一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制多肽及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制多肽及其制備方法、應(yīng)用，本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及多肽1化合物，能治療糖尿病。所述的多肽1序列為MEPSSKKLTGIFAGGSVGGMIGS。所述多肽1的制備方法，采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，可共價(jià)連接一個(gè)佐劑，佐劑是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽1在治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。多肽1可通過多種給藥方式治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發(fā)明中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抑制多肽1，可以靶向抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白，達(dá)到預(yù)防或治療糖尿病的效果。
【專利說明】一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制多肽及其制備方法、應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于治療糖尿病的多肽化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，是由于胰島素不足或胰島素的細(xì)胞 代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合癥。近年來(lái)，糖尿病患者 的人數(shù)逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數(shù)占糖尿病 總?cè)藬?shù)的85-90%，嚴(yán)重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并發(fā)癥，例如：糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病變、高血壓等。
[0003]目前，大多數(shù)患者通過口服降糖藥物來(lái)幫助控制體內(nèi)血糖，或調(diào)節(jié)胰島素分泌等， 很多患者最終仍然要使用胰島素治療。
[0004] 葡萄糖的代謝取決于細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，然而，葡萄糖無(wú)法自由通過細(xì)胞膜脂 質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝入需要借助細(xì)胞膜上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（glucose transporters)簡(jiǎn)稱葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體（GLUT)轉(zhuǎn)運(yùn)功能才能得以實(shí)現(xiàn)。
[0005] 抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)功能就可以抑制體內(nèi)葡萄糖的攝入，緩解體內(nèi)高血糖的癥 狀，因此，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)抑制認(rèn)為是治療糖尿病的靶點(diǎn)。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑問世，用于治療糖尿病。
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有降血糖的藥物的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種多肽1化合物，能有效治 療糖尿病。
[0007] 技術(shù)方案
[0008] 一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制多肽1，其序列為MEPSSKKLTGIFAGGSVGGMIGS。所述多肽 1的制備方法，其特征在于：采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，可共價(jià)連接一個(gè)佐劑，佐 劑是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽1在治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥 中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性 病變。多肽1可通過多種給藥方式治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈 注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0009]有益結(jié)果：
[0010] 本發(fā)明中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抑制多肽1，可以靶向抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白，達(dá)到 預(yù)防或治療糖尿病的效果。更優(yōu)選是治療糖尿病和/或糖尿病并發(fā)癥藥物中的用途。所 述的糖尿病包括I型糖尿病和π型糖尿??；所述的糖尿病并發(fā)癥包括但不限于：糖尿病腎 病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變等。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1
[0012] 多肽的化學(xué)合成方法
[0013] 多肽1用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備。合成反應(yīng)按照多肽1序列從C端向N 端進(jìn)行，Rink介質(zhì)（可在AdvancedChemTech公司購(gòu)得）上有自由氨基。每一步連接過 程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍于介質(zhì)上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和 Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，都用一個(gè)吡啶/醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5) 的混合物來(lái)封閉未連接的自由氨基，封閉反應(yīng)10分鐘。每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，下一 個(gè)氨基酸連接之前，都要把介質(zhì)上的Fmoc-基團(tuán)去掉，去Fmoc-基團(tuán)使用含20 %哌啶的二甲 基甲酰胺，需15分鐘。最后，當(dāng)所有氨基酸殘基順序連接之后，多肽1用98%三氟乙酸從介 質(zhì)上切割下來(lái)，切割在室溫下進(jìn)行2小時(shí)。
[0014] 應(yīng)用上述化學(xué)條件可合成并獲得多肽1，序列為MEPSSKKLTGIFAGGSVGGMIGS，該序 列為全新序列。
[0015] 實(shí)施例2
[0016] 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抑制多肽1的體外細(xì)胞活性測(cè)定
[0017] 采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的胰島瘤細(xì)胞（INS-1細(xì)胞），以I.OX105加入96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽(yáng)性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn) 體蛋白抑制多肽1 ;空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT， 作用4h后，加入DMS0,孵育30min，在酶標(biāo)儀570nm處測(cè)定吸光度A值，按公式細(xì)胞生長(zhǎng)增殖 率=(實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值-l)X100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的EC50為7.13nmOl/ L0
[0018] 實(shí)施例3
[0019] 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抑制多肽1的體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)
[0020] 昆明小鼠，高脂高糖喂養(yǎng)至體重18?22g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射鏈脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(l%的檸檬酸鹽緩沖液溶解配制）。1周后小鼠尾靜 脈采血測(cè)血糖（BS)，BS高于16mmol/L為造模成功。造模后將小鼠分為3組，每組10只，糖 尿病模型組（DM組）：給予等量的PBS緩沖液皮下注射；對(duì)照組（拜糖平）：20μg/kg皮下 注射給藥（溶于0.lmol/LPBS緩沖液），一天兩次，連續(xù)15d;樣品組（葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白 抑制多肽1):同對(duì)照組；另取10只正常小鼠做為空白組。用藥后第3d、9d、15d于尾靜脈取 血快速測(cè)量血糖。15d之后，在停藥1周后，禁食不禁水16小時(shí)進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)。用 25%葡萄糖溶液（2g/kg)灌胃，灌胃后0、30、60、120分鐘尾靜脈取血檢測(cè)血糖。
[0021] 結(jié)果：葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白多肽1具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈〇. 05,表 1);同時(shí)，可以緩解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其多肽1的作用與對(duì)照組拜糖平作 用相當(dāng)。
[0022] 表1葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抑制多肽1對(duì)小鼠降血糖作用
[0023]
【權(quán)利要求】
1. 一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制多肽，其特征在于：其氨基酸序列為 MEPSSKKLTGIFAGGSVGGMIGS 〇
2. -種權(quán)利要求1所述多肽的制備方法，其特征在于：采用Fmoc保護(hù)的固相合成技 術(shù)制備。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽1的制備方法，其特征在于：共價(jià)連接一個(gè)佐劑，佐劑是 牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。
4. 一種權(quán)利要求1所述的多肽1在制備治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其特征在于所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高 血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽1的用途，其特征在于：通過多種給藥方式治療糖尿病 及糖尿病并發(fā)癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等， 鼻噴劑。
【文檔編號(hào)】C07K14/00GK104262468SQ201410509067
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請(qǐng)人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司