一種反式草木樨苷的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種化合物的制備方法，具體來說公開了一種從大葉紫珠中制備反式草木樨苷的方法；該方法依次利用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠SephadexLH-20柱層析、反相硅膠柱層析的方法從大葉紫珠葉中提取反式草木樨苷；本發明工藝簡單,周期短，得率高，純化效率高，制備反式草木樨苷含量可達到90%-99.9%。
【專利說明】一種反式草木樨苷的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于化學醫藥領域，涉及化學領域化合物的提取制備方法，具體涉及一種從大葉紫珠葉子中制備反式草木樨苷的方法。
【背景技術】
[0002]大葉紫珠Callicarpa macrophylla Vahl為馬鞭草科紫珠屬植物的干燥葉或帶葉嫩枝，是2010年版中國藥典I部新增品種，性平，歸肝、腎、胃經，具有散瘀止血，消腫止痛之效；常用于咯血、吐血、便血、外傷出血、跌打腫痛。目前關于大葉紫珠的成分研究報道較少,主要為酚酸類、黃酮類、萜類和留醇類化合物。
[0003]反式草木樨苷(trans-Mel1tosid-e)為我公司首次從大葉紫珠中分離得到一個酚酸類化合物。其分子式為C15H1808，其結構見圖1，反式草木樨苷具有顯著的抗氧化及抑制細胞中自發性彈性蛋白酶釋放的藥理活性，具有很好的開發前景。目前關于反式草木樨苷的研究報道較少，尚未有一種適合產業化生產同時制備高純度反式草木樨苷的工藝路線披露。市場上反式草木樨苷的產量少，得率低，難以滿足研發需求，嚴重限制其深入研究。本發明利用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱層析、反相硅膠柱層析從大葉紫珠的葉子中制備反式草木樨苷，工藝簡單，得率高，周期短，分離效果好。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種制備反式草木樨苷的方法，本發明方法不僅操作工藝簡單，得率高，利用本發明可在一個工藝流程中制備得到純度達到90%以上的反式草木樨苷。
[0005]為了解決上述問題，本發明提供一種制備反式草木樨苷的方法，依次以:用硅膠柱進行層析；用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱進行層析；用反相硅膠柱進行層析的方法從大葉紫珠葉子中提取反式草木樨苷。
[0006]上述制備反式草木樨苷的方法具體包括以下步驟:
a:粉碎大葉紫珠，以含水甲醇作為提取溶劑進行提取處理，將提取處理所得提取液減壓濃縮，得到甲醇提取物浸膏。
[0007]b:將步驟a獲得的甲醇提取物浸膏以正丁醇為萃取劑進行萃取處理，合并萃取液，減壓濃縮得到正丁醇部位。
[0008]c:將步驟b獲得的正丁醇部位提取物以硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到反式草木樨苷粗品。
[0009]d:將步驟c獲得的反式草木樨苷粗品以葡聚糖凝膠S印hadex LH-20柱進行層析處理，收集，檢測，合并，濃縮，得到含反式草木樨苷的洗脫液。
[0010]e:將步驟d獲得的含反式草木樨苷的洗脫液以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測，合并，濃縮洗脫液，干燥后得到反式草木樨苷純品。
[0011]進一步的改進是:步驟a中所述含水甲醇的提取溶劑，其質量百分比濃度為30%-99.9%ο
[0012]進一步的改進是:步驟a中所述含水甲醇的提取溶劑，其質量百分比濃度優選50%-70%。
[0013]進一步的改進是:步驟a中所述以含水甲醇為提取溶劑進行的提取處理，采用浸泡或滲漉或加熱的回流方式。
[0014]進一步的改進是:步驟b中所述萃取處理中正丁醇和甲醇提取物浸膏比例為(1-3):1 (v/v)0
[0015]進一步的改進是:步驟b中所述以正丁醇為萃取劑進行萃取處理，萃取次數為3-5次。
[0016]進一步的改進是:步驟c中所述以硅膠柱進行層析處理的硅膠柱，其硅膠目數為100-400 目。
[0017]進一步的改進是:步驟c中所述以硅膠柱進行層析處理的硅膠柱，其層析柱徑高比為 1:10-1:18ο
[0018]進一步的改進是:步驟c所述以硅膠柱進行的層析處理，包括以體積比10:1的醋酸乙酯-甲醇至以體積比25:5:1的醋酸乙酯-甲醇-水進行梯度洗脫處理。
[0019]更進一步的改進是:步驟c所述以硅膠柱進行的層析處理，還包括以體積比5:1的氯仿-甲醇至以體積比為25:5:1的氯仿-甲醇-水進行梯度洗脫處理。
[0020]進一步的改進是:步驟d中將步驟c獲得的所述反式草木樨苷粗品溶于含水乙醇溶液，以葡聚糖凝膠S印hadex LH-20柱進行層析處理。
[0021]更進一步的改進是:所述含水乙醇溶液的質量百分比濃度為1%-99.9%。
[0022]更進一步的改進是:所述含水乙醇溶液的質量百分比濃度優選50%_70%。
[0023]進一步的改進是:步驟d中所述葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱的徑高比為1:5-1:20o
[0024]更進一步的改進是:步驟d中所述葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱的徑高比優選1:10-1:15o
[0025]進一步的改進是:步驟d中所述以葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱進行的層析處理，以百分比濃度為50%_70%的乙醇溶液作為洗脫劑。
[0026]進一步的改進是:步驟e中所述反相硅膠柱為C18為載體的反相柱，所述反相柱為預裝柱或DAC準備柱。
[0027]進一步的改進是:步驟e中所述以反相硅膠柱進行的層析處理，以含水的甲醇溶液或含水的乙腈溶液為洗脫劑。
[0028]更進一步的改進是:所述含水的甲醇溶液的質量百分比濃度為20%_50%，或含水的乙腈溶液的質量百分比濃度為15%-45%。
[0029]更進一步的改進是:所述含水的乙腈溶液的質量百分比濃度優選15%_40%。
[0030]與現有技術相比，本發明的技術效果是:本發明所公開的從大葉紫珠中制備反式草木樨苷的方法，工藝簡單，得率高，專屬性，強除雜質和色素效果佳。使用硅膠柱層析，周期短，分離效果好，價格低廉。使用葡聚糖凝膠S印hadex LH-20作為分離材料，有較好的吸附性能和分離效果，操作簡便，經濟，易洗脫再生，可反復利用。應用本發明，制備反式草木樨苷含量可達到90%-99.9%，可得到公斤級的反式草木樨苷，滿足產業化生產。
[0031]
【專利附圖】
【附圖說明】
[0032]圖1是反式草木樨苷的分子結構圖；
圖2是本發明的反式草木樨苷樣品純度檢測色譜圖。
[0033]
【具體實施方式】
[0034]下面通過具體實施例對本發明進行進一步說明:
具體實施例一:
稱取大葉紫珠葉10 kg，粉碎過20目篩，裝入提取罐中，用20倍量(重量體積比)質量百分比濃度為70%的甲醇溶液滲漉提取，滲漉液減壓濃縮得到甲醇提取物浸膏；
將甲醇提取物浸膏用正丁醇萃取3次，每次正丁醇的用量與甲醇提取物浸膏比例為3:1 (v/v)，合并萃取液，減壓濃縮得到正丁醇部位；
正丁醇部位上樣至填料為100-200目的常壓硅膠柱，徑高比為1:10，用氯仿-甲醇(5:1)至氯仿-甲醇-水(25:5:1)梯度洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，濃縮至干，得到反式草木樨苷粗品102.8 g；
反式草木樨苷粗品用500mL 60%乙醇溶解后，再上樣至葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，葡聚糖凝膠S印hadex LH-20柱徑高比為1:10，以質量百分比濃度為70%乙醇溶液洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，減壓濃縮至干，得35.2 g。
[0035]用300 mL 10% 乙腈溶解后，將其上樣至 C18 柱(100 mmX250 mm，50-70 μπι)，分別用質量百分比濃度為15%乙腈溶液20 L、20%乙腈溶液50 L、25%乙腈溶液100 L洗脫，高效液相檢測，合并目標流分，減壓回收溶劑至干，60°C真空干燥，可得反式草木樨苷12.43g，純度為91.6%。
[0036]具體實施例二:
稱取120 kg大葉紫珠葉，粉碎過20目篩，用質量百分比濃度為50 %的甲醇溶液浸泡提取3次，每次15倍量(重量體積比)，每次12 h，合并提取液，過濾，減壓濃縮得到甲醇提取物浸膏；
將甲醇提取物浸膏用正丁醇萃取4次，每次正丁醇的用量與甲醇提取物浸膏比例為1:1 (v/v),合并萃取液，減壓濃縮得到正丁醇部位；
正丁醇部提取物上樣至填料為200-300目的常壓硅膠柱，徑高比為1:15，用醋酸乙酯-甲醇的體積比(10:1)至醋酸乙酯-甲醇-水的體積比(25:5:1)梯度洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，濃縮至干，得到反式草木樨苷粗品1303.6 g。
[0037]得到的反式草木樨苷粗品用70%乙醇溶解，將其上樣至葡聚糖凝膠S印hadexLH-20柱，徑高比為1:12，50%乙醇溶液(質量百分比濃度)洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，減壓濃縮至干，得408.7 g。
[0038]用12%甲醇溶解后，將其上樣至C18柱(200 mmX 250 mm，50-70 μ m)柱層析，分別用質量百分比濃度為20%甲醇和40%甲醇洗脫，高效液相檢測，合并，得到含反式草木樨苷流分，減壓濃縮至干，得167.4g。用8%乙腈溶解后，將其上樣至C18柱(200 mmX250mm, 50-70μπι)，分別用質量百分比濃度為20%乙腈和40%乙腈洗脫，液相跟蹤檢測，合并目標流分，減壓回收溶劑至干，60°C真空干燥，可得反式草木樨苷152.34 g，純度為98.9%。
[0039]具體實施例三:
稱取300 kg大葉紫珠葉，粉碎過20目篩，用質量百分濃度為90%的甲醇溶液加熱回流提取2次，每次15倍量(重量體積比)，每次2 h，合并提取液，過濾，減壓濃縮得到甲醇提取物浸膏；
然后將甲醇提取物浸膏用正丁醇萃取5次，每次正丁醇的用量與甲醇提取物浸膏比例為2:1 (v/v),合并萃取液，減壓濃縮得到正丁醇部位。
[0040]正丁醇部提取物上樣至填料為300-400目的常壓硅膠柱，徑高比為1:18，首先用醋酸乙酯-甲醇的體積比(10:1)至醋酸乙酯-甲醇-水的體積比(25:5:1)梯度洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，濃縮，上樣至填料為300-400目的常壓硅膠柱，徑高比為1:18，用氯仿-甲醇(5:1)至氯仿-甲醇-水(25:5:1)梯度洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，減壓濃縮至干，得到反式草木樨苷粗品2932.6g。
[0041]將得到的反式草木樨苷粗品用質量百分比濃度為50%乙醇溶解，將其上樣至葡聚糖凝膠S印hadex LH-20柱，徑高比為1:15，質量百分濃度為質量百分比濃度為60 %乙醇溶液洗脫，高效液相檢測，收集反式草木樨苷高濃度流分段，減壓濃縮至干，得1033.1 g。
[0042]用13%甲醇溶液溶解后，將其上樣至C18柱(500 mmX800 mm, 50-70 μ m)柱層析，分別用質量百分比濃度為23%甲醇和42%甲醇洗脫，高效液相檢測，合并，得到含反式草木樨苷流分，減壓濃縮至干，得到405.7 g;用10%乙腈溶解后，將其上樣至C18柱(500 mmX800mm, 50-70 μ m)，分別用質量百分比濃度為20 %乙腈和40 %乙腈洗脫，液相跟蹤檢測，合并目標流分，減壓回收溶劑至干，60°C真空干燥，可得反式草木樨苷359.41 g，純度為99.4%。
[0043]以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，本發明不受限于上述實施例的限制，凡是依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何細微修改、等同變化與修飾，仍屬于本發明的技術方案的范圍內。本發明的保護范圍僅由權力要求書所界定。
【權利要求】
1.一種制備反式草木樨苷的方法，依次以:用硅膠柱進行層析；用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱進行層析；用反相硅膠柱進行層析的方法從大葉紫珠葉子中提取反式草木樨苷。
2.一種如權利要求1所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于具體包括以下步驟: a:粉碎大葉紫珠，以含水甲醇作為提取溶劑進行提取處理，將提取處理所得提取液減壓濃縮，得到甲醇提取物浸膏； b:將步驟a獲得的甲醇提取物浸膏以正丁醇為萃取劑進行萃取處理，合并萃取液，減壓濃縮得到正丁醇部位； c:將步驟b獲得的正丁醇部位提取物以硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到反式草木樨苷粗品； d:將步驟c獲得的反式草木樨苷粗品以葡聚糖凝膠S^hadex LH-20柱進行層析處理，收集，檢測，合并，濃縮，得到含反式草木樨苷的洗脫液； e:將步驟d獲得的含反式草木樨苷的洗脫液以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測，合并，濃縮洗脫液，干燥后得到反式草木樨苷純品。
3.—種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟a中所述含水甲醇的提取溶劑，其質量百分比濃度為30%-99.9%。
4.一種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟a中所述含水甲醇的提取溶劑，其質量百分比濃度為50%-70%。
5.一種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟a中所述以含水甲醇為提取溶劑進行的提取處理，采用浸泡或滲漉或加熱的回流方式。
6.一種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟b中所述萃取處理中正丁醇和甲醇提取物浸膏比例為(1-3):1 (v/v)0
7.—種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟b中所述以正丁醇為萃取劑進行萃取處理，萃取次數為3-5次。
8.—種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟c中所述以硅膠柱進行層析處理的硅膠柱，其硅膠目數為100-400目。
9.一種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟c中所述以硅膠柱進行層析處理的硅膠柱，其層析柱徑高比為1:10-1:18。
10.一種如權利要求2所述的制備反式草木樨苷的方法，其特征在于步驟C所述以硅膠柱進行的層析處理，包括以體積比10:1的醋酸乙酯-甲醇至以體積比25:5:1的醋酸乙酯-甲醇-水進行梯度洗脫處理。
【文檔編號】C07H15/203GK104356181SQ201410566998
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月23日 優先權日:2014年10月23日
【發明者】顧正兵 申請人:上海永恒生物科技有限公司