專利名稱：從人工流產(chǎn)物中提取人絨毛膜促性腺激素方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及從人工流產(chǎn)物中提取人絨毛膜促性腺激素(HCG)的方法。
HCG是分子量約為30000-40000的糖蛋白性激素，它能刺激性腺活動，對雌性可促使卵胞成熟及排卵功能，對雄性可促使細(xì)精管功能及間質(zhì)細(xì)胞活動，增加雄性素產(chǎn)生，促使睪丸下降，可治療神經(jīng)衰弱，習(xí)慣性流產(chǎn)，嚴(yán)重子宮出血，閉經(jīng)，不孕癥等。
現(xiàn)在國內(nèi)外人們提取HCG是從孕婦尿中提取，如日本專利昭60-45852介紹從孕婦尿中提取HCG的方法，該方法的優(yōu)點是提取率高，但缺點是原料收集困難，而且HCG的含量低，每立升尿含量約4萬國際單位。
本發(fā)明的目的是提供一種從人工流產(chǎn)物中提取HCG的方法。本法的優(yōu)點是原料來源和收集比較容易，在醫(yī)院或婦科醫(yī)院都比較容易收集到，提取方法簡單，而且HCG含量高，一立升人工流產(chǎn)物可提取HCG60-100萬國際單位。
本發(fā)明的方法包括初提液提取和HCG成品提取二步第一步 初提液的提取(見
圖1)將人工流產(chǎn)物過濾，得到濾液A和固體物，把固體物研磨加入生理鹽水，或者蒸餾水，或者低級醇水溶液或可溶性鹽的水溶液浸泡攪拌20-60分鐘，再過濾，并洗滌濾渣，得到濾液B，上述濾液A和濾液B都是HCG含量很高的初提液(見附表)。
第二步 提取HCG成品(見圖2)將上述濾液A和濾液B混合，加入適量蒸餾水，用20%的NaOH溶液，調(diào)PH至8.5，加入適量的硅藻土作為助濾劑，經(jīng)攪拌過濾，濾液中加入冰醋酸，調(diào)PH至4.0，再加入吸附劑人造沸石攪拌，放入冰箱4℃冷藏8-16小時，靜止分離，傾析上清液，抽濾用蒸餾水洗滌，再用乙醇洗滌，得到沉淀物，用下列方法處理。(1)用2N-氨水或2N-碳酸鈉水溶液洗提、過濾，洗提液用冰醋酸調(diào)PH至5.0離心分離，離心液加入硫酸銨使HCG沉淀，經(jīng)離心、分離、抽干，獲得HCG成品;(2)用含40%的乙醇，10%醋酸銨溶液洗提，過濾，濾液加入4倍量95%乙醇使HCG沉淀，經(jīng)離心分離，真空抽干，獲得HCG成產(chǎn)。
實施例一(提取初提液)取60天人工流產(chǎn)物10份，1800ml(含水)過濾后，得到濾液A，用放射免疫檢驗，測得其中HCG為864000國際單位;過濾后的固體物500克，經(jīng)研磨，加2000ml生理鹽水浸泡，攪拌60分鐘，過濾，用生理鹽水洗滌濾渣2-3次，含并濾液和洗滌液得到濾液B，去掉濾渣用放射免疫檢測其中HCG含量約480000國際單位，合并濾液A和B獲得含1344000國際單位HCG的初提液。
實施例2(初提液提取)取70天人工流產(chǎn)物10份，1250ml(含水)，過濾后，得濾液A，檢測其中HCG含量540000國際單位，過濾后的固體物600克，經(jīng)研磨，加蒸餾水浸泡，攪拌60分鐘，過濾，再用蒸餾水洗滌濾渣3次，合并濾液洗滌液得濾液B，檢測其中HCG含量為480，000國際單位，合并濾液A和濾液B共得含HCG1020000國際單位的初提液。
實施例3(提取HCG成品)取初提液A1250ml，加10升蒸餾水，在攪拌中加入20%NaOH溶液，調(diào)PH至8.5，加入硅藻土50克，壓濾，用蒸餾水洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，攪拌中加冰醋酸調(diào)PH至4.0，再加人造沸石150克，攪拌2小時，冷藏靜止10小時，傾析上清液抽濾，用蒸餾水，乙醇依次洗滌沉淀物，再用2N-氨水洗提沉淀物，過濾后，濾液用冰醋酸調(diào)PH至5.0，除去沉淀，加50%硫酸銨溶液，使HCG沉淀，經(jīng)離心分離，真空抽干得HCG產(chǎn)品。
實施例4取實施例2中的初提液A和B共3000ml加10升蒸餾水，在攪拌中加入20%NaOH溶液，調(diào)PH至8.5，加入硅藻土100克，壓濾，用蒸餾水洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，攪拌中加冰醋酸調(diào)PH至4.0，加入人造沸石200克攪拌2小時，冷藏靜止10小時，傾析上清液，抽濾，用蒸餾水、乙醇依次洗滌沉淀物，用含量40%乙醇和10%醋酸銨溶液洗提沉淀物，過濾后，在濾液中加4倍量95%乙醇使HCG沉淀，經(jīng)離心分離、真空抽干得HCG產(chǎn)品。
采用本發(fā)明方法提取HCG的優(yōu)點是，原料來源和收取比較容易，方法簡便易行，HCG的提取率高，含量高，10份人流物可提取HCG100萬-130萬國際單位。
附表
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及從人工流產(chǎn)物中提取人絨毛膜促性腺激素(HCG)的方法，其特征是所述的方法包括初提液提取和HCG成品提取二步。a、初提液提取將人工流產(chǎn)物過濾，得到濾液A和固體物，將固體物研磨加入生理鹽水或蒸餾水，或低級醇水溶液或可溶性鹽的水溶液浸泡，攪拌20-60分鐘，再過濾，得到濾液B，濾液A和濾液B都是HCG含量很高的初提液；b、HCG成品提取將上述濾液A和濾液B混合，用20%的NaOH溶液，調(diào)PH值至8.5，加入適量的硅藻土作為助濾劑，經(jīng)攪拌過濾，在濾液中加冰醋酸，調(diào)PH至4.0，加吸附劑一人造沸石，攪拌，放入冰箱4℃，冷藏8-16小時，靜止分離，傾析上清液，抽濾，用蒸餾水洗滌，再用乙醇洗滌，得到的沉淀物用下列方法處理(1)用2N-氨水或2N-碳酸鈉溶液洗提，過濾，洗提液用冰醋酸調(diào)PH至5.0，經(jīng)離心分離，分離液加入50%硫酸銨溶液，使HCG沉淀，經(jīng)離心分離，真空抽干即得到HCG成品；或(2)用含量40%的乙醇，10%醋酸銨溶液洗提過濾，濾液加4倍量95%乙醇，使HCG沉淀，離心分離真空抽干即獲得HCG成品。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是取人工流產(chǎn)物10份1800ml(含水)過濾得到濾液A，用放射免疫檢測HCG含量;過濾后的固體物500克經(jīng)研磨，加入2000ml生理鹽水浸泡，攪拌60分鐘，過濾，用生理鹽水洗滌濾渣2-3次，合并濾液和洗滌濾即得濾液B，去濾渣，檢測其HCG含量。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是取人工流產(chǎn)物10份1250ml(含水)過濾后得濾液A，檢測其HCG含量，過濾后的固體物600克，經(jīng)研磨加蒸餾水浸泡，攪拌60分鐘，過濾，再用蒸餾水洗滌濾渣3次，合并濾液和洗滌液，檢測其HCG含量。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是取初提液A1250ml(含水)加10升蒸餾水，攪拌中加20%NaOH溶液調(diào)PH至8.5，加入硅藻土50克，壓濾，用蒸餾水洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，攪拌加冰醋酸調(diào)PH至4.0，加人造沸石150克攪拌2小時，冷藏靜置10小時，傾析上清液，抽濾，用蒸餾水、乙醇依次洗滌沉淀物，用2N氨水洗提沉淀物，過濾后，濾液用冰醋酸調(diào)PH值至5.0，除去沉淀，加50%硫酸銨溶液，使HCG沉淀，經(jīng)離心分離，真空抽干即得HCG成品。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是取人流物10份的初提液A和B共3000ml加10升蒸餾水，加入20%NaOH溶液調(diào)至PH8.5，加入硅藻土100克，壓濾，用蒸餾水洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，攪拌中加冰醋酸調(diào)PH至4.0，加人造沸石200克攪拌2小時，冷藏靜止10小時，傾析上清液，抽濾，用蒸餾水，乙醇依次洗滌沉淀物，用含40%乙醇和10%醋酸銨溶液洗提沉淀物，過濾后，濾液中加4倍量95%乙醇使HCG沉淀，經(jīng)離心分離，真空抽干即得HCG成品。
全文摘要
從人工流產(chǎn)物中提取人絨毛膜促性腺激素(HCG)的方法包括，HCG初提液提取和HCG成品提取二步，用此法提取HCG的優(yōu)點是原料易得，收取容易，提取方法簡單，HCG含量高，從10份人工流產(chǎn)物中即可提取HCG100萬至130萬國際單位
文檔編號C07K7/06GK1057465SQ9010515
公開日1992年1月1日 申請日期1990年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1990年6月15日
發(fā)明者朱在美, 王力男 申請人:朱在美, 王力男