一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法
【專利摘要】本發明涉及一種酶解協同雙頻超聲法提取利血平的方法，其處理步驟包括：將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，加入酸性乙醇溶液，調節pH值至3.0~5.0，并加入1~4%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，于40~60℃提取90~120min，酶解液依次經滅活、離心、過濾、中和、樹脂分離純化、濃縮、有機溶劑萃取、重結晶等步驟，得到利血平晶體。本發明以催吐蘿芙木為原料，充分利用酶解協同雙頻超聲提取的雙重作用，最大限度的溶出催吐蘿芙木中的利血平，具有工藝簡單、提取時間短、有機溶劑用量少、毒性小的優點，適用于大規模生產。
【專利說明】—種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提取催吐蘿芙木中利血平的方法，具體涉及一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，屬于中藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]藥用催吐蘿芙木為夾竹桃科植物催吐蘿芙木的根，含有多種生物堿，包括蛇根堿、阿馬靈堿、利血平等，具有清風熱、降肝火、消腫毒的功效。利血平，為長棱柱狀晶體，微溶于水，易溶于氯仿、二氯甲烷和冰醋酸，溶于苯和乙酸乙酯，略溶于丙酮、甲醇、乙醇和乙醚，具有降壓、鎮靜和安定作用，是醫藥生產降壓藥的重要原料，具有廣闊的發展前景。
[0003]目前，傳統的提取利血平的方法是用蘿芙木根粉用水濕潤，苯回流提取，酸性甲醇溶解，硫氰酸鉀結晶，再脫鹽、重結晶獲得利血平。這種工藝雖然工藝簡單，對設備要求也不高，但苯用量大，毒性比較大，同時使用了有毒的硫氰酸鹽，容易導致蘿芙木堿結構的改變。專利CN100494194C公開了一種利用乙醇浸提多次提取，大孔吸附樹脂進行吸附分離、氯仿-石油醚沉淀出膠質，結晶生產出利血平，該方法雖然在原有基礎上有所改進，但是仍然采用回流提取，耗能高，提取率低，并且采用了氯仿除膠，毒性也較大，不利于環保。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，該方法工藝簡單、成本低、提取時間短、提取率高，適合工業化生產。
[0005]本發明包括以下步驟:
a.將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，加入5^7倍的70-90%的酸性乙醇溶液，調節pH值至3.0-5.0，并加入1~4%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，超聲頻率分別為20KHz、40KHz，功率為 400~600W，于 50~60°C提取 90~120min ；
b.酶解液依次經90°C滅活15min、離心、取上清液，氫氧化鈉中和至pH為7.0-7.5，上樹脂柱，1(T15BV的70-80%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮得固體生物堿；
c.將步驟b中固體生物堿用乙酸乙酯-石油醚溶解，攪拌，取上清液減壓濃縮，得利血平粗品；
d.利血平粗品乙酸乙酯重結晶2次，得到利血平晶體；
步驟a中所述的調節乙醇溶液的酸為鹽酸或乙酸。
[0006]步驟a中所述的超聲功率為雙頻超聲作用時總功率(20KHz與40KHz各取一半)。
[0007]步驟b中所述的樹脂為D-101、D-72或HZ-818。
[0008]本發明選用纖維素酶來破壞催吐蘿芙木的細胞壁，使其疏松、膨脹、崩潰，釋放出細胞質中的生物堿，提高了生物堿的溶出率。再結合雙頻超聲波振動的空化作用，減少駐波所造成的死角，加速生物堿的溶出。該方法設備簡單、成本低、提取時間短、提取率高，適合工業化生產。
[0009] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
[0010]【具體實施方式】:
實施例1:
將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，取5kg粉末，加入5倍的70%的鹽酸乙醇溶液，調節pH值至3.0，并加入1%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，超聲頻率分別為20KHz、40KHz，功率為400W，于60°C提取90min，酶解液依次經90°C滅活15min、離心、取上清液，氫氧化鈉中和至pH為7.5，上D-101樹脂柱，1BV的70%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮得固體生物堿，乙酸乙酯-石油醚溶解，攪拌，取上清液減壓濃縮，乙酸乙酯重結晶2次，得到利血平晶體1.42g。
[0011]實施例2:
將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，取5kg粉末，加入7倍的80%的鹽酸乙醇溶液，調節pH值至4.0,并加入2%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，超聲頻率分別為20KHz、40KHz，功率為500W，于55°C提取lOOmin，酶解液依次經90°C滅活15min、離心、取上清液，氫氧化鈉中和至pH為7.0，上D-72樹脂柱，15BV的80%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮得固體生物堿，乙酸乙酯-石油醚溶解，攪拌，取上清液減壓濃縮，乙酸乙酯重結晶2次，得到利血平晶體1.62g。
[0012]實施例3:
將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，取5kg粉末，加入6倍的90%的乙酸乙醇溶液，調節pH值至5.0,并加入4%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，超聲頻率分別為20KHz、40KHz，功率為600W，于50°C提取120min，酶解液依次經90°C滅活15min、離心、取上清液，氫氧化鈉中和至pH為7.2，上 HZ-818樹脂柱，12BV的90%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮得固體生物堿，乙酸乙酯-石油醚溶解，攪拌，取上清液減壓濃縮，乙酸乙酯重結晶2次，得到利血平晶體
1.56g。
【權利要求】
1.一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，其特征在于，包括以下步驟:將催吐蘿芙木的根粉碎，過60目篩，加入5~7倍的70-90%的酸性乙醇溶液，調節pH值至3.0-5.0，并加入I~4%的纖維素酶，置于雙頻超聲提取器中，超聲頻率分別為20KHz、40KHz，功率為40(T600W，于5(T60°C提取9(Tl20min，酶解液依次經90°C滅活15min、離心、取上清液，氫氧化鈉中和至pH為7.0-7.5，上樹脂柱，1(T15BV的70-80%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮得固體生物堿，乙酸乙酯-石油醚溶解，攪拌，取上清液減壓濃縮，乙酸乙酯重結晶2次，得到利血平晶體。
2.根據權利要求1所述的一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，其特征在于，所述的調節乙醇溶液的酸為鹽酸或乙酸。
3.根據權利要求1所述的一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，其特征在于，所述的超聲功率為雙頻超聲作用時總功率(20ΚΗζ與40ΚΗζ各取一半)。
4.根據權利要求1所述的一種酶解協同雙頻超聲提取利血平的方法，其特征在于，所述的樹脂為D-101、D-72或ΗΖ-818。
【文檔編號】C07D459/00GK104072494SQ201410269097
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月17日 優先權日:2014年6月17日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司