專利名稱：α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的分離方法
技術領域：
本發明涉及以α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的無機酸鹽形式或有機磺酸鹽的形式，在一種有機羧酸中或含有該有機羧酸的一種有機溶劑中，將粗品α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯中與之共存的雜質分離開來的方法。
α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(后文中簡稱為α-APM)是一種以二肽為基礎的甜味劑并為人所熟知。它具有優質的甜味，并且其甜度約為蔗糖的200倍。作為食品甜味劑，對α-APM的需求現已相當廣泛。
α-APM是一種二肽化合物，它是由L-天冬氨酸和L-苯丙氨酸甲酯所構成。關于α-APM的制備，現已披露了各種不同方法。這些方法多數是化學過程，一般是應用帶有一個被護氨基的α-L-天冬氨酸酐作起始物質。
例如，已知可將帶一個被護氨基的L-天冬氨酸酐在適當的溶劑中與L-苯丙氨酸甲酯進行縮合反應，然后用適當方法將該保護基斷開，得到α-APM(USP3786039)。在USP3933781中披露了使用除L-苯丙氨酸甲酯之外的物質制備α-APM的方法。在該方法中，將N-甲酰-L-天冬氨酸酐與L-苯丙氨酸在乙酸中進行縮合反應，然后在鹵化氫存在下進行去甲酰化反應。將所得的中間產物用水、醇和鹵化氫處理，進行酯化。然后以氫鹵酸鹽的形式離析出α-APM。
USP4173562描述了另一種方法。將N-甲酰-L-天冬氨酸酐與L-苯丙氨酸進行縮合，然后同時進行去甲酰化和酯化，制備成α-APM。
USP3962207也提出了一種方法，該方法是使用L-天冬氨酸酐的一種無機酸鹽。將該無機酸鹽于含有強酸、水和甲醇的混合溶劑中與L-苯丙氨酸甲酯進行反應。將α-APM以其強酸鹽的形式從該混合溶劑中離析出來。
但是，在上述每一種方法中，除去生成需要的α-APM之外，不可避免地要生成副產物β-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(后文中簡稱為β-APM)。β-APM沒有甜味，并且顯現一些苦味。所以受到β-APM污染后，使α-APM的商品價值下降。
當把N-酰基特別是N-甲酰基作為保護基時，通常是將該基團與一種強酸接觸而除掉該保護基。
但在這些條件下，α-APM的甲酯基容易發生部分水解。在甲醇存在下，生成α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-甲酯和/或α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸二甲酯副產物，因此要選擇性地單獨得到所需的α-APM是困難的。
另方面，當把芐氧基羰基作為該保護基時，通過催化還原而很容易除掉該保護基，從而可消除甲酯發生水解的問題。因此，已知能夠以高選擇性除掉該保護基。JapanesePatentPublication25537/1982和25538/1982披露了一種方法，是將芐氧羰基天冬氨酸酐與L-苯丙氨酸甲酯反應，將所得N-芐氧羰基-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(后文簡稱為Z-APM)在一種無機酸水溶液存在下進行氫化，將所得反應混合物中和，得到α-APM。但是，因為此方法也使用了該無機酸水溶液來除掉保護基，故而也生成β-APM副產物。所以，α-APM的甲酯基也象除掉N-甲酰基的情況一樣，容易發生水解。在該專利刊物中也描述了在乙酸中的催化還原方法。在催化還原反應完成后，在蒸餾脫除乙酸的步驟中形成二酮哌嗪衍生物，使α-APM的收率下降。這些二酮哌嗪衍生物也沒有甜味，受到它們污染對于α-APM的商品價值也是不利的。
此外，已知的常規分離方法是將α-和β-APM的混合物在水相介質中與β-二羥基苯甲酸接觸。在此方法中，α-APM形成一種微溶性加合物，并且與雜質β-APM分開(JapanesePatentPublication6305/1974)。
雖然此方法可以將α-APM與含量很大的雜質分開，所需用的β-二羥基苯甲酸量與α-和β-APM的量差不多。在此方法中，α-APM的加合物是從稀的水溶液中離析出來，應用有機溶劑和類似試劑來回收β-二羥基苯甲酸，所得的水溶液進一步減壓濃縮。然后將已離析的α-APM從水中重結晶。因此，分離程序很復雜，高價值的α-APM的回收率不高，所以這方法的經濟效果不理想。
USP3798207披露了一種方法，該法是將α-APM與水介質中的鹵化氫接觸，形成只有微溶性的α-APM的氫鹵酸鹽，從而將共同存在的雜質β-APM分離。此方法可達到α-和β-APM的良好分離效果，但是，由于使用了稀的鹵化氫水溶液，α-APM的甲酯基趨向于發生水解。使用過量的鹵化氫可以促使α-APM與雜質的分離效果更好。另方面，此方法的缺點是α-APM氫鹵酸鹽的回收率不高。
如上所述，迄今為止一切已知的α-APM分離方法作為工業生產的分離和純化方法都因具有缺陷而不符合要求。
本發明的目的是提供一種方法，該方法不存在上述常規分離方法的缺點，并且能夠高效地從α-APM與雜質的混合物中分離出α-APM。
本發明的方法包括(1)將粗制α-APM溶解或懸浮于一種有機羧酸或含有該有機羧酸的有機溶劑中，(2)向所得溶液或懸浮液中加入一種無機酸或一種有機磺酸，形成α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽，(3)將α-APM的該種鹽與β-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽分開。
按本發明的方法，是將粗品α-APM在該有機羧酸或含有該有機羧酸的有機溶劑中與該無機酸或該有機磺酸接觸。于是沉淀出僅為微溶性的α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽。另方面，諸如β-APM、α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸和二酮哌嗪衍生物等雜質仍留在溶液中。因此，可以得到單獨的α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽，并達到高收率。
用于本發明的方法的粗品α-APM可以是由任何方法制備而得。將L-苯丙氨酸甲酯或L-苯丙氨酸用作為起始物質，并與N-被護的L-天冬氨酸酐進行縮合反應。然后進行除掉該保護基的反應和酯化反應，從而得到粗制α-APM。通過本發明的方法可將α-APM從粗品α-APM中分離出來。
更具體講，采用芐氧羰基來保護天冬氨酸酐。將所得的芐氧羰基天冬氨酸酐與L-苯丙氨酸甲酯反應。將這樣得到的粗品Z-APM在該有機羧酸中或含有該有機羧酸的有機溶劑中進行氫化。所得的反應混合物可以用本發明的方法處理來分離α-APM，而無需離析出粗制的α-APM。
由上述方法制備的α-APM通常含有雜質例如有β-APM及其水解產物，α-APM的水解產物，二酯化合物以及二酮哌嗪衍生物。
用于本發明的方法的有機羧酸例如包括脂族羧酸，如乙酸和丙酸，最好用乙酸。
可以使用該有機羧酸和其他有機溶劑的混合物，條件是該溶劑不得對于α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽的生成產生不利作用。在含有該有機羧酸的溶劑混合物中可用的溶劑例如有烴類，如甲苯、二甲苯以及己烷;羧酸酯類如乙酸乙酯和乙酸丁酯;醚類如四氫呋喃和二噁烷。
該有機羧酸的用量并無特別限制。優選用量為α-APM重量的3-10倍，這樣有利于操作。
在本發明方法中所用的無機酸例如包括硫酸、硝酸、磷酸、鹽酸及氯化氫氣體，其中以硫酸為優選。對所用各種酸的濃度沒有特別限定。但是，無機酸中水含量多趨向于使酯基水解，同時增大α-APM鹽的溶解度，這樣使α-APM的收率下降。
該無機酸的需用量是足以在溶液中形成α-及β-APM的鹽的理論需用量。該酸的用量一般稍有過量已足。加入該無機酸的溫度沒有特別限定。但溫度過高會使α-APM發生水解，并趨向于降低α-APM鹽的收率。優選溫度一般在10-50℃。
用于本發明方法的有機磺酸例如有脂族及芳族磺酸如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、三氟甲磺酸、萘磺酸，其中以甲磺酸為優選。
該有機磺酸的需用量是足以在溶液中形成α-及β-APM的有機磺酸鹽的理論需用量。該磺酸的用量一般稍有過量已足。加入該有機磺酸的優選溫度通常為10-50℃。
在實施本發明的方法時，將α-APM溶解于或懸浮于該有機羧酸中或含有該有機羧酸的有機溶劑中。向所得溶液或懸浮液加入該無機酸或該有機磺酸之后，α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽即沉淀出來。將沉淀的晶體過濾并洗滌，離析出α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽。
另一種方法，將粗制的Z-APM溶解于或懸浮于該有機羧酸或含有該有機羧酸的溶劑中，并于氫氣氛中在還原催化劑存在下進行攪拌。還原反應完成后，向反應混合物中加入該無機酸或有機磺酸。將分離出來的無機酸鹽形式或有機磺酸鹽形式的α-APM過濾并洗滌，離析出α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽。
關于氫化反應中所用的還原催化劑，可使用鐵族或鉑族金屬。該催化劑可以用整體金屬的形式或者載于載體上的形式。優選的催化劑是以貴金屬為基礎并且載于一種炭載體上，例如鉑炭、鈀炭等等。關于催化劑用量并無特別限定。優選的用量以換算為催化劑金屬計為粗品Z-APM的0.01-1%(重量)。優選的氫化溫度在-10°-80℃范圍，以便使粗品Z-α-APM和產物α-APM穩定。氫化反應亦可在加壓條件下進行，但在常壓該反應已可進行充分。氫化反應的時間因所用溶劑、催化劑以及溫度而各不同。當條件選擇適當情況下，該反應可于1-5小時完成。
利用本發明的方法離析而得的α-APM無機酸鹽或有機磺酸鹽可進一步制備游離的α-APM。將α-APM的無機酸鹽或有機磺酸鹽溶解于水中。向所得溶液中加入堿，將其pH值調節至α-APM的等電點，所加入的堿可以是無機堿，例如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸鈉、氨;可以是有機堿，例如三乙胺和甲基吡啶。通常用這些無機和有機堿進行中和反應。由此很容易得到高純度的α-APM。
按本發明的方法，用簡易的步驟很容易從含有β-APM和其它雜質的粗品α-APM中分離出單獨的α-APM無機酸鹽或有機磺酸鹽。
可以將粗品Z-APM的保護基除掉并達到高收率。只需將該無機酸或有機磺酸加入到該反應混合物中。并不需要從含有β-APM及其它雜質的反應混合物中分離出α-APM。由此而可以離析出單獨的該無機酸鹽或有機酸鹽。此外，按本發明方法的離析過程與常規方法相比，可以達到很高收率。
所以，本發明的方法是有工業實用價值的分離α-APM的方法。
實例后文中以實例詳細闡明本發明實例1向133.2克含有22.1克(0.075摩爾)α-APM、7.4克(0.025摩爾)β-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入10.5克(0.105摩爾)98%硫酸。在同一溫度將此混合物攪拌1小時。過濾出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析出的硫酸鹽晶體為29.6克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為20.8克，這相當于原來α-APM的回收率為94%。α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。
元素分析結果與α-APM的硫酸鹽相吻合。
元素分析(%)C14H20N2O9SCHNS測定值42.725.347.148.16
理論值42.865.147.148.17實例2向133.2克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入10.5克(0.105摩爾)98%硫酸。在同一溫度將此混合物攪拌1小時。過濾出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析出的硫酸鹽晶體為30.9克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為22.9克，相當于原來α-APM的回收率為97.5%。α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。
向178克水中，加入20克該種晶體。加入碳酸氫鈉將所得溶液的pH值調節至5.2，并冷卻至5℃。過濾出沉淀的晶體，用冷水洗滌并干燥。α-APM晶體為18.8克。
旋光角度[α]20D+15.8(C＝4.15N 甲酸)根據高效液相色譜分析得知，所得的晶體是高純度α-APM。
實例3向133.2克含有30.0克(0.10摩爾，按α-APM和β-APM總和計)粗品α-APM(此粗品含有95.6%α-APM和4.1%β-APM雜質)的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入10.5克(0.105摩爾)98%硫酸。在同一溫度將此混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析出的硫酸鹽晶體為38.6克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。以α-APM硫酸鹽計的純度為99.1%，β-APM硫酸鹽的含量為0.5%。收率為97.4%。
元素分析結果與α-APM硫酸鹽吻合。
元素分析(%)C14H20N2O9SCHNS測定值42.765.337.128.16理論值42.865.147.148.17
將20克該晶體加入到178克水中。加入碳酸氫鈉將所得溶液的pH值調節到5.2，并冷卻至5℃。過濾分出沉淀的晶體，用冷水洗滌并干燥。α-APM晶體為18.8克。
旋光角度[α]20D+15.8(C＝4.15N 甲酸)根據高效液相色譜分析結果，這樣得到的晶體為高純度α-APM。
實例4向294克含有30.0克(0.10摩爾，以α-APM及β-APM總和計)與實例3所用者組成相同的粗品α-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.0克(0.105摩爾)35%鹽酸。于相同溫度將混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的鹽酸鹽晶體為32.1克。
用高效液相色譜法分析所得到的晶體。按α-APM的鹽酸鹽計其純度為99.6%，β-APM鹽酸鹽的含量為0.3%。收率為94.9%。
元素分析結果與β-APM鹽酸鹽相吻合。
元素分析(%)C14H19ClN2O5CHNCl測定值50.705.838.3510.53理論值50.845.798.4710.72實例5向133.2克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM，5.9克(0.02摩爾)β-APM和2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.4克(0.114摩爾)的98%硫酸。于同一溫度將此混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的硫酸鹽晶體為30.6克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為22.8克。
元素分析結果與α-APM硫酸鹽相吻合。
原來α-APM的回收率為97.0%。
實例6向235克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM、2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸和0.6克(0.0021摩爾)β-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入98%硫酸11.7克(0.117摩爾)。于同一溫度將該混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的硫酸鹽為29.4克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為21.9克。α-APM∶β-APM的比率為99.5∶0.5。
對于原來α-APM的回收率為93.2%。
實例7向235克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM、2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸、0.6克(0.0021摩爾)β-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸以及0.6克(0.0023摩爾)5-芐基-3，6-二氧哌嗪-2-乙酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.7克(0.117摩爾)98%硫酸。于相同溫度將該混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析出的硫酸鹽晶體為29.0克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為21.4克。
α-APM∶β-APM的比率為99.5∶0.5。
原來α-APM的回收率為91.1%。
實例8向133.2克含有14.7克(0.05摩爾)α-APM、14.7克(0.05摩爾)β-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入5.2克(0.052摩爾)98%硫酸。于同一溫度將該混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的硫酸鹽晶體為17.2克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為12.8克。
α-APM∶β-APM的比率為99.1∶0.9。
原來的α-APM的回收率為87.0%。
實例9按實例2的相同步驟，不同之處是使用丙酸作為該有機羧酸。收得量為30.3克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為22.5克。
對原來α-APM的回收率為95.7%。經元素分析鑒定，該晶體為α-APM的硫酸鹽。
實例10按實例5的相同步驟，不同之處是另外加入133.2克甲苯。收得量為28.5克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為21.2克。
對原來的α-APM的回收率為90.2%。
實例11-15按實例2的相同步驟，不同之處是使用有機羧酸和無機酸，如表1所示。
所得結果示于表1。
對比實例1向500毫升含有5克(0.017摩爾)α-APM、5.0克(0.017摩爾)β-APM的水溶液中，加入6.0克(0.039摩爾)β-二羥基苯甲酸，于室溫攪拌5小時。將該混合物于冰箱中冷藏過夜。過濾出沉淀的晶體并干燥。得到晶體9.3克。用常規方法處理該晶體，得到4.0克游離α-APM。
原來α-APM的回收率為80%。
對比實例2向50毫升1N鹽酸中，于室溫溶解入5.0克(0.017摩爾)α-APM和5.0克(0.017摩爾)β-APM。立即沉淀出晶體。將該混合物于冰箱中冷藏過夜。過濾出沉淀的晶體，得到4.8克α-APM的鹽酸鹽。
將所得的晶體轉化為游離α-APM并進行分析。證明α-APM具有高純度。
對于原來α-APM的回收率為72%。
實例16向133.2克含有22.1克(0.075摩爾)α-APM、7.4克(0.025摩爾)β-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入98%甲磺酸10.6克(0.105摩爾)。于相同溫度將混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的甲磺酸鹽晶體為26.7克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為26.4克。α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。原來的α-APM回收率為90.0%。
元素分析結果與α-APM的甲磺酸鹽相吻合。
元素分析(%)C15H22N2O6SCHNS測定值46.015.737.168.05理論值45.155.687.188.21
實例17向133.2克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入10.6克(0.105摩爾)98%甲磺酸。于同一溫度攪拌該混合物1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析出的甲磺酸鹽晶體為29.8克。用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為22.3克。
α-APM∶β-APM比率為99.0∶1.0。
原來α-APM的回收率為95.0%。
將20克該晶體加入178克水中。加入碳酸氫鈉將所得溶液中和至pH5.6，并冷卻至5℃。過濾出沉淀的晶體，用冷水洗滌并干燥。α-APM晶體為18.7克。
旋光角度[α]20D+15.6(C＝4.15N 甲酸)按高效液相色譜分析結果，所得晶體為高純度α-APM。
實例18向133.2克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.2克(0.02摩爾)β-APM、2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.0克(0.114摩爾)甲磺酸。于同一溫度攪拌該混合物1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。
離析得到的該甲磺酸鹽晶體為27.8克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為20.9克。元素分析結果與α-APM的甲磺酸鹽相吻合。
原來α-APM的回收率為89.0%。
實例19將235克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM、2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸、0.6克(0.0021摩爾)β-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.2克(0.117摩爾)甲磺酸。于同一溫度攪拌混合物1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析得到甲磺酸鹽晶體27.6克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為20.8克。α-APM∶β-APM的比率為99.5∶0.5。
原來α-APM的回收率為88.0%。
實例20向235克含有23.5克(0.08摩爾)α-APM、5.9克(0.02摩爾)β-APM、2.5克(0.0089摩爾)α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸、0.6克(0.0021摩爾)β-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸和0.6克(0.0023摩爾)5-芐基-3，6-二氧哌嗪-2-乙酸的乙酸溶液中，于20-25℃用30分鐘加入11.2克(0.117摩爾)甲磺酸。于同一溫度將該混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的甲磺酸鹽晶體為27.7克。
用高效液相色譜法分析所得到的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為20.8克。
α-APM∶β-APM的比率為99.5∶0.5。
原來α-APM的回收率為88.3%。
實例21按實例17的相同步驟，不同之處是用丙酸替代乙酸。收得量為28.1克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為21.2克。
原來α-APM的回收率為90.2%。
實例22按實例18的相同步驟，不同之處是另外加入133.2克甲苯。收得量為27.6克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM為20.8克。原來α-APM的回收率為88.7%。
實例23-26按實例17的相同步驟，不同之處是應用如表2所示的有機羧酸和有機磺酸。表2中示出所得結果。
實例27向428克含有34.3克(0.08摩爾)Z-α-APM、8.6克(0.02摩爾)Z-β-APM的乙酸溶液中加入2.1克5%鈀炭，并于室溫和常壓進行催化還原反應，歷時2小時。反應完畢后，過濾分出催化劑，用30分鐘向該濾液中加入10.5克(0.105摩爾)98%硫酸。于相同溫度攪拌該混合物1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。離析得到的晶體為29.8克。
用高效液相色譜法分析所得到的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為22.1克。α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。原來α-APM的回收率為94%。
元素分析結果與α-APM的硫酸鹽相吻合。
元素分析(%)C14H20N2O9SCHNS測定值42.765.337.128.16理論值42.865.147.148.17將20克此種晶體加入到180克水中。加入碳酸氫鈉將所得溶液中和至pH＝5.2，同時冷卻至5℃。過濾分出沉淀的晶體，用冷水洗滌并干燥。α-APM晶體為14.2克。
旋光角度[α]20D＝15.8(C＝4.15N 甲酸)根據高效液相色譜分析之結果，所得的晶體為高純度α-APM。
實例28向428克含有34.3克(0.08摩爾)Z-α-APM、8.6克(0.02摩爾)Z-β-APM的乙酸溶液中，加入2.1克5%鈀炭，并于室溫和常壓進行催化還原反應，歷時2小時。反應完畢后，過濾分出催化劑，用30分鐘向該濾液中加入10.6克(0.105摩爾)98%甲磺酸。于相同溫度將該混合物攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所離析的α-APM甲磺酸鹽晶體為28.1克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為17.5克。
α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。
原來α-APM的回收率為88%。
元素分析結果與α-APM的甲磺酸鹽相吻合。
元素分析(%)C15H22N2O8SCHNS測定值46.065.717.178.09理論值46.155.687.188.21實例29應用與實例27相同組成的Z-α-APM和Z-β-APM混合物，按實例27所述步驟進行催化還原反應，不同之處是使用2.1克鉑炭催化劑。
向催化還原反應所得反應混合物中，用30分鐘加入11.0克(0.105摩爾)35%鹽酸，于同一溫度攪拌1小時。過濾分出沉淀的晶體，洗滌并干燥。所得的晶體為23.8克。
用高效液相色譜法分析所得的晶體。轉化為游離胺的α-APM量為21.2克。
α-APM∶β-APM比率為99.5∶0.5。
原來α-APM的回收率為90%。
元素分析結果與α-APM的鹽酸鹽相吻合。
元素分析(%)C14H19ClN2O5CHNCl測定值50.705.838.3510.53理論值50.845.798.4710.72將20克該晶體加入到180克水中。向此溶液中加入28%氨水，將其中和至pH＝5.2，并冷卻至5℃。過濾分出沉淀的晶體，用冷水洗滌并干燥。α-APM晶體為14.0克。
按高效液相色譜分析結果，所得晶體為高純度α-APM。
實例30按實例27所述相同步驟進行催化還原反應，不同之處是用丙酸替代其中的乙酸溶劑。離析出硫酸鹽形式的α-APM。收得量為29.9克。
用高效液相色譜法分析該產物。轉化為游離胺的α-APM量為22.1克。
原來的α-APM的回收率為94%。α-APM∶β-APM的比率為98.8∶1.2。
實例31應用實例27的相同步驟離析出α-APM的硫酸鹽，不同之處是在乙酸中含有20%作為溶劑的甲苯。收得量為30.4克。
應用高效液相色譜法分析該硫酸鹽。轉化為游離胺的α-APM量為22.1克。原來α-APM的回收率為94%。
α-APM∶β-APM的比率為98.5∶1.5。
實例32應用428克含有32.1克(0.075摩爾)Z-α-APM、8.6克(0.02摩爾)Z-β-APM、2.1克(0.005摩爾)N-芐氧基羰基-α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸、0.1克(0.00038摩爾)5-芐基-3，6-二氧哌嗪-2-乙酸的乙酸溶液，實施實例27的相同步驟。完成催化還原反應后，按實例27所述的相同步驟離析出α-APM的硫酸鹽。收得量為27.7克。
用高效液相色譜法分析該硫酸鹽。轉化為游離胺的α-APM量為20.5克。原來α-APM的回收率為93%。
α-APM∶β-APM的比率為99.0∶1.0。
未檢測到α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸和5-芐基-3，6-二氧哌嗪。
實例33-36應用表3所示的其他類型的有機羧酸溶劑和無機酸，實施實例27所述的相同步驟。
表3中示出所得結果。
權利要求
1.一種分離α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的方法，包括將粗品α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯于一種有機羧酸中或含有有機羧酸的溶劑中與一種無機酸或有機磺酸進行接觸，然后離析出呈無機酸鹽或有機磺酸鹽形式的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯。
2.權利要求1的分離方法，其中的粗品α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯是得自粗品N-芐氧基羰基-α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯于該有機羧酸或含有該有機羧酸的溶劑中，在一種氫化催化劑存在下進行氫化反應所得的產物。
全文摘要
一種分離α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的方法，包括將粗品α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯于一種有機羧酸中或含有有機羧酸的溶劑中與一種無機酸或有機磺酸進行接觸，然后離析出呈無機酸鹽或有機磺酸鹽形式的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯。
文檔編號C07K5/075GK1036580SQ8910147
公開日1989年10月25日 申請日期1989年3月13日 優先權日1988年3月14日
發明者加藤敏雄, 樋口長二郎, 大浦剛, 味岡正伸, 山口彰宏 申請人:三井東圧化學株式會社