一種高純梔子苷的制備純化方法
【專利摘要】一種高純梔子苷的制備純化方法，即一種以茜草科植物梔子的未成熟果實為原料，采用醇提、濃縮、過濾、大孔樹脂純化、重結晶精制工藝提取制備高純梔子苷的方法。該方法具體如下：采集7月中旬至8月初的未成熟梔子青果，粉碎、烘干，用70~80%乙醇常溫浸泡提取3次，每次1h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，濃縮液用硅藻土過濾，濾液上大孔吸附樹脂吸附，先用水洗去極性雜質，再用20%乙醇洗脫梔子苷，收集20%乙醇洗脫液，減壓濃縮、烘干，得梔子苷粗品，純度可達80%以上，粗品經無水乙醇重結晶進一步純化，最終可制得純度大于95%的高純梔子苷產品。該方法簡單、生產成本低、產品純度高，對環境無污染,具有一定的優勢，適合工業化生產。
【專利說明】一種高純梔子苷的制備純化方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種高純桅子苷的制備純化方法，特別是以茜草科植物桅子的未成熟果實為原料，采用醇提、濃縮、過濾、大孔樹脂純化、重結晶精制工藝提取制備高純桅子苷的方法，屬于天然產物提取分離純化領域。
【背景技術】
[0002]藥食兩用傳統中藥桅子為菌草科植物桅子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實，性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦經，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒、消腫止痛等功效，常用于熱病虛煩不眠、黃疸、淋病、消渴、目赤、咽痛、吐血、血痢疫病、扭傷腫痛等癥。桅子的有效活性成分為環烯醚萜類化合物，包括桅子苷、羥異桅子苷、京尼平苷酸、京尼平-l-β-龍膽二糖苷等，其中含量最高的為桅子苷，中國藥典(2010版，一部)中即以桅子苷為桅子藥材的標志性成分。現代藥理學研究表明，桅子苷具有對肝臟、胰腺細胞的保護作用，可以促進膽汁分泌，以及具有降糖、降壓、解熱、抗菌、抗炎、鎮痛、抗氧化、抗腫瘤、抗細胞凋亡及神經保護等作用。桅子苷也是生產天然色素桅子藍的重要原料。
[0003]研究發現，桅子果實在成熟過程中桅子黃色素的含量逐漸累積，而桅子苷含量逐漸降低，未變黃的桅子青果中桅子苷含量高于成熟的桅子。我們調查研究也發現，江西的桅子在每年7月中旬至8月初果實基本發育至成熟時大小，8月中旬以后進入成熟期開始變黃，至10月下旬變紅，成熟期間果實的粒重和水分沒有較大變化。現有桅子苷的生產都是采用傳統工藝，以成熟的桅子果實為原料，提取完色素后再從苷水中純化桅子苷，工藝復雜，由于成熟果實中色素含量較高，雜質不容易去除，桅子苷很難結晶，用傳統工藝生產的桅子苷純度偏低，雜質較多，直接影響進一步生產的桅子藍的品質。如果以未變黃的桅子青果為原料，因原料中不含桅子黃色素，雜質較少，可直接提取和純化桅子苷，工藝簡單，制得的桅子苷產品純度高，成本低廉，可解決后續生產桅子藍的品質問題，比傳統工藝有明顯優勢。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提出一種高純桅子苷的制備純化方法，即一種采用醇提、濃縮、過濾、大孔樹脂純化、重結晶精制的工藝，從茜草科植物桅子的未成熟果實中提取制備高純度桅子苷的方法。
[0005]本發明的具體方法如下:
(1)提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果干粉，用10~12倍原料量(W/W)的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，用硅藻土過濾澄清，得桅子青果醇提濃縮液。
[0006](2)大孔樹脂純化:將上述過濾澄清的桅子青果醇提濃縮液上D101大孔樹脂柱吸附，控制流速為每小時1~2倍柱體積量，跟蹤檢測流出液的UV-vis吸收曲線，當流出液在238nm處出現明顯桅子苷吸收峰時停止上樣。先用約4倍柱體積量(W/W)的純水洗雜，再用20%乙醇洗脫桅子苷，檢測乙醇洗脫液的UV-vis吸收曲線，至沒有明顯桅子苷吸收峰時停止洗脫。最后用50~95%乙醇和水活化再生樹脂柱，用于下次上樣純化。
[0007](3)濃縮干燥:收集20%乙醇洗脫液，減壓濃縮、真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法檢測其中桅子苷含量，純度達80%以上。
[0008](4)重結晶精制:將上述桅子苷粗品用2~3倍量(W/W)無水乙醇于50~60°C加熱溶解，趁熱過濾，濾液冷卻后于4~5°C靜置析晶，待析晶完全，濾出白色晶體，用少量無水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得純度大于95%的桅子苷粉末產品。
[0009]本發明一種高純桅子苷的制備純化方法的有益效果是:以未變黃的桅子青果為原料，因原料中不含桅子黃色素，雜質較少，可直接提取和純化桅子苷，方法簡單，生產成本低，制得的桅子苷產品純度高，可解決后續生產桅子藍的品質問題，比傳統工藝有明顯優勢；對環境無污染，適合工業化生產。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1桅子苷的結構圖。
[0011]圖2桅子苷理化特征數據表。
【具體實施方式】
[0012]實例1
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉50 g，室溫下用74%乙醇浸泡提取三次，每次大約200 g乙醇，每次浸泡提取1小時。合并乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味，用硅藻土過濾澄清，得桅子青果醇提濃縮液。
[0013]大孔樹脂純化:使用一根裝有50g預處理好的D101大孔吸附樹脂的柱子，將上述醇提濃縮液上樣吸附，控制流速1.0-1.5 mL/min，跟蹤檢測流出液的UV-vis吸收曲線，當流出液在238nm處出現明顯桅子苷吸收峰時停止上樣。用約200 g純水洗雜，洗脫液棄去。再用20%乙醇洗脫桅子苷，跟蹤檢測乙醇洗脫液的UV-vis吸收曲線，至沒有明顯桅子苷吸收峰時停止洗脫，收集20%乙醇洗脫液大約250g。用50~95%乙醇和水活化再生樹脂柱，用于下次上樣純化。
[0014]濃縮干燥:收集的20%乙醇洗脫液減壓濃縮，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法檢測粗品桅子苷含量，純度為82.2%。
[0015]重結晶精制:將上述桅子苷粗品1.0 g，加入2.0 g無水乙醇，于60°C加熱使其完全溶解，趁熱過濾，濾液冷卻至室溫，于4°C冰箱靜置，待析晶完全，濾出白色晶體，用少量無水乙醇淋洗，真空干燥，碾碎，得白色桅子苷粉末產品0.62 g，用HPLC法檢測桅子苷含量為98.1%。
[0016]實例2
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉200 g，室溫下用70%乙醇浸泡提取三次，每次700~800 g乙醇，浸泡提取1小時。合并乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味，用硅藻土過濾澄清，得桅子青果醇提濃縮液。
[0017]大孔樹脂純化:使用一根裝有200 g預處理好的D101大孔吸附樹脂的柱子，將上述醇提濃縮液上樣吸附，控制流速為4~5 mL/min，跟蹤檢測流出液的UV-vis吸收曲線，當流出液在238nm處出現明顯桅子苷吸收峰時停止上樣。用約800 g純水洗雜，洗脫液棄去。再用20%乙醇洗脫桅子苷，跟蹤檢測乙醇洗脫液的UV-vis吸收曲線，至沒有明顯桅子苷吸收峰時停止洗脫，收集20%乙醇洗脫液大約800 go用50~95%乙醇和水活化再生樹脂柱，用于下次上樣純化。
[0018]濃縮干燥:收集的20%乙醇洗脫液減壓濃縮，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法檢測粗品桅子苷含量，純度為84.3%。
[0019]重結晶精制:將上述桅子苷粗品約5.0 g，加入12.0 g無水乙醇，于60°C加熱使其完全溶解，趁熱過濾，濾液冷卻至室溫，于4°C冰箱靜置，待析晶完全，濾出白色晶體，用少量無水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色桅子苷產品2.66 g，用HPLC法檢測桅子苷含量為97.4%。
[0020]實例3
提取:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干。取桅子青果果粉I kg，室溫下用80%乙醇浸泡提取三次，每次大約4 kg乙醇，浸泡提取I小時。合并乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味，用硅藻土過濾澄清，得桅子青果醇提濃縮液。
[0021]大孔樹脂純化:使用一根裝有500 g預處理好的DlOl大孔吸附樹脂的柱子，將上述醇提濃縮液上樣吸附，控制流速為10~12 mL/min，跟蹤檢測流出液的UV-vis吸收曲線，當流出液在238nm處出現明顯桅子苷吸收峰時停止上樣。用約4 kg純水洗雜，洗脫液棄去。再用20%乙醇洗脫桅子苷，跟蹤檢測乙醇洗脫液的UV-vis吸收曲線，至沒有明顯桅子苷吸收峰時停止洗脫，收集20%乙醇洗脫液大約2 kg ο用50~95%乙醇和水活化再生樹脂柱，用于下次上樣純化。
[0022]濃縮干燥:收集的20%乙醇洗脫液減壓濃縮，真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法檢測粗品桅子苷含量，純度為85.5%。
[0023]重結晶精制:將上述桅子苷粗品約10.0 g，加入20.0 g無水乙醇，于55°C加熱使其完全溶解，趁熱過濾，濾液冷卻至室溫，于4°C冰箱靜置，待析晶完全，過濾，得白色晶體，用少量無水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色桅子苷產品6.17 g，用HPLC法檢測桅子苷含量為98.6%ο
【權利要求】
1.一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟: (O原料:采集7月中旬至8月初的未成熟桅子青果，粉碎成粗粉，烘干； (2)提取:用10~12倍原料量(W/W)的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次I小時，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，用硅藻土過濾澄清，得桅子青果醇提濃縮液； (3)大孔樹脂純化:將上述過濾澄清的桅子青果醇提濃縮液上DlOl大孔樹脂柱吸附，控制流速為每小時1~2倍柱體積量，跟蹤檢測流出液的UV-vis吸收曲線，當流出液在238nm處出現明顯桅子苷吸收峰時停止上樣。先用約4倍柱體積量(W/W)的純水洗雜，再用20%乙醇洗脫桅子苷，檢測乙醇洗脫液的UV-vis吸收曲線，至沒有明顯桅子苷吸收峰時停止洗脫。最后用50~95%乙醇和水活化再生樹脂柱，用于下次上樣純化； (4)濃縮干燥:收集20%乙醇洗脫液，減壓濃縮、真空干燥得桅子苷粗品，HPLC法檢測其中桅子苷含量，純度達80%以上； (5)重結晶精制:將上述桅子苷粗品用2~3倍量(W/W)無水乙醇于50~60°C加熱溶解，趁熱過濾，濾液冷卻后于4~5°C靜置析晶，待析晶完全，濾出白色晶體，用少量無水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得純度大于95%的桅子苷粉末產品。
2.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于原料為生長至7-8月份的未成熟桅子果實，果皮顏色為青色，果仁未變黃。
3.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于提取溶劑為70-80%乙醇，用量為原料的10~12倍量(W/W)。
4.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于純化所用大孔樹脂為DlOl或同類型大孔吸附樹脂。
5.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于純化時上樣終點為樹脂柱流出液檢出桅子苷。
6.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于純化時用水洗脫雜質，水的用量不少于4倍樹脂量。
7.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于純化時用20%乙醇洗脫桅子苷。
8.根據權利要求1所述一種高純桅子苷的制備純化方法，其特征在于純化時用無水乙醇為重結晶溶劑，用量為桅子苷粗品的2~3倍量。
【文檔編號】C07H17/04GK104497076SQ201410614395
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月5日 優先權日:2014年11月5日
【發明者】王國艷, 張保霞, 林曉鋒, 唐婷 申請人:潛江市綠海寶生物技術有限公司