一種制備利西拉來的方法
【專利摘要】本發明涉及一種制備利西拉來的方法。本發明的具體步驟為：A)通過液相合成片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH；B)米用固相合成法，以氨基樹脂為起始樹脂，按照利西拉來主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中32、33、34、35氨基酸偶聯采用片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-0H偶聯；C)勝樹脂裂解、純化、脫鹽、凍干后可以得到利西拉來，其多肽雜質Di-Ser33-利西拉來和Di-Ala35-利西拉來含量都小于0.1%。本發明提供了一種純度高、成本低，適合規模化生產的利西拉來的制備工藝，此工藝既能有效控制雜質Di-Ser33-利西拉來和Di-Ala35-利西拉來的含量又不影響利西拉來的收率。
【專利說明】一種制備利西拉來的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種多肽類藥物的制備方法，是一種合成的具有胰高血糖素樣 肽-I (GLP-I)受體激動劑的II型糖尿病的治療特效藥-利西拉來的制備方法。
【背景技術】
[0002] 利西拉來，英名為：Lixisenatide,是含有44個氨基酸的多肽，結構式如下： 肽序列為：
【權利要求】
1. 一種制備利西拉來的方法，提供了一種純度高，適合規模化生產的利西拉來的制備 工藝，此工藝既能有效控制雜質Di-Ser 33-利西拉來和Di-Ala35-利西拉來的含量又不影響 利西拉來的收率。
2. 其特征在于，所述方法包括以下步驟： 步驟 1，通過液相合成片段 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-OH ; 步驟2,采用固相合成法，以氨基樹脂為起始樹脂，按照利西拉來主鏈肽序依次偶聯具 有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中32、33、34、35氨基酸偶聯采用片段Fmoc-Ser ( tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-OH 偶聯； 步驟3,肽樹脂裂解、純化、脫鹽、凍干后可以得到利西拉來，其多肽雜質Di-Ser33-利西 拉來和Di-Ala35-利西拉來含量都小于0. 1%。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征是： 其中，步驟1所述的片段Fmoc-Ser (tBu)-Ser (tBu)-Gly-Ala-OH的液相合成步驟為： I )Fmoc_Ser (tBu) _0H、H0Su 和 DCC 偶聯得到 Fmoc-Ser (tBu) -〇Su，然后 Fmoc-Ser (tBu) -OSu 和 H-Ser (tBu)-OH 反應得到二肽片段 Fmoc-Ser (tBu)-Ser (tBu)-OH ;2) Boc-Gly-OH、HOSu 和 DCC 偶聯得到 Boc-Gly-OSu，然后 Boc-Gly-OSu 和 H-Ala-OH 反應得到 Boc-Gly-Ala-OH， 在體積比為I : 1的TFA和DCM的混合溶液下去Boc保護基，得到H-Gly-Ala-OH ;3) Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、HOSu 和 DCC 偶聯得到 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -〇Su，然后 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OSu 和 H-Gly-Ala-OH 反應得到四膚片段 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tB u)_GIy-AIa-OH。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征是： 其中，步驟2所述的固相合成方法，1)采用0. l(T〇. 40mmol/g的氨基樹脂為起始樹脂； 2)采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護液脫除氨基樹脂上的Fmoc保護基；3) 在偶聯劑系統的存在下，氨基樹脂和Fmoc-Lys (Boc) -OH偶聯得到Fmoc-Lys (Boc)-氨基樹 脂；4)重復步驟2)、3)，按照利西拉來主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護且側鏈保護的 氨基酸，其中32、33、34、35氨基酸偶聯采用片段Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-OH偶 聯。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特征是： 所述氨基樹脂選自Rink Amide AM ResiruRink Amide MBHA Resin樹脂，優選 Rink Amide MBHA Resin樹脂；其中所述氨基樹脂的替代度為0.1(T0.40mmol/g，優選為 0·15?0· 35mmol/g。
6. 根據權利要求4所述的方法，其特征是： 所述活化劑系統由DIC、HOBt和DMP組成；所述偶聯劑系統包括縮合劑和反應溶劑， 所述縮合劑選自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA ;所述反應溶劑選自DMF、 DCM、NMP、DMSO或他們之間的組合。
【文檔編號】C07K1/06GK104211801SQ201410357788
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年7月25日 優先權日:2014年7月25日
【發明者】周俊, 路楊, 楊東暉 申請人:杭州諾泰制藥技術有限公司