專利名稱：用于免疫診斷結核病的新的17KDa蛋白抗原及由其衍生的肽片段的制備方法
技術領域：
本發明涉及新的結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)(南印度分離菌SⅡ1)的17KDa蛋白抗原和由其衍生的若干肽片段以及所述抗原和由其衍生的肽片段在人和試驗結核的免疫診斷、免疫治療和免疫預防中的應用。本發明還涉及編碼所述17KDa抗原的DNA順序、編碼由17KDa抗原衍生的肽片段的DNA順序和以包括17KDa抗原的肽片段順序的17KDa抗原的蛋白質順序為基礎構建的DNA和RNA探針。主要的應用領域是17KDa抗原及其肽片段在免疫診斷結核中的應用。另一個應用領域是17KDa抗原或其肽亞結構在制備抗結核疫苗中的應用。還有一個應用領域是通過人體的皮膚試驗或離體測定，將17KDa抗原或其亞結構肽應用于檢測T細胞的增殖。后一個應用領域在通過加強細胞免疫性有可能治療人體癌癥方面具有重要意義。還有一個應用領域是17KDa抗原或其亞結構肽在實驗室生產細胞生長因子和酶方面的應用。
由結核分枝桿菌引起的人體結核是廣泛發生在大約1600萬人中的重要的慢性體衰病。正當結核病在發達國家和發展中國家嚴重蔓延時，目前在發達國家中后天獲得性免疫缺陷綜合癥(愛滋病)的傳染已經成為包括結核分枝桿菌在內的分枝桿菌傳染的另一個難題。
盡管在許多國家抗藥性已經成為一個問題，但是準確確診人體結核病就能夠利用有效的抗菌素進行早期治療。因此，結構病的早期診斷意味著能進行有效的化學治療，從而消滅肺結核患者中活桿菌的傳播。
結核病的常規診斷決定于臨床和放射性檢查結果、結核桿菌樣品的顯微鏡檢查和結核分枝桿菌培養物的細菌分離。
由于現有可利用的診斷方法不完整，因此還不能全球性控制結核病。
雖然包括印度在內的許多國家把所有X光檢查的疑似患者都進行抗結核化學治療，但是結核病的許多臨床特征不只對結核病具有專一性，而且在印度進行的研究(由印度班加羅爾全國結核病研究所提供)說明，僅僅30%的X光檢查的疑似患者最后發展成為結核病患者。
在野外的條件下，對結核樣品進行顯微鏡檢查并不容易，并且至少104桿菌/ml需要進行篩選。許多結核樣品，像結核性腦脊膜炎中的腦脊髓液，并非經常含有桿菌。此外，細菌培養物通常要培養6至8周，作為一種診斷方法而言確太費時。
廣泛使用的結核菌素皮膚試驗則缺乏敏感性和特異性，并且需要大約三天才能完成。由于結核的化學治療需要至少6個月，許多不正常治療的患者都產生了抗藥性，造成活桿菌的傳播。現已發現傳統的BCG疫苗接種，其保護程度也隨地區不同而改變。
基于這些因素，許多研究人員和世界衛生組織都認為，應把結核病的早期診斷視為優先研究和開發的領域。
將分枝桿菌用于加強免疫反應的免疫助劑，已經證明它對人和動物是有效的抗原。現已知道，由結核分枝桿菌產生的許多抗原可促使結核病患者特異性抗體和可增殖的淋巴細胞的形成(Ivanyi et al.，1988)以及試驗動物模型的產生。結核病患者中抗體反應的檢測可應用于早期診斷。關于對T淋巴細胞特異性的結核分枝桿菌的研究，通過皮膚試驗和保護性疫苗的發展，同樣也可應用于早期診斷。
有關結核病上述各方面研究的中心集于結核分枝桿菌特異性抗原的鑒定和合成。
許多研究人員已經鑒定出具有免疫診斷或免疫防護應用可能性的結核分枝桿菌的蛋白抗原。許多上述抗原的N末端的內氨基酸順序已經發表，現將其中有些抗原的N端氨基酸順序列于表1。
表1經過鑒定的結核分枝桿菌蛋白抗原的N端氨基酸順序研究者 抗原和N末端Shinnick et al，1987 65 kDaRGCRHPVYamaguchi et al，1987 MPB 57MAKFNIKPLPattorroyo et al，1987 13 kDaAKVNI18 kDaGDLVGPGAE23 kDaAPKTY30 kDaFSXPGL68 kDaWMTMT77 kDaGKXIAYDGAAMatsuo et al，1988 30 kDaFSRPGLPAshbridge et al，1989 19 kDaEHRVKRGLTVBaird et al，1989 10 kDaAKVNIPKPGarcia et al，1989 70 kDaFQRITRQDLLBorremans et al，1989 32 kDaFSRPGLP據我們所知，上述抗原中沒有一個能夠用作免疫診斷的試驗產品，其中兩個抗原即Baird等(1989)的10KDa和Shinnick等(1987)的65KDa同系物已經測定，其用于試驗動物模型的疫苗對結核分枝桿菌的保護性極差(美國維斯康辛大學D.W.Smith，私人通訊)。
使用存在于所有分枝桿菌中的A60抗原診斷結核病的ELISA盒已經用于ANDA診斷(法國)，但是該測定并不僅對人體結核具有特異性。
診斷結核病的另一方法就是使用DNA探針。通過商業途徑得到的基因探針盒(1988)已用于鑒定由培養物分離得到的結核分枝桿菌復合物的成份，但并未直接用于臨床樣品。這些測定并不能排除其他分枝桿菌得到正結果。由Enzo Biochem設計的DNA探針(J.Clin.Microbiol.1988，Dec.)已用于1000堿基或更長的特異性DNA順序并要求具有更高的特異性。以DNA為基礎的所有探針的主要問題在于用患者的樣品是否能得到真實的正結果，從而避免繁復的桿菌培養。
在南印度分離得到的結核分枝桿菌菌株中(Naganathan et al.，1987)，已經知道有毒性的表型變異，其分子基礎還不清楚。Abou Zeid等(1988)發現，13KDa蛋白抗原存在于噬菌體Ⅱ型毒性結核分枝桿菌中，但在噬菌體Ⅰ型南印度低毒性結核桿菌中卻不存在。而對該抗原和毒性間的關系至今還未詳細研究。
現已發現，在結核分枝桿菌的分離物中存在17KDa蛋白抗原，本發明公開了其免疫化學特征。
因此，本發明涉及如下各個方面1.如下所述的結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原及其若干亞結構(肽)。
2.編碼結核分枝桿菌(SⅡ1)中的17KDa抗原的DNA順序。
3.編碼結核分枝桿菌(SⅡ1)中的17KDa抗原亞結構(肽)的DNA順序。
4.將所述17KDs蛋白或所述亞結構(肽)用于制備與所述17KDa蛋白抗原或其亞結構反應的單克隆或多克隆抗血清。所述抗體可在用于多克隆的諸如小鼠、兔和羊一類的哺乳動物中和在用于單克隆的小鼠中產生。
5.將所述亞結構(肽)的17KDa蛋白抗原用于檢測免疫診斷的人和動物樣品中的抗體。檢測方法是本領域已知的方法，例如ELISA、放射免疫測定(RIA)和被動逆轉血紅細胞凝集(RPHA)等方法。
6.17KDa蛋白抗原或其亞結構(肽)在治療結核病中的應用。
7.17KDa蛋白抗原或其亞結構(肽)在制備抗結核疫苗中的應用。
8.17KDa蛋白抗原或其亞結構(肽)在制備用于皮膚試驗免疫診斷結核病的試劑中的應用。
9.以17KDa抗原或其亞結構(肽)的蛋白質順序為基礎構建用于診斷結核病的DNA或RNA探針。這類探針可按本領域已知方法構建和標記，例如摻入放射性同位素或用生物素進行非放射性標記。
10.通過諸如待診斷患者的血清、CSF和胸膜液等體液與3所述的17KDa抗原或其亞結構(肽)的單克隆抗體反應，診斷人體結核病的方法。
11.通過待診斷患者的體液(例如血清)與5所述的17KDa蛋白反應，診斷人體結核病的方法。
12.通過待診斷患者的體液(例如痰、血清、CSF和胸膜液)與9所述的DNA或RNA探針反應，診斷人體結核病的方法。
13.體外檢測人體結核病的方法，該方法包括患者的體液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)樣品與10所述的經過標記的單克隆抗體接觸。
14.體外檢測人體結核病的方法，該方法包括患者的體液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)樣品與10所述的經過標記的單克隆抗體接觸。
15.體外檢測人體結核病的方法，該方法包括患者的體液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)樣品與3所述的經過標記的多克隆抗體接觸。
16.使用3所述的17KDa抗原的單克隆抗體實施免疫診斷結核病的藥盒。
17.使用5所述的17KDa抗原或肽亞結構實施免疫診斷結核病的藥盒。
18.使用9所述的DNA或RNA探針實施診斷結核病的藥盒。
19.表達1所述的17KDa蛋白或其亞結構的微生物。
20.以1所述的17KDa抗原或其亞結構肽為基礎研制的抗結核疫苗。這類疫苗可以是通過遺傳工程方法處理過的有機體(例如沙門氏菌屬和牛痘病毒等)的產物。
本發明通過例舉疾病的診斷、治療和預防，特別是結核分枝桿菌傳染病的診斷予以說明，但并不是以這些實施例限制本發明。本申請公開的內容，其應用方面可包括流行病檢查、法醫調查、食品污染測定、公共衛生檢查、預防藥物和農畜牧業等傳染原的診斷檢查。
實施例117KDa抗原的分級分離和純化聲波處理抗原粗制品，在37℃下，將結核分枝桿菌置于Kirchner培養基中培養2周，收集到的桿菌在4℃下和冷丙酮中經18小時殺死。桿菌用鹽水洗滌3次，取10mg桿菌的鹽水[5ml]懸浮液用Branson超聲波儀微型探測器在40瓦輸出功率下經聲波處理，然后在20000×g下離心30分鐘，再用Lowry方法測定其上清液中蛋白質含量后，在-70℃下冷凍貯藏。
分級分離和純化取500μg經聲波處理的粗制品，在按Hunkapi-ller和Lujan(1986)所介紹的12.5%聚丙烯酰胺凝膠上分級分離。用考馬斯亮蘭簡單染色，即可目視到蛋白帶。用0.1%SDS和0.05M碳酸氫銨將17KDa抗原進行電洗脫，然后用0.02%SDS和0.01M碳酸氫銨電滲析，洗脫的蛋白用氯仿-甲醇提取，除去SDS，將沉淀物干燥。
取5μg該沉淀物，用Lichrosorb RP18柱(LKB)進行HPLC檢測，分析洗脫蛋白的純度。在45%B和26分鐘處洗脫物呈現的一個峰值，含有免疫反應抗原。圖1表示17KDa抗原的HPLC圖形。
實施例217DKa抗原的氨基酸順序分析關于17KDa抗原的肽譜法，本文給出胰蛋白酶圖和V8蛋白酶圖。
胰蛋白酶圖取30μg的17KDa蛋白，在37℃下，于0.1M碳酸氫銨緩沖液(pH7.8)中，用經TPCK處理過的胰蛋白酶(酶與底物比為1∶50)消化5小時。在經溶劑A(0.1%TFA水溶液)平衡過的RP18柱(0.46×25cm)上用HPLC分級分離胰蛋白酶消化物，并用0-65%的梯度溶劑B(含0.085%TFA的70%乙腈溶液)將肽洗脫60分鐘。胰蛋白酶圖示于圖2。
V8蛋白酶圖取30μg的17KDa抗原，在37℃下，于0.07%的氨中，用葡萄球菌V8蛋白酶處理48小時。酶與底物的摩爾比為1∶25。在用于蛋白酶圖的條件下，在HPLC柱上純化酶消化物中的各種肽。肽圖示于圖3。
17KDa抗原的順序分析用與477A型蛋白質順序儀(Applied Bios-ystems Inc.，USA)相連接的PTH氨基酸分析器進行蛋白和肽的氨基酸順序分析。將樣品溶于10%甲酸中，固定在經TFA處理過的涂有Polybre-ne(1mg)的玻璃纖維盤上，用于定序。
用完全蛋白測定N端的前18個氨基酸。根據胰蛋白酶分解的肽段的氨基酸順序，選擇V8蛋白酶產生能夠與胰蛋白酶分解的肽段重疊的肽。胰蛋白酶和V8蛋白酶分解的肽段連成直線，得到17KDa抗原的完整順序。重疊的詳細情況示于圖4。
17KDa抗原的氨基酸組份蛋白質具有A9、C3、D11、E10、F9、G8、H2、I7、K4、L11、M2、P9、Q2、R12、S8、T9、V11和Y4。顯然其中沒有色氨酸和天冬酰胺。由于該蛋白質的酸性氨基酸(D+E＝21)比堿性氨基酸總數(R+K＝16)多5個，所以呈酸性。該蛋白具有131個氨基酸，分子量為14762。
實施例317KDa抗原的免疫反應性在結核分枝桿菌菌株中呈現17KDa抗原的免疫顯性結核分枝桿菌(M.tuberculosis)ATCC 27294，草分枝桿菌(M.phlei)、恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)、Kanasasii分枝桿菌(M.kanasasii)、胞內烏分枝桿菌(M.avium intracellulare)和scrofulaceum分枝桿菌(M.scrofulace-um)在Kirchner培養基中培養2周，將收集到的桿菌置于冷丙酮中殺死。按實施例1所述，由每個菌種制備經過聲波處理的抗原，然后在12.5%凝膠中對這些抗原進行SDS PAGE分析。經考馬斯蘭染色的凝膠證明，17KDa抗原僅存在于結核分枝桿菌菌株中。在Western影印法中，結核分枝桿菌SⅡ1的兔抗血清也被用于探查這些聲波處理物。在Weste-rn影印法中。呈現17KDa顯性帶。
在試驗動物中得到17KDs抗體經電洗脫的17KDa抗原(10μg于100μl鹽水中)用等體積的弗羅得氏不完全佐劑(FICA)乳化，并用于10BALB/C小鼠的腹膜內免疫。免疫30天后，從這些小鼠中收集血清，識別經聲波處理過的結核分枝桿菌SⅡ1抗原中的17KDa帶。
該試驗確認，在經識別17KDa抗原的蛋白結構及其亞結構(肽)的小鼠中，能夠產生多克隆或單克隆抗體。這類抗體，特別是單克隆抗體如同ELISA方法一樣，可用于檢測人體結核病樣品中17KDa抗原或其亞結構的抗原檢測方法，從而能夠進行結核病的免疫診斷。
17KDa抗原與人結核病患者血清反應的證明從24個健康的人和20個已證實為結核病患者的培養物得到的血清按如下所述與17KDa抗原進行滴定。在22℃下，用1μg/ml經電洗脫的17KDa抗原的PBS涂敷PVC Dynatech平皿24小時。然后PBS-BSA封阻的平皿用在22℃下溫育2.5小時的血清重復(1/200)稀釋液滴定。洗滌平皿1.5小時內得到抗人IgGHRP結合物。洗滌平皿，用鄰苯二胺底物測定并在492nm處讀數。表Ⅱ給出17KDa抗原的敏感性達70%，特異性達85%。
表Ⅱ在結核病患者和對照的血清上ELISA微量測定17KDa抗原血清 n ELISA+ ELISA- 敏感性 特異性健康的人 24 4 20 - 85%結核病患者 20 14 6 70% -敏感性已知結核病患者為陽性特異性已知健康對照組為陰性ELISA+OD 492 nm＞＝0.3(1/200稀釋)健康對照組＝平均+2SDOD 492 nm，n＝24)。
因此，這個試驗肯定了結核分枝桿菌菌株中的17KDa抗原能夠用于免疫診斷人體結核病的微量ELISA系統。
17KDa蛋白抗原其限定的抗體表位的證明由胰蛋白酶消化(實施例2，圖2)的17KDa抗原產生的肽片段，按以上所述分別用健康人和結核病患者的血清滴定。在被測定的14個肽中，具有RATYDK，YEVR，LEDEMK，LMR，DFDGR和SEFAYGSFVR順序的肽顯示抗體結合活性的敏感性為17-36%。為了測定這些肽是否形成線性或構象抗體表位，用17KDa抗體的小鼠抗血清并參照其他5個肽測定另一個肽，即進行ELISA的抑制測定。YEVR和ATYDK兩個肽相互抑制，從而說明它們是完整抗體表位的一部份，并且還按實施例2和圖4所述，通過17KDa抗原的完整結構的測定予以肯定。對抗體表位說明，其他四個肽都呈線性肽，并可能呈構象肽。在帶肽的上述6個抗體表位中，下述氨基酸順序的肽是按Merrifi-eld的固相法合成的，并且含有特異性和敏感性的抗體結合活性
RATYDKRYEVR敏感性65%，特異性95%SEFAYGSFVR敏感性66%，特異性95%如上所述的抗體表位圖譜法說明了限定的17KDa抗原的亞結構或肽能夠被合成，并且采用微量ELISA法，能夠將其用于免疫診斷人體結核病。
順序為RATYDKRYEVRDFDGRAEL的肽已被合成，在對已被證實為結核病患者和對照的培養物的CSF樣品進行測定時，其敏感性為86.6，特異性為100%。因此這個肽特別適宜用于代替ELISA測定中的17KDa抗原。
17KDa抗原能使淋巴增殖將健康供體和結核病患者的外周血淋巴細胞(PBL)進行分級分離，取2×106細胞在含10%自身血清的RPMl1640培養基中，在含或不含(對照)1μg的17KDa抗原條件下培養3天。在收集培養物前24小時，先用1μci的3H胸苷沖洗。表Ⅲ說明，17KDa抗原能使結核病患者的淋巴細胞的淋巴增殖(僅2個患者的數據)。
表Ⅲ用17KDa抗原測定淋巴增殖PBL源 加入3H胸苷 每分鐘計數，3個重復培養物的平均健康供體 對照90 抗原121結核病患者 對照110 抗原65017KDa抗原除了具有使淋巴增殖的性質外，預測T細胞刺激性表位的方法(Rothbard和Taylor，1988)也可用于繪出17KDa抗原結構中的可能位點。這些T細胞表位位于SEFAYGSFVR和AELPGVDPDCDVCITR順序的肽上。
因此，這個試驗說明，17KDa抗原或亞結構(肽)能夠用于刺激人外周血淋巴細胞。由于受刺激的淋巴細胞能夠產生有助17KDa抗原或其亞結構的疫苗效應的若干細胞生長分化因子，所以17KDa抗原首先能用作結核疫苗，而且還可以非特異性地加強細胞免疫。
圖5表示含有生物活性區的結核分枝桿菌的17KDa抗原的一級結構，但在未標出區中并不需要排除類似的活性。
測定結果的討論和總結本發明介紹了結核分枝桿菌(SⅡ1菌株)中新的17KDa蛋白抗原的免疫化學性質。結核分枝桿菌造成了世界范圍的1600萬人的結核病。由于現有診斷方法存在的缺陷，目前這種疾病還未能被消滅。由于傳統的BCG疫苗僅能部份預防結核病，所以近幾年來的研究集中于開展檢測早期結核病的免疫診斷方法和鑒定適當的防疫手段。
本發明所介紹的研究說明，由結柿分枝桿菌產生的新的17KDa抗原具有抗原活性，其抗原性質和抗原化學已進行了研究。
提供了蛋白抗原的生物活性蛋白，研究了早期檢測結核病的免疫診斷方法。
因此，發現了具有131個氨基酸的17KDa蛋白抗原含有RATYDKRYE-VR和SEFAYGSFVR順序的兩種肽，帶有診斷結核病的抗體結合表位。此外，還含有在SEFAYGSFVR和AELPGVDPDCDVCITR順序中帶預測T細胞刺激區的兩種肽。后兩種肽可能增加本發明所述整個17KDa抗原的T細胞刺激性質。17KDa抗原及其亞結構肽的T細胞刺激性質意味著它們能用于結核病的治療和預防。
如下圖1經電洗脫后的結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的HPLC分析。
HPLC條件RP18柱(LKB，10μm孔徑)，A＝0.1% TFA水溶液，B0.085%TFA的乙腈(70%)溶液，梯度0-65%，B，40分鐘，敏感性0.08，220nm。
圖2經RP18(LKB，10μm孔徑)的HPLC分級分離結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的胰蛋白酶肽。
分級分離A0.1%TFA水溶液，B0.085%TFA的70%乙腈溶液，梯度0-65%B，60分鐘，敏感性0.08.220nm。
氨基酸順序給出各個肽所測定的順序。
圖3經RP18(LKB，孔徑10μm)的HPLC分級分離的結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的V8蛋白酶肽。
分級分離A0.1%TFA水溶液;B0.085%TFA的70%乙腈溶液，梯度0-65%，60分鐘，敏感性0.082，220nm。
圖4表示肽直線連接的結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa抗原的一級結構。Trp胰蛋白酶，V8金黃色葡萄球菌V8蛋白酶。標在上面的箭頭表示完全蛋白得到的氨基酸順序。
(單字母密碼用于氨基酸)。
圖5;給出生物活性區的結核分枝桿菌(SⅡ1)的17KDa抗原的一級結構。
AA68-77表示抗體和T細胞表位。
AA91-101表示抗體表位。
AA107122表示2個T細胞的表位。
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權利要求
1.下列結構的蛋白1 40ATTLPVQRHPRSLFPEFSELFAAFPSFAGLRPTFDTRELM30RSIQITIKLEDEMKGIYLPVAKHGELRSEFAYGSFVRTVS131LPVGADEDDIRATYDKRYEVRDFDGRAELPGVDPDCDVCITRGILTVSVCV
2.下列結構的肽和權利要求1的蛋白的片段RATYDKRYEVRDFDGRAELAELPGVDPDCDVCITR包括一個或多個該肽的順序。
3.編碼權利要求1定義的蛋白的DNA順序。
4.編碼權利要求2定義的肽的DNA順序。
5.根據權利要求1或2定義的蛋白或肽或權利要求3或4的DNA順序構建的DNA或RNA雜交探針，所述探針可任意進行標記。
6.根據權利要求1或2定義的蛋白或肽的抗體。
7.根據權利要求6的抗體，它是多克隆或單克隆抗體，所述抗體可任意進行標記。
8.實施免疫診斷結核病的藥盒，它包括權利要求1或2的蛋白或肽。
9.實施免疫診斷結核病的藥盒，它包括權利要求7的單克隆抗體。
10.實施以DNA為基礎的診斷結核病的藥盒，它包括權利要求5的雜交探針。
11.能夠表達權利要求1或2的蛋白或肽的微生物。
12.結核疫苗，包括權利要求1或2的蛋白或肽。
13.診斷人結核病的方法，該方法包括患者的體液，例如血清，與權利要求1或2的蛋白或肽相互反應。
14.診斷人結核病的方法，該方法包括患者的體液，例如痰、CSF、胸膜液或血清，與經過標記的權利要求7的單克隆抗體相互反應。
15.診斷人結核病的方法，該方法包括患者的體液，例如痰、CSF、胸膜液或血清，與經過標記的權利要求5的DNA探針相互反應。
16.體外檢測人結核病的方法，該方法包括患者的體液樣品，例如痰、CSF、胸膜液或血清，與經過標記的權利要求7的多克隆抗體接觸。
17.體外檢測人結核病的方法，該方法包括患者的體液樣品，例如痰、CSF、胸膜液或血清，與經過標記的權利要求7的單克隆抗體接觸。
18.根據權利要求1或2的蛋白或肽，其在治療人或動物體的方法中應用于人結核病的免疫診斷、治療或接種預防。
19.根據權利要求1或2的蛋白或肽，其在治療人或動物體的方法中應用于在小鼠體內產生用于像ELISA方法的免疫診斷方法的哺乳動物的多克隆抗體或單克隆抗體，該方法可檢測人結核病中的如權利要求1所述的蛋白。
20.根據權利要求1或2的蛋白或肽，其在治療人或動物體的方法中，通過早期檢測結核病的血清液方法，用于檢測結核病樣品中的抗體。
21.根據權利要求1或2的蛋白或肽，其在治療人或動物體的方法中為了通過皮膚獲得免疫診斷或為了獲得接種預防結核病的手段，用于檢測結核樣品中T細胞的增殖。
22.權利要求1或2的蛋白用于人結核病的免疫診斷、治療和預防接種。
23.權利要求1或2的蛋白或肽用于開發通過T細胞的增殖治療結核感染的試劑。
24.權利要求1或2的蛋白或肽應用于通過T細胞增殖測定，產生生長分化因子。
25.權利要求5的DNA或RNA探針用于檢測人結核樣品中的結核分枝桿菌DNA，以利獲得早期檢測結核病。
26.權利要求5的DNA或RNA探針應用于鑒定培養分離物中的分枝桿菌DNA和實驗室研究。
全文摘要
本申請公開了分級分離、純化和定序結核分枝桿菌(SⅡ1)氨基酸的17KDa蛋白抗原的免疫化學特性。具有N末端ATTLPVQR(aa1-8)的17KDa蛋白抗原至少具有3個位于線性順序RATYDKRYEVR(aa91-101)和SEFAYGSFVR(aa68-77)肽的特異性抗體結合的抗原決定部位。促人體結核外周血淋巴細胞有絲分裂的17KDa蛋白原含有3個預測的位于線性順序SEFAYGSFVR(aa68-77)和AELPGVDPDCDVCITR(aa107-122)肽的T細胞抗原決定部位。17KDa蛋白抗原可能用于人體結核病的免疫診斷、治療和預防。
文檔編號C07K16/12GK1060310SQ9110123
公開日1992年4月15日 申請日期1991年3月27日 優先權日1990年3月27日
發明者C·賈甘納特, M·包爾甘納什, B·R·斯里尼瓦沙 申請人:阿斯特拉公司