二噁烷(250ml)稀釋L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽(25g，161mmol)的水(350ml)懸浮液。用固體碳酸鈉(17g，1.0eq.)處理所得的澄清溶液，接著用N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺(37g，1.05eq.)處理。反應混合物在室溫氬氣氛下攪拌2.5小時。用乙酸乙酯(3×500ml)萃取混合物，合并的有機萃取液依次用5%碳酸氫鈉(250ml)、5%硫酸氫鉀(250ml)和鹽水(250ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥。產物混合物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶3;1∶2)洗柱，合并所需級分，蒸發至干，真空干燥，得到31g稠漿狀的標題化合物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)，Rf＝0.52。
            
c).N-鄰苯二甲酰基-O-(2-丙烯基)-L-絲氨酸甲酯將步驟(b)產物(7.37g，29.5mmol)的無水二氯甲烷(30ml)溶液用步驟(a)產物(11.97g，59.1mmol，2eq.)的環己烷(60ml)溶液處理，接著用三氟甲磺酸(0.37ml)處理。反應混合物在室溫氬氣氛下攪拌20小時。過濾沉淀，用最小量二氯甲烷洗滌，合并的濾液用5%碳酸氫鈉(30ml)和水(30ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾、蒸發至干，并真空干燥。粗產物混合物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶9)洗柱。合并所需級分，蒸發至干，真空干燥得到7.56g透明稠漿狀的標題化合物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.70。
            
d).N-鄰苯二甲酰基-O-(乙醛)-L-絲氨酸甲酯將步驟(c)產物(2.5g，8.64mmol)在無水二氯甲烷(46.4ml)和甲醇(4.6ml)混合物中的溶液冷卻至-78℃(干冰-丙酮浴)，用溴氧處理，直到出現持續的藍色(大約15分鐘)。然后用氮氣吹洗混合物10分鐘(直至藍色消失)，用二甲硫(14.0ml，0.19mol，22.1eq.)處理，溫熱至室溫，在氮氣氛下攪拌2.5小時。將反應混合物蒸發至干并將殘余的漿狀物溶于乙酸乙酯(50ml)中，用水(15ml)和鹽水(15ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾、蒸發至干，并真空干燥。
            
將粗產物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶9，1∶4，1∶2)洗柱，得到1.54g標題產物，TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.33。
            
e).N-鄰苯二甲酰基-O-(2，2-二甲氧基乙基)-L-絲氨酸甲酯用原甲酸三甲酯(0.84ml，7.68mmol，1.45eq.)和對甲苯磺酸一水合物(92mg)處理步驟(d)產物(1.54g，5.29mmol)在無水二氯甲烷(8.3ml)和無水甲醇(8.3ml)混合物中的溶液。反應混合物在室溫氬氣氛下攪拌2.5小時，然后在乙酸乙酯(50ml)和飽和碳酸氫鈉(15ml)間分配。將有機相用水(15ml)和鹽水(15ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾、蒸發至干并真空干燥。粗產物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶4)洗柱，得到1.35g透明的稠漿狀標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.58。
            
f).O-(2，2-二甲氧基乙基)-L-絲氨酸甲酯用水合肼(0.30ml，6.1mmol)處理步驟(e)產物(2.0g，5.93mmol)的無水甲醇(14ml)溶液并在室溫氬氣氛下攪拌4天。將所得懸浮液過濾、用甲醇(2×14ml)洗滌沉淀，將濃縮濾液至干。將漿狀物再溶于二氯甲烷中，過濾兩次以上，直至沒有沉淀，濃縮澄清濾液至得到1.17g標題產物，為淺黃色漿狀物，TLC(二氯甲烷∶甲醇，9∶1)Rf＝0.54。
            
g).N-[(苯基甲氧基)羰基]-O-[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-L-高絲氨酸用[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基氯(10.72g，71.1mmol)和咪唑(9.65g，0.14mol)處理N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酸[按實施例6(a)所述方法制備，3.0g，11.85mmol]的無水二甲基甲酰胺(65ml)溶液并在室溫氬氣氛下攪拌24小時。用甲醇(207ml)稀釋反應混合物，在室溫下再攪拌24小時，然后濃縮至漿狀物，將殘余的漿狀物溶于乙酸乙酯(200ml)中，用10%檸檬酸(2×75ml)和鹽水洗滌、干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥。將粗產物混合物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗柱，然后用乙酸乙酯∶乙酸(99.5∶0.5)洗柱，合并所需級分，濃縮并用甲苯蒸發幾次得到3.56g蠟狀固體的標題化合物。TLC(乙酸乙酯∶乙酸，95∶5)Rf＝0.82。
            
h).N-[O-[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酰基]-O-(2，2-二甲氧基乙基)-L-絲氨酸甲酯將步驟(g)產物(2.18g，5.93mmol)的無水二氯甲烷溶液冷卻至0℃(冰鹽浴)，依次用步驟(f)產物(1.71g，5.65mmol)的無水二氯甲烷(5ml)溶液、三乙胺(0.78ml，5.65mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(2.63g，6.0mmol)處理。反應混合物在0℃攪拌30分鐘，在室溫下攪拌1小時45分鐘。反應混合物在乙酸乙酯(2×100ml)和水(30ml)間分配，合并的有機萃取液用50%飽和碳酸氫鈉(20ml)和鹽水(25ml)洗滌、干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并且真空干燥。將粗產物混合物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶4;1∶3;1∶1)洗柱得到2.38g標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)，Rf＝0.40。
            
i).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用Amberlyst 15離子交換樹脂(酸形式)和甲醇(0.1ml)處理步驟(h)產物(1.0g，1.8mmol)的無水二氯甲烷(50ml)溶液，將所得混合物在室溫氬氣氛下攪拌3天。過濾樹脂，用少量二氯甲烷洗滌并將濾液濃縮至漿狀物。粗產物混合物通過硅膠柱進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗柱，得到339mg標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，3∶1)，Rf＝0.53。
            
j).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯用10%鈀/炭催化劑(125mg)處理按步驟(i)所述方法制備的產物(771mg，2.04mmol)的無水甲醇(25ml)溶液，并在室溫下氫化(氣球)16小時。用硅藻土Celite 墊過濾反應混合物，濾墊用甲醇(2×25ml)洗滌。將澄清濾液蒸發至干并真空干燥得到448mg漿狀標題產物。
            
TLC(二氯甲烷∶甲醇，9∶1)，Rf＝0.22。
            
k).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸甲酯將(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸的二環己基胺鹽(813mg，2.01mmol)懸浮于乙酸乙酯(70ml)中，用5%硫酸氫鉀(5×9.3ml)和鹽水(9.3ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)，過濾、蒸發至干并真空干燥。
            
將上述游離酸溶于無水二氯甲烷(12ml)中，冷卻至0℃(冰鹽浴)，依次用步驟(j)產物(448mg，1.84mmol)的無水二氯甲烷(4.0ml)溶液、三乙胺(0.25ml，1.80mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(823mg，1.86mmol)處理。將反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫氬氣氛下攪拌2小時。將反應混合物汽提至干，并將所得的漿狀物再溶于乙酸乙酯(60ml)中，用0.5N鹽酸(2×11ml)、水(11ml)和鹽水(11ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥。將粗產物混合物通過硅膠柱(Merck)用色譜法純化兩次，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶1，1∶2)洗脫各柱，得到665mg漿狀標題產物。
            
TLC(乙酸乙酯∶己烷，3∶1)Rf＝0.30。
            
l).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(k)產物(650mg，1.44mmol)的甲醇(13ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃(冰鹽浴)，然后滴加入1.0N氫氧化鈉溶液(5.84ml，已用氬氣吹洗30分鐘)進行處理，同時在加入和反應過程中保持用氬氣鼓泡。反應混合物在0℃攪拌5.0小時，在0℃用5%硫酸氫鉀(25.4ml)使其中止反應。將混合物溫熱至室溫，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，合并的有機萃取液用鹽水(15ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾、蒸發至干并真空干燥，用己烷∶二氯甲烷(130∶7)研制粗產物，所得固體通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶2;1∶1)洗柱，接著用二氯甲烷∶甲醇∶乙酸(100∶4∶0.2)洗柱。合并所需級分。蒸發至干，用甲苯蒸發幾次，真空干燥9.0小時后得到364mg標題產物，然后所得產物用二氯甲烷∶己烷(1∶10)、己烷(50ml)和戊烷(2×50ml)研制，首先與50ml戊烷攪拌4小時，然后與50ml戊烷在氬氣氛下攪拌過夜。潷析溶劑，真空干燥固體6.0小時，得到純標題產物，為固體非晶體泡沫狀物;[α]D＝-49.1°(c＝0.48，甲醇)，TLC(甲苯∶乙酸，5∶1)Rf＝0.17。
            
元素分析C18H22N2O6S·0.56H2O計算值C，53.45;H，5.76;N，6.93;S，7.92;
            
實測值C，53.45;H，5.53;N，6.75;S，7.48。
            
HPLCRt＝10.45min.;(98.3%);YMS S-3 ODS(C＝18)6.0×150mm;44%(10%水-90%甲醇-0.2%磷酸)/56%(90%水-10%甲醇-0.2%磷酸)，等效洗脫;1.5ml/min。
            
實施例11[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸實施例3的產物也可按下列步驟制備a).N-[(苯基甲氧基)羰基]-O-[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-L-高絲氨酸將[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氯(37.5g，249mmol)加到N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酸[按實施例6(a)所述方法制備，41.56mmol]的二甲基甲酰胺(125ml)溶液中，接著加入咪唑(33.95g，498mmol)。所得淺黃色溶液在室溫下攪拌22小時。加入甲醇(500ml)，將反應混合物再攪拌6小時，然后真空除去甲醇和大部分二甲基甲酰胺。剩余的殘余物溶于乙酸乙酯(800ml)中，用10%檸檬酸(2×300ml)洗滌，合并的水相用乙酸乙酯(300ml)萃取。合并的乙酸乙酯相用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)、濃縮、殘余物用己烷蒸發形成白色粉末。將該粉末真空干燥得到12.942g標題產物。
            
b).[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯向在0℃下冷卻的步驟(a)產物(22.78g，61.97mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入N-甲基嗎啉(6.81ml，61.97mmol)，接著加入羥基苯并三唑(8.37g，61.97mmol)、(S)-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸甲酯[按實施例1(e)所述方法制備，10.6g，51.64mmol]的二氯甲烷(50ml)溶液，然后加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(11.88g，61.97mmol)。反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌過夜。真空濃縮反應混合物，殘余物用乙酸乙酯(600ml)稀釋，用5%硫酸氫鉀(200ml)、0.5N氫氧化鈉(200ml)、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)。濃縮濾液并將殘余物溶于乙醚(150ml)中。過濾所得的懸浮液，收集的固體用乙醚充分洗滌。真空濃縮濾液至干得到30g粗標題產物，為油狀化合物，其無需純化則可用于下面反應。
            
TLC(8∶2乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.55。
            
c).[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-羥基-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯向在0℃冷卻的步驟(b)產物(30g)的甲醇(150ml)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(1.96g)。將反應混合物在0℃攪拌2小時，然后用碳酸氫鈉水溶液(1.3g碳酸氫鈉在100ml水中的溶液)使反應中止，真空濃縮混合物，并將殘余物在乙酸乙酯(400ml)和水(150ml)間分配。分離出的水相用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。合并的乙酸乙酯層用10%碳酸氫鈉、鹽水(2次)洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發至干。殘余物通過10×25cm硅膠柱進行快速色譜法純化，用80%乙酸乙酯的己烷(5L)溶液、乙酸乙酯(3L)和2%甲醇的乙酸乙酯(5L)溶液洗脫。合并所需的級分并濃縮，真空干燥得到17.45g標題產物，為淺黃色油狀物。TLC(8∶2，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.17。
            
d).[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-[(甲磺酰基)氧基]-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯向在-15℃冷卻(冰/丙酮)的步驟(c)產物(17.40g，39.50mmol)(用甲苯汽提三次，真空干燥過夜)的無水二氯甲烷(250ml)溶液中加入三乙胺(8.26ml，59.28mmol)，新蒸餾過的)，接著滴加入甲磺酰氯(3.67ml，47.4mmol)。反應混合物在-15℃攪拌30分鐘，然后用飽和氯化銨溶液(100ml)中止反應。攪拌5分鐘后，混合物用乙酸乙酯(600ml)稀釋，用5%硫酸氫鉀、鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發至干。真空干燥殘余物得到20.40g黃色油狀的標題化合物，其無需純化則可用于下面反應。TLC(8∶2，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.35。
            
e).[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-(乙酰硫基)-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯向硫代乙酸(5.09ml，71.10mmol)的甲醇(100ml)溶液中加入碳酸銫(10.81g，33.18mmol)。將所得溶液真空濃縮。用無水丙酮研制固體(3次)，然后用五氧化二磷真空干燥過夜得到硫代乙酸銫。
            
通過套管將步驟(d)產物(20.40g，39.50mmol)的無水二甲基甲酰胺(150ml)溶液加到硫代乙酸銫(10.576g，50.85mmol)的二甲基甲酰胺(50ml)懸浮液中。所得黃色溶液在氬氣氛室溫下攪拌過夜，然后高真空濃縮除去大部分二甲基甲酰胺，殘余物溶于乙酸乙酯(1L)中，用10%碳酸氫鈉(200ml)、水(4×200ml)、鹽水(400ml)洗滌并干燥(硫酸鈉)。濃縮濾液，殘余物用甲苯蒸發(3次)，然后真空干燥得到20g標題化合物，為淺黃色固體，其無需純化則可用于下面反應。TLC(8∶2，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.47。
            
f).[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-巰基-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯用氬氣吹洗在0℃冷卻的步驟(e)產物(20g，39.50mmol)的甲醇(250ml)溶液15分鐘。在連續用氬氣吹洗的條件下，滴加入在甲醇(9.17ml，40mmol)中的25%(重量/重量，密度＝0.945)甲醇鈉溶液。攪拌5分鐘后，反應混合物用飽和氯化銨溶液(200ml)使之中止反應，混合物在乙酸乙酯(1L)和水(200ml)間分配。水相用乙酸乙酯(200ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用飽和氯化銨溶液(400ml)、鹽水(400ml)洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮得到17.5g標題產物，為黃色油狀物。其無需純化則可用于下面反應。TLC(8∶2，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.45。
            
g).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯向步驟(f)產物(17.5g，38.3mmol)的二氯甲烷(600ml)溶液中加入Amberlyst 15離子交換樹脂(6g，用6N鹽酸、水、四氫呋喃和二氯甲烷預處理并干燥)。懸浮液在氬氣氛室溫下攪拌18小時并過濾。濃縮濾液并將殘余物吸附在硅藻土Celite 上，用10×30cm硅膠柱進行色譜法純化，用20-30%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫。合并所需的級分并真空蒸發至干，得到9.18g黃色油狀的標題產物。TLC(1∶1，乙酸乙酯∶己烷)Rf＝0.32。
            
h).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯向步驟(g)產物(9.1g，23.19mmol，用甲苯蒸發三次，真空干燥過夜)的無水二氯甲烷(150ml)溶液中滴加入碘代三甲基甲硅烷(4.95ml，34.78mmol)。將所得黃色溶液在氬氣氛室溫下攪拌1.5小時，然后用0.4N鹽酸的甲醇/二噁烷(120ml)溶液中止反應。真空除去揮發物，殘余物在乙醚(500ml)和水(700ml)間分配。有機相用0.1N鹽酸(150ml)萃取，將合并的酸性水萃取液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉堿化至pH10.5(用pH計測定)，然后用二氯甲烷(4×400ml)萃取。合并的有機萃取液用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮得到6.45g黃色油狀的標題產物，其無需進一步純化則可用于下面反應。TLC(1∶9，甲醇∶二氯甲烷)Rf＝0.20。
            
i).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將冷的(0℃)(S)-(2-乙酰硫基)苯丙酸和三乙胺的二氯甲烷溶液用步驟(h)產物的二氯甲烷溶液處理，接著用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻處理。按照實施例3(c)中所述的方法處理反應混合物得到[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯。
            
按照實施例3(d)的方法，用1N氫氧化鈉處理上述甲酯產物的去氧甲醇溶液，得到標題產物。
            
實施例12[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-巰基甲基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-2-[(乙酰硫基)甲基]苯丙酸麻黃堿鹽將(1R，2S)-(-)-麻黃堿(17.3g，105mmol)的乙醚(175ml)溶液一次性加到2-[(乙酰硫基)甲基]苯丙酸(50.0g，210mmol)的乙醚(175ml)溶液中。室溫下旋轉16小時后，過濾收集晶狀麻黃堿鹽(19.7g);m.p.114-125℃;[α]D＝-40.6°(c＝1，甲醇)。室溫下放置20小時后，從濾液中又分離出一些固體[8.9g，m.p.121-126℃;[α]D＝-47.2°(c＝1，甲醇)]。合并固體，經乙腈(1500ml)重結晶。室溫下保持16小時后，收集得到20.8g固體;m.p.125-130℃;[α]D＝-48.9°(c＝1，甲醇)。按同樣方法將產物經乙腈(300ml)重結晶得到18.7g，m.p.128-130℃;[α]D＝-48.9°(c＝1，甲醇)。用乙腈(225ml)第三次重結晶得到17.4g固體(S)-2-[(乙酰硫基)甲基]苯丙酸麻黃堿鹽;m.p.128-129℃;[α]D＝-50.1°(c＝1，甲醇)。
            
元素分析C12H14O3S·C10H15NO計算值C，65.48;H，7.24;N，3.47;S，7.95;
            
實測值C，65.46;H，7.34;N，3.21;S，8.00。
            
b).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-[(乙酰硫基)甲基]-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用5ml 1N鹽酸溶液洗滌攪拌著的步驟(a)的麻黃堿鹽(333.1mg，0.822mmol)的乙酸乙酯(5ml)懸浮液三次。合并有機萃取液，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)、過濾、濃縮并真空干燥30分鐘。將所得油狀物溶于二氯甲烷(2ml)中并在氮氣氛在0℃下攪拌。向此溶液中加入[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯[200.0mg，0.774mmol，按實施例3(c)所述方法制備]的二氯甲烷(6ml)溶液，然后加入三乙胺(0.113ml，0.813mmol)，最后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(360.0mg，0.813mmol)。反應混合物在0℃攪拌，并緩慢溫熱到室溫。19小時后，真空濃縮反應混合物，殘余物溶于乙酸乙酯中。溶液用5%硫酸氫鉀(20ml)洗滌一次。用飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)洗滌一次，再用鹽水洗滌一次。將有機層干燥(硫酸鎂)、過濾并濃縮得到黃色泡沫狀物。用快速色譜法(硅膠，230-400目，10-20psi氮氣壓)純化，用4∶3乙酸乙酯/已烷洗脫得到303mg透明油狀的產物。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(巰基甲基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(b)產物(303.1mg，0.635mmol)的甲醇(6.5ml，用氮氣鼓泡去氧)溶液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉(6.5ml，用氮氣鼓泡去氧)處理。在0℃下攪拌1小時，同時繼續用氮氣吹洗，然后將反應混合物溫熱至室溫。總計三小時后，反應混合物用5%硫酸氫鉀酸化至PH1，并用乙酸乙酯萃取。合并有機層，用水、鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)。過濾并真空濃縮得到219mg白色固體的標題產物;m.p.200℃(分解)。TLC(6∶0.01∶3.99，乙酸乙酯/乙酸/己烷)Rf＝0.15。
            
HPLCtR＝26.3min，雜質于27.0min;YMC S-3 ODS(c-18)6.0×150mm;0%至100%B∶A，30min。線性梯度洗脫，保持10min，1.5ml/min;A＝90%水∶甲醇+0.2%磷酸，B＝90%甲醇∶水+0.2%磷酸;220nm。
            
元素分析C20H26O4N2S2·0.11C4H8O2·0.07CH2Cl2計算值C，56.22;H，6.21;N，6.39;S，14.63;
            
實測值C，56.46;H，6.28;N，6.31;S，14.59。
            
實施例13[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-4-甲基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-溴-4-甲基戊酸室溫下將溴化鉀(9.5g，80mmol)加到攪拌著的D-亮氨酸(3.0g，23mmol)的2.5N硫酸(47ml)溶液中，將反應混合物冷卻至-10℃，分批加入固體亞硝酸鈉(2.4g，34mmol)，同時保持溫度在-10℃至-5℃間。加完后，將反應混合物攪拌1小時，然后溫熱至室溫，再攪拌1小時。然后用乙醚萃取反應混合物兩次，用水洗滌乙醚萃取液一次、干燥(硫酸鎂)、過濾并蒸發得到2.7g粗標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)-4-甲基戊酸二環己基胺鹽室溫氬氣氛下向攪拌著的硫代乙酸鉀(1.7g，15.0mmol)的50ml無水乙腈漿狀液中加入步驟(a)產物(2.6g，13mmol)的17ml乙腈溶液。將反應混合物攪拌4小時，過濾所得的漿狀液并蒸發。殘余物溶于乙醚，用5%硫酸氫鉀溶液洗滌一次，用鹽水洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并蒸發。殘余物溶于乙醚(64ml)中，用二環己基胺(2.7ml，14mmol)處理。立即從溶液中沉淀出白色固體。將溶液過濾并收集白色固體得到2.0g標題產物，m.p.153-158℃;[α]D＝-54.5°(c＝0.61，氯仿)。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-4-甲基-1-氧代戊基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用5ml 5%硫酸氫鉀溶液洗滌攪拌著的步驟(b)產物(403.3mg，1.09mmol)的乙酸乙酯(5ml)懸浮液三次。合并有機萃取液，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)、過濾、濃縮并真空干燥30分鐘。所得油狀物(179.4mg，0.943mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中，并在氮氣氛在0℃攪拌，向此溶液中加入[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯[232.0mg，0.898mmol，按實施例3(c)所述方法制備]的二氯甲烷(6ml)溶液、然后加入三乙胺(0.131ml，0.943mmol)，最后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(417.1mg，0.943mmol)。反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫下攪拌3.5小時。總計4.5小時后，真空濃縮反應混合物，殘余物溶于乙酸乙酯中，溶液用5%硫酸氫鉀(20ml)洗滌一次，用飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)洗滌一次，并用鹽水洗滌一次。將有機層干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮至得到黃色泡沫狀物，用快速色譜法(硅膠，230-400目，10-20psi氮氣壓)純化，用2∶3乙酸乙酯/己烷洗脫，得到209.4mg透明油狀的標題產物。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-4-甲基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(c)產物(209.4mg，0.486mmol)的甲醇(5ml，用氮氣鼓泡去氧)溶液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉(5ml，用氮氣鼓泡去氧)處理。0℃攪拌1小時同時繼續用氮氣吹洗，然后將反應混合物溫熱至室溫。總計2.5小時后，反應混合物用5%硫酸氫鉀酸化至pH1，用乙酸乙酯萃取。合并有機層，用水、鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾和真空濃縮。用快速色譜法(硅膠，230-400目，10-20psi氮氣壓)純化，用氮氣吹洗過的6∶0.01∶3.99乙酸乙酯/乙酸/己烷洗脫得到142.0mg白色固體的標題產物。TLC(6∶0.1∶3.9乙酸乙酯/乙酸/己烷)Rf＝0.20。[α]D＝-103.0°(c＝0.43，氯仿)。HPLCtR＝26.7min;YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;0%至100%B∶A，30min，線性梯度洗脫，并保持10min，1.5ml/min;A＝90%水∶甲醇+0.2%磷酸，B＝90%甲醇∶水+0.2%磷酸;220nm。
            
元素分析C16H26O4N2S2·0.19C4H8O2·0.18C7H16·0.9H2O計算值C，50.87;H，7.63;N，6.58;S，15.07;
            
實測值C，50.57;H，7.20;N，6.83;S，14.75。
            
實施例14[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代丁基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-溴丁酸將溴化鉀(7.85g，65.94mmol)加到(R)-2-氨基丁酸(2.0g，19.40mmol)的2.5N硫酸(25ml)溶液中，并冷卻至0℃。分幾批緩慢加入亞硝酸鈉(2.06g，29.87mmol)。在加入過程中保持溫度低于2℃。將反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫攪拌16小時，然后用3-50ml乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯層用2-50ml水、1-50ml鹽水洗滌、干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到2.86g粗油狀的標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)丁酸二環己基胺鹽在15分鐘內向在室溫下攪拌著的2.14g(18.77mmol)硫代乙酸鉀的15ml乙腈漿狀液中滴加入(R)-2-溴丁酸(2.83g，17.07mmol)的15ml乙腈溶液。將反應混合物在室溫下攪拌16小時然后過濾。真空濃縮濾液，所得油狀物溶于30ml乙醚中。乙醚層用2-20ml  5%硫酸氫鉀、2-20ml水、2-20ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并過濾。向濾液中加入3.4ml(17.07mmol)二環己基胺。在室溫攪拌2小時后，將漿狀物過濾得到1.24g二環己基胺鹽產物。由濾液可得到第二批724mg二環己基胺鹽產物。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-[(乙酰硫基)-1-氧代丁基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(b)的二環己基胺鹽產物(227mg，0.66mmol)溶于15ml乙酸乙酯中，并用3×10ml硫酸氫鉀洗滌，用10ml鹽水洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到108mg透明油狀的(S)-2-(乙酰硫基)丁酸。
            
向冷卻至0℃的上述游離酸(108mg，0.66mmol)的5ml無水二氯甲烷溶液中加入三乙胺(90μl，0.66mmol)，接著加入[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[250.0mg，0.66mmol，由實施例5(d)所述物質制備]，再加入第二批三乙胺(90μl，0.66mmol)。將反應混合物在0℃攪拌20分鐘，然后一次性加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(292mg，0.66mmol)。將反應混合物在0℃攪拌1小時，冷凍56小時，然后在室溫下攪拌3小時。然后將反應混合物真空濃縮，再溶于30ml乙酸乙酯中，用20ml5%硫酸氫鉀、20ml飽和碳酸氫鈉、20ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到粗油狀物。將粗油狀物通過快速色譜法(Merck硅膠，25×100mm，2∶3乙酸乙酯/己烷)純化得到208mg白色泡沫狀的標題產物。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代丁基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(c)產物(225mg，0.559mmol)的甲醇(5ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃。向此溶液中滴加入5ml 1M氫氧化鈉，同樣用氬氣吹洗30分鐘并冷卻至0℃。在繼續用氬氣吹洗下將反應混合物在0℃攪拌3小時，然后用5%硫酸氫鉀溶液酸化至pH2。混合物用3-40ml乙酸乙酯萃取，將合并的乙酸乙酯層干燥(硫酸鎂)，真空濃縮得到粗泡沫狀物。粗產物通過快速色譜法純化(Merck硅膠，25×180mm，3%乙酸/乙酸乙酯)得到白色泡沫狀物，將其溶于二氯甲烷中，用己烷研制得到176mg標題產物，為密實的白色泡沫狀物;[α]D＝-125.4°(c＝1.0，氯仿)。TLC(甲醇/二氯甲烷，1∶9)Rf＝0.16。
            
HPLCtR＝15.5min;(97%總面積，UV220nM);YMC S-3 ODS(C-18，120A)6×150mm;0%B∶A-100%B∶A，線性25分鐘梯度洗脫(A＝90%水/甲醇+0.2%磷酸)B＝90%甲醇/水+0.2%磷酸);流速＝1.5ml/min。
            
元素分析C13H20N2S2O4·0.8H2O·0.2C6H14·0.1CH2Cl2計算值C，46.10;H，6.66;N，7.52;S，17.21;
            
實測值C，46.00;H，6.17;N，7.52;S，16.82。
            
實施例15[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-溴戊酸按照實施例14(a)的方法，只是使用D-正纈氨酸代替(R)-2-氨基丁酸，得到(R)-2-溴戊酸，為澄清的液體。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)戊酸二環己基胺鹽按照實施例14(b)的方法，使(R)-2-溴戊酸與硫代乙酸鉀的乙腈溶液反應，接著用二環己基胺處理，得到白色固體的(S)-2-(乙酰硫基)戊酸二環己基胺鹽。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代戊基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯按照實施例14(c)的方法，使步驟(b)的二環己基胺鹽的游離酸與[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯反應，得到白色泡沫狀的標題產物。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸按照實施例14(d)的方法，用1M氫氧化鈉處理步驟(c)產物的甲醇溶液，得到白色密實的泡沫狀的標題產物;[α]D＝-122.8°(c＝1.0，CDCl3)，TLC(甲醇/二氯甲烷1∶9)Rf＝0.15。HPLCtr＝20.5min;(97%總面積，UV220nM);YMC S-3 ODS(C-18，120A)6×150mm;0%B∶A-100%B∶A，線性25分鐘梯度洗脫(A＝90%水∶甲醇+0.2%磷酸);B＝90%甲醇∶水+0.2%磷酸;流速＝1.5ml/min。
            
元素分析C14H22N2S2O4·0.65H2O·0.20C6H14
            
計算值C，48.63;H，7.01;N，7.46;S，17.08;
            
實測值C，48.86;H，6.70;N，7.24;S，16.74。
            
實施例16[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-4，4-二甲基-1-氧代戊基)]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-溴-4，4-二甲基戊酸將(R)-2-氨基-4，4-二甲基戊酸(950mg，6.55mmol)，的2.5N硫酸水溶液(13ml，33mmol)冷卻至-5℃，用溴化鉀(2.72g，22.9mmol)一次性處理，用亞硝酸鈉(680mg，9.86mmol)分批處理該無色溶液，保持溫度在0℃至3℃之間達25分鐘，將反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫下攪拌1.5小時。將反應混合物傾入水(10ml)中，產物用乙醚(60ml)萃取，用水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，真空濃縮得到無色液體的標題產物。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)-4，4-二甲基戊酸將硫代乙酸鉀(750mg，6.58mmol)和乙腈(10ml，分子篩干燥)的漿狀液冷卻至0℃，用步驟(a)的(R)-2-溴-4，4-二甲基戊酸的乙腈(2ml)溶液處理5分鐘。將反應混合物溫熱至室溫，并攪拌2.5小時。過濾漿狀液，真空濃縮濾液。殘余物用乙醚(50ml)稀釋，用兩份5%硫代硫酸鈉水溶液(50ml)和鹽水(25ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。將淺黃色油狀物通過快速色譜法(Merck硅膠，12×3cm，10%甲醇/二氯甲烷)純化得到575mg淺黃色油狀的標題產物。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-4，4-二甲基-1-氧代戊基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(b)產物(148mg，0.72mmol)的二氯甲烷(5ml，用氫化鈣蒸餾過)的澄清溶液冷卻至0℃，用[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[250.0mg，0.60mmol，由實施例5(d)所述物質制備]的二氯甲烷(3ml，用氫化鈣蒸餾過)溶液、三乙胺(122mg，1.2mmol)處理，接著用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(319mg，0.72mmol)處理。將反應混合物在0℃攪拌24小時，在室溫攪拌5小時。真空濃縮粗反應混合物。殘余物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，用5%硫酸氫鉀水溶液(50ml)、50%飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。粗產物通過快速色譜法(20g，Merck硅膠，乙酸乙酯)純化得到244mg白色泡沫狀的標題產物。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-4，4-二甲基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(c)產物(240mg，0.56mmol)的甲醇(2ml，用氮氣吹洗過)的澄清溶液冷卻至0℃，用滴加入1N氫氧化鈉(2.27ml，2.24mmol，用氬氣吹洗過)處理，同時在0℃下繼續鼓泡。將混合物在0℃攪拌3小時，在室溫攪拌3小時。用5%硫酸氫鉀水溶液(氬氣吹洗過)萃取，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。粗產物經二氯甲烷/己烷重結晶，得到75mg白色固體的標題產物;m.p.124-126℃;[α]D＝-175°(c＝0.25，甲醇)。TLC(乙酸/甲醇/二氯甲烷1∶5∶94)Rf＝0.65。HPLCtR(YMC，S-3 ODS(C-18)6.0×150mm，1.5ml/min，線性梯度洗脫0-100%B達30分鐘;緩沖液A＝甲醇/水/磷酸(10∶90∶0.2)，緩沖液B＝甲醇/水/磷酸(90∶10∶0.2))＝24.4min，95%總峰面積位于254nm處。
            
元素分析C16H26N2O4S2·0.13C6H14計算值C，52.24;H，7.28;N，7.26;S，16.62;
            
實測值C，51.97;H，7.26;N，7.09;S，16.23。
            
實施例17[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-溴丙酸按照實施例14(a)的方法，只是用D-丙氨酸代替(R)-氨基丁酸，得到淺黃色油狀的(R)-2-溴丙酸。
            
b).(S)-2-(乙酰硫基)丙酸在室溫氬氣氛下向淺綠色的硫代乙酸鉀(3.94g，34.5mmol)的乙腈(150ml)溶液中加入(R)-2-溴丙酸(4.8g，31mmol)和乙腈(12ml)溶液。將所得白色漿狀液在室溫攪拌2小時，然后過濾。真空濃縮濾液。殘余物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用10%硫酸氫鉀水溶液(50ml)和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。粗產物(4.61g)通過快速色譜法(60gMerck硅膠，1∶45∶54乙酸/乙酸乙酯/己烷)純化得到3.7g淺黃色油狀的標題產物;[α]D＝-114°(c＝0.50，甲醇)。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將澄清的(S)-2-(乙酰硫基)丙酸(86mg，0.58mmol)的二氯甲烷(5ml，用氫化鈣蒸餾過)溶液冷卻至0℃，用[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[200.0mg，0.48mmol，由實施例5(d)所述物質制備]的二氯甲烷(5ml，用氫化鈣蒸餾過)溶液、三乙胺(98mg，0.97mmol)處理，接著用六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(255mg，0.58mmol)處理。將反應混合物在0℃攪拌22小時，在室溫攪拌2小時。真空濃縮粗反應混合物。殘余物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用5%硫酸氫鉀水溶液(30ml)、50%飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。粗產物通過快速色譜法(40g，Merck硅膠，乙酸乙酯)純化得到180mg白色固體的標題產物;m.p.143-145℃。
            
d).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸在氬氣氛下將澄清的步驟(c)產物(180mg，0.48mmol)的甲醇(2ml)溶液冷卻至-10℃，在氬氣鼓泡下滴加入1N氫氧化鈉(1.95ml，1.95mmol)處理，保持溫度低于0℃。在氬氣鼓泡在0℃下將混合物攪拌3小時。在氬氣氛下用5%硫酸氫鉀水溶液將混合物酸化至pH1。在氮氣鼓泡下用乙酸乙酯(100ml)萃取產物，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。粗產物通過快速色譜法(40g，Merck硅膠，1∶5∶94乙酸/甲醇/二氯甲烷)，純化得到154mg白色固體的標題產物m.p.150-152℃;[α]D＝-156°(c＝0.50，甲醇)，TLC(1∶5∶94乙酸/甲醇/二氯甲烷)Rf＝0.28，HPLCtR(YMC，S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;1.5ml/min，線性梯度洗脫0-100%B30分鐘;緩沖液A＝甲醇/水/磷酸(10∶90∶0.2)，緩沖液B＝甲醇/水/磷酸(90∶10∶0.2))＝14.69min，在254nm處有大于95%的總峰面積;
            
元素分析C12H18N2O4S2·0.75CH3CO2H計算值C，44.61;H，5.82;N，7.71;S，17.64;
            
實測值C，44.76;H，5.71;N，7.81;S，17.76。
            
實施例18[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[3-環丙基-2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-戊烯酸將D-烯丙基甘氨酸(2.8g，24.3mmol)、1M氫氧化鈉水溶液(25ml)和四氫呋喃(10ml，用羰游基鈉蒸餾過)的混合物在室溫攪拌直至成均相，然后在冰浴中冷卻。向所得的快速攪拌的溶液中加入大約5ml 1.0M氫氧化鈉水溶液。然后滴加入大約1g氯甲酸芐酯。將上述操作重復4次直至加入總量為28ml  1.0M氫氧化鈉水溶液和4.80g(95%，27mmol)氯甲酸芐酯。將反應混合物在0℃攪拌15分鐘，然后在室溫攪拌30分鐘，接著用50ml乙醚萃取。加入6N鹽酸溶液(大約10ml)酸化水層(pH＝1.5)，然后用三批50ml乙醚萃取。合并三次乙醚萃取，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到6.01g無色油狀的標題產物。
            
b).(R)-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-戊烯酸苯基甲基酯在室溫下將碳酸銫(4.28g，13.1mmol)加到步驟(a)產物(5.96g，23.9mmol)的無水二甲基甲酰胺(25ml)溶液中。將反應混合物攪拌20分鐘，然后迅速加入芐基溴(4.5g，26.3mmol)(中等放熱)。將混合物攪拌30分鐘，然后在100ml水和100ml乙醚間分配。分離有機層，用三份100ml水、50ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到油狀物。粗產物通過快速色譜法純化(Merck硅膠，24×5.0cm，1∶10乙酸乙酯/己烷，然后1∶4乙酸乙酯/己烷)得到6.13g無色油狀的標題產物。
            
c).(R)-α-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]環丙烷丙酸苯基甲基酯將乙酸鈀(Ⅱ)(65mg，0.29mmol)加到步驟(b)產物(5.78g，17.1mmol)的無水乙醚(60ml)溶液中，攪拌10分鐘。將所得混合物冷卻至0℃，然后在大約15分鐘內分批加入過量的重氮甲烷的乙醚溶液(由12gN-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍/120ml乙醚制備)。將反應混合物攪拌15分鐘，然后加入1ml冰乙酸使反應中止。將所述溶液轉移到分液漏斗中，用100ml飽和碳酸氫鈉水溶液、50ml鹽水洗滌。干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到黃色油狀物。粗產物通過快速色譜法純化(Merck，硅膠，20×5.0cm，1∶4乙酸乙酯/己烷)得到5.74g無色油狀的標題產物。
            
d).(R)-(α-氨基)環丙烷丙酸將鈀/炭催化劑(10%，1.14g)加到步驟(c)產物(5.71g，16.2mmol)的甲醇(75ml)溶液中，并在氫氣氛(氣球)在室溫下攪拌48小時，過濾反應混合物除去催化劑，催化劑用溫水漂洗。然后將濾液通過0.4μM聚碳酸酯膜過濾器，真空濃縮濾液得到2.03g白色固體的標題產物。
            
e).(S)-α-(乙酰硫基)環丙烷丙酸將步驟(d)產物(2.00g，15.5mmol)的2.5N硫酸水溶液(30ml)的混合物在室溫下攪拌直至形成均相，然后冷卻至-5℃。向此溶液中一次性加入溴化鉀(6.50g，54.6mmol)。攪拌混合物直至形成均相，然后在25分鐘內分小批量地加入亞硝酸鈉(1.60g，23.2mmol)，保持反應溫度低于0℃。將反應混合物在0℃再攪拌1小時，然后在室溫攪拌1.5小時。所得混合物用30ml水稀釋，用3份30ml乙醚萃取。合并的乙醚萃取液用25ml鹽水洗滌、干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到2.82g粗的(R)-(α-溴)環丙烷丙酸，為淺黃色油狀物。
            
將上述粗的(R)-(α-溴)環丙烷丙酸的乙腈(10ml)溶液于5分鐘內加到攪拌著的硫代乙酸鉀(1.83g，16.1mmol)的乙腈(20ml)漿狀液中，同時在冰浴中冷卻。將反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌16小時，過濾反應混合物，真空濃縮濾液得到油狀物，油狀物在50ml乙醚和50ml  5%硫代硫酸鈉水溶液間分配。分離有機層，用25ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到黃色油狀物。粗產物通過快速色譜法純化(Merck硅膠，12×5.0cm，1∶19甲醇/二氯甲烷)得到1.52g黃色油狀的標題產物。
            
f).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-3-環丙基-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(292mg，0.66mmol)一次性加到[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[250mg，0.60mmol，由實施例5(d)所述物質制備]的二氯甲烷(3ml，用氫化鈣蒸餾過)溶液、三乙胺(121mg，1.20mmol)和步驟(e)產物(122mg，0.65mmol)的二氯甲烷(3ml，用氫化鈣蒸餾過)溶液的混合物中。將反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌1.5小時。所得混合物在20ml乙酸乙酯和20ml 1M硫酸氫鉀水溶液間分配。分離有機層，用20ml 5%碳酸氫鈉水溶液、20ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到油狀物。粗產物通過快速色譜法(Merck硅膠，12×3.0cm，1∶1乙酸乙酯/己烷)純化得到191mg標題產物，為白色固體泡沫狀物。
            
g).[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(3-環丙基-2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸在0℃下用氬氣吹洗步驟(f)產物(185mg，0.45mmol)的甲醇(3ml)溶液10分鐘，然后加入1M氫氧化鈉水溶液(3ml，剛用氬氣吹洗10分鐘)。將反應混合物在室溫攪拌2.5小時，繼續用氬氣吹洗，然后加入20ml 1M硫酸氫鉀溶液酸化，用20ml乙酸乙酯萃取，有機萃取液用20ml鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到膠狀物，用無水乙醚漂洗該膠狀物，然后在用油泵抽真空條件下濃縮得到121mg白色泡沫狀的標題產物;[α]D＝-103°(c＝0.23，甲醇)。TLC(1∶10∶90乙酸/甲醇/二氯甲烷)Rf＝0.46。
            
HPLCtR(YMC S-3 ODS 6.0×150mm;1.5ml/min，線性梯度洗脫0-100%B30分鐘，緩沖液A＝甲醇/水/磷酸(10∶90∶0.2)，緩沖液B＝甲醇/水/磷酸(90∶10∶0.2))＝20.7分鐘，在254nm處有大于97%總峰面積。
            
元素分析C15H22N2O4S2·0.20H2O計算值C，49.77;H，6.23;N，7.74;S，17.71;
            
實測值C，50.01;H，6.27;N，7.50;S，17.40。
            
實施例19[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-[[(1-巰基環戊基)羰基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).1-巰基環戊烷甲酸在氮氣氛并保持溫度為-3℃至0℃下，由二異丙基胺(5.4ml，38.5mmol)與正丁基鋰(2.5M的己烷溶液，15.4ml，38.5mmol)的四氫呋喃(17.6ml)溶液制得二異丙基氨基鋰溶液。攪拌15分鐘后，在0℃至3℃下在25分鐘內加入環戊烷甲酸(2.0g，17.5mmol)的四氫呋喃(2ml)溶液。在0℃保持15分鐘后，撤去浴器，將反應混合物攪拌15分鐘以上，使溫度升至15℃。將乳白色溶液冷卻至-78℃。就地將反應混合物溫熱至室溫。70小時后，將反應混合物冷卻至0℃，用水(pH8-9)中止反應，用6N鹽酸快速酸化至pH值為1。水溶液用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮，得到2.62g黃色油狀的標題產物。
            
b).1-(乙酰硫基)環戊烷甲酸在0℃下向步驟(a)產物(1.44g，9.89mmol)的1N氫氧化鈉(20ml，19.7mmol)的氮氣吹洗過的溶液中加入乙酐(0.93ml，9.89mmol)。加入四氫呋喃(13ml)以溶解所形成的油狀物。在0℃(pH7)攪拌1小時后，將反應混合物溫熱至室溫，再加入乙酐(0.47ml，4.9mmol)，然后加入固體碳酸鉀(2.04g，14.8mmol)至pH為10，再加入四氫呋喃(4ml)。室溫下攪拌過夜后，用1N鹽酸酸化反應混合物至pH1，并用乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到黃色固體(1.61g)。固體經乙酸乙酯/己烷重結晶得到614mg標題產物，為淺棕色固體;m.p.119.5-121.5℃。
            
c).[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-[[1-[(乙酰硫基)環戊基]羰基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯在0℃氮氣氛下，向步驟(b)產物(94.5g，0.502mmol)的二氯甲烷(3.6ml)溶液中加入三乙胺(70μl，0.502mmol)，接著一次性加入[4S-(4α，7α，9αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽[由實施例5(d)所述物質制備，198.9mg，0.478mmol]，接著加入三乙胺(66.6μl，0.478mmol)。將反應混合物在0℃攪拌5分鐘。然后加入固體六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(222.0mg，0.502mmol)。將反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌2.25小時，真空濃縮反應混合物，殘余物在乙酸乙酯和5%硫酸氫鉀(20ml)間分配。有機層用半飽和的碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮至得到澄清的油狀物。快速色譜法純化，用11∶9乙酸乙酯/己烷洗脫，得到169.3mg澄清油狀的標題產物。
            
d).[4S-(4α，7α，9αβ)]-八氫-4-[[(1-巰基環戊基)羰基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(c)產物(167.3mg，0.404mmol)的甲醇(4ml，用氮氣鼓泡去氧)溶液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉(4ml，用氮氣鼓泡去氧)處理，在0℃攪拌1.5小時同時繼續用氮氣吹洗，然后將反應混合物溫熱至室溫。總計3小時后，用5%硫酸氫鉀酸化反應混合物至pH1，用乙酸乙酯萃取。合并有機層，用水(20ml)、鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)、過濾、真空濃縮并用己烷再蒸發得到白色固體。將該化合物溶于二噁烷(無水)中并冷凍干燥得到110mg白色固體的標題產物;[α]D＝-106.5°(c＝0.68，氯仿)。TLC(7∶2.9∶0.1，乙酸乙酯/己烷/乙酸)Rf＝0.12。
            
HPLCtR＝21.5min;YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;0%至100%B∶A，30分鐘線性梯度洗脫，保持10分鐘，1.5ml/min;A＝90%水/10%甲醇+0.2%磷酸;B＝90%甲醇/10%水+0.2磷酸;220nm。
            
元素分析C15H22N2O4S2·0.15C4H8O2·0.7H2O·0.08C5H14計算值C，49.37;H，6.63;N，7.16;S，16.39;
            
實測值C，49.03;H，6.37;N，7.21;S，16.65。
            
實施例20[4S-(4α，7α，10αβ)]-4-[(2-羧基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]八氫-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).3-(苯基甲基)丙二酸單乙酯將3-(苯基甲基)丙二酸二乙酯(2.5g，10mmol)的10ml四氫呋喃溶液與10ml 1N氫氧化鋰攪拌過夜。反應混合物用11ml 1N鹽酸酸化，用2份50ml乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。使用5%甲醇∶氯仿溶劑體系通過硅膠(80g)進行色譜法純化濃縮物。合并合適的級分并濃縮得到1.23g標題產物。
            
b).[4S-(4α，7α，10αβ)]-4-[[2-(乙氧羰基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]八氫-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(a)產物(0.222g，1mmol)和[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯
            
溶于二氯甲烷(5ml)并冷卻至0℃。加入三乙胺(0.14ml，1mmol)并將反應混合物攪拌1小時。加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.442g，1mmol)，并將溶液在0℃攪拌1小時，在室溫攪拌2.5小時。反應混合物用50ml二氯甲烷稀釋，用水、10%硫酸氫鈉、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮。殘余物通過硅膠色譜法純化，用30%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，合并合適的級分并真空濃縮得到0.22g標題產物。
            
c).[4S-(4α，7α，10αβ)]-4-[(2-羧基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]八氫-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(b)產物(0.22g，0.476mmol)與1N氫氧化鋰(5ml)的四氫呋喃(5ml)溶液一起在室溫下攪拌3小時。反應混合物用1N鹽酸酸化至pH2，并真空濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯中，用水、鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)并真空濃縮至3ml，此時產物結晶。在0℃放置過夜后，過濾固體并干燥得到0.16g白色固體標題產物;m.p.159-162℃;[α]D＝-84.92°(c＝0.7，甲醇)。TLC(氯仿∶甲醇，9∶1)Rf＝0.23，0.28。
            
HPLCtR＝16.15，16.35min，(UV254nm);YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm，3μ封端柱，線性梯度洗脫50-90%含有0.2%磷酸的甲醇水溶液，20min，1.5ml/min。(44.9%，55.1%異構體混合物)。
            
元素分析C20H24N2SO5·0.1H2O計算值C，56.89;H，5.78;N，6.66;S，7.59;
            
實測值C，56.98;H，5.68;N，6.58;S，7.15。
            
實施例21[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).O-(2，2-二甲氧基乙基)-N-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酰基]-L-絲氨酸甲酯將N-[O-[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酰基]-O-(2，2-二甲氧基乙基)-L-絲氨酸甲酯[5.56g，10mmol，按實施例10(h)所述方法制備]的甲醇(65ml)溶液冷卻至0℃(冰鹽浴)，用對甲苯磺酸一水合物(386mg，2.0mmol)處理，并在0℃攪拌1.5小時。反應混合物用碳酸氫鈉溶液(198mg，在20ml水中的溶液)使反應中止，攪拌5分鐘，然后蒸發除去甲醇。用乙酸乙酯(2×200ml)萃取水相，合并的有機萃取液用水(110ml)、5%碳酸氫鈉(80ml)和鹽水(80ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾，蒸發至干并真空干燥。粗產物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷(2∶1)和乙酸乙酯∶甲醇(98∶2)洗柱，得到3.975g漿狀標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷4∶1)Rf＝0.17。
            
b).O-(2，2-二甲基氧基乙基)-N-[O-(甲磺酰基)-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高絲氨酰基]-L-絲氨酸甲酯將步驟(a)產物(3.975g，8.98mmol)的無水二氯甲烷(52ml)溶液冷卻至-15℃，用三乙胺(1.82ml，13.1mmol)和甲磺酰氯(0.82ml，10.6mmol)處理并在-15℃下攪拌30分鐘。反應混合物用25%氯化銨(19ml)使反應中止，溫熱至室溫，用乙酸乙酯(750ml)稀釋。有機相用5%硫酸氫鉀(100ml)、50%飽和鹽水(100ml)和飽和鹽水(100ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥，得到4.9g蠟狀固體的標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，4∶1)Rf＝0.32。
            
c).N-[S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高半胱氨酰基]-O-(2，2-二甲氧基乙基)-L-絲氨酸甲酯將碳酸銫(5.56g，17.04mmol)加到硫羥乙酸(2.6ml)的無水甲醇(40ml)溶液中，攪拌10分鐘，然后蒸發至干。所得固體用丙酮(7×8ml)研制，將所得灰白色固體真空干燥得到4.39g硫羥乙酸銫。
            
將硫羥乙酸銫(2.43g，1.3eq.)的無水二甲基甲酰胺(8.0ml)的懸浮液用步驟(b)產物(4.9g，8.98mmol)的無水二甲基甲酰胺(24ml)溶液處理，并在室溫氬氣氛下攪拌16小時。混合物用乙酸乙酯(1.0L)稀釋，依次用5%碳酸氫鈉(2×150ml)、水(2×150ml)和鹽水(150ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干，并真空干燥。粗產物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶1，2∶1)洗柱，得到3.93g蠟狀固體的標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，4∶1)Rf＝0.63。
            
d).O-(2，2-二甲氧基乙基)-N-[N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高半胱氨酰基]-L-絲氨酸甲酯用氬氣吹洗步驟(c)產物(200mg，0.49mmol)的甲醇(8.0ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃(冰鹽浴)并用25%甲醇鈉的甲醇溶液(0.11ml，0.5mmol)處理，同時在加入和反應過程中保持用氬氣鼓泡。在0℃保持5分鐘后，混合物用25%氯化銨(2.3ml)使反應中止，并在乙酸乙酯(2×12ml)和水(2.3ml)間分配。合并的有機萃取液用25%氯化銨(4.6ml)和鹽水(4.6ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾，蒸發至干，真空干燥得到183.2mg白色固體的標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，4∶1)Rf＝0.62。
            
e).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-5-氧代-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基][1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用Amberlyst 15(H+形式;13mg)處理步驟(d)產物(50mg，0.11mmol)的無水二氯甲烷(2.01ml)溶液，在室溫氬氣氛下攪拌3天，用另外的Amberlyst 15(13mg)處理并再攪拌3天。潷析溶液并通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶3，1∶1)洗柱，得到21.1mg漿狀標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，4∶1)Rf＝0.70。
            
f).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用三甲基甲硅烷基碘(0.72ml，5.06mmol)處理步驟(e)產物(421mg，1.01mmol)的無水二氯甲烷(25ml)溶液，并在室溫氬氣氛下攪拌1.75小時。將混合物蒸發至干，所得漿狀物在乙醚(50ml)和0.2N鹽酸(2×25ml)間分配。用飽和碳酸氫鈉(25ml)堿化水相至pH10，用固體氯化鈉(2.0g)處理，用二氯甲烷(3×75ml)萃取，得到219mg漿狀標題產物。用氯化鈉(2.0g)第二次處理水相并用二氯甲烷(2×100ml)再萃取，得到另外37mg標題產物。
            
TLC(二氯甲烷∶甲醇，9∶1)Rf＝0.23。
            
g).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己基胺鹽(516mg，1.32mmol，1.2eq.)懸浮于乙酸乙酯(42ml)中，用5%硫酸氫鉀(5×6.0ml)和鹽水(6.0ml)洗滌，干燥(無水硫酸鎂)、過濾、蒸發至干并真空干燥。
            
將上述游離酸溶于無水二氯甲烷(9.5ml)中，冷卻至0℃(冰鹽浴)，依次用步驟(f)產物(285.5mg，1.09mmol)的無水二氯甲烷(4.2ml)溶液、三乙胺(0.14ml，1.15mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(484mg，1.09mmol)處理。反應混合物在室溫攪拌10小時，在室溫氬氣氛下攪拌2.0小時，然后汽提至干。將殘余的漿狀物溶于乙酸乙酯(40ml)中，用0.5N鹽酸(2×6.6ml)、水(6.6ml)和鹽水(6.6ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)、過濾、蒸發至干并真空干燥。粗產物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用乙酸乙酯∶己烷混合物(1∶2;1∶1)洗脫，得到382.9mg漿狀的標題產物。TLC(乙酸乙酯∶己烷，1∶1)Rf＝0.28。
            
h).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸用氬氣吹洗步驟(g)產物(382.9mg，0.82mmol)的甲醇(9.0ml)溶液30分鐘，冷卻至0℃(冰鹽浴)，然后用1.0N氫氧化鈉(3.32ml，4.0eq，預先用氬氣吹洗30分鐘)處理，在加入和反應過程中保持用氬氣鼓泡。將反應混合物在0℃攪拌5.0小時。在室溫攪拌1.0小時，用5%硫酸氫鉀(14.5ml)酸化至pH2，溫熱至室溫，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并的有機萃取液用鹽水(10ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾，蒸發至干并真空干燥。所得漿狀物用己烷(25ml)蒸發2次，所得固體泡沫狀物通過硅膠柱(Merck)進行色譜法純化，用甲苯∶乙酸混合物(100∶1;50∶1;20∶1)洗柱，得到212mg固體標題產物;m.p.224-226℃;[α]D＝-50.2°(c＝0.45，甲醇)。TLC(甲苯∶乙酸，5∶1)Rf＝0.28。
            
HPLCtR＝5.37min，(UV220nm)(98.9%);YMS S-3 ODS(C-18)6×150mm;60%(10%水-90%甲醇-0.2%磷酸)/40%(90%水-10%甲醇-0.2%磷酸)，等效洗脫。
            
元素分析C18H22N2O5S2·0.14H2O計算值C，52.34;H，5.44;N，6.78;S，15.53;
            
實測值C，52.58;H，5.57;N，6.44;S，15.16。
            
實施例22[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸實施例3和11的產物也可按下列步驟制備a).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽將[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯(6.11g)溶于乙酸乙酯(大約100ml)中，用對甲苯磺酸一水合物(4.52g)的甲醇(3ml)和乙酸乙酯(20ml)溶液處理。馬上生成沉淀。再用乙酸乙酯稀釋混合物，過濾收集固體。用乙醚洗滌固體并真空干燥得到7.908g標題產物，為淺黃色固體，純度98%;m.p.179-181℃(分解)。
            
b).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(a)產物(636mg，1.48mmol)的二氯甲烷(5ml)和二甲基甲酰胺(1ml)漿狀液用N-甲基嗎啉(163μl，150mg，1.48mmol)處理，接著用1-羥基-7-氮雜苯并三唑(208mg，1.52mmol)處理。然后將所得的亮黃色溶液用(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(333mg，1.48mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液處理并在冰浴中冷卻。加入乙基-3-(二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.88mg，1.50mmol)，將混合物在0℃攪拌1小時，在室溫攪拌1.5小時。旋轉蒸發除去溶劑，殘余物在乙酸乙酯和0.5N鹽酸間分配。乙酸乙酯萃取液依次用水(2次)、50%飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)、過濾并汽提得到651.2mg白色泡沫的標題產物。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸按照實施例3(d)的方法，用1N氫氧化鈉處理步驟(b)的甲酯產物的去氧甲醇溶液得到標題產物。
            
實施例23[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸實施例3、11和22的產物也可按下列步驟制備a).N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-蛋氨酸在裝有機械攪拌器和內部溫度計的2L燒瓶中，將氫氧化鈉(61.65g，1.541mmol)溶于蒸餾水(1000ml)中。在室溫下向此溶液中加入L-蛋氨酸(100.0g，0.670mol)。將溶液在冰浴(內溫為3℃)中冷卻，10分鐘內加入氯甲酸芐酯(110ml，0.737mol)。在15分鐘誘發期后，內溫從3℃升至12℃，歷時30分鐘，然后在15分鐘內降至0℃，將反應混合物在0℃攪拌2小時，期間開始時的混濁反應混合物成為均相。撤去冰浴，將反應混合物于1小時內溫熱至室溫。然后將反應混合物移至分液漏斗中，用己烷(2×300ml)洗滌。用6N鹽酸酸化水層至pH5，并用乙酸乙酯(600ml)稀釋。混合物再酸化至pH2。分離有機層，用乙酸乙酯(3×600ml)萃取水層。合并有機萃取液，用鹽水(750ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到淺黃色油狀物。將粗產物(油狀物)溶于甲苯(1500ml)中，并將溶液濃縮至原體積的一半。加入第二批甲苯(750ml)并再次濃縮，余下630ml甲苯。將該溶液在5℃貯存過夜，期間一部分產物從溶液中結晶出來。通過溫熱至室溫使固體再溶解，然后加入甲苯(134ml)(留下少量晶種)。在機械攪拌下，以每批30ml，以10分鐘間隔(總的加入時間大約為3小時)加入庚烷(500ml)。此時，產物開始由溶液中結晶出。在1.5小時內加入另一批庚烷(1020ml)，將所得漿狀物攪拌2小時，真空過濾收集產物，用1∶2甲苯∶庚烷(3×150ml)和庚烷(3×500ml)洗滌并空氣干燥得到158.6g白色固體的標題產物;m.p.66℃;[α]D＝-1.5°(c＝1，95%乙醇)。TLC(乙醇∶水，3∶1)Rf＝0.78。
            
元素分析C13H17NO4S計算值C，55.11;H，6.05;N，4.94;
            
實測值C，54.96;H，6.20;N，4.83。
            
b).N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-蛋氨酸甲酯在裝有機械攪拌器和氬氣導入管的3L燒瓶中，將步驟(a)產物(100.0g，0.353mol)溶于甲醇(2L)中，加入對甲苯磺酸一水合物(6.71g，0.035mol)。將反應混合物在氬氣氛下攪拌21小時。加入三乙胺(4.9ml，0.035mol)。將反應混合物再攪拌15分鐘。真空濃縮反應混合物得到淺黃色油狀物。將此油狀物溶于乙酸乙酯(900ml)中，溶液用1N鹽酸(740ml)、飽和碳酸氫鈉(2×740ml)和鹽水(740ml)洗滌。將有機層干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到淺黃色油狀物。用己烷(2×100ml)濃縮油狀物得到98.22g白色固體的標題產物。
            
c).N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-蛋氨酸甲酯亞砜化合物在裝有機械攪拌器的3L燒瓶中，將步驟(b)產物(97.95g，0.329mol)溶于甲醇(1675ml)和蒸餾水(215ml)中。將溶液在冰浴中冷卻，加入碳酸氫鈉(28.5g，0.339mol)。在25分鐘內分少批量加入N-氯琥珀酰亞胺(44.0g，0.329mol)，以便使內溫不超過7℃。將混合物在冰浴中攪拌1小時，然后在1小時內溫熱至室溫。真空濃縮(大約75%)混合物除去甲醇，用乙酸乙酯(1000ml)稀釋，并用鹽水(500ml)洗滌。鹽層用乙酸乙酯(2×200ml)反萃取。合并有機萃取液、干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到透明粘稠的油狀物。用甲苯(3×100ml)濃縮油狀物，在高真空下除去殘余的溶劑得到透明油狀的粗標題產物，將其固化得到白色固體(131.4g)。由NMR分析可知粗產物含有12%重量琥珀酰亞胺和9%重量甲苯。產物為亞砜非對映異構體的混合物。
            
d).S-[(乙酰氧基)甲基]-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高半胱氨酸甲酯向含有步驟(c)產物(102.8g校正重量，0.328mol)的1L燒瓶中加入甲苯(480ml)、乙酸鈉(32.3g，0.394mol)和乙酐(186ml，1.970mol)。將所得混合物在氬氣氛下回流(118℃)18小時。將暗棕色反應混合物冷卻至室溫。在室溫下經1小時后反應混合物成為含有固體的非常稠的物質。用乙酸乙酯(100ml)溶解固體，真空部分濃縮混合物得到粘稠棕色殘余物。用甲苯(240ml)濃縮殘余物除去乙酐，用乙酸乙酯(1000ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉(4×680ml)小心洗滌。有機層用鹽水(450ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并真空濃縮。在高真空下除去殘余的溶劑得到淺棕色固體。在溫熱(35℃)和攪拌下將粗產物溶于乙酸正丁酯(450ml)中。冷卻至室溫后，在攪拌下將己烷(200ml)緩慢加到上述溶液中，歷時15分鐘。此時產物從溶液中結晶出來，30分鐘內加入另外一批己烷(700ml)，并將所得漿狀物攪拌3小時。過濾收集產物，用1∶2乙酸正丁酯∶己烷(200ml)、1∶4乙酸正丁酯∶己烷(2×240ml)和己烷(2×250ml)洗滌。在空氣中干燥產物，然后在高真空下干燥，得到87.7g淺棕色固體的標題產物。m.p.73℃;[α]D＝-1.6°(c＝1，95%乙醇)。TLC(5%甲醇/二氯甲烷)Rf＝0.80。
            
元素分析C16H21NO6S計算值C，54.07;H，5.95;N，3.94;
            
實測值C，53.48;H，5.74;N，3.82。
            
e).S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高半胱氨酸在1L燒瓶中，用氬氣吹洗步驟(d)產物(83.0g，0.233mol)的四氫呋喃(415ml)溶液30分鐘在裝有機械攪拌器和氬氣導入管的另一2L燒瓶中，用氬氣吹洗86.8%氫氧化鉀(62.7g，0.969mol)的蒸餾水(280ml)溶液15分鐘。
            
在氬氣氛下在劇烈攪拌下通過套管將四氫呋喃溶液迅速加到氫氧化鉀溶液中(內溫20℃)。用20ml四氫呋喃(用氬氣鼓泡15分鐘)漂洗含有步驟(d)產物的燒瓶，然后將漂洗液加到反應混合物中。30分鐘后，反應混合物變為澄清且為兩相，產生放熱至28℃。
            
再經2小時后，將反應混合物冷卻至1℃(內溫)并一次性加入硼氫化鈉(2.75g，0.073mol)(放熱至6.8℃)。將反應混合物在0℃再攪拌20分鐘，然后在30分鐘內溫熱至11℃。將反應混合物冷卻至1℃，在10分鐘內加入乙酐(68.6ml，0.727mol)。在加入過程中產生放熱升溫至10℃。在加完之前，內溫降至4℃。撤去冷浴，將反應混合物在環境溫度下攪拌45分鐘。
            
真空濃縮反應混合物至大約原體積的一半，用6N鹽酸(175ml)酸化至pH2，并用乙酸乙酯(2×1.1L)萃取。合并的有機萃取液用鹽水(560ml)洗滌。有機層用活性炭和無水硫酸鎂處理，過濾并真空濃縮得到黃色油狀物。加入乙酸正丁酯(380ml)，真空濃縮(于45℃)溶液至原體積的一半。加入第二批乙酸正丁酯(190ml)，并再次濃縮，剩下190ml乙酸正丁酯。在攪拌下緩慢加入庚烷(300ml)至溶液呈混濁，加入晶種。15分鐘后，由溶液中結晶出白色固體。在30分鐘內緩慢加入第二批庚烷(570ml)，并將所得漿狀液在室溫下攪拌過夜。過濾收集產物，用1∶3乙酸正丁酯∶庚烷(2×275ml)和己烷(2×275ml)洗滌，空氣干燥，然后高真空干燥得到50.1g白色固體的標題產物;m.p.73-74℃;[α]D＝-1.3°(c＝1，95%乙醇)。TLC(乙醇∶水，3∶1)Rf＝0.83。
            
元素分析C14H17NO5S計算值C，54.01;H，5.50;N，4.50;
            
實測值C，53.88;H，5.45;N，4.44。
            
濃縮濾液，余下100ml乙酸丁酯。按上述方法用310ml庚烷處理溶液得到第二批8.4g白色固體的標題產物，總產量為58.5g。
            
f).[S-(R＊，R＊)-2-[[4-(乙酰硫基)-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6，6-二甲氧基己酸甲酯將S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-高半胱氨酸(0.456mol)溶于二氯甲烷(600ml)和二甲基甲酰胺(90ml)的混合物中，加入羥基苯并三唑水合物(64.72g，0.479mol)。將混合物在冰浴中冷卻，加入溶于二氯甲烷(600ml)中的(S)-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸甲酯[按實施例1(e)所述方法制備，93.7g，0.456mol]溶液。最后，加入乙基-3-(二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(91.83g，0.479mol)，將反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌2小時。結束后，真空濃縮反應混合物，殘余物在乙酸乙酯(3L)和飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)間分配。有機萃取液用水(1L)、5%硫酸氫鉀(1L)、水(1L)和鹽水(1L)洗滌，然后干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到238g粗產物。將粗產物溶于乙酸乙酯∶二氯甲烷(1∶1，300ml)中，然后用10×15cm  Merck硅膠墊純化，用8∶2乙酸乙酯∶己烷(7L)洗脫，接著用乙酸乙酯(4L)洗脫，得到205.28g標題產物。
            
g).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將步驟(f)產物[205.28g，0.412mol，通過在二氯甲烷/甲苯中蒸發干燥]的甲醇(2L)溶液冷卻至0℃(冰浴)，用氬氣吹洗30分鐘。在繼續用氬氣吹洗的條件下，迅速加入25%(重量)的甲醇鈉的甲醇溶液(95.1ml，1.01eq.)，并將反應混合物攪拌10分鐘以上，然后加入1L飽和氯化銨溶液使反應中止，用0.5L水稀釋，并用3L乙酸乙酯處理。將所得混合物分成兩份，每份分別真空濃縮除去有機物(乙酸乙酯和甲醇)。再合并濃縮的殘余物，用1L乙酸乙酯處理。分離有機層，用0.5L飽和氯化銨漂洗。用1L乙酸乙酯再萃取合并的水溶液。合并有機萃取液，用1L水和兩份1L鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮。殘余物用二氯甲烷進一步蒸發，真空干燥得到182.65g步驟(f)產物的游離的巰基化合物。
            
將上述巰基中間體(0.400mol)溶于二氯甲烷(4L)中，用30.8ml(0.400mol)三氟乙酸處理，將反應混合物回流16小時，然后冷卻并真空濃縮，所得殘余物溶于2L乙酸乙酯中，然后用400ml 0.1N鹽酸、1L水、1L飽和碳酸氫鈉、1L水和1L鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮，用二氯甲烷蒸發殘余物，真空干燥得到166.24g標題產物。
            
h).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯在氬氣氛下，將碘代三甲基甲硅烷(76.6ml，0.538mol)加到含有溶于二氯甲烷(1.5L)中的步驟(g)產物(162.43g，0.414mol)的溶液中。攪拌1.5小時后，真空濃縮反應混合物，殘余物在1L乙酸乙酯和700ml 1N鹽酸間分配(有CO2放出;pH1.2)。分離乙酸乙酯層，用300ml 1N鹽酸萃取。合并的酸性水萃取液用另外1L乙酸乙酯洗滌，然后冷卻至0℃，用4N氫氧化鈉(大約275ml)堿化至pH10.0。用固體氯化鈉飽和水層，然后用5份1L二氯甲烷萃取。將合并的有機萃取液干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮。殘余物再溶于1L二氯甲烷中，用0.5L鹽水漂洗、干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮得到98.8g標題產物。
            
i).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯將(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己基胺鹽(173.1g，0.427mol)在乙酸乙酯(1L)和10%硫酸氫鉀(800ml)間分配。分離有機層，用5%硫酸氫鉀(1L)、50%鹽水(1L)和鹽水(1L)洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮。殘余物用二氯甲烷蒸發幾次，然后真空干燥過夜得到97.3g粗(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸。
            
將溶解于二氯甲烷(900ml)中的該(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(0.427mol)溶液在冰浴中冷卻，然后用步驟(h)產物(100.28g，0.388mol)的二氯甲烷(600ml)溶液、三乙胺(154.1ml，0.388mol)處理，最后一次性加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(188.9g，0.427mol)處理。在0℃經1小時，在室溫經2小時后，真空濃縮反應混合物，并溶于2L乙酸乙酯中。真空濃縮有機溶液并溶于2L乙酸乙酯中，有機溶液用0.5L鹽水、1L 0.5N鹽酸、1L水、2L飽和碳酸氫鈉、1L水和1L鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮。此時，用乙酸乙酯再萃取含有產物(TLC表明)的水漂洗液。按常規方法處理乙酸乙酯萃取液，合并所有產物得到粗黃色油狀產物。黃色油狀物加到15×15cm硅膠墊(用1∶1乙酸乙酯∶己烷制備)上，用7L  1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫，接著用4L6∶4乙酸乙酯∶己烷洗脫，最后用2L  7∶3乙酸乙酯∶己烷洗脫。濃縮含有所需產物的濾液得到123.57g標題產物。
            
j).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸向裝有加料漏斗和機械攪拌器的12L三頸瓶中加入步驟(i)產物(96.0g，0.207mol)的甲醇(1.1L)溶液，用氬氣吹洗溶液30分鐘，然后在冰浴中冷卻直至內溫為+7℃。在1小時內加入總量為1.45L的1N氫氧化鈉溶液(已用氬氣鼓泡30分鐘)。在加入過程中繼續用氬氣吹洗反應混合物。反應溫度升至+12℃，并在加入過程保持不變。將反應混合物再攪拌30分鐘，然后用環境水浴溫熱至室溫，并在吹洗下攪拌2.5小時，在15-20分鐘內滴加入大約250ml 6N鹽酸調節pH至2。在酸化過程中生成膠狀沉淀。繼續攪拌2小時后，沉淀變成細白色固體，并有一些大塊的固體產物。用600ml燒結的玻璃漏斗收集產物，用1L水、接著用2L無水乙醚洗滌收集的固體，最后真空干燥得到70.3g標題產物，為細白色固體;m.p.218-220℃(分解)，TLC(1∶99乙酸/乙酸乙酯)Rf＝0.48。
            
HPLCtR(YMC S-3 ODS 6.0×150mm;1.5ml/min;等效洗脫，60%B，緩沖液A＝甲醇/水/磷酸(10∶90∶0.2)，緩沖液B＝甲醇/水/磷酸(90∶10∶0.2))＝9.33min，99.3%總峰面積在220nm處。
            
元素分析C19H24N2O4S2計算值C，55.86;H，5.92;N，6.86;S，15.70;
            
實測值C，55.83;H，5.83;N，6.96;S，15.70。
            
實施例24[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯實施例3(c)、11(i)、22(b)和23(i)所述的偶合反應也可按下列步驟進行將(S)-2-(乙酰硫基)苯丙酸(1.83g，8.14mmol)和[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯(2.11g，8.17mmol)的無水二氯甲烷(20ml)溶液冷卻至0℃，一次性加入乙基-3-(二甲基氨基)丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.77g，9.32mmol)。將反應混合物在0℃攪拌6小時，然后濃縮得到油狀泡沫物。然后殘余物在乙酸乙酯(100ml)和1N鹽酸(50ml)間分配。有機相用1N鹽酸(50ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×50ml)和飽和氯化鈉水溶液(50ml)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)，過濾并真空濃縮得到3.43g白色泡沫狀的標題產物。
            
實施例25[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸1，1-二甲基乙基胺鹽將裝有回流冷凝器的15ml三頸燒瓶抽空并再充入氬氣，重復三次。然后將[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸(0.20g)和1∶1脫氣的無水乙醇和乙腈(1.0ml)溶液加到燒瓶中。攪拌該多相混合物，滴加入叔丁基胺(53.0μl，1.03eq.)。在加完胺后在三分鐘內溶液成為均相。通過滴加入乙腈緩慢稀釋溶液(內溫20℃)至最終體積為10ml。再攪拌2小時后，過濾固體，用100%乙腈(5ml)洗滌一次，空氣干燥，置于高真空下2小時除去殘余的溶劑，得到0.2g白色晶狀固體的標題產物。
            
將上述產物與其他幾次操作的產物合并，且按下列方法重結晶。將裝有回流冷凝器、磁性攪拌棒和加料漏斗的25ml三頸燒瓶抽空并再充入氬氣，重復三次。將各批1，1-二甲基胺鹽產物(0.37g)，和59%乙腈/乙醇(2.28ml)加到燒瓶中，將燒瓶和內含物溫熱至29-32℃以便溶解固體。用乙腈(27ml)稀釋溶液。撤去加熱浴，并將燒瓶冷卻至室溫(20℃)。再攪拌1小時后，過濾混合物，用乙腈(10ml)洗滌固體一次，空氣干燥，并置于高真空下除去殘留的溶劑，得到0.29g白色晶狀固體的標題產物;m.p.在160℃收縮，當溫度升至190-191℃時緩慢熔化并分解(在190-191℃，剩余的有光澤的物質迅速熔化)。
            
實施例26[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯實施例3(c)、11(h)和23(h)的中間體也可按下列步驟制備a).2-(乙酰氨基)-2-[4-(乙酰氧基)丁基]丙二酸二乙酯在氬氣氛下將攪拌著的95%氫化鈉(60.8g，2.532mol)的無水二甲基甲酰胺(500ml)懸浮液冷卻至0℃(冰浴)。在45分鐘內同時保持反應溫度低于18℃，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(500g，2.302mol)的無水二甲基甲酰胺(1.2L)溶液。加完后，將混濁的溶液逐漸溫熱至室溫，在室溫下攪拌1小時后，加入乙酸(4-溴丁基)酯(471.5g，2.417mol)。然后將混合物在59-60℃攪拌18小時。將所得漿狀液冷卻至室溫，用無水乙醇(40ml)和冰醋酸(4ml)使反應中止，攪拌大約15分鐘，傾入10%氯化鋰溶液中并用乙酸乙酯(2×3L)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用10%氯化鋰(3×3L)洗滌，干燥(無水硫酸鈉)并真空蒸發得到750g油狀標題產物。
            
b).2-(乙酰氨基)-6-羥基己酸將步驟(a)產物(730g，2.2mol)加到5L三頸燒瓶(裝有溫度計、磁性攪拌器和空氣冷凝器)中，用無水乙醇(300ml)稀釋，接著加入6N氫氧化鈉水溶液(1.6L，9.6mol)。將反應混合物在68-70℃下加熱5小時，得到均相溶液。將反應混合物冷卻至室溫，緩慢加入6N鹽酸(1.32L)使pH為1.3。將短徑蒸餾頭裝在燒瓶上，當溫度緩慢升至87-90℃時蒸除乙醇，并在此溫度下保持8.5小時。觀察到有二氧化碳緩慢逸出。蒸餾物的總體積為600ml。最終溶液的pH為3.0，真空濃縮反應混合物直至所有的水蒸發掉，然后用甲苯(2×500ml)濃縮。用無水乙醇(1L)研制半固體物質、過濾并用另外的無水乙醇(500ml)漂洗。真空濃縮濾液得到509g粗油狀物(82%純度)，它也含有乙醇和甲苯。
            
c).(S)-2-氨基-6-羥基己酸將步驟(b)的粗產物(443g，含有一些甲苯和乙醇，估計起始原料重量為394g)溶于水(3.3L)中，加入1N氫氧化鋰直至pH為7.5(需要1.53L)。將混合物加熱至35℃，加入酰基酶(1級，由豬腎得到，0.4g)，將反應混合物攪拌24小時，結束時，pH為7.33。用1N氫氧化鋰(大約2ml)將pH再調至7.5。加入另外的酰基酶(0.4g)，將反應混合物攪拌17小時以上(pH7.3)。用乙酸調節溶液的pH至5.9。加入硅藻土Celite (20g)和炭(20g)，將反應混合物加熱至92℃，并保持5分鐘。用硅藻土Celite 墊過濾反應混合物并真空濃縮得到半膏狀物(441g)。用900ml 1∶5∶10水∶乙醇∶二甲基甲酰胺研制該半膏狀物。需要溫熱以溶解原餅。冷藏反應混合物過夜、過濾并用200ml上述溶劑混合物洗滌得到214g粗產物(大約40% N-乙酰基產物)。將產物懸浮于甲醇(500ml)中，在蒸汽浴上加熱、放置2小時并過濾。重復該方法兩次得到108g標題產物;[α]D＝+22°(c＝1.44，6N鹽酸)。
            
另外，步驟(b)和(c)也可按下述步驟進行b).2-(乙酰氨基)-6-羥基己酸向裝有機械攪拌器和熱電偶溫度計的5L三頸燒瓶中加入步驟(a)產物(631g，1.933mol)和四氫呋喃(259ml)。在40分鐘內將6N氫氧化鈉溶液(1385ml，8.31mol)加到攪拌著的溶液中。產生強烈的放熱，因此必須在冰浴中冷卻反應混合物以保持溫度低于60℃，然后將反應混合物加熱至稍微回流(釜溫為67-68℃)，保持5.5小時。
            
將反應混合物在室溫攪拌過夜(16.5小時)。逐漸加入6N鹽酸溶液(1150ml，6.9mol)使pH從12.75達到1.30，同時保持溫度為大約25℃。用短蒸餾頭逐漸加熱混合物，直至開始有蒸餾物和氣體(二氧化碳)逸出(72.3℃釜溫，70℃頭溫)，蒸餾至無餾出物餾出且氣體逸出變得非常慢時停止(94.1℃釜溫，50℃頭溫)。收集的總蒸餾物為410ml，釜中殘余物的pH為3.9。再繼續加熱10分鐘，再沒有氣體逸出。從開始蒸餾的總加熱時間為7.5小時。
            
室溫攪拌過夜后，在60℃浴中真空下用旋轉蒸發器汽提澄清的反應混合物(pH3.50)，將糊狀殘余物與無水乙醇(750ml)一起攪拌，將所得的晶狀懸浮液用旋轉蒸發器(真空泵，60℃浴)汽提，用無水乙醇(2×750ml)處理糊狀殘余物。向最后殘余物中，加入無水乙醇(1500ml)，并將混合物在60℃浴中攪拌直至形成細晶狀懸浮液，歷時大約20分鐘，然后在室溫下攪拌20分鐘。過濾懸浮液，用無水乙醇(2×300ml)洗滌濾餅。濾液出現混濁，用硅藻土Celite 濾餅過濾使之進一步澄清。用旋轉蒸發器汽提新的澄清濾液得到434.6g標題產物。為琥珀色稠漿狀物。TLC(10∶1∶1，甲醇∶乙酸∶水)Rf＝0.59。
            
c).(S)-2-氨基-6-羥基己酸向裝有機械攪拌器和溫度計的5L三頸燒瓶中加入步驟(b)產物(434g，1.93mol)和水(3L)。加入1N氫氧化鋰(705ml)將混濁溶液的pH從4.05調至7.50。將溶液溫熱至36℃，加入豬腎酰基酶I(0.710g)。將混合物在35℃至36℃下攪拌23.5小時，將反應混合物冷卻至室溫，加入冰醋酸(4.4ml)pH從7.0調至5.9。加入硅藻土Celite (29g)和炭(29g)，在攪拌下將溫度升至91℃，撤去加熱浴，將混合物冷卻至室溫。通過18.5cm濾紙片過濾懸浮液，用水充分洗滌濾餅。在60℃下用旋轉蒸發器濃縮無色濾液(大約3.9L)得到476g澄清稠狀的油狀物。加入無水乙醇(720ml)，攪拌混合物直至形成均相晶狀懸浮液。再次汽提溶劑，向白色固體殘余物中加入無水乙醇(1584ml)。在室溫下將懸浮液在旋轉蒸發器中旋轉過夜(15小時)，用18.5cm濾紙過濾。用無水乙醇(7×100ml)洗滌濾餅并真空干燥至恒重，得到85.8g白色晶狀標題產物。TLC(甲醇∶水∶乙酸，10∶1∶1)Rf＝0.62。
            
元素分析C6H13NO3計算值C，48.25;H，8.94;N，9.38;
            
實測值C，48.66;H，8.77;N，9.43。
            
d).[S-(R＊，R＊)-2-[[4-(乙酰硫基)-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6-羥基己酸甲酯在氬氣氛室溫下攪拌(S)-2-氨基-6-羥基己酸(1.0g，6.8mmol)的甲醇(20ml)漿狀液，并用三甲基甲硅烷基氯(1.9ml，15mmol)處理。將所得溶液在室溫下攪拌18小時，減壓下將溶劑體積減至大約3.5ml。加入乙腈(5ml)，將溶液冷卻至-10℃，然后加入N，N-二異丙基乙基胺(4.15ml，23.8mmol)，將溶液冷卻至-40℃，得到含有(S)-2-氨基-6-羥基己酸甲酯的溶液。
            
在另一燒瓶中，在0℃下用N，N-二異丙基乙基胺(1.20ml，6.8mmol)處理S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]高半胱氨酸[按實施例23(e)所述方法制備，2.117g，6.8mmol]的乙腈(5ml)溶液。在另一燒瓶中，將羥基苯并三唑水合物(0.104g，0.68mmol)和甲磺酰氧基苯并三唑(1.450g，6.8mmol)溶于乙腈中并冷卻至-18℃。然后將前面生成的S-乙酰基-N-[(苯基甲氧基)羰基]高半胱氨酸滴加到此溶液中，同時保持內溫低于-10℃。在-18℃至-12℃下攪拌3小時后，在-40℃下將所得溶液滴加到上述含有(S)-2-氨基-6-羥基己酸甲酯的溶液中，將混合物緩慢溫熱至16℃，保持18小時以上。然后將反應混合物傾入到乙酸乙酯(50ml)和1N鹽酸(50ml)中。將混合物轉移到分液漏斗中，分離各層。用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水層。合并有機層，然后用1N鹽酸(100ml)、飽和碳酸氫鈉(100ml)和飽和氯化鈉(100ml)洗滌，用硫酸鎂干燥溶液、過濾并濃縮至得到白色固體。向此固體中加入叔丁基甲基醚(20ml)，將所得漿狀物在室溫下攪拌4小時，然后過濾。用叔丁基甲基醚洗滌產物并干燥得到2.087g標題產物;m.p.89-90℃。
            
e).[S-(R＊，R＊)-2-[[4-(乙酰硫基)-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6-氧代己酸甲酯在-65℃(內溫)下向草酰氯(546μl，6.27mmol)的無水二氯甲烷(16ml)溶液中滴加入二甲亞砜(905μl，12.54mmol)的二氯甲烷(13ml)溶液，歷時12分鐘，同時保持內溫在-65℃至-60℃之間。在20分鐘內將步驟(d)產物(1.90g，4.18mmol)的二氯甲烷(7ml)溶液加到反應燒瓶中得到混濁的混合物。用另外的二氯甲烷(1ml)完全將所述醇轉移到反應燒瓶中，并將反應混合物在-65℃下攪拌40分鐘。然后加入N，N-二異丙基乙基胺(3.7ml，20.90mmol)得到澄清的溶液。再在-65℃下攪拌30分鐘后，將反應混合物溫熱至-18℃保持2小時。用10%硫酸氫鉀水溶液(30ml)使反應中止，然后溫熱至室溫。用25ml水稀釋反應混合物、混合，并分離各相。用二氯甲烷(2×25ml)反萃取含水部分。合并的有機萃取液用10%硫酸氫鉀水溶液(25ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×25ml)、鹽水(25ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到1.84g白色固體的標題產物。
            
f).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯在氬氣氛下向干燥的燒瓶中加入步驟(e)產物(1.76g，3.89mmol)和甲醇(17ml)。將溶液冷卻至0℃，用氬氣吹洗25分鐘。在大約15秒內向反應混合物中加入甲醇鈉溶液(25%(重量)的甲醇溶液，983μl，4.28mmol)。1小時后，用1N鹽酸溶液(20ml)使反應中止。然后溫熱至室溫。加入乙酸乙酯(35ml)并且在混合后，分離各層。用乙酸乙酯(2×15ml)反萃取含水部分。合并的有機部分用1N鹽酸溶液(15ml)、鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并真空濃縮得到1.69g白色泡沫狀的[S-(R＊，R＊)]-2-[[4-巰基-1-氧代-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]丁基]氨基]-6-氧代己酸甲酯。
            
將上述白色泡沫狀物和三氟乙酸(305μl，3.95mmol)的二氯甲烷(17ml)溶液回流2.25小時。冷卻至室溫后，濃縮反應混合物，將殘余物溶于乙酸乙酯(25ml)中，用飽和碳酸氫鈉溶液(2×20ml)和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮得到1.50g白色泡沫狀的標題產物。
            
g).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯按照實施例23(h)或11(h)的方法，用碘代三甲基甲硅烷處理步驟(f)產物，除去N-保護基，得到所需的4-氨基產物。
            
實施例27(S)-2-鄰苯二甲酰亞氨基-6-羥基己酸實施例1(c)中間體也可按下列步驟制備向2-(乙酰氨基)-2-[4-(乙酰氧基)丁基]丙二酸二乙酯[730g，2.2mol，按實施例24(a)所述方法制備]的無水乙醇(300ml)溶液中加入6N氫氧化鈉溶液(1.6L)。將反應混合物在70-75℃下加熱5小時，然后在90°-95℃下蒸餾除去大部分乙醇。將反應混合物冷卻，用6N鹽酸(大約1.3L)酸化至pH1.3，然后在90°-100℃下加熱以完成脫羧。完成后，將粗反應混合物冷卻至室溫。
            
將上述粗反應混合物加熱至35℃，用大約600ml 6N氫氧化鈉處理，接著用1N氫氧化鈉調節pH為7.5(最終體積為大約5.3L)。向此混合物中加入0.6g豬腎酰基酶Ⅰ。在35℃下攪拌過夜后pH為7.25。調節pH至7.5，加入另外300mg酰基酶。攪拌過夜后，反應完成大約90%。接著用20g炭和20g硅藻土Celite 處理反應混合物，然后加熱至85℃，在此溫度保持10分鐘，然后冷卻至50℃并過濾。此時，濾液的總體積為大約4.9L。將濾液冷卻至5℃，加入固體碳酸鈉調節pH為9.3。一次性加入N-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺(263.04g，1.2mol)，加入碳酸鈉保持pH9.3。在5℃經2小時然后在室溫經3小時后，pH降至8.5，且大部分試劑已溶解。過濾反應混合物，冷卻至5℃，用6N鹽酸酸化至pH2.3。過濾收集沉淀出的固體，用200ml冷水洗滌，然后真空干燥得到220g標題產物。
            
實施例28[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-巰基-3-(1-萘基)-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(乙酰氨基)(1-萘基甲基)丙二酸二乙酯向乙醇鈉(21%的乙醇溶液，4.613gm，67.8mmol)的乙醇(100ml)溶液中加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(14.74gm，67.8mmol)，然后加入1-(溴甲基)萘(10.0gm，45.2mmol)。將溶液在室溫下攪拌1小時。然后濃縮反應混合物至得到橙色油狀物。將油狀物溶于乙酸乙酯中，用50%飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥、過濾、并濃縮至得到橙色固體。固體經乙酸乙酯和己烷重結晶得到混雜有乙酰氨基丙二酸二乙酯的晶體。將固體溶于50%乙酸乙酯的己烷溶液中，通過Merck硅膠進行快速色譜法純化，用50%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫。合并含有純產物的級分并濃縮得到10.225g白色固體的產物。m.p.105-108℃;Rf＝0.57(50%乙酸乙酯的己烷溶液)。
            
b).α-氨基-1-萘丙酸將步驟(a)產物(16.182gm，47.5mmol)的溶液懸浮于48%溴化氫(100ml)中并在氬氣氛中回流14小時。從溶液中過濾出產物的溴化氫鹽，為白色固體，然后溶于熱(50℃)水(500ml)中，用濃縮的氫氧化銨中和溶液。產物從溶液中沉淀出來，為細白色固體。過濾并高真空干燥過夜(18小時)，得到8.335g松散白色固體的產物;m.p.264℃。
            
c).α-溴-1-萘丙酸于1小時內向保持在0℃下的步驟(b)產物(4.000g，18.6mmol)和溴化鉀(7.63g，63.2mmol)的2.5N硫酸(35ml)溶液中加入亞硝酸鈉(1.92g，27.8mmol)。在0℃下再攪拌混合物1小時，然后溫熱至室溫并攪拌2.5小時。然后用乙醚(3X)萃取反應混合物，合并乙醚層，用水和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮得到橙色油狀物。油狀物通過Merck硅膠進行快速色譜法純化，用70%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，并加入1%乙酸減少拖尾。合并含有溴化物的級分并濃縮得到含少量雜質的產物，為橙色油狀物，將其放置過夜固化。Rf＝0.40(40%乙酸乙酯的己烷溶液且含有1%乙酸)。
            
d).α-(乙酰硫基)-1-萘丙酸在0℃下向硫代乙酸鉀(0.912g，8.00mmol)的乙腈(300ml)漿狀液中加入步驟(c)產物(2.030g，7.27mmol)的乙腈(3ml)溶液。將該溶液在0℃攪拌1小時，然后溫熱至室溫并攪拌15小時，從反應混合物中濾出溴化鉀，濃縮濾液得到橙色油狀物。將油狀物溶于乙酸乙酯中，用10%硫酸氫鉀和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到橙色油狀物。油狀物通過Merck硅膠進行快速色譜法純化，用50%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，加入1%乙酸減少拖尾。含有產物的級分均混雜有Rf＝0.43的化合物。合并各級分并濃縮得到橙色油狀物，通過將橙色油狀物溶于乙醚中，并向溶液中加入一當量的二環己基胺(1.32g，7.27mmol)，從而使粗產物經其二環己基胺鹽而得到純化，得到兩批還稍微混雜有雜質的棕色晶體(1.450gm)狀的二環己基胺鹽。將晶體懸浮于乙酸乙酯中，用10%硫酸氫鉀(3X)搖蕩。然后用水和鹽水洗滌有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到875mg黃色油狀產物;Rf＝0.40(40%乙酸乙酯的己烷溶液，且含有1%乙酸)。
            
e).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-3-(1-萘基)-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯按照實施例23(i)的方法，使步驟(d)的外消旋酸產物的二氯甲烷溶液和[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯的二氯甲烷溶液在三乙胺和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻存在下反應得到標題產物。
            
f).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-巰基-3-(1-萘基)-1-氧代丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸按照實施例23(j)的方法，用1N氫氧化鈉處理步驟(e)產物的甲醇溶液，得到標題產物。
            
實施例29[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-巰基-1-氧代-3-(2-噻吩基)丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(S)-α-(乙酰硫基)-2-噻吩丙酸在室溫氬氣氛下，將氯化鉀(3.0g，40.1mmol)加到β-(2-噻吩基)-D-丙氨酸(1.37g，8.03mmol)的2.5N鹽酸(25ml)溶液中。攪拌10分鐘后，將所得混合物冷卻至0℃，用亞硝酸鈉(720mg，10.44mmol)處理。2.5小時后，將反應混合物溫熱至室溫，并攪拌1小時。混合物在水和乙酸乙酯間分配，并將有機層干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮。殘余物通過快速色譜法(Merck硅膠)純化，用1%乙酸的3∶1己烷/乙酸乙酯溶液洗脫，得到760mg(R)-α-氯-2-噻吩甲酸，為黃色油狀物。
            
在室溫氬氣氛下將硫代乙酸銫(2.95g，14.19mmol)加到含有上述氯化物(750mg，4.73mmol)的二甲基甲酰胺(15ml)溶液中。攪拌2小時后，反應混合物在10%硫酸氫鉀和乙酸乙酯間分配。有機層用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并濃縮，殘余物通過快速色譜法(Merck硅膠)純化，用1%乙酸的4∶1己烷/乙酸乙酯溶液洗脫，得到500mg油狀標題產物。TLC(2%乙酸的3∶1乙酸乙酯/己烷溶液)Rf＝0.73。
            
b).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-(2-噻吩基)丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯按照實施例23(i)的方法，使步驟(a)的酸產物的二氯甲烷溶液與[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯的二氯甲烷溶液在三乙胺和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻存在下反應得到標題產物。
            
c).[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-巰基-1-氧代-3-(2-噻吩基)丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸按照實施例23(j)的方法，用1N氫氧化鈉處理步驟(b)產物的甲醇溶液，得到標題產物。
            
實施例30[4S-[4α(S＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己基胺鹽按照實施例1(h)的方法，只是用L-苯基丙氨酸代替D-苯基丙氨酸，得到(R)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己基胺鹽。
            
b).[4S-[4α(S＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯用5%硫酸氫鉀溶液(3×5ml)洗滌攪拌著的(R)-2-(乙酰硫基)苯丙酸二環己基胺鹽(353.5mg，0.872mmol)的乙酸乙酯(5ml)懸浮液。合并有機萃取液，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾，濃縮，真空干燥并用已烷汽提兩次得到油狀的(R)-2-(乙酰硫基)苯丙酸。
            
將所得游離酸(181.4mg，0.809mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中并在氮氣氛0℃下攪拌。向此溶液中加入[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-氨基-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯(200mg 0.774mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液，然后加入三乙胺(0.113ml，0.813mmol)，最后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(360mg，0.813mmol)。在0℃攪拌反應混合物，然后緩慢溫熱至室溫，總計20小時后，真空濃縮反應混合物。殘余物溶于乙酸乙酯中，用5%硫酸氫鉀溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌該溶液。將有機層干燥(硫酸鎂)、過濾并濃縮得到黃色固體。用快速色譜法(用2∶3乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到261.7mg澄清油狀的標題產物。
            
c).[4S-[4α(S＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(b)產物(261.1mg，0.562mmol)的甲醇(6ml，通過氮氣鼓泡去氧)溶液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉(6ml，通過氮氣鼓泡去氧)處理。在0℃下攪拌1小時，同時繼續用氮氣鼓泡，然后將反應混合物溫熱至室溫。在室溫下攪拌30分鐘后，得到澄清的溶液。5.5小時后，用5%硫酸氫鉀酸化反應混合物至pH1，并用乙酸乙酯萃取，合并有機層，用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并真空濃縮。用快速色譜法(6∶0.01∶3.99乙酸乙酯∶乙酸∶己烷)純化，得到190mg白色固體的標題產物;[α]D＝-87.5°(c＝0.51，氯仿)。TLC(6∶0.01∶3.99乙酸乙酯∶乙酸∶己烷)Rf＝0.20。
            
HPLCtR＝25.3min;YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm;0%至100%B∶A，30min，線性梯度洗脫，保持10min。1.5ml/min;A＝90%水∶甲醇+0.2%磷酸，B＝90%甲醇∶水+0.2%磷酸;220nm。
            
元素分析C19H24O4N2S2·0.15C4H8O2·0.15C7H16·0.39H2O計算值C，55.89;H，6.45;N，6.31;S，14.45;
            
實測值C，56.19;H，6.50;N，6.71;S，13.96。
            
實施例31[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-巰基-1-氧代-3-(4-噻唑基)丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸a).(R)-2-氨基-3-(4-噻唑基)丙酸將4N鹽酸的二噁烷(10ml)溶液加到(R)-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-(4-噻唑基)丙酸(2.0g，7.3mmol)的二噁烷(2ml)溶液中。將反應混合物在室溫攪拌3小時，真空濃縮，將殘余物溶于水(3ml)中。用1N氫氧化鈉將pH調至6.5，溶液通過20ml Dowex AG50(H+)，用水(250ml)洗柱，接著用2%吡啶的水(300ml)溶液洗柱。真空濃縮含有產物的級分得到0.94g標題產物。
            
b).(R)-2-溴-3-(4-噻唑基)丙酸將步驟(a)產物(0.516g，3mmol)和溴化鉀(1.19g，10.1mmol)的水(5.94ml)和硫酸(0.43ml)溶液在-10℃下攪拌5分鐘，接著在10分鐘內分批加入亞硝酸鈉(0.318g，4.61mmol)。將反應混合物在0℃再攪拌10分鐘，在室溫攪拌1小時，然后用乙醚(3×100ml)萃取。乙醚萃取液用鹽水(2×20ml)洗滌、干燥(硫酸鈉)、過濾并真空濃縮得到0.37g標題產物;[α]D＝+37.35°(c＝0.7，甲醇)。用同樣的方法，使用2.67mmol步驟(a)產物作為起始原料進行第二次操作，另外得到0.35g標題產物。
            
c).(S)-2-(乙酰硫基)-3-(4-噻唑基)丙酸將步驟(b)產物(0.72g，3.05mmol)和硫代乙酸鉀(0.35g，3.05mmol)在乙腈(9ml)中在室溫下攪拌過夜，在30℃下攪拌1小時。用乙酸乙酯(100ml)稀釋反應混合物并過濾。真空濃縮濾液，將殘余物再溶于乙酸乙酯(10.0ml)中，用水(2×50ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并真空濃縮得到0.52g標題產物;[α]D＝-15.89°(c＝0.6，甲醇)。
            
d).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-(乙酰硫基)-1-氧代-3-(4-噻唑基)丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯在0℃下，將[4S-(4α，7α，10αβ)]-4-氨基-八氫-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸甲酯對甲苯磺酸鹽
            
溶于二氯甲烷(5ml)中，接著加入三乙胺(0.12ml，0.868mmol)。將步驟(c)產物(0.2g，0.865mmol)加到此溶液中，接著加入第二批三乙胺(0.12ml，0.865mmol)。加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.383g，0.865mmol)，并將反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫攪拌4小時。真空濃縮反應混合物，將殘余物溶于乙酸乙酯(60ml)中。有機萃取液用5%硫酸氫鉀水溶液(10ml)和鹽水(2×10ml)洗滌，干燥(硫酸鈉)。過濾并真空濃縮。粗產物通過100g Merck硅膠進行色譜法純化，用0.2%甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫。真空濃縮富含極性較小異構體的級分得到0.134g標題產物。
            
e).[4S-(4α，7α，10αβ)]-八氫-4-[[2-巰基-1-氧代-3-(4-噻唑基)丙基]氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸將步驟(d)產物(0.135g，0.29mmol)溶于甲醇(3ml)中，在0℃下用氬氣向溶液鼓泡30分鐘。將已用氬氣吹洗過的1N氫氧化鈉(1.32ml)加到上述溶液中。用氬氣向溶液鼓泡，將反應混合物在0℃攪拌1小時，在室溫攪拌2小時。加入5%硫酸氫鉀水溶液(20ml)使反應中止，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取有機物。乙酸乙酯溶液用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并真空濃縮。濃縮物通過40g Merck硅膠進行色譜法純化，用含有5%甲醇和0.5%乙酸的氯仿溶液洗脫。合并合適的級分、濃縮并在20ml乙酸乙酯和5%硫酸氫鉀水溶液間分配。乙酸乙酯溶液用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。殘余物在二噁烷(4ml)中冷凍干燥得到36mg標題產物，為異構體的70∶30的混合物;m.p.95-115℃;[α]D＝-191.7°(c＝0.06，氯仿)。TLC(氯仿∶甲醇∶乙酸，8∶2∶0.2)，Rf＝0.59。HPLCtR＝3.06min;YMC S-3 ODS(C-18)6.0×150mm，3μ封端柱，等效洗脫，含有0.2%磷酸的60%甲醇水溶液，25min，1.5ml/min，(95.4%)。
            
元素分析C15H19N3O4S3·0.2C4H8O2·0.9H2O計算值C，43.59;H，5.19;N，9.65;S，22.09;
            
實測值C，43.54;H，4.89;N，9.44;S，21.90。
            
實施例32各自含有下列成分的1000片片劑[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸  100mg玉米淀粉  100mg明膠  20mgAvicel(微晶纖維素)  50mg硬脂酸鎂  5mg275mg
            
通過將實施例3的產物和玉米淀粉與明膠水溶液混合以足夠大的量制得上述片劑。將混合物干燥并研磨成細粉末。將Avicel，然后將硬脂酸鎂與上述顆粒混合。然后將混合物在壓片機中壓制制成各自含有100mg活性成分的1000片片劑。
            
用類似的方法，可制得含有200mg實施例1、2、4-23、25和28-31的產物的片劑。
            
可使用類似的方法，制成含有10mg-500mg活性成分的片劑或膠囊劑。
            
權利要求
            
1.下式化合物及其可藥用鹽 X為O或S-(O)t；R1為R12獨立地選自氫、烷基、鏈烯基、環烷基、取代的烷基、取代的鏈烯基、芳基、取代的芳基、雜芳基、環烷基亞烷基、芳基亞烷基、取代的芳基亞烷基和雜芳基亞烷基，或R1和R12與它們所連接的碳原子一起形成環烷基環或苯并稠合的環烷基環；R2為氫， 或R11-S-；R3、R5和R7獨立地選自氫、烷基、取代的烷基、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、雜芳基-(CH2)p-； R4為烷基、環烷基-(CH2)p-、取代的烷基、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、或雜芳基-(CH2)p-；R6為烷基、取代的烷基、環烷基-(CH2)p-、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、或雜芳基-(CH2)p-；R8為氫、低級烷基、環烷基或苯基；R9為氫、低級烷基、低級烷氧基或苯基；R10為低級烷基或芳基-(CH2)p-；R11為氫、烷基、取代的烷基、環烷基-(CH2)p-、芳基-(CH2)p-、取代的芳基-(CH2)p-、雜芳基-(CH2)p-，或者-S-R11形成對稱的二硫化物，其中R11為 m為0或1；Y為CH2、S-(O)t或O，其條件是僅當m為1時，Y為S-(O)t或O；n為1或2；p為0或1-6的整數；q為0或1-3的整數；r為0或1；和t為0、1或2。
            
2.權利要求1的具有下式的化合物 其中A為 R2為氫、R6 或R11-S-;R3為氫或1-4個碳原子的低級烷基;r為0或1;R11為1-4個碳原子的低級烷基;R1為芳基-CH2-、取代的芳基-CH2-、雜芳基-CH2-、環烷基-CH2-(其中環烷基具有3-7個碳原子)、或者1-7個碳原子的直鏈或支鏈烷基及R12為氫;或R1和R12與它們所連接的碳原子一起形成5-7個碳原子的環烷基環;R5為1-4個碳原子的低級烷基或苯基;n為1或2;m為0或1;X為O或S;和Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時，Y為O或S。
            
3.權利要求2的化合物，其中R2為氫或H3 ;R3為氫;r為0或1;R1為芐基、環丙基甲基、或3-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基;R12為氫;n為1或2;m為0或1;X為O或S;和Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時，Y為O或S。
            
4.權利要求3的化合物，其中X為S;Y為CH2;n為2;m為1;r為0或1;R2為氫;R1為芐基或異丁基;和R12為氫;或X為S;Y為CH2;n為1;m為1;r為0;R2為氫;R1為芐基;和R12為氫;或X為S;Y為CH2;n為2;m為0;r為0;R2為氫;R1為芐基、環丙基甲基、正丁基、異丁基、正丙基或-CH2C(CH3)3;和R12為氫;或X為O;Y為CH2;n為2;m為1;r為0;R2為氫;R1為芐基;和R12為氫;X為O;Y為CH2;n為2;m為0;r為0;R2為氫;R1為芐基;和R12為氫;X為O;Y為O;n為2;m為1;r為0;R2為氫;R1為芐基;和R12為氫;X為S;Y為O;n為2;m為1;r為0;R2為氫;R1為芐基;和R12為氫。
            
5.權利要求4的化合物[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸1，1-二甲基乙基胺鹽;[4S-[4α(S＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-(巰基甲基)-1-氧代-3-苯基丙基]氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-甲基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[3R-[3α(S＊)，6α，9αβ]]-六氫-3-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-4-氧代-2H，6H-吡啶并[2，1-b][1，3]噻嗪-6-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(3-環丙基-2-巰基-1-氧代丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代己基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-4-甲基戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-4，4-二甲基-1-氧代戊基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代-7H-吡啶并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，9αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代吡咯并[2，1-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸;[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]氧雜氮雜 -7-甲酸;或[4S-[4α(R＊)，7α，10αβ]]-八氫-4-[(2-巰基-1-氧代-3-苯基丙基)氨基]-5-氧代[1，4]噁嗪并[3，4-b][1，3]硫雜氮雜 -7-甲酸。
            
6.下式化合物及其可藥用鹽
            
7.一種用于治療心血管疾病如高血壓和充血性心力衰竭的藥物組合物，它包含可藥用載體和一種或多種下式化合物及其可藥用鹽 其中A、X、Y、n、m和R3如權利要求1中所定義;
            
8.下式化合物及其鹽 其中X為O或S;n為1或2;m為0或1;Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時，Y為O或S;R3為氫、低級烷基或芳基-(CH2)p-;和p為0或1-6的整數。
            
9.制備下式化合物的方法 該方法包含a).當A為 且R3為氫時，使下式的酰硫基側鏈化合物 或其活化形式與下式的胺 在偶合劑存在下偶合，其中X、Y、m、n、R5、r、R1和R12如權利要求1中所定義，及R3為氫或酸保護基，接著除去酰基 和R3酸保護基; 在偶合劑存在下偶合，其中X、Y、m、n、R1和R12如權利要求1中所定義，和R3和R7為酸保護基;c).當A為 ，且R3為氫時，使式 的酮酸或酯在還原條件下或使下式的三氟甲磺酸酯 與下式的胺反應 其中X、Y、m、n、R7和R1如權利要求1中所定義，和R3為酸保護基，接著除去R3酸保護基，以及d).當A為R4 和R3為氫時，使下式的膦酰基氯化物 與下式的胺偶合， 其中X、Y、m、n和R4如權利要求1中所定義，及R3和R5均為酸保護基，接著除去R3和R5酸保護基。
            
10.制備下式化合物的方法 其中X為O或S;n為1或2;m為0或1;Y為CH2、O或S，其條件是僅當m為1時，Y為O或S;和R3為酸保護基;該方法包含a).使下式的氨基酸 與下式的氨基酸酯偶合 得到下式的二肽 其中P1為氨基保護基或為與N原子一起形成保護基的基團;P2為羥基或巰基保護基;b).選擇性地除去步驟(a)產物的P2保護基;c).環化步驟(b)產物得到下式化合物 ;和d).除去步驟(c)產物的P1保護基得到所需產物。
            
11.權利要求10的方法，其中X為S;n為1或2;Y為CH2;m為0或1;該方法包含a).使下式的氨基酸 與下式的氨基酸酯偶合 得到下式的二肽 其中P1為氨基保護基或為與N原子一起形成保護基的基團;和P2為羥基保護基;b).選擇性地除去步驟(a)產物的P2保護基，得到相應的羥基化合物;c).將步驟(b)的羥基產物轉化為下式的硫醇化合物 d).環化步驟(c)的硫醇產物得到下式化合物 e).除去步驟(d)產物的P1保護基得到所需產物。
            
12.權利要求10的方法，其中X為S;n為2;Y為S或O;和m為1;該方法包含a).使下式的氨基酸 與下式的氨基酸酯偶合 得到下式的二肽 其中P1為氨基保護基或為與N原子一起形成保護基的基團;和P2為羥基保護基;b).選擇性地除去步驟(a)產物的P2保護基得到相應的羥基化合物;c).將步驟(b)的羥基產物轉化為下式的硫醇化合物 d).環化步驟(c)的硫醇產物得到下式化合物 和e).除去步驟(d)產物的P1保護基得到所需產物。
            
13.制備下式化合物的方法 其中X為O或S;n為1或2;m為0或1;和R3為酸保護基;該方法包含a).使下式氨基酸 與下式的羥基氨基酸酯偶合 得到下式的二肽。 其中P1為氨基保護基或為與N原子一起形成保護基的基團;和P2為羥基或巰基保護基;b).氧化步驟(a)的羥基產物得到下式的醛 c).選擇性地除去步驟(b)醛產物的P2保護基;d).環化步驟(c)的產物得到下式化合物 和e).除去步驟(d)產物的P1保護基得到所需產物。
            
14.制備下式化合物的方法 其中P1為氮保護基、R5如權利要求1中所定義，該方法包含a).使L-蛋氨酸反應從而引入P1保護基;b).酯化步驟(a)產物，例如在酸催化劑存在用醇、烷基-OH處理得到下式化合物 c).使步驟(b)的酯產物與氧化劑如N-氯琥珀酰亞胺在含水溶劑中反應得到下式化合物 d).用下式的酸酐 處理步驟(c)的亞砜產物得到下式化合物 和e)用堿金屬氫氧化物處理步驟(d)產物，接著除去甲醛，用酸酐或酰鹵處理得到所需產物。
            
15.制備下式化合物的方法 其中m為0或1，并且R3為易于除去的酯保護基，該方法包含a).使乙酰氨基丙二酸二乙酯溶液與堿如氫氧化鈉反應，接著與下式的乙酸鹵代烷基酯反應 其中鹵素為Br、I或Cl，從而得到下式化合物 b).用氫氧化鈉處理并加熱步驟(a)產物，然后用酸處理并加熱得到下式化合物 c).用水解酶如豬腎酰基酶處理步驟(b)產物得到下式化合物 d).處理步驟(c)產物從而引入R3基團，得到所需產物。
            
16.制備下式化合物的方法 其中m為0或1，且R3為酸保護基，該方法包含a)使下式的醛 其中P3為N保護基或為與N原子一起形成保護基的基團，與下式原甲酸酯HC-(O-烷基)3在酸催化劑和下式醇的存在下反應烷基-OH得到下式化合物 ;和b).選擇性地除去步驟(a)產物的P3保護基，得到所需的最終產物。
            
全文摘要
            
本發明公開了下式化合物，其中X為O或S-(O)
            
文檔編號C07DGK1099392SQ9410642
            
公開日1995年3月1日 申請日期1994年6月10日 優先權日1993年6月15日
            
發明者J·A·羅布爾, D·R·克倫塔爾, 小·J·D·戈德弗雷 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司
            


                        
            
                        
            
                        
            
                            
                        
            

                        
                            
                    
            
                    
                    


                     
                        
                        
                    

                
            

                
                
            
                    
            
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