新型肽酶抑制劑的制作方法

專利名稱：新型肽酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有多種生理用途的蛋白酶抑制劑。
廣義地說，本發明涉及肽酶底物類似物，其中底物肽中開裂的酰胺基團上的氯原子被H原子或一個取代的丙二酰殘基代替。這些肽酶底物類似物為多種蛋白酶提供了特定的酶抑制劑，其抑制作用對于多種疾病具有生理效果。
具體地說，本發明涉及某些肽酶底物衍生物，它們可用于抑制絲氨酸、硫和金屬依賴蛋白酶，其抑制作用對于多種疾病具有生理效果。
更具體地說，本發明涉及肽酶底物衍生物，按其活性位點的依賴性，這些衍生物分屬于下列各組Ⅰ。絲氨酸依賴酶屬于這一類的酶包括彈性蛋白酶(人白細胞)、組織蛋白酶G、凝血酶、血漿酶、C-1酯酶、C-3轉化酶、尿激酶、血漿酶原激動劑、精蟲頭粒蛋白、β-內酰胺酶、D-丙氨酸-D-丙氨酸羧肽酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶以及激肽釋放酶。
Ⅱ。硫依賴酶組織蛋白酶和CalPainⅢ.金屬依賴酶屬于這一組的酶包括腦啡肽酶、假單胞菌彈性蛋白酶和亮氨酸氨肽酶。
上述酶的肽酶抑制劑選自通式(Ⅰ)的化合物及其水合物、等排物或其可作藥用的鹽
其中x為
R1為氫原子、選自K組的氨基保護基、α-氨基酸或由一定數目的α-氨基酸結構單元組成的肽，其中所說的α-氨基酸或肽在其末端氮原子上帶有或不帶選自K組的氨基保護基，R2為將抑制劑作用于酶的活性位點的α-氨基酸的“R基團”，或為-A-SiR7R8R9、帶有R7、R8和R9的C1-10烷基、芳烷基或芳基，其中R7、R8和R9分別選自C1-10烷基，芳烷基或芳基，A為C1-6亞烷基。
R4為與肽酶底物類似的α-氨基酸的特定R基團，R5為α-氨基酸或由α-氨基酸組成的肽，或被除去，Y為NHR3或OR3，R3為H、C1-7烷基、芐基或苯乙基。
除非另有說明，上述肽酶底物的α-氨基酸最好為L-構型，本發明的化合物可為游離態(如兩性形式)或成鹽(如加酸或陰離子鹽)。可按現有技術已知的方法使化合物轉化成鹽或轉化成堿性形式。優選的鹽為三氟乙酸鹽、鹽酸化物、鈉鹽、鑭鹽或銨鹽，但本發明的鹽不僅限于此，鹽的范圍可包括已知用于肽化學領域的所有的鹽。
這里所用的術語“烷基”包括直鏈、支鏈或環狀形式，尤其象甲基、乙基、正丁基、叔丁基、環丙基、正丙基、戊基、環戊基、正己基、環己基和環己基用基等殘基。術語“芳烷基”包括芳基連接于C1-4亞烷基上的那些基團。對R2的定義中的術語“芳基”包括碳環和雜環殘基。優選的芳烷基和芳基有苯基、芐基、萘甲基、苯乙基、2-吡啶甲基、吲哚、吡啶、吲唑、呋喃、且優選噻吩。其它碳環有稠合芳基，如并環戊二烯基、茚基、萘基、萘甲基、薁基、庚間三烯并庚間三烯基、苊基、芴基、phenalenyl、菲基、蒽基、二氫芴基、醋蒽烯基、苯并菲基、芘基、
基和并四苯、“-A-SiR7R8R9”中的亞烷基(即“A”)為直鏈或支鏈C1-7亞烷基，它將“SiR7R8R9”殘基與“-A-SiR7R8R9”殘基所連接的碳原子隔開。與硅原子相連的R7、R8和R9殘基中最好有兩個或三個殘基為C1-7低級烷基(優選甲基或乙基)，當其中之一含有芳基時，該芳基最好為芐基。優選的亞烷基部分為亞甲基。優選的“-A-SiR7R8R9”部分為三甲基硅甲基、三乙基硅甲基、芐基二乙基硅甲基、芐基二甲基硅甲基、芐基乙基甲基硅甲基、二甲基-(3-吲哚甲基)硅甲基、二甲基(3-吡啶甲基)硅甲基等。
在對式(Ⅰ)的肽酶底物抑制劑的范圍作出進一步限定和/或顯示前，有必要敘述一些與肽有關的更基本概念。例如，除脯氨酸外，已發現蛋白質中的所有α-氨基酸都有一個共同特性，即在α-碳原子上都有一個游離羧基和游離未取代的氨基(對于脯氨酸，由于其α-氨基被取代，它實際為-α-亞氨基，但為了方便起見，仍將它稱作α-氨基)。另外，每-α-氨基酸都有一個特征性的“R基團”，R基團為與α-氨基酸的α-碳原子相連的側鏈或殘基。例如，對于甘氨酸，其R基團為氫原子，對于丙氨酸其R基團為甲基，對于纈氨酸其R基團為異丙基。(因此，在本說明書中R2和R4就是每種給定氨基酸的R基團，或者另一種用于定義任何給定蛋白酶抑制劑該位點的殘基)。對于α-氨基酸的具體R基團或側鏈，參考A.L。Lehningers的文章(Biothemistry)(尤其是第4章)將是有益的。
為了便于進一步定義式(Ⅰ)所示化合物的范圍，以及與本發明的各個酶相關的下位概念，已對各種α-氨基酸進行了分類，每一組對于被式Ⅰ的肽酶底物抑制的各個具體酶具有相似的功能特征。這些分組列于表Ⅱ，對于每一個α-氨基酸的被識別的縮寫列于表Ⅰ。
表1氨基酸符號丙氨酸Ala精氨酸Arg天冬酰胺Asn天冬氨酸AspAsn+AsPAsx半胱氨酸Cys谷氨酰胺Gln谷氨酸GluGtn+GtuGlx
甘氨酸Gly組氨酸His異亮氨酸Ile亮氨酸Leu賴氨酸Lys蛋氨酸Met苯丙氨酸Phe脯氨酸Pro絲氨酸Ser蘇氨酸Thr色氨酸Trp酪氨酸Tyr纈氨酸Val正纈氨酸n-Val正亮氨酸n-Leu1-萘基丙氨酸Nal(l)2-二氫吲哚羧酸Ind肌氨酸Sar表ⅡA組Lys和ArgB組Glu，AsPC組Ser，Thr，Gtn，Asn，Cys，(3-吡唑基)Ala，(4-嘧啶)Ala及其N-甲基衍生物、
C′組Ser，Thr，Gln，Asn和Cys及其N-甲基衍生物D組pro，IndE組Ala，β-Ala，Leu，Ile，Val，n-Val，β-Val，Met，n-leu及其N-甲基衍生物E′組Leu，Ile，n-Val，Met，n-Leu，CHM及其N-甲基衍生物F組phe，Tyr，O-甲基酪氨酸，(3-吡唑基)Ala，(4-嘧啶基)Ala，TrP，Nal(1)及其N-甲基衍生物F′組phe，Tyr，O-甲基酪氨酸，TrP，Nal-(Ⅰ)及其N-甲基衍生物G組Gly，SarG′組GlyJ組
φ當然代表苯基(J1-4的鍵被理解為總是與所涉及的氨基酸的碳原子相連，例如所涉及的p1位置氨基酸的R2殘基)。
K組乙酰基(Ac)，琥珀酰基(Suc)，甲氧琥珀酰基(H3COSuc)，苯甲酰基(Bz)，叔丁氧羰基(Boc)，芐酯基(CBZ)，甲苯磺酰基(Ts)，丹酰基(DNS)，異戊酰基(IVa)，甲氧琥珀酰基(MeOSuc)，1-金剛烷磺酰基(AdSO2)，1-金剛烷乙酰基(AdAc)，2-羧基苯甲酰基(2-CBZ)，苯乙酰基，叔丁基乙酰基(Tba)，雙〔(1-萘基)甲基〕乙酰基(BNMA)或K′K′組A-Rz，其中A為
Rz為含6、10或12個碳原子的芳基，該芳基被獨立選自下列基團中的1至3個基團適當取代氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1至6個碳原子的烷基、含1至6個碳原子的烷氧基、羧基、其中烷基含1至6個碳原子的烷基羰基氨基、5-四唑并以及含1-15個碳原子的酰基亞磺酰氨基(即酰氨基磺酰基和磺酰基氨基羰基)，條件是當酰基亞磺酰氨基含有芳基時，芳基可進一步被氟、氯、溴、碘或硝基取代;Rz也可以是與以上基團具有相同功能的其它末端氨基保護基。
當α-氨基酸的正常R殘基含有-OH基時(如絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸)，據信這種殘基可被衍生。例如，在上述每一種情況下-OH殘基都可被轉化成醚。當發生這種轉化，如轉化成其甲基醚后，這些殘基將分別被稱作O-甲基絲氨酸、O-甲基蘇氨酸和O-甲基酪氨酸。這些甲基醚殘基也可分別表示為CH2OMe，H3CHC-OMe和CH2φ-OMe(p)，其它類型的衍生物也可用類似方式表示。
當K組基團代表-A-Rz部分時，最好A代表-C(＝O)-，Rz代表酰基亞磺酰氨基，尤其是含有被一個鹵原子取代的芳基部分(優選苯基)的酰基亞磺酰氨基。優選的-A-Rz部分為4-〔(4-氯苯基)磺酰氨基羰基〕苯基羰基，4-〔(4-溴苯基)磺酰氨基羰基〕苯基羰基，以及4-〔(苯基磺酰氨基羰基〕苯基羰基(它們分別被縮寫為4-Clφ-SAC-Bz，4-Brφ-SAC-Bz和φ-SAC-Bz)。
很明顯，對本發明肽酶底物的開裂酰胺鍵的變更將會對某些名稱產生異議。為了在本申請中保持總的一致性，特提供以下解釋，以排除對本發明的范圍和目的的模糊理解。
當化合物由下式定義時
R2部分為位于p1位置的α-氨基的殘基(或其它限定部分)，R1為由K組定義的保護基、氨基酸或肽(不多于4個α-氨基酸)。當對每種具體酶的R1部分進行定義時，將按照它所處的p位置對氨基酸或肽的氨基酸進行定義。例如，含有2個氨基酸的R1肽將由p2-p3部分組成，含有3個氨基酸的R1肽將由p2-p3-p4部分組成，含有4個氨基酸的R1肽將由p2-p3-p4-p5部分組成。在所有這些情況下，這些部分的末端氮原子可帶有或不帶有選自K組的保護基(當然也包括-A-Rz部分)。當對本發明的各個蛋白酶抑制劑的具體R1部分進行定義時，例如，R1將帶有K組保護基的p2p3部分定義為p2p3pg，pg代表在其末端胺上的K組保護基。如果末端α-氨基酸不帶有保護基，它將由p2p3表示。當R5為肽時，將對每個氨基酸依次編號(即R5-1，R5-2，R5-3等)，Y代表底物的末端。在實際中，優選不多于3個氨基酸單位的R5部分。例如，假定R1為含2個氨基酸(phe和Val)的肽，其末端氮原子帶有CBZ部分，R2為α-氨基酸Arg殘基，R4為α-氨基酸Leu殘基，R5為由兩個氨基酸Ser和Val組成的二肽，Y為NHR3，R3為CH3，則該化合物可被寫為CBZ-phe-Val-Arg〔C(O)Leu〕-SerValNHCH3方括弧部分(即〔C(O)Leu〕)用于表示p1′α-氨基酸的氮原子被羰基官能團取代，Leu為該α-氨基酸的R4殘基。當然，方括弧部分也可被承認為表示丙二酰部分，但為了一致和方便，最好按上述方式表示該部分。p2′和p3′部分(即SerVal)代表R5部分，Ser和Val有時分別被稱作R5-1和R5-2，NHCH3代表底物末端部分的Y基團。如果R5被省去且Y為OH或OCH3，該化合物將分別被寫作CBZ-Phe-Val-Arg〔C(O)leu〕OH和CBZ-phe-Val-Arg〔C(O)Leu〕OCH3。
按照以上所述，本發明的化合物為能夠抑制以下各酶的肽酶抑制劑人白細胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G，凝血酶，血漿酶，C-1酯酶，C-3轉化酶，尿激酶原激化劑，精蟲頭粒蛋白酶，β-內酰胺酶，D-丙氨酸-D-丙氨酸羧肽酶，胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，激肽釋放酶，組織蛋白酶B，CalPain，復制所需的逆病毒蛋白酶，腦啡呔酶，假單胞菌彈性蛋白酶及亮氨酸氨肽酶，且將該化合物定義為具有式Ⅰ的化合物及其水合物、等排物或其可作藥用的鹽的肽酶抑制劑其中X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為H，K組的氨基保護基，氨基酸，由2-4個α-氨基酸組成的肽，帶有K組保護基的α-氨基酸，或為由2-4個α-氨基酸組成的肽，其末端氨基酸帶有K組保護基，R2為α-氨基酸殘基，-A-SiR7R8R9，C1-10烷基，芳烷基或芳基，A為C1-6亞烷基R7、R8和R9均為C1-10烷基，芳烷基或芳基，R4為α-氨基酸的殘基，R5為α-氨基酸，由2-4個α-氨基酸組成的肽，或被省去，Y為NHR3或OR3，其中R3為H，C1-7烷基，芐基或苯乙基，所說的保護基、α-氨基酸或肽部分均選自以下A、B、C、D、E、F、G、J、C′、E′、F′、G′和K組ALys和Arg
BGlu，AsPCSer，Thr，Gln，Asn，Cys，His，(3-吡唑)Ala，(4-嘧啶)Ala及其N-甲基衍生物C′Ser，Thr，Gln，Asn和Cys及其N-甲基衍生物Dpro，IndEAla，β-Ala，Leu，Ile，Val，n-Val，β-Val，Met，n-Leu及其甲基衍生物E′Leu，Ile，n-Val，Met，n-Leu，CHM及其N-甲基衍生物Fphe，Tyr，O-甲基酪氨酸，(3-吡唑)Ala，(4-嘧啶)Ala，TrP，Nal(1)及其N-甲基衍生物F′phe，Tyr，O-甲基酪氨酸，TrP，Nal-(Ⅰ)及其N-甲基衍生物GGly，SarG′GlyJ
K乙酰基(Ac)，琥珀酰基(Suc)，甲氧琥珀酰基(H3COSuc)，苯甲酰基(Bz)，叔丁氧羰基(Boc)，芐酯基(CBZ)，甲苯磺酰基(Ts)，丹酰(DNS)，異戊酰基(Iva)，甲氧琥珀酰基(MeOSuc)，1-金剛烷磺酰基(AdSO2)，1-金剛烷乙酰基(AdAc)，2-羧基苯甲酰基(2-CBZ)，苯乙酰基，叔丁基乙酰基(Tba)，雙〔(1-萘基)甲基〕乙酰基(BNMA)，或K′K′A-Rz，其中A為
Rz為含6、10或12個碳原子的芳基，該芳基被獨立選自以下基團的1-3個基團適當取代氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個碳原子的烷基，含1-6個碳原子的烷氧基，羧基，烷基羰基氨基(其中烷基含1-6個碳原子)，5-四唑并，以及含1-15個碳原子的酰基亞磺酰氨基，條件是當酰基亞磺酰氨基含有芳基時，該芳基可進一步被氟、氯、溴、碘或硝基取代。
用作人體白細胞彈性蛋白酶抑制劑的通式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，最好為甲氧基琥珀酰基，p2為D、E和F組α-氨基酸，最好為脯氨酸，p3為D和E組α-氨基酸，最好為異亮氨酸，p4可被刪除或為E組α-氨基酸，最好為丙氨酸，R2為E和G組α-氨基酸的殘基，最好為正纈氨酸或纈氨酸，R4為E和G組α-氨基酸的殘基，最好為丙氨酸，R5為E和G組α-氨基酸，最好為丙氨酸，Y為NH2人體白細胞彈性蛋白酶是通過炎癥部位的多形核白細胞釋放的，因此是導致許多疾病的原因。由此，(Ⅰa)肽酶底物具有抗炎癥作用，可用于治療痛風，類風濕性關節炎和其它炎癥疾病及治療肺氣腫。在本發明的應用中，(Ⅰa)化合物的酶抑制性質可通過本領域熟知的標準生化技術容易地確定。本發明使用的劑量取決于診斷出的疾病的性質和嚴重程度，用于前述疾病的劑量范圍為0.01-10mg/kg體重/每天。抑制該酶的優選化合物是MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val［C(O)-Ala］Ala-NH2,MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val［C(O)-Ala］Ala-NH2,［αN-(AdSO2)］-［εN-(2-CBz)］-Lys-Pro-Val-［C(O)-Ala］AlaNH2,［αN-(AdSO2)］-［εN-(2-CBz)］-Lys-Pro-Val-H.
用作組織蛋白酶G抑制劑的通式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，最好為Suc，MeOSuc，Boc，4-ClφSac-Bz或4-BrφSac-Bz，p2為D，E或G組α-氨基酸，p3可被刪除或為E或G組α-氨基酸，最好為Ala，p4可被刪除或為E或G組α-氨基酸，最好為Ala，R2為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為phe，R4為E或G組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，Y為NH2或OH。
抑制組織蛋白酶G的(Ⅰb)化合物的應用與人體白細胞抑制劑的應用相同，其不僅可治療關節炎、痛風和肺氣腫，而且可治療腎小球性腎炎和由肺感染造成的肺感染疾病。當它們使用時，(Ⅰb)化合物酶抑制作用特征，即效力和其它生化參數可通過本領域熟知的標準生化技術容易地測定。使用時的準確劑量取決于所診斷患者或動物所患疾病的性質和嚴重程度。通常使用的具有有效治療效果的劑量范圍是約0.01-10mg/kg/天。優選的式(Ⅰb)化合物是Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-［C(O)Ala］OH.
用作凝血酶抑制劑的通式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為K組保護基，(a)p2p3或p2p3pg或(b)p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，最好為DNS，Ts，J-1，4-ClφSac-Bz或4-BrφSac-Bz，(a)p2為D、E或F組α-氨基酸，最好為pro，p3為F組α-氨基酸，宜為D-構型，最好為D-phe，(b)p2為E組α-氨基酸，最好為Ala，p3為C、E或G組α-氨基酸，最好為Ser，p4可被刪除或為E、F或G組α-氨基酸，最好為phe，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg，R4為C或G組α-氨基酸的殘基，最好為Gly或Ser，R5可被刪除或為D或E組α-氨基酸，最好為Gly，Y為OH。
式(Ⅰc)化合物抑制凝血酶，可作為肝素使用，該化合物也可在血栓性靜脈炎和冠狀血栓中用作首選抗凝劑。在這些化合物的使用中，(Ⅰc)化合物的酶抑制特征的效力和其它生化參數可通過本領域熟知的標準生化技術很容易地測定。該化合物使用的準確劑量范圍取決于所診斷患者或動物所患疾病的性質和嚴重程度。一般使用的具有有效治療效果的劑量范圍是約0.01-10mg/kg/天。
優選的式Ⅰc化合物與抑制組織蛋白酶G的優選化合物相同，另外還包括
Bz-Jl-[C(O)Gly]Pro-OH.
用作胰凝乳蛋白酶抑制劑的式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為K組保護基，p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，優選的保護基為Bz，Boc，4-ClφSac-Bz，4-BrφSac-Bz或φSac-Bz，p2可被刪除或為D，E或G組α-氨基酸，最好為Ala，p3可被刪除或為E或G組α-氨基酸，最好為Ala，p4可被刪除或為E或G組α-氨基酸，最好為Ala，R2為E和F組α-氨基酸，最好為Gly或Ala，Y為OH。
抑制胰凝蛋白酶的(Ⅰd)化合物可用于治療胰腺炎。(Ⅰb)化合物的酶抑制特征的效力和其它生化參數可通過本領域熟知的標準生化技術很容易測定。該化合物使用的準確劑量范圍取決于所診斷的患者或動物所患疾病的性質和嚴重程度。一般使用的具有有效治療作用的劑量范圍約為0.01-10mg/kg/天。
優選的式Ⅰd化合物與優選的抑制組織蛋白酶G的化合物相同，另外還包括Pg-Phe-［C(O)Gly］Gly-OH,Pg-Val-Pro-Phe-［C(O)Gly］Gly-OH,Pg-Aal-Ala-Phe-［C(O)Gly］Gly-OH,
(在各種情況下pg表示Bz，Boc，4-Cl或4-BzφSACBz，或φSACBz)用作胰蛋白酶抑制劑的式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為K組保護基，(a)p2p3或p2p3pg或(b)p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，優選的保護基是DNS或Ts，(a)p2為D、E或F組α-氨基酸，最好為pro或Ala，p3為F組α-氨基酸，宜為D-構型，最好為D-phe，(b)p2為D或E組α-氨基酸，最好為pro或Ala，p3為C、E或G組α-氨基酸，最好為Ser，p4可被刪除或為E或G組α-氨基酸，最好為phe，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg，R4為C或G組α-氨基酸的殘基，最好為Gly或Ser，R5可被刪除或為D、E或G組α-氨基酸，最好為Gly，Y為OH。
抑制胰蛋白酶的(Ⅰe)化合物可用于治療胰腺炎。在實際應用中，(Ⅰe)化合物的酶抑制特征，即抑制效力和其它生化參數可通過本領域熟知的標準生化技術很容易測定。當然，具體使用的準確劑量范圍取決于所診斷患者或動物所患疾病的性質和嚴重程度。一般使用的具有有效治療效果的劑量范圍約為0.01-10mg/kg天。用于抑制胰蛋白酶的優選化合物與抑制凝血酶的優選化合物相同。
用作C1-酯酶抑制劑的式Ⅰ化合物是下式化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2或p2pg，pg為K組保護基，最好為CBZ，p2為A、B、C、D、E或G組α-氨基酸，最好為Ala，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg，R3為H、C1-7烷基、芐基或苯乙基，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為E組α-氨基酸或被刪除，Y為NHR3或OR3，最好為NH2。
抑制C1-酯酶的(Ⅰg)化合物可用于治療全身性狼瘡、關節炎、自身免疫性溶血性貧血和腎小球性腎炎。(Ⅰg)化合物在實際應用中的酶抑制作用特征，即其效力和其它生化參數可通過本領域熟知的準確生化技術容易地測定。本申請具體使用的準確劑量范圍取決于所診斷患者或動物所患疾病的性質和嚴重程度。一般具有有效治療效果的劑量范圍約為0.01-10mg/kg/天。優選的化合物是CBZ-Ala-(p-gua)-Phe-［C(O)Ala］NH2用作C3-轉化酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，最好為Bz，p2為E或F組α-氨基酸，最好為Ala，p3為E或F組α-氨基酸，最好為Leu，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg，R3為H、C1-7烷基、芐基或苯乙基，最好為H和芐基，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為α-氨基酸或被刪除，最好被刪除，Y為OR3或NHR3，最好為OR3。
式(Ⅰh)所示化合物能夠抑制C3-轉化酶，因而適用于治療全身性狼瘡、關節炎、自身免疫性溶血性貧血以及腎小球性腎炎。借助本領域公知的一般生物化學技術容易確定化合物(Ⅰh)在實際應用中的酶抑制特性的效力和其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用場合而言，可以產生有效的治療效果的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。以選用下列化合物為佳Be-Leu-Ala-Arg［C(O)-Ala］OCH2φ,Bz-Leu-Ala-Arg［C(O)-Ala］OH.
用作尿激酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5YR1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，R1最好為p2p3，但當pg存在時，最好為CBZ，p2為E或G組α-氨基酸，最好為Ala或Gly，p3為B組α-氨基酸，最好為Glu，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg或對一胍基phe(即J-1)，R3為H、C1-6烷基、芐基或苯乙基，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為E組α-氨基酸，最好為Ala，Y為OR3或NHR3，最好為NH2。
優選的尿激酶抑制劑是H-Glu-Gly-Arg［C(O)Ala］AlaNH2,H-Glu-Gly-(p-gua)Phe-［C(O)Ala］AlaNH2,(p-gua)beingpara-guanidino(p-gua)是對一胍基。
式(Ⅰi)所示化合物能夠抑制尿激酶，因而適用于治療細胞生長過度病癥，例如，適用于治療良性前列腺肥大與前列腺癌，適用于治療牛皮癬并且可用作墮胎藥。借助本領域公知的一般生物化學技術容易確定化合物(Ⅰi)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用場合而言，可以產生有效的治療效果的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑的式Ⅰ化合物是下式的化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，最好為DNS，p2為G組α-氨基酸，最好為DNS，p3為B組α-氨基酸，最好為Glu，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg或對一胍基phe(即J-1)，R3為H、C1-6烷基、芐基或苯乙基，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為E組α-氨基酸，最好為Ala，Y為OR3或NHR3，最好為NH2。
優選的化合物是DNS-Glu-Gly-(p-gua)Phe-［C(O)Ala］Ala-NH2,式(Ⅰj)所示化合物能夠抑制纖維蛋白溶酶原激活劑，因而適用于治療細胞生長過度病癥，因此該化合物適用于治療良性前列腺肥大與前列腺癌，適用于治療牛皮癬并且可用作墮胎藥。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰj)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用場合而言，可以產生有效的治療效果的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作精蟲頭粒蛋白抑制劑的式Ⅰ化合物是下式的化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽。
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，最好為Boc，p2為E組α-氨基酸，最好為Leu，p3為E組α-氨基酸，最好為Leu，R2為A或J組α-氨基酸的殘基，最好為Arg或對一胍基phe(即J-1)，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為E組α-氨基酸或可被刪除，最好為Ala，Y為NH2。
優選的化合物是Boc-Leu-(pGgua)Phe-［C(O)Ala］Ala-NH2,式(Ⅰk)所示化合物為精蟲頭粒蛋白抑制劑，由于它們具備防止精液穿透其它可受精卵的特性，因而可被用作抗受精劑。借助本領域公知的一般生物化學技術容易確定化合物(Ⅰk)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的癥狀。就一般目的應用場合而言，可以產生有效的治療效果的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作D-Ala-D-Ala羧肽酶抑制劑的式Ⅰ化合物是下式的化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2或p2pg，pg為K組保護基，最好為Ac，p2為E、C或A組α-氨基酸或Nε-Ac-Lys，最好為Nε-Ac-Lys或Lys，R2為D-Ala的殘基，R3為H、C1-6烷基、芐基或苯乙基，R4為D-Ala的殘基，Y為OR3，最好為OH或OCH3。
優選的化合物是(Nα,ε)-di-Ac-Lys-D-Ala［C(O)-(D)-Ala］OH,(Nα,ε)-di-Ac-Lys-D-Ala［C(O)-(D)-Ala］OMe.
式(Ⅰm)所示化合物是特別適用于抗格蘭氏陰性菌的抗菌劑。借助本領域公知的一般生物化學技術容易確定化合物(Ⅰm)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用場合而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作組織蛋白酶B抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為(a)p2或p2pg，或(b)p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，對p2pg而言，最好為CBZ，對p2p3pg而言，最好為Ac，(a)p2為E和F組α-氨基酸，最好為phe，(b)p2為E和F組α-氨基酸，最好為phe，p3為E和F組α-氨基酸，最好為leu，R2為A或E組α-氨基酸的殘基，或J組的基團或OBzThr，最好為Arg，R4為E組α-氨基酸的殘基，最好為leu，R5為E、F或G組α-氨基酸，最好為Gly，Y為OH。
優選的化合物是Ac-Leu-LeU-Arg-［C(O)-Leu］Gly-OH,CBZ-Phe-Arg［C(O)-Leu］Gly-OH,CBZ-Phe-Thr［C(O)-Leu］Gly-OH.
式(Ⅰn)所示化合物能夠抑制組織蛋白酶B，因此適用于治療細胞生長過度病癥，如適用于治療良性前列腺肥大、前列腺癌、牛皮癬并且可用作墮胎藥。此外，式(Ⅰn)的化合物還可用作牲畜的飼料添加劑。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰn)在實際應用中的酶抑制特性的效力及其它生物化學參數。對于它們的具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作胃蛋白酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，pg最好為Ⅳa，p2為E或F組α-氨基酸，最好為Val，p3為E或F組α-氨基酸或被刪除，最好為Val，R2為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為leu，R4為E，F或G組α-氨基酸的殘基，最好為Gly，R5為E和F組α-氨基酸，最好為Ala，Y為NHCH2(CH3)2或NHCH2CH(CH3)2。
優選的化合物是
Iva-Val-Leu［C(O)Gly］Ala-NHCH2CH2CH(CH3)2,Iva-Val-Val-Leu［C(O)Gly］Ala-N(Me)-Ala-NHCH2CH2CH(CH3)2,Iva-Val-Val-Leu［C(O)Gly］Gly-N(Me)Ala-NHCH2CH2CH(CH3)2,式(Ⅰo)所示化合物能夠抑制胃蛋白酶，因而可以用來在防治潰瘍的過程中產生抗潰瘍效果。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰo)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們的具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0.01-10mg/kg/天。
用作組織蛋白酶D抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，p2為E或F組α-氨基酸，最好為Val，p3為E或F組α-氨基酸，最好為Val，R2為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為phe，R4為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為phe，R5為E或F組α-氨基酸，最好為Ala，Y為NH(CH2)2CH(CH3)2，NHCH2CH(CH3)2或NH2。
優選的化合物是CBZ-Val-Val-Phe-［C(O)Phe］Ala-NH2,CBZ-Val-Val-Phe-［C(O)Phe］Ala-NH(CH2)2CH(CH3)2,CBZ-Val-Val-Phe-［C(O)Phe］Ala-NHCH2CH(CH3)2,作為組織蛋白酶D的抑制劑，式(ⅠP)所示化合物適用于與人體白細胞彈性蛋白酶抑制劑(Ⅰa)相同的目的應用場合，同樣適用作脫髓鞘劑用以防止和阻礙神經組織被損傷。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰp)在實際應用的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用場合而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0。01-10mg/kg/天。
用作腦菲肽酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中，X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，R1最好為p2p3，p2為Gly，p3為F組α-氨基酸或被刪除，最好為Tyr，R2為Gly的殘基，
R4為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為phe，R5可被刪除或為E或F組α-氨基酸，最好為Met，Y為NH2或OH，當Rs為氨基酸時，最好為OH，當R4被刪除時，最好為NH2。
優選的化合物是Tyr-Gly-Gly［C(O)Phe］MetOH.
式(Ⅰq)所示化合物能夠抑制腦菲肽酶，因而可作止痛藥。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰq)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數，對于它們的具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0。01-10mg/kg/天。
用作假單胞菌彈性蛋白酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2或p2pg，pg為K組保護基，最好為MeOSuc，p2為E組α-氨基酸，最好為AlaR2為E或G組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R4為E或F組α-氨基酸的殘基，最好為Ile，R5為E和G組α-氨基酸，最好為Ala，Y為NH2。
優選的化合物是
MeOSuc-Ala-Ala-［C(O)Ile］Ala-NH2,式(Ⅰr)所示化合物能夠抑制假單胞菌彈性蛋白酶，因而可用作抗菌劑，尤其是可用作抗假單胞菌感染的抗菌劑。借助本領域公知的一般生物化學技術容易確定化合物(Ⅰr)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們的具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0。01-10mg/kg/天。
用作亮氨酸氨肽酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物或其水合物、電子等排物或藥用鹽，
式中X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為H，R2為A、B、E、F或J組α-氨基酸的殘基，最好為phe、leu、Glu、Arg或J-1，R4為A、B、C、D、E、F、G或J組α-氨基酸的殘基，最好為Ala，R5為E組α-氨基酸，最好為Ala，Y為NH2優選的化合物是H-Leu［C(O)Ala］AlaNH2.
式(Ⅰs)所示化合物為亮氨酸氨肽酶的抑制劑，因而可適用于作為與其它已知抗癌藥進行協同治療的免疫刺激物。借助本領域公知的一般生物化學技術很容易確定化合物(Ⅰs)在實際應用中的酶抑制特性的效力與其它生物化學參數。對于它們的具體目的應用來說，實際的劑量范圍自然要取決于醫師確診的就醫患者或動物患病的性質與嚴重程度。就一般目的應用而言，可以產生療效的劑量范圍預計約為0。01-10mg/kg/天。
可作為Calpain和組織蛋白酶B抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物其中X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3或p2p3pg，pg為K組保護基，保護基最好為CBZ、BZ或AC，p2為E或F組α-氨基酸，最好為Val、Ile、Ala或pro，p3為B、E或F組α-氨基酸，或者被刪去，p3最好刪去或為Ile，R2為H、E、F、J組α-氨基酸的殘基，萘基、C1-7烷基、芐基、苯乙基或A-SiR7R8R9，R7、R8和R9為C1-10烷基、苯基、芐基或苯乙基，A為C1-6亞烷基，R2最好為環己甲基、萘基、苯基或萘基，R3為C1-6烷基、芐基或苯乙基，最好為C1-6烷基R4為C、E組α-氨基酸的殘基，或為H，R5應刪去，Y為OR3或NHR3。
由于式(Ⅰu)化合物具有抑制CalPain和組織蛋白酶B的作用，式(Ⅰu)化合物可以(a)影響細胞通過細胞外基質的移動性，使該化合物適宜用來治療癌轉移;(b)長期作用調節蛋白質(例如向下調節蛋白激酶C和分解細胞骨胳使對激活小板如(為增強凝塊形成)降解白細胞產生第二作用(用以治療炎癥和免疫疾病，例如關節炎、肺氣腫、多發性硬化和神經狼瘡);(c)有普通的細胞內蛋白水解作用，尤其是對肌細胞，使對局部缺血/再灌注細胞死亡產生第二作用，因此使該化合物適宜用來治療發作和心臟病;和(d)有助于阻滯紅細胞的溶解，使該化合物適宜用來治療與過量溶血例如鐮狀貧血有關的各種疾病并適于腎透析。最終應用的劑量范圍應在約0.01-10mg/kg體重/天范圍內以取得有效的治療效果。
可作為再試驗所需的逆病毒蛋白酶抑制劑的式Ⅰ化合物為下式所示化合物其中X為-C(O)CHR4C(O)R5Y，R1為p2p3p4或p2p3p4pg，pg為K組保護基，最好為Iva，p2為C′、E′、F′或G′組α-氨基酸，最好為Asn、Gln或Ala，p3為C′、E′或G′組α-氨基酸，最好為Asn、Gln或Ser，
p4為C′組α-氨基酸、β-Ala、β-Val，或被刪去，最好為Ser或Thr，R2為F′或E組α-氨基酸的殘基，或為環己甲基，最好為Tyr、phe或CHM，R3為C1-6烷基、芐基或苯乙基，R4為E′組α-氨基酸的殘基，或Val，R5應刪去，Y為OR3或NHR3。
優選的式(Ⅰv)化合物為Thr-Gln-Asn-Tyr-［C(O)Phe］OCH3,Thr-Gln-Asn-Phe-［C(O)Phe］OCH3,Thr-Leu-Asn-Tyr-［C(O)Phe］NH2,Thr-Leu-Asn-Phe-［C(O)Phe］OCH3,Iva-Ser-Asn-Phe-［C(O)Phe］OCH3,Iva-Ser-Asn-Phe-［C(O)Phe］NH2.
在治療逆病毒感染的最終應用中，式(Ⅰv)化合物可按約1-100mg/kg體重/天的劑量給藥，最好靜脈內給藥。
可用本領域已知的類似標準化學方法制備本發明化合物。用下述反應式A和B來說明這些方法
其中Y′為NHR3′、OR3′、pg、烷基、芐基或苯乙基，Y為NHR3或OR3，R3為N、烷基、芐基或苯乙基，R5′為氨基酸的殘基，n為1-4，R1、R2和R4如前所述定義。
反應式B
其中R1、R2、R4、R5和Y的定義如前所述。
為進行上述反應式A的反應，使原料(2)經過步驟(a)反應，用堿(最好為N-甲基嗎啉、三乙胺(TEA)、二異丙基乙胺(DIEA)或其它適宜的胺)對原料陰離子化。最好通過使用過量的胺，在約-15℃-10℃，最好在0℃下攪拌混合物形成陰離子。加入等量的氯甲酸異丁酯并在約-20℃下冷卻，就地生成混合酐(3)。(也可使用等量的其它肽偶聯劑如氰基磷酸二乙酯、DCC、BOp試劑、BOp氯化物代替氯甲酸異丁酯)。向就地活化的中間體(3)中加入等摩爾量的N，O-二甲基羥基胺，生成式(4)二甲基異羥肟酸衍生物(即N-甲基-N-甲氧基酰胺)。該偶聯步驟是在惰性氣氛(氬氣或氮氣)下于無水條件下進行的。
用式(5)的乙酸鋰代烷基酯(alkyllithioacetates)將上述方法得到的式(4)α-羥基-N-甲基-N-甲氧基酰胺酰化。該酰化反應可在標準的酰化條件下進行，例如使酰胺(4)與鋰代烷基衍生物(5)在約-78℃反應約1小時，使得到的混合物溫熱至室溫，然后將該混合物加到稀鹽酸中以停止反應，得到所需的式(6)中間體。使這些羥基中間體進行氧化反應，例如通過采用(1)Swern氧化方法，(2)使用重鉻酸吡啶鎓的改進的Jones反應，(3)三氧化鉻-吡啶鎓配合物，或(4)1，1，1-三乙酸基-2，1-benzoxidol進行反應。
Swern氧化反應通常是通過使約2-10當量的二甲亞砜(DMSO)與約1-6當量的三氟甲基乙酸酐〔(CF3CO)2O〕或草酰氯〔(COCl)2〕反應實現。上述反應物溶于惰性溶劑如二氯甲烷(CH2Cl2)中，所述反應是在惰性氣氛(如氮氣或其它惰性氣體)于無水條件下，在約-80℃至-50℃下進行，就地生成锍加合物，再向其中加入約1當量的式(6)醇。優選的是，將醇溶于惰性溶劑如CH2Cl2或少量DMSO中，將反應混合物加熱至約-50℃(用約10-20分鐘)，再通過加入約3-10當量叔胺(如三乙胺、N-甲基嗎啉等)使反應進行完全。氧化反應進行后，分離出所需的中間體(7)，準備進行下一步反應。
改進的Jones氧化反應一般按下述步驟進行通過將反應物在脫水分子篩粉末(例如磨細的3 分子篩)上接觸使式(6)醇與重鉻酸吡啶鎓反應。所述接觸是在乙酸的存在下，于約0℃-50℃(優選室溫)下進行的。
或者，取1至5當量就地制得的三氧化鉻-吡啶鎓配合物〔即就地制備的Sarett試劑，見Fieser and Fieser“Reagents for Organic Synthesis”Vol，1，PP.145和Sarett等人，J.A.C.S.25，422，(1953)〕，在惰性溶劑(例如CH2Cl2)中，在惰性氣氛下，在無水條件下和在0℃至50℃的溫度下，往該配合物中加入1當量醇(6)，使反應物相互反應約1至15小時，接著分離出所需的產物(7)。
使醇(6)轉化成所需的酮(7)的另一替換方法是使用periodane〔即1，1，1-三乙酸基-2，1-benzoxiodol(見DessMartin，J.Org.Chem，48，4155，(1983)〕的氧化反應。該氧化反應按下述步驟和條件進行使約1當量的醇(6)與懸浮在惰性溶劑(例如二氯甲烷)中的1至5當量的periodane(較好的為1.5當量)在惰性氣氛(較好的為氮氣)中，在無水條件下和0℃至50℃的溫度(較好的為室溫)下相接觸，使反應物相互反應1至48小時。
氧化和分離后，可采用本領域已知的皂化方法制備式(8)酸，例如使酯與氫氧化鋰在二噁烷/水混合溶劑中反應。
可通過采用偶聯劑如氯甲酸異丁酯(及其它上述偶聯劑)，根據本領域已知的標準肽偶聯方法使酸(8)與適宜的胺偶聯，得到式(9)產物。偶聯后，可采用本領域已知的技術選擇性除去氨基保護基，并將酯轉化為酸。
通過與上述相似的酰化和氧化步驟，可將式(4)化合物轉化為所需的丙二酰衍生物(其中n＝0，即R5被刪去)，分別得到化合物(12)和(13)。
或者，可通過反應式B的反應來制備式(16)化合物。該反應式B基本涉及根據R.R.Schmidt和J.Talbiershyl〔Angen.Chem.Im.Ed.Engl.15卷(1976)No.3，171頁〕技術，通過酰化使式(4)異羥肟酸衍生物與β-乙烯基陰離子Synton進行親核取代，包括使β-乙酰基烯胺陰離子(14)(用叔丁基鋰于低于-100℃的溫度處理相應的β-乙酰基烯胺而制得)與異羥肟酸衍生物(4)反應，生成化合物(15)，通過用三氟乙酸和水順序處理該化合物(15)，得到所需的式(16)化合物。
可通過已有的自動化方法例如自動肽合成儀來進行固相連續合成。在該操作中，氨基受到保護的氨基酸的末端羧基連結到樹脂載體上，在所需肽鍵的氨基部位上氨基酸去保護，用堿中和氨基，將所需序列的下一個氨基受到保護的氨基酸與肽鍵偶聯。重復進行去保護、中和和偶聯步驟，直到合成所需的多肽。由此從羧基末端到氨基末端合成了本發明的化合物。氨基受到保護的氨基酸可為通常的氨基酸、其衍生物或其異構體，或其空間群。所用的樹脂載體可為任何用于固相制備多肽領域的常規樹脂。優選的樹脂為用約0.5-約30%二乙烯基苯交聯的聚苯乙烯，該樹脂已經過二苯甲基胺化、氯甲基化或羥甲基化，以提供與原先引進的氨基受到保護的氨基酸生成酰胺或酯的部位。
Bodansky等〔Chem.Ind.(倫敦)38，1957-98(1966)〕描述了一種羥甲基樹脂的實例。Stewart等〔“固相肽合成”，第2版，pierceChemicalCo，Rockford，Illinois(1984)，第二章，54-55頁〕描述了氯甲基和二苯甲基胺樹脂的制備方法。許多這樣的樹脂可從市場買到。在肽的羧基末端需要的氨基受到保護的氨基酸可通過在本領域非常著名的已知標準方法和操作連結到樹脂上。例如，可用Gisin〔HelvChem.Acta，56，1976(1973)〕的方法將氨基受到保護的氨基酸連結到樹脂上。如果需要采用含作為連結部位的二苯甲基胺基團的樹脂，氨基受到保護的氨基酸通過其α-羧酸和樹脂上的氨基基團間的酰胺鍵偶聯到樹脂上。可用下述標準偶聯方法進行偶聯。許多與樹脂相連的氨基酸可從市場上買到。
每個引入多肽序列的氨基酸上的α-氨基保護基可為任何本領域已知的保護基。可以舉出的氨基保護基類型有(1)酰基型保護基如甲酰基、三氟乙酰基、鄰苯二甲酰基、對甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)、苯磺酰基、硝基苯基亞磺酰基、三苯甲基亞磺酰基、鄰硝基苯氧乙酰基和α-氯丁酰;(2)芳族尿烷型保護基如苯甲氧羰基和取代的苯甲氧羰基如對一氯苯甲氧羰基、對一甲氧基苯甲氧羰基、對一硝基苯甲氧羰基、對-溴苯甲氧羰基、1-(對-聯苯基)-1-甲基乙氧羰基、α，α-二甲基-3.5-二甲氧基苯甲氧羰基和二苯甲氧羰基;(3)脂族尿烷型保護基如叔丁氧羰基(Boc)、二異丙基甲氧羰基、異丙氧羰基、乙氧羰基和烯丙氧羰基;(4)環烷基尿烷型保護基如環戊氧羰基、金剛烷氧羰基和環己氧羰基;(5)硫代尿烷型保護基如苯基硫代羰基;(6)烷基型保護基如三苯甲基和芐基;(7)三烷基硅烷型保護基如三甲基硅烷基。優選的α-氨基保護基為叔丁氧羰基(Boc)。Bodansky等在“肽合成實踐”〔SPringer-Verlag，Berlin(1984)，20頁〕中描述了Boc作為氨基酸的α-氨基保護基的用途。
在將氨基受到保護的氨基酸偶聯到樹脂載體之后，可通過任何適宜的方法例如通過采用三氟乙酸、于二氯甲烷中的三氟乙酸或于二噁烷中的HCl將α-氨基保護基除去。去保護是在0℃-室溫的溫度下進行的。可在本領域已知的條件下用其它標準除去試劑來除去特定的氨基保護基團。
在除去并中和α-氨基保護基之后，下一個所需的氨基受到保護的氨基酸通過肽鍵偶聯。這種去保護、中和和偶聯過程重復進行，直至得到所需序列的多肽。此外，還可在與樹脂載附的氨基酸序列偶聯之前通過溶液方法將多氨基酸基團偶聯。
適宜的偶聯劑的選擇和使用是本領域的普通專業人員所熟知的。當所加的氨基酸為Gln、Asn或Arg，特別適宜的偶聯劑為N，N-二環己基碳化二亞胺和1-羥基苯并三唑。采用這些試劑可防止腈和內酰胺的生成。其它適宜的偶聯劑為(1)碳化二亞胺(如N，N-二環己基碳化二亞胺和N-乙基-N′-(ν-二甲氨基丙基碳化二亞胺);(3)乙烯酮亞胺;(4)異噁唑鎓鹽(如N-乙基-5-苯基-異噁唑鎓-3-磺酸鹽;(5)在環上含1-4個氮原子的芳族單環含氮雜環酰胺，如咪唑酰胺、吡唑酰胺和1，2，4-三唑酰胺(可用的特定酰胺包括N，N-羰基二咪唑和N，N-羰基-二-1，2，4-三唑);(6)烷氧基化乙炔，如乙氧基乙炔;(7)能與氨基酸的羧基形成混合酐的試劑(如氯代甲酸乙酯和氯代甲酸異丁酯)或需偶聯的氨基酸的對稱酸酐(如Boc-Ala-O-Ala-Boc);(8)在一個成環氮原子上有羥基的含氮雜環化合物(如N-羥基苯鄰二甲酰亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺和1-羥基苯并三唑)。KaPoor〔J.pharm.Sci，59，1-27(1970)〕描述了其它活性試劑及其在肽偶聯中的用途。一般來說，在本發明中優選的氨基酸偶聯方法中采用對稱酸酐作為偶聯劑。
優選的Gln、Asn和Arg的偶聯方法是使氨基受到保護的氨基酸、其衍生物或異構體與N，N-二環己基碳化二亞胺及1-羥基苯并三唑(1∶1)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中反應，該反應是在樹脂或與樹脂相連結的氨基酸或肽的存在下進行的。對其它氨基酸來說，優選的偶聯方法包括使氨基受到保護的氨基酸、其衍生物或異構體與N，N-二環己基碳化二亞胺在二氯甲烷中反應，生成對稱的酸酐。然后將該對稱酸酐引入其中含有樹脂、與樹脂相連結的氨基酸或肽的固相合成儀中，在DMF、二氯甲烷或DMF∶二氯甲烷(1∶1)介質中進行偶聯。優選的介質為DMF。可用Kaiser等人〔AnalytBiochem.34，595(1970)〕所述的茚三酮實驗來檢測在合成的每一階段偶聯反應是否成功。如果發現偶聯不完全，可重復進行偶聯操作。如果偶聯仍不完全，可用適當的屏蔽劑將去保護的胺屏蔽起來以防止其繼續合成。適宜的屏蔽劑及其用途在本領域是很著名的。適宜的屏蔽劑的實例為乙酐和乙酰咪唑，如Stcwart等〔“固相肽合成”，第二版，perceChemicalCo，Rockforol，I11(1984)，第二章，73頁〕所述。
在得到所需的氨基酸序列之后，將肽從樹脂上脫除。該操作可用本領域中已知的方法進行，如水解樹脂上的酯或酰胺鍵。優選采用于無水氟化氫中的二甲硫、對甲酚、硫代甲酚或苯甲醚溶液從二苯甲基胺樹脂上脫除肽。脫除反應最好在約0℃至室溫的溫度范圍內進行，反應時間最好從約5分鐘到約5小時。
如固相肽合成領域已知的那樣，許多氨基酸都帶有在制備肽時需要保護的側鏈官能團。為這些側鏈官能團選擇并采用適當的保護基團是本領域一般技術人員所能勝任的，而且取決于需保護的氨基酸以及肽中存在的其它保護的氨基酸基團。這種側鏈保護基的選擇是很嚴格的，因為在合成中的去保護和偶聯過程中這種保護基必須不能被除去。例如，當采用Boc為α-氨基保護基時，下述側鏈保護基是適宜的對甲苯磺酰基可用于保護氨基酸如Lys和Arg的側鏈氨基;對甲基芐基、乙酰氨基甲基、芐基或叔丁磺酰基可用于保護氨基酸如半胱氨酸、高半胱氨酸、青霉胺等或其衍生物的側鏈含硫基團;芐基或環己基酯基團可用于保護氨基酸如AsP、Glu的側鏈羧基;芐基醚可用于保護氨基酸如Ser或Thr的側鏈含羥基基團;2-溴代芐氧羰基(2Br-Z)基團可用于保護氨基酸如Tyr的側鏈含羥基基團。根據本領域已知的標準技術加入和除去這些側鏈保護基。優選采用苯甲醚于無水氟化氫(1∶10)中的溶液除去這些側鏈保護基。一般來說，側鏈保護基的去保護在肽鏈合成完成后進行，但也可在其它任何適宜的時候除去這些側鏈保護基。優選在從樹脂上脫除肽的同時除去這些側鏈保護基。
然后用標準技術分離出化合物并提純。所需的氨基酸、其衍生物或其異構體可從市場上得到，也可用本領域的已知技術進行合成。
給出下述具體實施例來說明本發明化合物的制備，但化合物的范圍限于式Ⅰ所定義的化合物。
實施例14-羥基-6-苯基-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-3-氧代-己酸乙酯將2-羥基-4-苯基-3-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕丁酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺(372mg，1.0mmol)于四氫呋喃中的溶液冷卻至-78℃，加入乙酸鋰代乙酯(72mg，3.0mmol)。于-78℃攪拌該溶液1小時，使其溫熱至室溫，攪拌1小時，然后傾入稀HCl。用乙酸乙酯(3×150ml)萃取產物，用NaHCO3洗滌合并的有機萃取液，用Na2SO4干燥，減壓蒸除溶劑。用快速硅膠色譜提純粗產物。
實施例23，4-二氧代-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-6-苯基己酸乙酯向4-羥基-6-苯基-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-3-氧代己酸乙酯(397mg，1.0mmol)于乙腈(15ml)中的溶液加入DessMartinperiodinane(1.27g，3.0mmol)。向該混合物加入三氟乙酸(342mg，3.0mmol)，再攪拌48小時。減壓蒸除溶劑，加入乙酸乙酯(100ml)，然后加入NaHCO3(0.80g)和Na2S2O3(1.41g)的水(25ml)溶液。分離掉有機層，用乙酸乙酯萃取含水相。用Na2S2O3干燥合并的萃取液，減壓蒸除溶劑。用快速硅膠色譜提純產物。
實施例33，4-二氧代-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-6-苯基己酸向3，4-二氧代-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-6-苯基己酸乙酯(400mg，1.0mmol)于二噁烷/H2O(10∶1)中的溶液加入氫氧化鋰(72mg，3.0mmol)。攪拌混合物3小時，減壓蒸除溶劑，粗產物可直接使用而無需提純。
實施例4N-〔3，4-二氧代-5-(((苯基甲氧基)羰基)氨基)-6-苯基己酰基〕甘氨酰胺向3，4-二氧代-5-〔((苯基甲氧基)羰基)氨基〕-6-苯基己酸(370mg，1.0mmol)于二氯甲烷(300ml)中的溶液加入N-甲基嗎啉(0.30g，3.0mmol)。將混合物冷卻至-15℃，加入氯甲酸異丁酯(136mg，1.0mmol)。于-15℃攪拌混合物15分鐘，然后加入N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(194mg，1.0mmol)。于-15℃攪拌混合物1小時，使其溫熱至室溫，攪拌3小時。將反應混合物傾入水(300ml)中，用二氯甲烷(2×150ml)萃取含水相。用Na2SO4干燥合并的有機萃取液，將其體積減至100ml，在硅膠(Zin)上過濾。減壓蒸除溶劑，得到粗產物，再用快速色譜提純。
上面詳細描述了本發明范圍的較寬的和具體的方面，以及完成和使用本發明的方法。此外，盡管所采用的方法是本領域已知的，前述參考文獻所采用的評價化合物生化作用的方法也適用于本發明化合物。
例如，采用發色肽、N-琥珀酰丙氨酰丙胺酰丙氨酰一對-硝基-苯胺、N-甲氧基琥珀酰丙氨酰丙氨酰脯氨酰纈氨酰-對-硝基-苯胺等(這些均可從市場上買到)活體外測定人體彈性蛋白酶。測定緩沖液(pH＝8.0)和測定方法與Lottenberg等人所述的相似。酶從人的痰中提取，但近來已有市售。瞬間抑制劑的動力學特性可用Dixon曲線來測定，其中，緩慢和/或緊密結合的抑制劑特性的數字分析技術由Williams和Morrison改進。
相似地，用相似的分光鏡技術活體外測定其它蛋白酶和抑制劑的作用組織蛋白酶G;纖維蛋白酶;糜蛋白酶;胰蛋白酶;纖維蛋白溶酶;C1-酯酶;尿激酶;纖維蛋白溶酶原活化劑;精蟲頭粒蛋白;β-內酰胺酶;組織蛋白酶B;胃蛋白酶;組織蛋白酶D和亮氨酸氨肽酶。通過采用人體彈性蛋白酶底物和微粒體氨基酞酶的雙估價方法測定假單胞菌屬彈性蛋白酶。血管緊張素Ⅰ轉化酶和腦菲肽酶及其抑制劑的放射量測定是根據Ryan方法并采用從Ventrex Laboratories，Inc買到的氚化了的底物。采用放射免疫測定方法研究血管緊張肽原酶。用Tack等人所述的方法測定C3轉化酶。
通過參照上述技術，采用其它已知技術，而且與那些用于治療上述疾病的已知化合物進行比較，我們相信已有足夠的材料使本領域的普通技術人員能夠實施本發明。當然，在本發明化合物的最終應用時，最好將這些化合物配制成適當的藥物制劑，如用于口服的片劑、膠囊劑或酏劑，或用于腸胃外給藥的無菌溶液或懸浮液。需要治療的病體(動物或人)可按0.01-10mg/kg體重/天的劑量服用本發明化合物。如上所述，劑量將取決于疾病的嚴重程度，病體的重量和本領域的人員的其它因素。
一般將上述化合物配制成下述藥物組合物。
將約10-500ng一種或多種式Ⅰ化合物或其生理上可接受的鹽與生理上可接受的載色劑、載體、賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩定劑、香味劑等混合，制成醫物上普遍采用的單位劑型。在這些組合物或制劑中活性物質的量應在上述適宜劑量的范圍內。
可加到片劑、膠囊劑等中的調節劑的實例為粘合劑如黃蓍樹膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠;賦形劑如微晶纖維素，崩解劑如玉米淀粉、預凝膠化的淀粉、藻酸等;潤滑劑如硬脂酸鎂;增甜劑如蔗糖、乳糖和糖精;香味劑如薄荷、冬青油或櫻桃油。如果單位劑型為膠囊劑，除含上述物質外，還可含液體載體如脂肪油。可采用多種其它物質包衣，或改善劑型的外觀。例如，可用紫膠、糖或這兩者給片劑包衣。糖漿劑或酏劑可含有活性物質、作為增甜劑的蔗糖、作為防腐劑的甲基或丙基對羥基苯甲酸酯、染料和香味劑如櫻桃或橙子香料。
可按照常規的醫藥實踐通過將活性物質溶于或懸浮于賦形劑如注射用水、天然植物油如芝麻油、椰子油、花生油、棉子油等或合成脂肪賦形劑如油酸乙酯等配制成注射用無菌組合物。如果需要，還可加入緩沖液、防腐劑、抗氧化劑等。
上面結合具體的實施方案對本發明進行了描述，但需指出的是本發明是可以進一步修改的。本申請有意包括基本應用本發明的原理而進行的各種改動、使用和改進，也包括那些與本申請公開內容略有背離的改進(差異在與本發明有關的領域中已知的或通常的實踐知識范圍內，或可應用前述基本特征，或在所附權利要求的范圍之內)。
權利要求
1.制備式A和B的化合物及其水合物、等排物或其可作藥用鹽的方法，
其中R1為H，K組的氨基保護基，α-氨基酸，由2-4個α-氨基酸組成的肽，帶有K組保護基的α-氨基酸，或由2-4個α-氨基酸組成的肽，其末端氨基酸帶有K組保護基，R2為α-氨基酸的殘基，-A-SiR7R8R9，C1-10烷基，芳烷基或芳基，R4為α-氨基酸的殘基，R5′為X-氨基酸的殘基，n為1-4，Y為NHR3或OR3，其中R3為H，C1-10烷基，芐基或苯乙基，所說的保護基，α-氨基酸或肽部分選自以下A、B、C、D、E、F、G、J、C′、E′、F′、G′和K各組ALYs和ArgBGlu、AspCSer、Thr、Asn、Cys、His、(3-吡唑)Ala，(4-嘧啶)Ala，及其N-甲基衍生物C′Ser，Thr，Gln，Asn和Cys，及其N-甲基衍生物Dpro，IndEAla，β-Ala，Leu，Lle，Val，n-Val，β-Val，Met，n-Leu及其甲基衍生物E′Leu，Lle，n-Val，Met，n-Leu，CHM及其N-甲基衍生物Fphe，Tyr，O-甲基酪氨基，(3-吡唑)Ala，(4-嘧啶)Ala，Trp，Nal(1)及其N-甲基衍生物F′phe，Tyr，O-甲基酪氨酸，Trp，Nal-(Ⅰ)及其N-甲基衍生物GGly，SarG′GlyJ
K乙酰基(Ac)，琥珀酰基(Suc)，甲氧琥珀酰基(H3COSuc)，苯甲酰基(Bz)，叔丁氧羰基(Boe)，芐酯基(CBZ)，甲苯磺酰基(Ts)，丹酰(DNS)，異戊酰基(Iva)，甲氧琥珀酰基(MeOSuc)，1-金剛烷磺酰基(AdSO2)，1-金剛烷乙酰基(AdAc)，2-羧基苯甲酰基(2-CBZ)，苯乙酰基，叔丁基乙酰基(Tba)，雙[(1-萘基)甲基]乙酰基(BNMA)或K′K′A-Rz，其中A為
R2為含6，10或12個碳原子的芳基，該芳基被獨立選自以下基團的1-3個基團適當取代氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個碳原子的烷基，含1-6個碳原子的烷氧基，羧基，烷基羰基氨基(其中烷基含1-6個碳原子)，5-四唑并，以及含1-15個碳原子的酰基亞磺酰氨基，條件是當酰基亞磺酰氨基含有芳基時，該芳基可進一步被氟、氯、溴、碘或硝基取代，該方法包括(1)當制備式A的化合物時，將下式的化合物
與下列物質進行氧化反應(a)二甲基亞砜與(CF3CO)2O或(COCl)2反應所就地形成的锍加成物，(b)在冰醋酸存在下的吡啶鎓重鉻酸鹽，(c)三氧化鉻-吡啶復合物，或(d)1，1，1-乙酸-2，1-benzoxiodol(2)當制備式B的化合物時，將化合物
與化合物
偶聯，然后除去任何Y′保護基，其中Y′為NHP3′或OR3，其中R3′為保護基、C1-10烷基、芐基或苯乙基。
全文摘要
本發明涉及肽酶底物類似物，其中底物肽斷開裂的酰胺基中的氮原子被H或一個取代的丙二酰部分所代替。這些肽酶底物類似物為多種蛋白酶提供了特定的酶抑制劑，其抑制作用對于多種疾病具有生理效果。
文檔編號C07C223/02GK1041950SQ89107699
公開日1990年5月9日 申請日期1989年10月7日 優先權日1988年10月7日
發明者菲利浦·貝, 米切爾·安吉拉斯特羅, 蘇亞斯·米赫迪 申請人:默里爾多藥物公司