專利名稱：用于控制生育的多肽化合物及含有它們的免疫原的制備方法
技術領域：
本發明涉及到一些多肽化合物和含有它們的合成免疫原的制備方法，以及它們的用途，尤其是用于制備控制人類或動物生育的疫苗。
本發明尤其涉及到抗人類絨毛膜促性腺激素疫苗和抗促黃體發生激素疫苗的制備。
人類絨毛膜促性腺激素(hCG)為體內的糖蛋白激素之一，這些激素中四個的結構是密切相關的;除了人類絨毛膜促性腺激素外，另外三個為人類促黃體發生激素(hLH)，人類促卵泡激素(hFSH)和人促甲狀腺激素(hTSH)，每一激素都含有兩個由非共價鍵相連的α和β亞單位。四個激素的α亞單位是一樣的，β亞單位也具有很明顯的類似性。具體來說，β-人類絨毛膜促性腺激素和β-人類促黃體發生激素有82%的殘基是相似的，其區別在于羧端的30個氨基酸殘基。
這種序列上的相似性也存在于其它種類的動物，進化過程中高度保留的結構區域不但見于不同物種間的同一激素(LH)，而且也存在于不同的激素之間(CG/LH)。
再者，下面的看法將會被取消;絨毛膜促性腺激素只存在于高度進化的哺乳動物，而其它動物內絨毛膜促性腺激素的功能由促黃體發生激素來完成。
據知，人類絨毛膜促性腺激素在妊娠的發生和發展過程中起著重要的作用。人類絨毛膜促性腺激素的生物活性還不十分清楚，看來它的主要作用是作為受精卵向黃體發生的信號，以便使后者保持甾體激素的合成。人類絨毛膜促性腺激素在發揮生理作用前，必須首先與卵巢中的受體結合，這一結合過程須發生在黃體的水平。
人們早已做過嘗試去抑制人類絨毛膜促性腺激素的活性以提供一個免疫方法來控制生育。基于這一目的，曾建議采用能誘導抗人類絨毛膜促性腺激素抗體形成的疫苗。
法國專利第74，15，780號可能提到了這一點，它描述了一種含有化學修飾的多肽，尤其是化學修飾的人類絨毛膜促性腺激素或β-人類絨毛膜促性腺激素作為抗原的疫苗。
法國專利7523673號也提到了這一點，其中描述了一種含有β-人類絨毛膜促性腺激素C-端片段(包括30到38氨基酸殘基)作為抗原的疫苗。選擇這一多肽片段是為了避免與相關激素的交叉反應，尤其是與人類促黃體發生激素的交叉反應。
VernonStevens在《今日免疫》，第7卷，369頁(1986)中報道了抗人類絨毛膜促性腺激素疫苗的試驗。這篇文章報告了用與白喉類毒素偶聯的β-人類絨毛膜促性腺激素序列109～145作為免疫原進行的開始階段的試驗。然而，作者最后指出有必要發展新的抗人類絨毛膜促性腺激素疫苗。
事實上，這一疫苗的致免疫活性的確較低，不能產生足夠高的抗體效價。
在1985年的一份報告中，世界衛生組織(人類生殖研究發展和研究訓練的特別方案)也得出一結論，有必要去發展新的免疫原。
再者，值得注意的是1986年7月1日到5日在多倫多舉行的國際生殖免疫學學術會義上AushuVashishtha等人提到了一種與破傷風類毒素偶聯的多肽作為免疫原的用途，這一多肽由β-人類絨毛膜促性腺激素的序列21～31和β-人類絨毛膜促性腺激素-酪氨酸序列105～115組成，這兩個序列用二硫鍵來連接。
另外，JeanMichelBiclart等人在分子免疫學，24卷，339頁，1987年上報告了兩個β-人類絨毛膜促性腺激素中兩個免疫決定區域，即區域110～116和區域134～139。
現已發現通過將一個β-人類絨毛膜促性腺激素的強免疫原活性的區域，在β-人類絨毛膜促性腺激素第112個殘基附近，具體來說為106～116，與一個含有賴氨酸殘基的氨基酸序列，例如那些在進化過程中高度保留的α-亞單位中存在的序列相偶聯可以得到很強的免疫原活裕硪環矯媯贍蕓捎謎庵址椒ㄉ桓隹谷死噯奕弈ご儺韻偌に氐囊咼紜 另外，已證明這發現可延伸到其它的糖旦白激素，尤其是在某些動物(貓、狗等)的生殖中起重要作用的促黃體發生激素。
因此，本發明的主題是至少包括如下一些多肽化合物的制備方法-β-絨毛膜促性腺激素或β-促黃體發生激素的序列106～116-含有至少一個賴氨酸殘基的至少有5個氨基酸的序列。
更具體些講，本發明的主題是至少包括如下多肽化合物的制備方法-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少有5個氨基酸的序列。
本發明的另一個主題是至少包括如下多肽化合物的制備方法-β-促黃體發生激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少有5個氨基酸的序列。
β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116為HPLTCDDPRFQ＊。
β-犬促黃體發生激素的序列106-116為QSLACDRPLLP(見WO86/07383)。
含有至少1個賴氨酸殘基的至少有5個氨基酸的序列可認為至少含有1個賴氨酸殘基的α-絨毛膜促性腺激素的一個序列，具體來講是α-人類絨毛膜促性腺激素的序列46～55、α-人類絨毛膜促性腺激素的序列45～49、α-人類絨毛膜促性腺激素的序列43～45或α-人類絨毛膜促性腺激素的序列41～58或59。然而，也可以是至少含有1個賴氨酸殘基的其它序列。尤其是可以為至少含有1個賴氨酸殘基的α-人類絨毛膜促性腺激素的序列的逆序列或者甚至是除賴氨酸殘基外含其它任何氨基酸序列的一個序列。
本發明中多肽化合物的兩個氨基絨序列，可呈線性連接，這種情況下賴氨酸殘基宜離開β-絨毛膜促性腺激素或β-促黃體發生激素的序列106～116至少4個氨基酸。在線性組合中，兩個序列可以以任何形式來連接，即可以為(含賴氨酸的序列)-(β-人絨毛膜促性腺激素的序列106～116)，也可以為(β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116)-(含賴氨酸的序列)。
另外，在線性組合中兩個序列之間可存在1個含有1到10個氨基酸的插入序列或“間隔”。
兩個序列也可以由分子間或甚至分子內化學鍵來連接。因此，兩個序列可由第一天門冬氨酸的-COOH基團與賴氨酸的游離-NH2基團形成的鍵來連接。在有分子內化學鍵的情況下。多肽化合物的結構呈環狀。
為增強免疫原性，最好是將多肽化合物用已知的方法偶聯到一個載體上。
因此，本發明的主題也包括一個將本發明中的多肽化合物偶聯到一個載體上制備合成免疫原的方法。
載體宜為旦白質載體，尤其是1)，類毒素破傷風類毒素，按照Covey等人，美國生殖免疫學和微生物學雜志，第8期，43頁(1985)中的方法制備的組分Ⅱ。
·白喉和百日咳類毒素。
2)抗痢疾疫苗〔抗輪蟲病毒(rotavirus)、霍亂菌、志賀氏菌、大腸桿菌和沙門氏菌〕。
3)被熱和輻照滅活的脊髓灰質炎和黃熱病病毒。
4)P.Falciparus子孢子的膜旦白。
5)鑰孔
血藍旦白(KLM)。
偶聯反應可在縮合劑如戊二醛、碳二亞胺或二迭氮聯苯胺的存在下完成。
戊二醛導致旦白質和至少含1個賴氨酸的序列中的賴氨酸殘基之間的縮合。
碳二亞胺導致旦白質和β-絨毛膜促性腺激素或β-促黃體發生激素的序列106～116中天門冬氨酸殘基之間的縮合(例如在β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116中111和112位有天門冬氨酸)。
用二迭氮聯苯胺進行縮合時多肽內必須有酪氨酸殘基。基于這一目的，最好將酪氨酸加到肽鏈的終端。
合成免疫原也可按照D.Posnett等人(生理化學雜志，263期，17～19頁，1988)的多種抗原肽(MAP)技術來制備。在這種情況下，多肽的合成是在事先制備好的多聚賴氨酸基質上進行的。這一方法產生一個多肽的“聚合物”，使其分子量足夠大而具有免疫原活性。
本發明的另一個主題是抗生育疫苗的制備方法，它包括本發明中的一個多肽化合物，較好的是本發明中的合成免疫原和一個適于藥用的賦形劑。
具體來講，本發明的主題為制備至少含有如下序列的多肽化合物組成的抗人類絨毛膜促性腺激素疫苗的方法。
-β-人類絨毛膜促性腺激素序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少有5個氨基酸的序列。
或一個由偶聯到載體上的本發明的多肽化合物和一個適于制劑的賦形劑構成的合成免疫原。
具體來講，本發明的另一個主題是含有至少如下結構的多肽化合物的抗促黃體發生激素疫苗的制法-β-促黃體發生激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列或偶聯到載體上的這些多肽和一個適于制劑的賦形劑構成的合成免疫原。
連到載體上的合成免疫原在給藥前最好先與免疫輔劑混合。例如，抗原可與用鹽水稀釋的胞壁酰二肽(MDP，N-乙酰基-氨基葡糖-3-基-乙酰基-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺)的正丁酯(胞壁丁酯)混和。然后用等量含有arlacl(賦形劑)的角鯊烯使其乳化。也可以采用其它輔劑如胞壁酰二肽的類似物、細菌提取物如鏈霉菌制劑(OK432)、生物制品(BiostimO1K2)或化學修飾的脂多糖制劑(LPS)、肽多糖(N-Opaca)或旦白多糖(K-Pneumonire)。采用這些賦形劑時，水/油乳劑優于油/水乳劑。
合成免疫原也可以生物降解型顆粒的形式給藥，如微膠囊或微球、脂質體和微粒制劑。這些情況下，免疫原包在顆粒里面。這種方法給藥是為了延長疫苗的作用時間。
疫苗可經非腸道途徑給藥(懸浮形式的疫苗)，也可經口服途徑給藥(顆粒形式的疫苗)。例如，乳劑可通過肌肉注射給到三角肌內。每次注射的免疫原的量可以不同，因為它決定于各個體的免疫反應。實際上，所用劑量為每次注射50到1000微克即1～20微克/公斤體重。注射數次，直至得到足夠高的抗體效價為止;免疫輔劑的注射與上次注射相隔4～6周。第二次注射輔劑5天后檢查抗人類絨毛膜促性腺激素抗體和抗載體旦白抗體的存在，然后于接種后6個月檢查。
本發明中的疫苗也可以含有其它多肽或其它免疫原。
本發明的另一個主題是將本發明中的疫苗用于雌性動物或婦女來控制生育的方法。
本發明的這一主題更具體地講是一個將含有至少以下多肽序列的疫苗用于婦女來控制生育的方法-β-人類絨毛膜促性激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列或一個由偶聯到載體上的上述多肽化合物和一個適于制劑的賦形劑組成的合成免疫原。
此外，至少含有-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列的多肽化合物可用來阻斷人類絨毛膜促性腺激素受體并抑制妊娠的發展。
所以，本發明的主題也包括一個含有至少以下序列的多肽化合物為有效成分的導致流產的組分-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列。
本發明中的多肽結構按照多肽合成的標準方法來前備，在固相或溶液中依次將氨基酸殘基進行縮合(液相中從N一端→C一端，或在固相合成中從C一端→N一端)，N一端和活潑側鏈事先用已知的合適的保護基進行保護。
可以采用不同的縮合方法1.使用碳二亞胺進行縮合〔例如，N-環己基-N′-嗎啡啉乙基碳二亞胺(CMECDI)、二環己基碳二亞胺(DCC)、N-乙基-N′-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亞胺(EDC)〕，反應體系中可以加入催化劑〔如，1-羥基苯并三唑(HOBT)〕或其它縮合劑〔如，N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)〕，也可以不加。
2.采用事先制備的氨基酸對稱酸酐。
3.采用氨基酸活潑酯的形式(如對硝基苯酯，HOBT酯)，并通過DCC進行縮合。
但采用被稱為Merrifield方法的固相合成法較好。
這種方法中采用多孔樹脂。
功能團用不同的方法連接到樹脂上。第1個氨基酸通過它的終端羧基連到樹脂上;氨基同時用能脫除的保護基保護。側鏈也進行保護，其保護基在整個合成過程中不予去除。
連在樹脂上的氨基酸的氨基脫保護后，一方面將待偶合的氨基酸的羧基活化，另一方面完成肽鍵的形成。洗滌并除去反應中的產物后，進行下一步脫保護以接上另一個活化的氨基酸。
最后，在脫除各側鏈保護基的同時或之后，將肽段從樹脂上脫下來。
當氨基的保護基用叔丁氧羰基(t-BOC)保護時，用三氟乙酸脫保護。
在這種情況下，側鏈功能團用對三氟乙酸穩定的保護基保護。如用對甲基苯磺酰基保護精氨酸和組氨酸側鏈，用芐基保護天冬氨酸側鏈，用芐氧羰基(Z)保護賴氨酸側鏈。
整個肽鏈的合成完成后，除掉不同氨基酸上的保護基，尤其是選用低濃度的氟化氫在對甲苯酚/二甲基硫醚混合物中的溶液，采用高濃度的氟化氫將肽段從樹脂上脫下來。
下面實施例對本發明進行進一步的說明Ⅰ-多肽化合物的制備1).多肽(α-hCG的序列46～55)(β-hCG的序列106～116)(TMLVQKNVTSHPLT-CDDPRFQ)的制備合成用ApplieslBiosystemModel410A自動合成儀來完成。
氨基酸的氨基用t-BOC保護，用三氟乙酸脫保護。
最后，每1克含肽鏈樹脂用含6.5毫升二甲硫醚、1克對甲苯酚和1毫升氟化氫的混和物在0℃下反應1小時來脫保護。每1克去保護的含肽鏈樹脂用10毫升氟化氫和1克對甲苯酚將多肽從樹脂上切下來。
所得多肽用排阻色譜法純化。它用酸水解后用交換高效液相層析法分析并用茚三酮檢測，并檢測其序列。
此法所制備的多肽及其它用類似方法制備的多肽列于表Ⅰ
表1多肽含賴氨酸的序列-β-hCG的序列106-116
2)含酪氨酸殘基多肽的制備下面這一多肽是將其酪氨酸殘基用聯苯胺法接到鑰孔
血藍旦白(KLH)上的。這個多肽的羧端以-CONM2的形式保護TMLVQKNVTSHPLTCDDPRFQYG-CONH2。
3).MAP型多肽的制備用Posnett等人(文獻已給出)的方法制備有如下結構式的MAP型多肽
其中R1＝TMLVQKNVTSHPLTCDDPRFQ(擬肽段1)Ⅱ-合成免疫原的制備1.偶聯到破傷風類毒素上擬肽段可用戊二醛或碳二亞胺衍生物作縮合劑將其偶聯到破傷風類毒素上。
a).用戊二醛縮合選用此縮合劑的目的在于聯接賴氨酸殘基的ε-NH2和載體旦白的ε-NH2。
反應路線如下R1-NH2+OCH-(CH2)3-CHO+NH2-R2→R1-N＝CH-(CH2)3-CH＝N-R2多肽與旦白的反應比例為50∶1，采用含0.15M氯化鈉的0.1M碳酸氫鈉緩沖液，pH為8.5。
慢慢滴加戊二醛(用同種緩沖液稀釋成1/10)，到戊二醚/多肽的比例為50為止。
混合物室溫下設置2小時(溶液變黃，但無沉淀產生)。
用葡聚糖G25柱進行排阻層析。
用擬肽段1時獲得多肽/載體旦白的比例為24。
b)用水溶性碳二亞胺衍生物縮合選此縮合試劑的目的在于把某一殘基的游離羧基β-COOH(天冬氨酸111或112位)與載體旦白的-NH2相偶聯。
碳二亞胺衍生物選用CMECDI。
6毫克上述多肽溶于0.5毫升磷酸鹽/氯化鈉緩沖液，往其中加入0.2毫升CMECDI的間甲苯磺酸鹽(10毫克/毫升)，攪拌這一溶液后，加入5毫克載體旦白(6毫克/毫升破傷風類毒素的溶液)。混合物在室溫攪拌2小時。多肽-載體旦白結合物用排阻色譜法純化，用Lowry試驗的旦白質分析法檢測這一結合旦白。多肽摩爾數/載體旦白摩爾數的比值是用酸水解后的氨基酸分析來確定的。
2)偶聯到鑰孔
血藍旦白(KLH)上為能使聯苯胺快速并完全地溶解，在25℃至30℃間緩緩加熱使18.8毫克聯苯胺溶于1.8毫升0.2M的鹽酸，然后冷卻并保持在0℃。
在0℃下往其中滴加200微升亞硝酸鈉溶液(14毫升/200微升)。
此反應在0℃下進行大約3分鐘，所得二迭氮聯苯胺立即使用。
下述二溶液在0℃下混合-10毫克KLH(分子量為6.5×106)，即1.5毫摩爾溶于750微升含0.15M氯化鈉的0.16M硼酸鹽緩沖液，pH＝9.1。(使用前溶掉KLH的不溶部分)。
-3毫摩爾多肽(即8毫克I.1)中說明的多肽)溶于750微升的同種硼酸鹽緩沖溶液，如前所述，pH＝9.1。
慢慢滴加100微升二迭氮聯苯胺。
反應進行1分鐘后，用葡聚糖G25M(Pharmacia)PD10柱柱高50毫米，直徑15毫米)，這一柱子事先用0.15M氯化鈉溶液作為洗脫劑使其平衡。
每一組分收集1毫升溶液，取各組分10微升做茚三酮試驗后，保存組分3和組分4(0.6毫升)。這兩組分中含有聯到KLH上的多肽。用100微升組分做酸水解(6N鹽酸+0.1%苯酚)，在110℃反應18小時。進行氨基酸分析后，計算實際比例，即在本例中R＝1520，相當于3.75毫克/毫升(6毫克/1.6毫升)。
Ⅲ-免疫試驗每一免疫原至少用兩只兔子(FauvedeBourgogne)來做免疫反應實驗。
免疫反應實驗記錄1.1.用于免疫實驗的免疫原的制備相當于200微克多肽的結合旦白(即對擬肽段I來說，用戊二醛偶聯時為133微升多肽/載體旦白溶液，用CMECDI偶聯時為167微升)用500微升pH＝7.5，含0.15M氯化鈉的磷酸鹽緩沖液稀釋。
依注射方式不同，往這兩種旦白溶液中臨時加入500微升Freund的完全或不完全免疫輔劑。
混合物被乳化后，進行注射。
1.2.注射時間表(D代表天數)D.O.取血樣(對照)真皮內注射加完全Freund免疫輔劑的旦白溶液(總體積為1毫升)。
取背部10到20個點進行注射。
D.+10皮下注射加不完全Freancl免疫輔劑的旦白溶液(總體積為1毫升)。
一次注射D.+20皮下注射加不完全Freand免疫輔劑的旦白溶液(總體積為1毫升)。
D.+22取血樣并檢查抗體的存在和效價。
D.+30與D.+20一樣的輔劑劑量。
D.+33與D.+22一樣取樣并檢查。
1.3.免疫反應的結果抗激素及其亞單位的抗體的出現及特異性用放射免疫分析法(RIA)來確定。激素(hCG、hLH)及其亞單位(α-hCG、β-hLH)按P.J.Fracker和J.C.Speck在《生物化學和生物物理研究通訊》80卷.849頁(1978)中給出的方法用放射性元素(NaI125)進行標記。待測試抗血清用不同的標記分子(示蹤物)培養抗血清用適當pH值的緩沖液進行稀釋并加入恒量的示蹤物。如果血清內有抗體，用聚乙二醇就能沉淀出抗原(標記分子)-抗體復合物。沉淀的放射量與抗體量成正比。抗體的特異性用下面的方法檢測將一定量的hCG-I125加到恒定稀釋的抗血清內，而逐漸增加加入的待測分子(hCG，β-hCG，α-hCG，hLH)的量。抗體的特異性則指其分子在最低濃度時能引起可觀的抗原-抗體鍵合取代(兔免疫作用的2個結果)。
下表列出了由D22組所取的免疫血清樣本的結果，這些樣本是用本發明中的多肽化合物連到破傷風類毒素上所得免疫原進行的免疫反應得到的。
表2
α偶合方法＝戊二醛方法β偶合方法＝碳二亞胺法表Ⅱ結果表明，擬肽段1具有很好的結果，對hCG而言每例都得到了有效的免疫反應，而與hLH無交叉作用。
下表給出了抗擬肽段1血清對hCG及其亞單位的平均結合活性(平均+SD)(稀釋1/10后的百分比)。
偶合位置動物數hcG-α結合對象hCGα 10 0 21(12) 32(17)＊β 10 0 21(17) 19(15)＊＊＊t＝1.51＊＊t＝0.18t大于1.18時，P＜0.05有顯著性差異對hCG及其β亞單位而言得到的結合活性表明多肽與α序列偶合方式，對hCG而言，與由擬肽段1得到的抗血清有更高的結合活性。
IV-抗血清的生物活性通過測定對大鼠排卵的抑制活性確定了免抗體對hCG的生物活性有中和作用。
基于此目的，給每組兩只大鼠注射1)免疫前血清2)從免中得到的抗擬肽段1的免疫血清3)生理血清。8小時后給500毫免疫單位(mIU)hCG。4小時后將動物處死，記錄卵巢內有(+)或無(-)充血囊泡出現。
免疫前血清抗血清生理血清卵巢卵巢卵巢121212大鼠1++--++大鼠2++-+++這些實驗結果表明抗擬肽段1的抗血清時卵泡的形成有拮抗作用。
氨基酸符號5AAla丙氨酸CCys半胱氨酸DAsp天門冬氨酸EGlu谷氨酸FPhe苯丙氨酸10GGly甘氨酸HHis組氨酸IIle異亮氨酸KLys賴氨酸LLeu亮氨酸15MMet蛋氨酸NAsn天門冬酰胺PPro脯氨酸QGln谷氨酰胺RArg精氨酸SSer絲氨酸TThr蘇氨酸VVal纈氨酸WTrp色氨酸YTyr酪氨酸
權利要求
1.一個制備至少含有如下序列的多肽化合物的方法-β-絨毛膜促性腺激素或β-促黃體發生激素的序列106～116。-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列，其中肽鏈是用依次縮合不同的氨基酸殘基的方法制備的。
2.權項1中的方法，其中所制備的多肽至少包括-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116。-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列。
3.權項1中的方法，其中所制備的多肽至少包括-β-促黃體發生激素的序列106～116。-含有至少1個賴氨酸殘基的至少5個氨基酸的序列。
4.權項2中的方法，其中所制備的多肽包括-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116。-α-絨毛膜促性腺激素的至少5個氨基酸的序列，其中至少含有一個賴氨酸殘基。
5.權項4中的方法，其中所制備的多肽包括-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116-α-人類絨毛膜促性腺激素的序列46～55。
6.權項4中的方法，其中所制備的多肽包括-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116-α-人類絨毛膜促性腺激素的序列45～49。
7.權項4中的方法，其中所制備的多肽包括-β-人噯廾ご儺韻偌に氐男蛄 06～116-α-人類絨毛膜促性腺激素的序列43～45。
8.權項1～7中的方法，其中制備多肽時是將兩個序列線性結合。
9.權項8中的方法，其中所制備的多肽中，賴氨酸殘基與β-絨毛膜促性腺激素或β-促黃體發生激素的序列106～116相隔至少4個氨基酸。
10.權項8中的方法，其中所制備的多肽包括如下線性結合至少含1個賴氨酸殘基的序列-β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116。
11.權項10中的方法，其中所制備的多肽包括如下線性結合α-人類絨毛膜促性膜激素的序列46～55-β-人類絨毛膜促性膜激素的序列106～116。
12.含有上述任一權項中方法制備的多肽化合物的合成免疫后的制備方法，其中將多肽偶聯到一個載體上。
13.權項12中的方法，其中載體為破傷風類毒素。
14.權項12或13中的方法，其中載體與至少含1個賴氨酸殘基的序列中的賴氨酸相偶聯。
15.權項14中的方法，其中偶聯反應是用戊二醛完成的。
16.權項12或13中的方法，其中載體偶聯到β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116中某一氨基酸上。
17.權項16中的方法，其中將載體偶聯到β-人類絨毛膜促性腺激素的序列106～116中的某一天門冬氨酸殘基上。
18.抗生育疫苗的制備方法，其中將由權項1到11任一權項中的方法制備的多肽或用權項12到17任一權項中的方法制備的合成免疫原制成適于制劑的形式。
19.抗人類絨毛膜促性腺激素疫苗的制備方法，其中是將用權項2以及權項4～11任一權項中的方法制備的多肽或含有這些多肽與載體結合物的合成免疫原制成適于制劑的形式。
20.抗促黃體激素疫苗的制備方法，其中是將用權項3中的方法制備的多肽或含有這一多肽與載體結合物的免疫原制成適于制劑的形式。
全文摘要
本發明的主題是一個至少含有如下序列的多肽化合物的制備方法
文檔編號C07K14/00GK1034208SQ88108010
公開日1989年7月26日 申請日期1988年11月25日 優先權日1987年11月26日
發明者比達特·瓊·米歇爾, 貝萊特·多米尼克, 博恩·克勞德 申請人:萊鋒法默公司