一種常壓柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法
【專利摘要】一種常壓柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法。將硅膠用等體積的石油醚(60～90℃)分散均勻后勻漿濕法裝柱，將迷迭香提取物用乙酸丁酯溶解后上樣，以乙酸丁酯和石油醚(60～90℃)的體積比為4∶1～4∶10作為洗脫劑，流速為2～8mL/min，洗脫后的級分分段收集，合并具有相同成分的級分，減壓濃縮得層析產物，可獲得純度98％以上的鼠尾草酸產品。本發明使用常規易得的溶劑，不需使用特殊高壓高溫設備，成本低、純化效率高、溶劑殘留少且易回收。
【專利說明】一種常壓柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方 法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種常壓柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，尤其涉 及一種由迷迭香提取物經常壓硅膠柱柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的制備 方法。
【背景技術】
[0002] 鼠尾草酸的純化方法主要有緩沖溶液精制法、pH值控制沉淀法、柱層析精制法，使 用最多的是柱層析精制法，中壓或常壓柱。
[0003] 緩沖溶液精制法工藝簡單，便于操作，但所得鼠尾草酸的純度不夠；pH控制沉淀 法純化鼠尾草酸，所得產品純度可以達到一定的要求，但工藝復雜，用時較長，且實驗需要 很低的溫度來保證鼠尾草酸的冷凍結晶，能耗大；柱層析法使用較為廣泛，將各種溶劑粗提 的迷迭香抗氧化劑溶于二氯甲烷經聚酰胺柱分離，然后再經過二次重結晶和活性炭脫色， 可以得到純度大于95 %的鼠尾草酸無色晶體（孫傳經，孫云鵬.超臨界C02反向萃取法 提取迷迭香抗氧化劑的方法：中國，1327038[P]. 2001-12-19)，但純化時間長，且純化成本 高；采用RP-C18填料分離純化迷迭香提取物中的鼠尾草酸，可以得到純度高達98%以上 的鼠尾草酸（杜紀權，徐鴻，陳香雪，等.迷迭香中鼠尾草酸分離純化及抗氧化能力指數測 定[J].食品與機械，2011，27 (6) :87-91);使用含量不低于15%的鼠尾草酸原料，制備純度 98%以上的鼠尾草酸，將鼠尾草酸粗品用乙酸丁酯溶解，得上柱樣品，使用硅膠填充柱，上 樣后以乙酸丁酯為洗脫劑，柱塞式溶劑泵進液，洗脫后的級分分段收集，減壓濃縮至干回收 洗脫劑，得層析產物，層析產物用烴溶劑重結晶，結晶產物減壓干燥，可獲得純度98%以上 的鼠尾草酸產品（祖元剛，楊磊，祖柏實，等.一種連續中壓柱層析制備高純度鼠尾草酸的 方法：中國，1〇1851158Α[Ρ]· 2010-10-06.)
【發明內容】
[0004] 本發明提供一種常壓柱層析從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，具有成 本低、能耗低、純化效率高、溶劑殘留少且容易回收、污染小的特點。
[0005] 本發明提供如下技術方案：
[0006] -種從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，將迷迭香提取物用乙酸丁酯溶 解，得上柱樣品，使用硅膠填充層析柱，將硅膠用等體積的石油醚分散均勻后勻漿濕法裝 柱，上樣后以乙酸丁酯和石油醚作為洗脫劑，洗脫后的級分分段收集，合并具有相同成分的 級分，30?60°C減壓濃縮至干得層析產物，可得到純度98%以上的鼠尾草酸產品。
[0007] 有益效果：
[0008] (1)本發明采用常壓柱層析分離純化方法，從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸， 僅通過一步常壓硅膠柱柱層析即可快速、高效地得到足夠純度的鼠尾草酸。
[0009] (2)使用常規易得的有機溶劑，價格低廉、回收方便、殘留少、污染小；
[0010] (3)本發明在較低溫度和較短時間內實現對迷迭香提取物中的活性成分鼠尾草酸 進行分離純化，操作方便，能耗低，不需使用特殊高溫高壓設備，提高了原料和設備利用率。 [0011] 其中，本發明涉及的HPLC分析方法，液相色譜儀為島津LC-20AT，采用C18反相色 譜柱（150mmX 4. 6mmX 5 μ m)，進樣量20 μ L，采用PDA檢測器進行多波長掃描。流動相采用 兩種混合展開溶劑，即溶劑A(乙腈-水-乙酸，體積比15 : 84 : 0.85)和溶劑B(甲醇）， 采用梯度洗脫方法（即：30min內由90% A和10% B遞增到100% B，保持5min，4min內返 回90% A和10% B，再保持3min)，控制流速為1. 5mL/min，柱溫為40°C，檢測波長為284nm。
[0012] 樣品中鼠尾草酸的含量和質量，主要利用標準樣品所測標準曲線進行定量計算。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013] 圖1為鼠尾草酸純化產品的HPLC圖（284nm)。
【具體實施方式】
[0014] 一種從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的常壓柱層析純化方法，本方法使用迷 迭香葉經乙醇超聲輔助提取所得的迷迭香提取物，將一定量的迷迭香提取物用1?2mL乙 酸丁酯溶解，得上柱樣品，使用相當于迷迭香提取物80?500倍（w/w)的硅膠填充層析柱， 將硅膠用等體積的石油醚（60?90°C )分散均勻后勻漿濕法裝柱，上樣后以乙酸丁酯和石 油醚（60?90°C )的體積比為4:1?10作為洗脫劑，流速為2?8mL/min，洗脫后的級分分 段收集，合并具有相同成分的級分，30?60°C減壓濃縮至干得層析產物，可獲得純度98% 以上的鼠尾草酸產品。
[0015] 一種從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的常壓柱層析分離純化方法，具體方法 如下：
[0016] 將迷迭香提取物用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品，使用相當于迷迭香提取物 80?500倍（w/w)的娃膠填充層析柱，將娃膠用石油醚（60?90°C )分散均勻后勻楽濕法 裝柱，上樣后以乙酸丁酯和石油醚（60?90°C )的體積比為4:1?10作為洗脫劑，流速為 2?8mL/min，洗脫后的級分分段收集，合并具有相同成分的級分，30?60°C減壓濃縮至干 得鼠尾草酸純化產品。
[0017] 實施例1
[0018] 迷迭香提取物粉末的制備方法（李大偉.迷迭香葉活性成分超聲輔助提取與分離 的研究[D].北京：中國林業科學研究院碩士研究生學位論文，2012年）：100g迷迭香葉 子（粉碎），按固液比1:16&/1^)加入75%的乙醇160〇1^，加入3 (%酸穩定劑（相對于乙 醇），超聲頻率28kHz，超聲功率200W，超聲提取時間40min，超聲溫度35°C。提取液經過濾 得濾液，濾液減壓蒸餾得到迷迭香提取物浸膏，在40°C真空干燥箱干燥后研缽內研磨，即可 得迷迭香提取物粉末16. 93g (鼠尾草酸含量為20% wt)。
[0019] 實施例2
[0020] 迷迭香提取物粉末（按實施例1的方法制備，鼠尾草酸含量為20% wt，下 同。）〇.5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目的硅膠40g，用等體積 石油醚（60?90°C )分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石油醚（60?90°C )，緩 慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層析柱側壁使填料緊密、均 勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?9(TC)為4:10(v/v)，流速6mL/min，接樣量為5mL/ 管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾個級分合并、減壓濃縮至 干，得0. 0642g鼠尾草酸純化產品。
[0021] 實施例3
[0022] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:11 (v/v)，流速 6mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇726g鼠尾草酸純化產品。
[0023] 實施例4
[0024] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:12(v/v)，流速 6mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇820g鼠尾草酸純化產品。
[0025] 實施例5
[0026] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:13(v/v)，流速 6mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇845g鼠尾草酸純化產品。
[0027] 實施例6
[0028] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:14(v/v)，流速 6mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇831g鼠尾草酸純化產品。
[0029] 實施例7
[0030] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:13(v/v)，流速 2mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇635g鼠尾草酸純化產品。
[0031] 實施例8
[0032] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:13(v/v)，流速 4mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇855g鼠尾草酸純化產品。
[0033] 實施例9
[0034] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:13(v/v)，流速 6mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 〇721g鼠尾草酸純化產品。
[0035] 實施例10
[0036] 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱樣品。稱取200-300目 的硅膠40g，用等體積石油醚（60?90°C)分散后勻漿濕法裝柱。在層析柱中裝入半柱石 油醚（60?90°C )，緩慢加入硅膠。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲擊層 析柱側壁使填料緊密、均勻。洗脫劑為乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)為4:13(v/v)，流速 8mL/min，接樣量為5mL/管，進行柱層析分離，經薄層色譜鑒定收集鼠尾草酸含量較高的幾 個級分合并、減壓濃縮至干，得〇. 0703g鼠尾草酸純化產品。
【權利要求】
1. 一種從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，其特征在于，將迷迭香提取物用 乙酸丁酯溶解，得上柱樣品，使用硅膠填充層析柱，將硅膠用等體積的石油醚分散均勻后勻 漿濕法裝柱，上樣后以乙酸丁酯和石油醚作為洗脫劑，洗脫后的級分分段收集，合并具有相 同成分的級分，30?60°C減壓濃縮至干得層析產物，得到純度98%以上的鼠尾草酸產品。
2. 按照權利要求1所述的從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，其特征在于： 所述的硅膠柱為常壓柱。
3. 按照權利要求1所述的從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，其特征在于： 所用洗脫劑乙酸丁酯和石油醚的體積比為4:1?10,溫度為60?90°C。
4. 按照權利要求1所述的從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法，其特征在于： 所用洗脫劑洗脫時，控制流速為2?8mL/min。
5. 采用權利要求1?4任一所述的從迷迭香提取物中分離純化鼠尾草酸的方法得到的 鼠尾草酸產品，其特征在于：鼠尾草酸的含量彡98% wt。
【文檔編號】C07C51/47GK104058955SQ201410312230
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月2日 優先權日:2014年7月2日
【發明者】畢良武, 夏田娟, 趙振東, 程賢 申請人:中國林業科學研究院林產化學工業研究所